專利名稱：：甾體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及甾體化合物，具體涉及一種甾體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用。
背景技術：
：心腦血管疾病是威脅人類健康的頭號殺手，其發病群體在逐步年輕化，發病率和死亡率也在不斷上升。心腦血管疾病的主要病因是心腦血管，中央或外周血管結構和功能的改變，如血管張力的異常增加。目前市場上作為治療心腦血管疾病的藥物都存在一定的不足，如容易產生耐藥性，作為治療心律失常的藥物本身又導致心律失常的產生，甚至有的藥物具有較強的毒副作用等等。海洋甾體化合物一直引起海洋化學家和藥物研究學家的興趣，一些結構新穎的海洋甾體化合物具有引人注目的生理和藥理活性，有可能為人類治療重大疾病提供思路。目前已經發現的一些甾體類化合物多具有抗炎、抗腫瘤等多種生理活性，其中有許多已經被開發為新型藥品，如環巴胺用于抗腫瘤。但用于心血管疾病的甾體化合物數量較少。海星屬棘皮動物門海星綱(Asteroidea)，約有1千2百種，廣布全球，以北太平洋分布的種類較多，我國主要分布在渤海以南海域。《中國藥用海洋生物》記載多種藥用海星。近年來，有關海星活性成分的研究日益受到國內外的關注。迄今為止，已相繼從海星體內獲得了十幾類化合物，它們具有許多重要的生理活性，如抗癌作用，溶血作用，調節生殖發育作用，降血壓作用，抗潰瘍作用，抗炎，抗病毒及抗菌作用。但目前尚沒有關于將其作為治療心腦血管疾病的藥物加以開發利用的報道。
發明內容本發明的目的是提供一種甾體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用。其中，所述的甾體化合物結構如下本發明所提供的留體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用，所述的藥物是將上述甾體化合物與醫藥上可接受的賦型劑制成相應的制劑。本發明的進步目的是將上述甾體化合物制備成血管舒張劑。本發明所述的甾體化合物可作為活性成分與醫藥上可接受的賦型劑制備成各種劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、注射劑等。本發明的優點(1)本發明涉及的甾體化合物具有促進血管舒張作用和對KCl誘導的心肌細胞內鈣超載的保護作用，可以發揮良好的心血管保護作用。(2)本發明涉及的甾體化合物可從海星中獲得，由于海星資源豐富，本發明涉及的甾體化合物來源非常豐富。圖1是實施例1所得的甾體化合物對抗去甲腎上腺素所致血管收縮的作用的張力曲線圖。圖2是實施例1所得的甾體化合物對抗KC1所致心肌細胞內鈣超載的作用的共聚焦掃描圖，其中a:對照；b:KC1;C:對照；d:實施例1所得的甾體化合物+KCl。具體實施例方式以下提供本發明的一些具體實施例，以助于進一步理解本發明。實施例1甾體化合物及其制備多棘海盤車(Asteriasamurensis)4公斤，甲醇回流提取3次(24Lx3)，減壓回收甲醇。甲醇提取物分散于4L水中，等體積正丁醇萃取3次，合并，減壓濃縮得到正丁醇提取物350克。取上述正丁醇提取物，經硅膠柱層析(①30X80cm)，氯仿甲醇混合溶液(氯仿和甲醇按照體積比100:0，50:1，20:1，l(hl，8:2，7:3，6:4配比)梯度洗脫，每1000毫升作為一個餾分收集，然后按照薄層層析的結果合并得到15個餾分(餾分A到0);餾分H(氯仿-甲醇8:2洗脫部分)20克經0DS中低壓柱層析，甲醇-水(體積比30%，50%,70%，90%)梯度洗脫，得到13個子餾分(H-1到H-13);其中，子餾分H-2(50%甲醇水洗脫部分)經s印hadexLH-20柱層析，氯仿-甲醇(體積比l:l)洗脫，進而采用HPLC制備(甲醇-水55:45，示差折光檢測)，即得本發明的甾體化合物(0.5克)，使用IR、MS、麗R等現代波譜手段結合理化方法鑒定其結構如下所得的甾體化合物3"-^sulfated-6ct-。1-cholest-9(11)-en-23-onesodiumsalt,白色無定型粉末；[a]2D5+28.8。(c1.0，Methanol);分子式GAASNa;正離子ESI-MS給出[M+Na]+峰歷/z541，負離子ESI-MS給出[M-Na]—/A495。力-醒R和13C-NMR數據見表1。表l.所得化合物核磁共振數據(400MHz,MeOH-oO<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>1039.111117.81243.31342.31454.91526.21629.41757.41812.01919.62033.52119.92251.223213,82453.32525.62622.82722.95.33(br.d，5.6Hz)2.00，2.15(m)1.30(m)1.23，1.81(m)1.29，1.85(m)1.27(m)0,66(s)0.97(s)2.0(m)0.89(d，6.4Hz)2.17，2.49(m)2.30(d，7.2Hz)2.08(m)0.91(d，7.2Hz)0.91(d，7.2Hz)實施例2促進血管舒張活性的檢測精密稱取實施例1所得的甾體化合物，加入DMS0，振搖溶解配成1molL—1溶液。取大鼠胸主動脈，切割成3mm寬的動脈環，然后將動脈環懸掛在充滿生理鹽水、體積為20ml的浴槽中，并持續不斷通以95%02+5%0)2的混合氣體。動脈環一端固定，另一端用細線連接到BL-420生物信號記錄系統的張力傳感器上，給予前負荷1克。穩定一小時后加入去甲腎上腺素。洗脫后，穩定20分鐘，加入去甲腎上腺素，在去甲腎上腺素收縮的高峰期加入IO^M實施例l所得的甾體化合物(編號為YLH-3)，記錄張力曲線。對抗去甲腎上腺素所致血管收縮說明書第5/6頁的作用的張力曲線圖如圖1所示。由圖l可以看出去甲腎上腺素使血管明顯收縮，張力增加。在去甲腎上腺素收縮的高峰期加入IOWM實施例l所得的甾體化合物后，張力明顯降低，血管舒張，提示該化合物可通過擴張血管而降低外周阻力，進而增加局部組織的血液供應，對心腦血管起到保護作用。實施例3對KC1誘導的心肌細胞內鈣超載的保護作用精密稱取實施例l所得的甾體化合物，加入DMS0，振搖溶解配成lmol-l/1溶液。酶解法分離單個大鼠心室肌細胞，將心肌細胞置于20wraol，L—1Fluo-3/AM的負載液中，Fluo-3/AM被動擴散進入細胞后，被酯酶水解釋出Fluo-3，Fluo-3與Ca，各合，受488nm的激光激發而產生熒光，其熒光值與[Ca2+]t呈正相關，即以熒光值變化表示[C,L變化，在激光掃描共聚焦顯微鏡timeseries程序下對細胞XY平面進行掃描，間隔時間為10s，共掃描25次。計算細胞XY平面內平均熒光強度，以平均熒光強度代表[Ca21。圖2是實施例1所得的甾體化合物對抗KC1所致心肌細胞內鈣超載的作用的共聚焦掃描圖，其中，a:對照；b:KC1;C:對照；d:實施例l所得的甾體化合物+KCl。由圖2可以看出加入KC1誘發心肌細胞內L型鈣通道開放，細胞內熒光強度升高，[Ca2+]i增加導致鈣超載；而同時加入實施例l所得的留體化合物和KC1后細胞內熒光強度與對照組相比無明顯升高，說明實施例l所得的甾體化合物(即本發明所述的具有心血管保護作用的甾體化合物)可通過抑制(^2+經電壓依賴性Ca2+通道涌入細胞內，減輕細胞內的鈣超載，明顯對抗KC1的作用，證明該化合物可抑制心肌細胞鈣超載，從而發揮心肌保護作用。實施例4膠囊劑的制備取實施例l所得的甾體化合物20mg和微粉硅膠280mg，充分混合均勻，過篩，加入適量的硬脂酸鎂，混勻，用干法造粒機制粒，過篩，篩取40-80目之間的顆粒，裝入膠囊，每粒裝0.3g。實施例5膠囊劑的制備按照實施例4所述方法制備膠囊，不同的是使用200mg實施例l所得的甾體化合物、200mg微粉硅膠和適量的硬脂酸鎂，每粒膠囊裝0.4g。實施例6片劑的制備按本
技術領域：
技術人員公知的方法制備實施例1所得的甾體化合物的片劑其中所述片劑按實際需要制成含20200mg/片，實施例l所得的甾體化合物100g、微粉硅膠420g、無水乳糖380g、氧化硅30g，混合30分鐘后，再篩入200g硬脂酸鎂，繼續混勻，最后用12/32英寸標準凹沖壓成片。實施例7注射劑的制備取注射用水約800毫升，加入氯化鈉8克，攪拌溶解，再加入實施例1所得的留體化合物5克，在加水到1000毫升，攪勻，過濾灌封于中性玻璃容器中，用流通蒸汽100度滅菌30分鐘。權利要求1、甾體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用，其中，所述的甾體化合物具有如下結構式id="icf0001"file="S2007100297215C00011.gif"wi="65"he="38"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2、根據權利要求1所述的甾體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用，其特征是，所述的藥物是所述的甾體化合物與醫藥上可接受的輔料制成的血管舒張劑。3、根據權利要求1或2所述的留體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物中的應用，其特征是，所述的藥物是將所述的甾體化合物與醫藥上可接受的賦形劑制成的注射劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液或者片劑。全文摘要本發明提供一種甾體化合物在制備治療心腦血管疾病藥物的應用，其中所述的甾體化合物結構如下本發明的應用所制備的藥物，具有促進血管舒張作用和對KCl誘導的心肌細胞內鈣超載的保護作用，能夠治療心腦血管疾病。文檔編號A61K31/575GK101172111SQ20071002972公開日2008年5月7日申請日期2007年8月15日優先權日2007年8月15日發明者劉宏偉,呂延杰,姚新生,毅戴,楊寶峰申請人:暨南大學