專利名稱：液膜分離提取博落回中生物堿的方法
技術領域：
本發明涉及可應用于藥廠藥材提取、生產，或分析化學中檢驗其有效成分的液膜分離提取博落回中生物堿的方法。
背景技術：
中草藥博落回提取物的主要成份是血根堿和白屈菜紅堿及原阿片堿、別隱品堿等生物堿。目前國內外已將這些生物堿開發為藥品、生物農藥、獸藥等產品。但目前博落回生物堿提取工藝主要是液-液萃取法。如毛鵬，周樂，冉曉雅，元超，王永學在西北農業學報2004年02期公開的“博落回生物堿提取工藝初步研究”，是采用分別以氯仿、甲醇和工業乙醇為溶劑，對博落回全草中的生物堿進行超聲萃取，其工藝為工業乙醇超聲提取，浸膏溶于正丁醇/水(V/V1∶1)的混合溶液，并用正丁醇萃取，然后將正丁醇浸膏溶于氯仿/水(V/V 1∶1)混合溶液，調pH至10～11，再用氯仿萃取脂溶性總堿，此后，將水相調pH至中性再用正丁醇萃取水溶性總堿。這些萃取法存在生產過程復雜、操作繁瑣、產品回收率低、能耗高、原料消耗多等不足。乳狀液膜法是一種簡單、快速、高效、選擇性高、經濟節能的新型分離提取技術，已應用于環境、化工生產、濕法冶金等領域，但還未應用于中草藥中總生物堿的提取，且現有乳狀液膜的膜溶劑通常是甲苯、環己烷、二氯甲烷和煤油；這些溶劑都具有一定的毒性，不適用于中草藥提取后人、獸的使用。
發明內容
本發明的目的在于提供一種液膜分離提取博落回中生物堿的方法。以實現提取過程快速、高效、操作簡單、且所選擇的溶劑無毒，能適用提取后人、獸的使用。
本發明包括以下步驟(1)乳狀液的制備按膜溶劑食用油表面活性劑Span 80或Span 80與助表面活性劑的混合物磷酸脂載體的體積比＝(31～45)∶(3～9)∶(2～10)進行混合，然后在混合物中按1∶1～4∶1體積比加入濃度為0.1～0.7mol/L的HCl溶液或稀硫酸溶液，在8000轉/分～10000轉/分的轉速下攪拌1-3min，即制得穩定的W/O型乳狀液；(2)生物堿的分離提取將pH＝4的博落回鹽酸提取液或硫酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200轉/分～300轉/分的低速攪拌提取5-15min；(3)破乳轉入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為博落回中總生物堿的溶液。
所述pH＝4的博落回鹽酸提取液或硫酸提取液是在1份博落回粉末中，加入30-60份0.1mol/L的HCl或稀硫酸，超聲提取二次，每次30-60min，離心分離，將濾液用0.1mol/L的HCl或硫酸稀釋8-10倍，再用飽和氫氧化鈉調節pH＝4。
所述助表面活性劑是C原子數為8-16的醇類，表面活性劑Span 80與助表面活性劑的體積比為1∶6～7∶11。
所述助表面活性劑最好是正癸醇。
所述磷酸脂載體最好是二(2-乙基己基)磷酸脂。
液膜分離提取博落回中生物堿的方法可以應用于藥品、生物農藥、獸藥等產品的生產；也可以應用于博落回中生物堿的分析測定。
本方法使用食用油作為膜溶劑，由于食用油具有無毒的特點，解決了乳狀液膜法目前所使用的有機溶劑有毒，不適用于中草藥提取后人、獸使用的難題。整個提取過程快速、高效、操作簡單。可應用于博落回藥品、生物農藥、獸藥等產品的生產和開發及博落回中生物堿的分析測定。
具體實施例方式
實施例1(1)博落回提取液的制備稱取1.0克博落回粉末，加入30mL 0.1mol/L的HCl，超聲提取30min，在轉速為4000r/min的離心機上離心10min，取出濾液，往濾渣中再加入30mL的0.1mol/L的HCl，超聲提取30min，再離心10min，合并濾液。用0.1mol/L的HCl稀釋濾液至500mL，過濾，用飽和氫氧化鈉調劑pH＝4，備用。
(2)乳狀液的制備取膜溶劑食用油42mL，表面活性劑總量為3.5mL，其中Span 80為0.5mL，正癸醇為3mL，磷酸脂載體4.5mL，將三者進行混合，每取此混合物20mL就按1∶1的體積比加入20mL 0.1mol/L的HCl溶液，在8000轉/分的轉速下攪拌1min，即制得穩定的W/O型乳狀液。
(3)生物堿的分離提取將pH＝4的博落回鹽酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為50∶20加入提取器中，在200轉/分的低速攪拌提取5min；(4)破乳轉入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為博落回中總生物堿的溶液。
經高效液相色譜分析，原阿片堿、別隱品堿、血根堿和白屈菜紅堿等四種生物堿的萃取率分別達到了79.8％、75.1％、95.6％和75.9％；四種生物堿的富集因子分別為8.571、8.306、17.4和15.0。
具體高效液相色譜的條件如下
色譜柱ODS Hyporsil(250×4.6mm，5μm I.D.)流動相A(30mmol/L的NaH2PO4+0.3％的三乙胺，用磷酸調劑pH＝3)∶B(乙腈)＝60∶40(體積比)流速1.0mL/min檢測波長270nm進樣量10μL柱溫30℃實施例2(1)博落回提取液的制備稱取2公斤博落回提取物粉末，加入120L 0.1mol/L的HCl，超聲提取60min，在轉速為4000r/min的離心機上離心10min，取出濾液，往濾渣中再加入120L的0.1mol/L的HCl，超聲提取60min，再離心10min，合并濾液。用0.1mol/L的HCl稀釋濾液至2400L，過濾，用飽和氫氧化鈉調劑pH＝4，備用；(2)乳狀液的制備取膜溶劑食用油124L，表面活性劑總量為36L，其中Span80為14L，正癸醇為22L，磷酸脂載體40L，將三者進行混合，然后將此混合物與0.7mol/L的HCl溶液按照4∶1的體積比加到制乳器中，在10000轉/分的轉速下攪拌15min，即制得穩定的W/O型乳狀液。
(3)生物堿的分離提取將pH＝4的博落回鹽酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為50∶5加入提取器中，在300轉/分的低速攪拌提取15min；(4)破乳轉入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為博落回中總生物堿的溶液，用高效液相色譜分析其中原阿片堿、別隱品堿、白屈菜紅堿和血根堿的分離、富集程度。
經高效液相色譜分析，原阿片堿、別隱品堿、血根堿和白屈菜紅堿等四種生物堿的萃取率分別達到了75.2％、69.8％、92.5％和73.1％；四種生物堿的富集因子分別為8.2、7.9、16.7和14.5。
具體高效液相色譜的條件如下色譜柱ODS Hyporsil(250×4.6mm，5μm I.D.)流動相A(30mmol/L的NaH2PO4+0.3％的三乙胺，用磷酸調劑pH＝3)∶B(乙腈)＝60∶40(體積比)流速1.0mL/min檢測波長270nm進樣量10μL柱溫30℃實施例3(1)博落回提取液的制備稱取1.0克博落回粉末，加入50mL 0.1mol/L的HCl，超聲提取50min，在轉速為4000r/min的離心機上離心10min，取出濾液，往濾渣中再加入50mL的0.1mol/L的HCl，超聲提取50min，再離心10min，合并濾液。用0.1mol/L的HCl稀釋濾液至900mL，過濾，用飽和氫氧化鈉調劑pH＝4，備用。
(2)乳狀液的制備取膜溶劑食用油37mL，表面活性劑總量為7mL，其中Span 80為1mL，正癸醇為6mL，磷酸脂載體6mL，將三者進行混合，每取此混合物20mL就按2∶1的體積比加入10mL 0.1mol/L的HCl溶液，在9000轉/分的轉速下攪拌2min，即制得穩定的W/O型乳狀液。
(3)生物堿的分離提取將pH＝4的博落回鹽酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為50∶10加入提取器中，在250轉/分的低速攪拌提取10min；(4)破乳轉入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為博落回中總生物堿的溶液。
經高效液相色譜分析，原阿片堿、別隱品堿、血根堿和白屈菜紅堿等四種生物堿的萃取率分別達到了81.1％、77.8％、98.4％和98.7％；四種生物堿的富集因子分別為10.9、10.5、18.2和16.2。
具體高效液相色譜的條件如下色譜柱ODS Hyporsil(250×4.6mm，5μm I.D.)流動相A(30mmol/L的NaH2PO4+0.3％的三乙胺，用磷酸調劑pH＝3)∶B(乙腈)＝60∶40(體積比)流速1.0mL/min檢測波長270nm進樣量10μL柱溫30℃
權利要求
1.液膜分離提取博落回中生物堿的方法，其特征在于包括以下步驟(1)乳狀液的制備按膜溶劑食用油表面活性劑Span 80或Span 80與助表面活性劑的混合物磷酸脂載體的體積比＝(31～45)∶(3～9)∶(2～10)進行混合，然后在混合物中按1∶1～4∶1體積比加入濃度為0.1～0.7mol/L的HCl溶液或稀硫酸溶液，在8000轉/分～10000轉/分的轉速下攪拌1-3min，即制得穩定的W/O型乳狀液；(2)生物堿的分離提取將pH＝4的博落回鹽酸提取液或硫酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200轉/分～300轉/分的低速攪拌提取5-15min；(3)破乳轉入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為博落回中總生物堿的溶液。
2.根據權利要求1所述的液膜分離提取博落回中生物堿的方法，其特征在于所述pH＝4的博落回鹽酸提取液或硫酸提取液是在1份博落回粉末中，加入30-60份0.1mol/L的HCl或稀硫酸，超聲提取二次，每次30-60min，離心分離，將濾液用0.1mol/L的HCl或硫酸稀釋8-10倍，再用飽和氫氧化鈉調節pH＝4。
3.根據權利要求1所述的液膜分離提取博落回中生物堿的方法，其特征在于所述助表面活性劑是C原子數為8-16的醇類，表面活性劑Span 80與助表面活性劑的體積比為1∶6～7∶11。
4.根據權利要求1所述的液膜分離提取博落回中生物堿的方法，其特征在于所述助表面活性劑是正癸醇。
全文摘要
本發明公開了一種液膜分離提取博落回中生物堿的方法。其乳狀液的制備是以食用油作膜溶劑，以Span 80或Span 80與助表面活性劑的混合物作為表面活性劑，磷酸脂作載體，再將pH＝4的博落回鹽酸提取液或硫酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200轉/分～300轉/分的低速攪拌提取5－15min；經水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為博落回中總生物堿的溶液。本方法使用食用油作為膜溶劑，解決了乳狀液膜法目前所使用的有機溶劑有毒，不適用于中草藥提取后人、獸使用的難題。整個提取過程快速、高效、操作簡單。可應用于博落回藥品、生物農藥、獸藥等產品的生產和開發及博落回中生物堿的分析測定。
文檔編號A61K36/185GK101091748SQ200710035400
公開日2007年12月26日 申請日期2007年7月20日 優先權日2007年7月20日
發明者馬銘, 梁鋒, 陳波, 姚守拙 申請人:湖南師范大學