專利名稱：虎杖苷在防治肥胖及緩解胰島素抵抗中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物技術和醫藥領域，具體涉及虎杖苷活性物質在預防、控制 或治療肥胖和胰島素抵抗中的用途。
背景技術：
眾所周知，隨著經濟的發展、生活水平的提高，肥胖和糖尿病這兩種慢性 疾病發病率逐年猛增，其范圍之廣泛、影響之惡劣，已經引起世界范圍內的關 注。各國科學家紛紛致力于防治肥胖和糖尿病的戰斗中。肥胖癥作為一種全身內分泌代謝疾病，不但影響體態和活動，而且與糖尿病、高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病等病癥密切相關，早在1997年即被世界 衛生組織(WHO)歸入慢性疾病行列。目前肥胖癥的發病率逐年迅速增加，據 2006年統計，全球有3億人患肥胖癥，13億人超重。為此，各國科學家都致力 于尋找各種減肥的辦法，但往往效果不佳，而且有的減肥化學藥品還有毒副作 用。目前開發的減肥藥物分為三大類抑制食欲的藥物、增加能量消耗的藥物 和抑制腸道消化吸收的藥物。減肥西藥的研究集中在腎上腺素能藥物，該藥 物直接作用于中樞神經系統(CNS)，起到抑制食欲減少攝食的作用；5-羥色胺受 體激動劑，這類藥物作用于CNS的5-羥色胺受體，增加飽腹感而起到抑制食欲 的作用；單胺再攝取抑制劑，西部曲明是該類藥物的代表，它能減少攝食，增 加產熱；脂酶抑制劑，奧利司他是該類藥物的代表，它能抑制胰腺和胃腸中的 羧基脂酶及磷脂酶A2活性，從而抑制腸道對脂肪的吸收，降低體內脂肪儲存而 減輕體重。然而，目前市場上很多減肥藥物在藥物療效和安全性方面還無法保證。目 前對減肥藥的開發主要集中在干擾中樞神經系統的正常通路，因而極易引起副 作用。因此，需要尋找新的減肥作用藥物或保健品。與此同時，全世界糖尿病的人數目前也已增加至1.7億，預計至2030年這一 數字將達到3.6億，嚴重威脅人類健康。研究發現，胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)是II型糖尿病的主要病理特征，其原因是胰島素分泌相對不足及 胰島素作用環節障礙所致。所以，通過增強胰島素刺激的葡萄糖利用，減少脂 肪酸氧化代謝，抑制肝糖輸出而增加胰島素的敏感性是一條有效的治療II型糖 尿病的途徑。目前開發的增強胰島素敏感性的藥物主要包括噻唑垸二酮類、胰 高血糖素受體拮抗劑及雙胍類降血糖藥。但此類藥物在有效地降低血糖、增強 胰島素敏感性的同時，往往會誘發低血糖、體重增加和肝功能受損等副作用。 因此，本領域還需要尋找新的具有更高的生物安全性的提高胰島素敏感性的藥 物。虎杖苷(Polydatin， PD)是從蓼科蓼屬一一虎杖的干燥根莖中提取的第四種 單體，故又名虎杖結晶四號。其結構式如下圖所示虎杖苷在植物中分布廣泛，含量高，具有較強的生物活性。現代藥理學研 究表明，虎杖苷對心肌細胞、血管平滑肌、抗血小板聚集、改善微循環等有顯 著作用，此外還能減輕多種因素造成的組織器官損傷，具有保護肝細胞及抗脂 質過氧化等作用，是一種很有前途的化合物，值得進行新藥研究和開發。然而，本領域中并未見關于虎杖苷對體重影響的報道，也未見其對胰島素抵抗影響的 報道。本領域迫切需要開發出一種不僅可安全有效地用于減肥，且還可安全有效 地用于防治胰島素抵抗的天然藥物。發明內容本發明的目的正是提供一種虎杖苷活性物質的用途，其不僅可安全有效地用于減肥，且還可安全有效地用于防治胰島素抵抗的。在本發明的第一方面，提供了一種虎杖苷活性物質的用途，所述虎杖苷活性 物質包括虎杖苷、其生理學上或藥學上可接受的鹽、其水合物或它們的混合物， 其特征在于，用于制備預防、控制或治療與肥胖相關和/或胰島素抵抗相關的疾病 或征狀的組合物。在本發明的一個優選實施方式中，所述組合物是藥物組合物、保健品組合 物、食物組合物或膳食添加劑。在本發明的另一優選實施方式中，所述虎杖苷活性物質占所述組合物總重量的0.001 99.9wt0/。。在本發明的一個優選例中，虎杖苷活性物質占組合物總重量的l 95wty。，較 優選為5 90wt。/。，更優選10 80wt。/c)。在本發明的另一優選實施方式中，所述組合物為單位劑型或多劑型，且其 中虎杖苷活性物質的含量為0.01 2000mg/劑。在本發明的一個優選例中，虎杖苷活性物質的含量為0.01-5.0mg/劑，更優選 為0.05 4.0mg/劑，進一步優選含有0.1 3.0mg/劑；最優選的含有虎杖苷活性 物質0.2 2.0mg/劑。在本發明的另一個優選例中，虎杖苷活性物質的含量為5.0 250mg/劑；更 優選10 200mg/劑，進一步優選20 150mg/劑，更優選30 100mg/劑；最優選 的，含有虎杖苷活性物質40 70mg/劑。在本發明的另一個優選例中，虎杖苷活性物質的含量為250 2000mg/劑； 更優選300 1500mg/劑，進一步優選500 1200mg/劑，更優選750 1100mg/ 劑；最優選的，含有虎杖苷活性物質800 1000mg/劑。在本發明的另一個優選例中，每天施用1 6劑本發明的組合物，優選施用 卜3劑。在本發明的另一優選實施方式中，所述與肥胖相關的疾病或征狀選自肥胖 癥、糖尿病、動脈粥樣硬化；所述與胰島素抵抗相關的疾病或征狀選自2型糖尿病、高胰島素血癥、糖尿 病酮癥酸中毒、高滲性非酮癥糖尿病昏迷、乳酸性酸中毒。在另一優選例中，所述組合物用于降低哺乳動物的體重和緩解胰島素抵抗。在本發明的另一優選實施方式中，所述組合物還包括用于減肥的其它物 質，所述的其它物質選自下組甲苯丙胺、芐甲苯丙胺、鄰氯苯丙胺、苯甲嗎啉、環咪吲哚、氯苯咪B引哚、芬氟拉明、氟西丁、 AD9677、 CP-331、 679、西 部曲明、奧利司他。在本發明的另一優選例中，所述組合物還含有選自下組的一種或多種物 質二甲雙胍、苯乙雙胍、格列本脲、格列吡嗪、格列齊持、格列波脲、格列 美脲、格列喹酮、阿卡波糖、伏格利波糖、米格列醇、環格列酮、曲格列酮、 羅格列酮、吡格列酮、阿司他丁、依帕司他、波拉司他、或托瑞司他、瑞格列 奈或那格列奈。在本發明的第二方面中提供了一種減肥方法，所述方法包括給予需要減肥 的對象有效量的虎杖苷活性物質或含有虎杖苷活性物質的組合物，其中所述虎 杖苷活性物質包括虎杖苷、其生理學上或藥學上可接受的鹽、其水合物或它們的混合物。在本發明的一個優選例中，所述減肥方法優選為非治療目的的減肥方法。 在本發明的一個優選實施方式中，所述虎杖苷活性物質占所述組合物總重量的0.001 99.9wt%。在本發明的另一優選實施方式中，給予對象的虎杖苷活性物質的劑量為 0.01 2000mg/60kg體重/天。在本發明的一個優選例中，給予對象的虎杖苷活性物質的劑量為0.05 1500mg/60kg體重/天，更優選為0.1 1000mg/60kg體重/天，最優選為1 500mg/60kg體重/天。在本發明的另一優選例中，將所述的量單次給予或多次給予。在本發明的另一優選例中，所述減肥方法還包括同時施用其它減肥藥物、保 健品或采用其它減肥方案。在本發明的另一個優選例中，所述減肥藥物選自甲苯丙胺、芐甲苯丙胺、鄰氯苯丙胺、苯甲嗎啉、環咪吲哚、氯苯咪吲哚、芬氟拉明、氟西丁、 AD9677、 CP-331、 679、西部曲明、奧利司他或它們的混合物。在本發明的另一優選例中，所述其它減肥方案包括運動、節食。在本發明的第三方面中，提供了一種組合物，所述組合物含有(1) 有效量的虎杖苷活性物質，其中所述虎杖苷活性物質包括虎杖苷、其 生理學上或藥學上可接受的鹽、其水合物或它們的混合物；(2) 選自下組的一種或多種物質甲苯丙胺、芐甲苯丙胺、鄰氯苯丙胺、苯甲嗎啉、環咪吲哚、氯苯咪吲哚、芬氟拉明、氟西丁、 AD9677、 CP-331、 679、西部曲明、奧利司他或它們的混合物；和(3)藥學上可接受的載體或食品學上可接受的載體。在本發明的另一優選例中，所述組合物還含有具有預防、控制或治療與胰 島素抵抗相關的疾病或征狀的選自下組的一種或多種物質二甲雙胍、苯乙雙胍、 格列本脲、格列吡嗪、格列齊持、格列波脲、格列美脲、格列喹酮、阿卡波糖、 伏格利波糖、米格列醇、環格列酮、曲格列酮、羅格列酮、吡格列酮、阿司他 丁、依帕司他、波拉司他、托瑞司他、瑞格列奈、那格列奈或它們的混合物。在本發明的一個優選例中，所述虎杖苷活性物質占組合物總重量的0.001 99.9wt%， l 95wt%，較優選為5 90wt。/。，更優選10 80wt0/0。本發明的其它方面由于本文的公開內容，對本領域的技術人員而言是顯而 易見的。
圖1顯示了虎杖苷(PD)對高脂飼料喂養的小鼠體重的影響。其中，Chow表 示低脂肪飼料對照組；HF表示高脂肪飼料對照組；PD表示虎杖苷，給藥濃度為 39mg/kg/d。圖2顯示了虎杖苷(PD)對高脂飼料喂養的小鼠葡萄糖耐受的影響。其中， 三組實驗小鼠均經過16周實驗后進行了葡萄糖耐受量的實驗。圖2A顯示了各時 間點小鼠的血糖值；圖2B是對圖2A的量化統計^p〈0.05)。圖3顯示了用虎杖苷(PD)喂養的小鼠的血清樣品對H印G2細胞葡萄糖摻入 的影響。其中，三組實驗小鼠均經過18周實驗后分別取血樣，分離得到的血清 加入葡萄糖胺誘導產生胰島素抵抗的H印G2中，檢測其對胰島素抵抗的緩解效 果。
具體實施方式
本發明人經過廣泛而深入的研究，首次發現天然中藥虎杖中的提取物虎杖 苷對高脂飼料喂養的肥胖小鼠模型可起到減肥的效果。本發明人還發現虎杖苷 能夠緩解高脂飲食造成的葡萄糖糖耐受量降低。且在胰島素抵抗模型中，使用 虎杖苷喂養可以有效緩解胰島素抵抗。在此基礎上完成了本發明。虎杖苷活性物質如本發明所用，術語"虎杖苷"、"活性成分"和"虎杖苷活性物質"可 互換使用，是指具有如下結構式的化合物(即虎杖苷)、其生理學可接受的鹽或 藥學上可接受的鹽、水合物或它們的混合物。在本發明中，對于制備虎杖苷活性物質的方法沒有特別的限制，比如其可 以提取自植物，或者可以采用化學合成的方法來制備，只要其具有上述結構。 一種優選的方法是從植物中提取虎杖苷活性物質，優選的植物為中藥虎杖。虎杖苷活性物質的效果及用途虎杖苷以往的研究集中于降低心血管疾病發病率、抗腫瘤、抗氧化等方面 的研究，目前還沒有關于其在減肥或緩解胰島素抵抗方面的研究報道。1. 減肥效果為了研究虎杖苷的減肥效果，本發明人首先利用高脂食物誘導肥胖小鼠， 建立肥胖模型。通過給水口服方式用虎杖苷對肥胖鼠進行干預。經過喂養后， 對給藥組與高脂肪對照組進行外形、體重、生理生化等指標的比較，驗證虎杖 苷的減肥效果。本發明證實了虎杖苷具有良好的減肥效果。由于它是天然植物中含有的物 質，因此安全性高，可作為一種安全可靠的減肥活性物質。此外由于虎杖苷活性物質具有減肥效果，其還可用于預防、治療和控制與 肥胖相關的疾病，例如但不限于糖尿病、脂肪肝、肝臟肥大、脂質代謝異常、 高脂血癥、動脈粥樣硬化、冠心病、癌癥、痛風、內分泌失調、肺泡低換氣綜 合征、膽囊炎等。為此，本發明提供了虎杖苷活性物質在制備預防、控制和治療肥胖的藥物 組合物、食物組合物、保健品組合物和/或膳食添加劑中的用途。下文將對這些 組合物進行詳細描述。此外，在本發明中還可利用虎杖苷活性物質進行非治療目的的減肥。2. 緩解胰島素抵抗的效果為了研究虎杖苷活性物質緩解胰島素抵抗的效果，發明人對施用虎杖苷后 的高脂喂養小鼠的葡萄糖耐受性以及用虎杖苷長期喂養的小鼠血清中的胰島 素抵抗緩解效果進行了研究。本發明證實了虎杖苷可以有效緩解胰島素抵抗。由于它是天然植物中含有 的物質，因此安全性高，可作為一種安全可靠的緩解胰島素抵抗的活性物質。此外由于虎杖苷具有緩解胰島素抵抗效果，其還可用于預防、治療和控制 與胰島素敏感性下降相關的疾病，例如但不限于2型糖尿病、高胰島素血癥。 也可用于胰島素抵抗導致的其它相關疾病及征狀，如糖尿病酮癥酸中毒、高 滲性非酮癥糖尿病昏迷、乳酸性酸中毒。為此，本發明提供了虎杖苷活性物質在制備預防、控制和治療與胰島素抵 抗相關的疾病或征狀的藥物組合物、食物組合物、保健品組合物和/或膳食添加 劑中的用途。下文將對這些組合物進行詳細描述。此外，本發明的虎杖苷活性物質還可用于同時產生預防、控制和治療與胰 島素抵抗和預防、控制和治療肥胖的雙重效果。組合物本發明還提供了一種組合物，所述的組合物含有有效量的虎杖苷活性物 質，以及食品學或藥學上可接受的載體。如本文所用，術語"含有"或"包括"包括了 "包含"、"基本上由…… 構成"、禾P "由……構成"。如本文所用，術語"藥學上可接受的"或"食品學上可接受的"的成分是 適用于人和/或動物而無過度不良副反應(如毒性、刺激和變態反應)的，即有合 理的效益/風險比的物質。如本文所用，術語"本發明的組合物"包括藥物組合物、食物組合物、保 健品組合物和/或膳食添加劑。如本文所用，術語"有效量"是指可對人和/或動物產生功能或活性的且可 被人和/或動物所接受的量。如本文所用，術語"藥學上可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體，包 括各種賦形劑和稀釋劑。該術語指這樣一些藥劑載體它們本身并不是必要的 活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合適的載體是本領域普通技術人員所熟知的。在《雷明頓藥物科學》(Remington' s Pharmaceutical Sciences, Mack Pub.Co.， N丄1991)中可找到關于藥學上可接受的賦形劑的充分討論。本發明的組合物還可作為一種食物或膳食添加劑，直接服用或添加到其它食品中服用。優選的，所述的"食品上學可接受的載體"選自填充劑、崩解 劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、矯味劑、包覆材料、膳食制品、賦形劑、或緩 /控釋劑。在組合物中藥學上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。 另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質，如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、潤濕劑或乳化劑、矯味劑、pH緩沖物質等。通常，可將這些物 質配制于無毒的、惰性的和藥學上可接受的水性載體介質中，其中pH通常約為 5-8，較佳地，pH約為6-8。本發明的組合物中可含有虎杖苷、虎杖苷的生理學可接受的鹽或藥學上可 接受的鹽、水合物或它們的混合物。本發明的組合物中虎杖苷活性物質有效成分占組合物總重量的0.001 99.9wt%;優選為組合物總重量的l 95wt。/。，較優選為5 90wt。/c)，更優選10 80wt%。余量為藥學上可接受的載體以及其它添加劑等物質。如本文所用，術語"單位劑型"是指為了服用方便，將本發明的組合物制 備成單次服用所需的劑型，包括但不限于各種固體劑(如片劑)、液體劑、膠囊 劑、緩釋劑。在本發明的另一優選實施方式中，所述組合物為單位劑型或多劑型，且其 中虎杖苷活性物質的含量為0.01 2000mg/劑。在本發明的一個優選例中，虎杖苷活性物質的含量為0.01-5.0mg/劑，更優選 為0.05 4.0mg/劑，進一步優選含有0.1 3.0mg/劑；最優選的含有虎杖苷活性 物質0.2 2.0mg/劑。在本發明的另一個優選例中，虎杖苷活性物質的含量為 5.0 250mg/劑；更優選10 200mg/劑，進一步優選20 150mg/劑，更優選30 100mg/劑；最優選的，含有虎杖苷活性物質40 70mg/劑。在本發明的另一個 優選例中，虎杖苷活性物質的含量為250 2000mg/劑；更優選300 1500mg/劑， 進一步優選500 1200mg/劑，更優選750 1100mg/劑；最優選的，含有虎杖苷 活性物質800 1000mg/劑。在本發明的另一個優選例中，每天施用1 6劑本發明的組合物，優選施用 1 3劑；最優選的，每天服用的劑量為l劑。應理解，所用虎杖苷活性物質的有效劑量可隨待施用或治療的對象的嚴重程度而變化。具體情況根據對象的個體情況(例如對象體重、年齡、身體狀況、所 需達到的效果)來決定，這在熟練醫師或營養師可以判斷的范圍內。本發明的組合物，可以為固態(如顆粒劑、片劑、凍干粉、栓劑、膠囊、舌 下含片)或液態(如口服液)或其他合適的形狀。施用方式本發明的組合物可以通過常規途徑施用，其中包括(但并不限于)口服、 肌注、皮下注射等。優選口服施用。組合物形式應與施用方式相匹配。本發明組合物的施用量，按活性物質計算，通常為每天約0.01-2000mg/60kg體重/天， 較佳地約0.05 1500mg/60kg體重/天，更優選為0.1 1000mg/60kg體重/天，最 優選為1 500mg/60kg體重/天。本發明的組合物可直接使用，也可與其它治療劑或輔劑聯合使用。 在本發明的優選實施方式中，在用于減肥或預防、控制、治療與肥胖相關 的疾病中時，本發明的組合物還可與有效量(如0.0005-0.1克/60千克體重/天；優 選的，為0.001-0.05克/60千克體重/天)的選自下組的物質聯合施用苯丙胺及其 衍生物，包括(但不限于)甲苯丙胺、芐甲苯丙胺、鄰氯苯丙胺、苯甲嗎啉； 吲哚類藥物，包括(但不限于)環咪吲哚、氯苯咪吲哚；5-羥色胺能藥物，包 括(但不限于)芬氟拉明、氟西丁； AR激動劑，包括(但不限于)AD9677、 CP-331、 679;單胺再攝取抑制劑，包括(但不限于)西部曲明；脂酶抑制劑， 包括(但不限于)奧利司他等。在本發明的優選實施方式中，在用于預防、治療與緩解胰島素抵抗相關的疾病中，本發明組合物還可與有效量(如0.5-100mg/60kg體重/天；優選的，為 l-50mg/60kg體重/天)的選自下組的物質聯合施用雙胍類糖尿病藥物包括(但不限于)二甲雙胍、或苯乙雙胍；磺酰脲類糖尿病藥物包括(但不限于)格列本 脲、格列吡嗪、格列齊持、格列波脲、格列美脲、或格列喹酮；葡萄糖苷酶抑 制劑類藥物包括(但不限于)阿卡波糖、伏格利波糖(VOkibose)、或米格列醇； 胰島素增敏類藥物包括(但不限于)環格列酮、曲格列酮、羅格列酮、或吡格 列酮；醛糖還原酶抑制劑類藥物包括(但不限于)阿司他丁、依帕司他、波拉 司他、或托瑞司他；促胰島素釋放類藥物包括(但不限于)瑞格列奈、或那格 列奈。當兩種或兩種以上的藥物聯合給藥時， 一般具有優于兩種藥物分別單獨給藥的效果。優選地，聯合施用的藥物或其它制劑不干擾本發明虎杖苷活性物質 有效成分的治療活性。非治療目的的減肥方法本發明還提供了一種非治療目的的減肥方法，所述方法包括給予對象有效 量的虎杖苷活性物質。在本發明的一種優選實施方式中，給予對象的虎杖苷活性物質的量為0.01 2000mg/60kg體重/天，更優選為0.1 1000mg/60kg體重/天，最優選為1 500mg/60kg體重/天。在一天中，可以將所述的量單次給予或多次給予。在本發明的另一種優選實施方式中，給予對象虎杖苷活性物質的量為6 49.9mg/60kg體重/天；更優選的，給予對象虎杖苷活性物質的量為8 45mg/60kg體重/天；進一步更優選的，給予對象虎杖苷的量為12 35mg/60kg 體重/天；最優選的，給予對象虎杖苷活性物質的量為15 30mg /60kg體重/ 天；比如，每劑可給予對象虎杖苷活性物質的量為20mg/60kg體重/天、22 mg /60kg體重/天、或24mg /60kg體重/天。在一天中，可以將所述的量單次給予或 多次給予。在本發明的一個優選實施方式中，在所述減肥方法中還包括給予對象其它 減肥藥物或保健品，例如上文所述的那些減肥藥物。在本發明的另一個優選實 施方式中，所述減肥方法中還包括其它減肥方案或措施，例如運動、節食等。本發明的優點本發明的以虎杖苷活性物質為活性成分的預防、控制或治療與胰島素抵抗相 關的疾病和/或與肥胖相關的征狀或疾病的藥物組合物、食物組合物、保健品組合 物和/或膳食添加劑具有以下優點1. 虎杖苷是一種植物中天然存在的化合物，具有較高的安全性；2. 虎杖苷在以往的研究中已應用于防治心血管疾病、抗血小板聚集、改善 微循環、保肝等慢性疾病的防治中，因此容易為市場所接受；3. 本發明的虎杖苷活性物質具有溶解度高、容易吸收、穩定性好等特點， 更加適合作為新型藥物、食物、保健品和/或膳食添加劑進行開發。實施例下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說 明本發明而不用于限制本發明的范圍。除非另行定義，文中所使用的所有專業 與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件如Sambrook等人，《分子克隆實驗室指南》 (New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。實施例l.虎杖苷(PD)對小鼠體重的影響實驗目的為驗證虎杖苷的減肥效果，首先需要建立肥胖鼠模型。實驗中利用高脂食 物誘導肥胖小鼠，建立肥胖模型。通過給水口服方式用虎杖苷對肥胖鼠進行干 預。經過18周喂養后，對給藥組與高脂肪對照組進行外形、體重、生理生化等 指標的比較，驗證虎杖苷的減肥效果。實驗動物及飼料雄性C57BL/6J小鼠，購自中國科學院上海實驗動物中心(斯萊克實驗動物 有限公司)。低脂肪含量飼料脂肪4.3 gra% (10 kcal%); 高脂肪含量詞料脂肪24 gm% (45 kcal%)。干預用藥虎杖苷分子式C2。H2A,購自西安天豐公司，批號NF070201。 干預劑量及方法濃度39mg/kg/d干預組小鼠將藥物溶于適量純凈水(每只小鼠日攝水量約為3niL)。采用自 然飲水口服給藥方法，經過HPLC檢測驗證，兩天換藥一次，可以保持藥效不失 活。對照組小鼠僅給予潔凈水。實驗方法三組小鼠平行飼養。小鼠三周斷奶后進入實驗室，均給予普通飼料。適應環境一周后按照下述給水和喂食方法飼養。低脂對照組(Chow)給予低脂飼料、 潔凈水，能夠自由取食、飲水。高脂對照組(HF)及高脂給藥組(HF+PD)均給予 高脂飼料，高脂對照組的飲水給予潔凈水，高脂給藥組的飲水給予含虎杖苷 390rog/L的潔凈水。每組動物均可以自由取食、飲水。實驗室溫度21 25'C， 相對濕度40 70%，晝夜比12:12。每周三次投食，記錄投食量和撤食量，每周稱體重一次，并記錄。喂養18周。實驗結果和討論由圖l可以看出，低脂對照組(Chow)和高脂對照組(HF)相比，喂養四周后 體重即開始出現差異(P^.05)，說明高脂飼料誘導肥胖模型的建立是成功的。 而高脂給藥組(HF+PD)與HF組相比，喂養8周時開始出現顯著性差異(* P<0.05): HF+PD組小鼠平均體重增加11.93克，HF組平均體重增加15.33克，Chow組平均 體重增加7.96克。繼續喂養至16周時，HF+PD和HF組的差異更加顯著HF+PD 小鼠體重增加14.21克，HF組平均體重增加18.64克，Chow組平均體重增加9.11 克。上述結果表明虎杖苷有明顯的減肥效果。實施例2.虎杖苷(PD)對小鼠葡萄糖耐受的影響實驗意義葡萄糖耐量試驗(GTT)對診斷糖尿病具有很大的診斷價值。對空腹糖正常 或可疑升高，以及不能完全肯定或否定糖尿病，均必須依賴葡萄糖耐量試驗才能做出最后診斷。 主要試劑葡萄糖溶液新鮮配置無菌的0.2g/mL葡萄糖溶液，小鼠注射劑量為10g體 重注射100y L。實驗方法小鼠實驗前一天禁食過夜，實驗當天稱量體重后檢測空腹血糖，之后按照 上述分別注射葡萄糖溶液，并記錄當時時間。以注射葡萄糖溶液的時間為起始時間點，之后分別在15、 30、 60、 90和120分鐘檢測小鼠的血糖值。依此數據 統計得到最終的葡萄糖耐受量實驗結果。實驗結果和討論三組實驗動物經過16周喂養后，體重有了顯著的差異。因此進一步的實驗 中檢測了各組實驗小鼠葡萄糖的耐受性的差異。如圖2所示，HF組的血糖值在 各個時間點較Chow組相比均有不同程度的升高，右圖統計顯示(PO.Ol)。而 HF+PD組的葡萄糖耐受性相對HF組的降低有明顯的緩解作用。P<0.05)。結果表明，虎杖苷可以緩解高脂飲食造成的糖耐受量降低。實施例3.虎杖苷(PD)對胰島素抵抗的緩解作用實驗目的檢測虎杖苷長期喂養的小鼠血清對胰島素抵抗的緩解效果。 實驗方法A. 胰島素抵抗的誘導HepG2細胞中分別加入相同周齡的高脂對照小鼠、虎杖苷喂養的高脂對照 小鼠的血清樣品處理24h，之后用內含葡萄糖胺(18mM)的低糖無血清培養液誘 導16h，使之產生胰島素抵抗。B. 糖原的合成HepG2細胞培養于24孔板，低糖無血清DMEM培養基饑餓16 h，力Q100nM 胰島素和/或0.5 )iCi 3H標記的葡萄糖培養3 h，吸掉培養液，PBS洗滌2次，每 孔加200iU 30% NaOH，收集細胞裂解液8(TC裂解30分鐘，離心，力B2倍體積 的無水乙醇，混勻，-2(TC靜置過夜。靜置后冷凍離心，棄上清，加無水乙醇洗 滌，離心，重復二次。將最后沉淀晾干，0.1 N H4C1溶解沉淀，采用液閃儀測 定放射強度。實驗結果和討論由圖3可知，虎杖苷在胰島素存在和不存在情況下對糖原合成的影響不同。在HepG2細胞中葡萄糖胺可以阻止胰島素誘導的糖元合成，即形成胰島素抵抗 模型，而使用虎杖苷喂養的小鼠的血清則很大程度上緩解胰島素抵抗的程度； 而虎杖苷對沒有胰島素誘導的糖元合成則未見影響。上述結果均說明，用虎杖苷喂養的小鼠的血清可以有效緩解胰島素抵抗。在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻 被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
權利要求
1. 虎杖苷活性物質的用途，所述虎杖苷活性物質包括虎杖苷、其生理學上或藥學上可接受的鹽、其水合物或它們的混合物，其特征在于，用于制備預防、控制或治療與肥胖相關和/或胰島素抵抗相關的疾病或征狀的組合物。
2. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述組合物是藥物組合物、保 健品組合物、食物組合物或膳食添加劑。
3. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述虎杖苷活性物質占所述組合物總重量的0.001 99.9wt。/。。
4. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述組合物為單位劑型或多劑 型，且其中虎杖苷活性物質的含量為0.01 2000mg/劑。
5. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述與肥胖相關的疾病或征狀選 自肥胖癥、糖尿病、動脈粥樣硬化；所述與胰島素抵抗相關的疾病或征狀選自2型糖尿病、高胰島素血癥、糖尿 病酮癥酸中毒、高滲性非酮癥糖尿病昏迷、乳酸性酸中毒。
6. 如權利要求l所述的用途，其特征在于，所述組合物還包括用于減肥的其它物質，所述的其它物質選自下組甲苯丙胺、芐甲苯丙胺、鄰氯苯丙胺、苯甲嗎啉、環咪吲哚、氯苯咪吲哚、芬氟拉明、氟西丁、 AD9677、 CP-331、 679、西部曲明、奧利司他。
7. —種減肥方法，所述方法包括給予需要減肥的對象有效量的虎杖苷活性 物質或含有虎杖苷活性物質的組合物，其中所述虎杖苷活性物質包括虎杖苷、 其生理學上或藥學上可接受的鹽、其水合物或它們的混合物。
8. 如權利要求7所述的減肥方法，其特征在于，所述虎杖苷活性物質占所述 組合物總重量的0.001 99.9wt%。
9. 如權利要求7所述的減肥方法，其特征在于，給予對象的虎杖苷活性物 質的劑量為0.01 2000mg/60kg體重/天。
10. —種組合物，所述組合物含有(1) 有效量的虎杖苷活性物質，其中所述虎杖苷活性物質包括虎杖苷、其生理學上或藥學上可接受的鹽、其水合物或它們的混合物；(2) 選自下組的一種或多種物質甲苯丙胺、芐甲苯丙胺、鄰氯苯丙胺、苯甲嗎啉、環咪吲哚、氯苯咪吲哚、芬氟拉明、氟西丁、 AD9677、 CP-331、 679、 西部曲明、奧利司他或它們的混合物；和(3)藥學上可接受的載體或食品學上可接受的載體。
全文摘要
本發明提供了虎杖苷活性物質在制備藥物組合物、食物組合物、保健品組合物和/或膳食添加劑中的用途，所述組合物用于預防、控制或治療與胰島素抵抗相關的疾病和/或與肥胖相關的征狀或疾病。本發明還提供了一種通過施用虎杖苷活性物質或其組合物進行的減肥方法，以及一種包含虎杖苷活性物質和其它具有預防、控制或治療與胰島素抵抗相關的疾病和/或與肥胖相關的征狀或疾病物質的組合物。本發明的組合物具有安全性高；易為市場所接受；溶解度高、容易吸收、穩定性好等優點。
文檔編號A61P5/50GK101264095SQ200710038000
公開日2008年9月17日 申請日期2007年3月13日 優先權日2007年3月13日
發明者史香林, 芳 張, 翟琦巍, 陳幸苗 申請人:中國科學院上海生命科學研究院