養顏保健食品的制作方法

專利名稱：養顏保健食品的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種具有養顏作用的復方保健食品。

背景技術：
中國專利申請號200610153340.3公開了“一種由銀杏葉與紅景天制成的藥物組合物”，由銀杏葉或其提取物與紅景天或其提取物、或者銀杏葉總黃酮與紅景天或其提取物、或者銀杏內酯與紅景天或其提取物制備而成。可制成臨床上或藥學上可接受的任一劑型。兩藥協同作用，共同發揮抑制血小板聚集和抗血栓形成、改善血流動力學、增加冠脈和腦血流量、降低腦血管阻力、降低血液粘度、保護缺血及缺氧引起的腦損傷和心肌損傷、抗心律失常、抗高血壓、抗高血脂、提高機體免疫等多種藥理作用，主要用于制備治療心腦血管疾病的藥物。中國專利申請號200410075592.X公開了“一種抗疲勞、降血壓血脂、抗癌防癌的保健品及制備方法”，是按重量份取紅豆杉10-80份、銀杏葉10-80份、絞股藍10-80份、紅景天10-80份分別水洗、烘干粉碎后混合加入北蟲草配制而成，主要用于提高人類機體免疫功能，抗衰老，降血脂、降血壓，改善心腦血管的微循環，抗疲勞，抗胃腸疾病，抗癌防癌，治療哮喘，黑發，防糖尿病和抗輻射。


發明內容
本發明的目的在于提供一種具有美容祛斑、免疫調節的養顏保健食品。
本發明所述的養顏保健食品由以下重量配比的成分組成蝙蝠蛾擬青霉菌粉2300-2700、紅景天提取物1000-1400、銀杏葉提取物1000-1400，每100克保健食品含總黃酮≥2100mg、紅景天甙≥1650mg、腺苷≥10.19mg。
所述的蝙蝠蛾擬青霉菌粉又名蟲草菌絲粉(體)，為市售產品。所述的銀杏葉提取物為目前臨床采用的銀杏葉提取物(GBE)，該提取物目前主要用于心腦血管疾病。所述的紅景天提取物為口服紅景天提取物，為已有技術(見“紅景天屬植物化學成分研究概述”華西醫科大學醫學院天然藥物教研室1991.12)。
本發明所述的蝙蝠蛾擬青霉菌粉也即冬蟲夏草菌絲體含有多種氨基酸、多糖、腺苷等化合物，藥理研究表明可明顯增加小鼠脾重，并能拮抗潑尼松與環磷酰胺可致脾重量減輕，脾重增加的機制可能是促進脾臟DNA的生物合成。增加核酸與蛋白質的含量，使脾細胞增殖；可使小鼠腹腔巨噬細胞；吞噬作用增加，并提高碳粒廓清速度，顯示其免疫調節功能。增加SOD含量，降低LPO含量的抗氧化作用，可美容祛黃褐斑。銀杏葉提取物富含銀杏類黃酮和萜內脂等生理活性物質，是一種較強的自由基清除劑，還有抗血小板活化因子的活血化瘀，通脈疏絡作用。臨床實驗證明，銀杏黃酮甙可使人體T淋巴細胞CD3、CD4亞群比值及免疫球蛋白G含量明顯增高，對人體免疫系統功能有興奮作用，動物試驗顯示銀杏葉提取物可明顯增加小鼠淋巴細胞線粒體脫氫酶和中性粒細胞MPO的釋放，提高小鼠機體免疫細胞功能。銀杏葉提取物可提高人體紅細胞超氧化岐化酶(E-SOD)活性，降低血漿過氧化脂質(P-LPO)，抑制酪氨酸酶活力，減少黑色素的生成，可美容祛黃褐斑。紅景天提取物具有較強的抗氧化作用，可促進蛋白質的合成，降低酸性磷酸酶活性，提高SOD和GSP-PX活性，抑制LPO的形成，延緩細胞衰老；促進細胞生長及細胞代謝。促進真皮中成纖維細胞的分裂及其合成分泌膠原蛋白，這種抗氧化作用是調節免疫及清除黃褐斑的物質基礎。
綜觀全方，冬蟲夏草菌絲體、銀杏葉提取物和紅景天提取物，富含多糖、腺苷、黃酮、甙類通過平衡營養、增強代謝共同發揮調節免疫、美容祛黃褐斑、緩解更年期綜合癥等的保健功能。
本發明所述產品經毒理學檢驗，急性毒性實驗屬實際無毒物質。三項致突實驗(Ames試驗、小鼠骨髓PCE微核實驗和小鼠精子畸變實驗)為陰性。30天喂養實驗表明該受試物于3.3、2.5、1.65g/kgBW劑量(相當于人群推薦量0.033g/kgBW的100、75和50倍)時，各劑量組對生長發育、血液系統、肝、腎功能，蛋白、脂肪、糖的代謝，以及主要臟器的組織學改變，均無明顯影響。衛生學檢驗結論為37-40℃相對溫度下進行三個保溫實驗，經理化、微生物檢驗，提示所檢指標質量穩定。
本發明功能試驗 免疫調節作用檢驗報告 1材料和方法 1.1樣品實施例1產品，膠囊制劑、內容物為棕褐色顆粒，廠家推薦日攝入量為2.00g/60kgbw，以下簡稱試驗用樣品。樣品溶劑為蒸餾水。
1.2試劑二硝基氟苯、丙酮、麻油、硫化鋇、SRBC、雞紅細胞、YAC-1細胞、Hanks液(pH7.2-7.4)、RPMI1640完全培養液、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)、NAD、0.2mol/L的Tris-HCl緩沖液(ph8.2)、2％TritionX100。
1.3飼料選用中國醫料大學實驗動物中心繁殖的普通級18～22g雄性昆明種小鼠，每組10只動物，實驗動物生產許可證號為SCXK(遼)2002-0009。塊狀鼠料由沈陽市于洪區動物實驗飼料廠提供，飼料質量合格證號為遼實動環字1999-024。
1.4試驗條件屏障系統動物實驗室，恒溫恒濕，溫度22±1.5℃，濕度50％±10％，工作照度160～280LX，人工照明12h，黑夜12h，噪音＜60dB，實驗動物使用許可證號為SYXK(遼)2002-0001。
1.5試驗儀器恒溫培養箱、離心機、恒溫水浴箱、電子分析天平AEL-160(感量0.0001g、沈計力字第M112289號)、動物電子天平ES-2000A(感量0.01g、遼計02041503103)、生物顯微鏡、雷勃MK3酶標儀(沈計醫字第P120206號)、自動洗板機。
1.6劑量分組按廠家推薦人體日攝入量的30倍、20倍、10倍設計，分1.00g/kgbw、0.67g/kgbw、0.33g/kgbw三個實驗組及樣品溶劑對照組。管飼法染毒，20ml/kgbw。每日稱體重后灌胃1次，連續30天后分別測定各項免疫指標。
1.7臟器/體重比值測定稱體重后，將小鼠斷髓處死，取脾臟、胸腺稱重，計算臟器/體重比值。
1.8二硝基氟笨(DNFB)誘導小鼠遲發性變態反應(DTH)試驗(耳腫脹法)每鼠腹部皮膚用硫化鋇脫毛，范圍3×3cm，用DNFB溶液50μl均勻涂抹致敏，5天后用DNFB溶液10μl均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進行攻擊，用不含DNFB溶液10μl均勻涂抹于小鼠左耳(兩面)作對照，攻擊后第24h頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下直徑8mm耳片，稱重，計算左右耳重量之差。并稱取體重、胸腺重和脾重，計算臟體比值。左右耳重量之差表示DTH的程度，實驗組的差值顯著高于樣品溶劑對照組，即可判定該項試驗結果陽性。
1.9小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗(半體內法)每鼠腹腔注射20％(v/v)雞紅細胞懸液1ml。間隔30分鐘，頸椎脫臼處死動物，將其仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁皮膚，經腹腔注入生理鹽水2ml，轉動鼠板1分鐘。然后吸出腹腔洗液1ml，平均分滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內，移置37±1℃孵箱溫育30分鐘。孵畢，于生理鹽水中漂洗，以除去未貼片細胞。晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v)Gimsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干。鏡檢，計數吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數和被吞噬雞紅細胞總數。計算吞噬百分率和吞噬指數。實驗組的吞噬百分率、吞噬指數與樣品溶劑對照組比較，差異有顯著性，即可判定該項試驗結果陽性。


1.10血清溶血素的測定(血凝法)每鼠腹腔注射2.0％(v/v)SRBC懸液0.20ml進行免疫，第4天摘除眼球取血，分離血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別置于微量血凝試驗板中，每孔100μl，再加入100μl0.50％(v/v)的SRBC懸液，混勻，裝入濕潤的平盤內加蓋，于37±1℃溫箱孵育3h，觀察血球凝集程度。計算抗體積數。實驗組的抗體積數顯著高于樣品溶劑對照組，即可判定該項試驗結果陽性。
抗體積數＝(S1+2S2+3S3……nSn) 式中1、2、3……n代表對倍稀釋的指數，S代表血球凝集程度的級別，抗體積數越大，表示血清抗體越高。
1.11NK細胞活性測定[乳酸脫氫酶(LDH)測定法](1)傳代靶細胞(YAC-1細胞)，試驗前24h將靶細胞進行傳代培養，應用前以Hanks液洗3次，用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為1×105個/ml。(2)制備脾細胞(效應細胞)懸液，無菌取脾，置于盛有適量無菌Hanks液的小平皿中用鑷子輕輕將脾撕碎，制成單細胞懸液，經200目篩網過濾，用Hanks液洗3次，每次離心10min(1000r/min)。然后將細胞懸液浮于2ml的完全培養液中，用臺酚蘭染色計數活細胞數(應在95％以上)。用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為5×105個/mL。(3)NK細胞活性檢測，取靶細胞和效應細胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培養板中，靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養液各100μl，靶細胞最大釋放孔加靶細胞和2％Triton X 100各100μl，上述各項均設3個復孔，于37±1℃，5％CO2培養箱中培養4h，然后將96孔培養板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100μl置于平底96孔培養板中，同時加入LDH基質液100μl，反應3min，每孔輥入1mol/L的HC130μl，在酶標儀490nm處測定光密度值(OD)。按下式計算NK細胞活性，試驗用樣品組的NK細胞活性顯著高于對樣品溶劑照組時，即可判定該項試驗結果陽性。

1.12數據處理計量資料中多樣本均數比較采用單因素方差分析，各實驗組與溶劑對照組比較同時采用最小顯著差法、新復極差法、兩樣本均數t檢驗。同時進行多樣本方差齊性檢驗(Bartlett法)和各實驗組與溶劑對照組的兩樣本方差齊性檢驗，若方差不齊，進行變量轉換和采用秩和檢驗(Wilcoxon兩樣本比較法)。百分率資料用反正弦函數轉換后按計量資料進行檢驗。同時采用行×列表x2檢驗，各實驗組與溶劑對照組比較采用四格表x2檢驗，對不符合四格表x2檢驗條件的資料采用秩和檢驗(Wilcoxon兩樣本比較法)。各項檢驗原始數據在Excel2002軟件程序中自動進行統計分析，并將分析得到的相關數據自動傳輸至檢驗報告表格的指定位置中。
2檢驗結果 2.1臟器/體重比值測定結果由表1可見，各實驗組的胸腺/體重、脾重/體重比值與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)。
表1 小鼠臟器/體重比值測定結果 單位mg/g 2.2DNFB誘導小鼠DTH試驗結果由表2和表3可見，各實驗組體重、體重增重與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)；由表4可見，各實驗組左右耳重量差與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)。
表2 DNFB誘導小鼠DTH試驗體重測量結果單位g 表3 DNFB誘導小鼠DTH試驗體重增量測量結果 單位g 表4 DNFB誘導小鼠DTH試驗左右耳重量差測量結果 2.3小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗結果(半體內法)由表5和表6可見，各實驗組體重、體重增重與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)；由表7可見，各實驗組的吞噬百分率、吞噬指數與樣品溶劑對照組比較，差異顯著(P＜0.05)。
表5 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞細胞試驗體重測量結果單位g 表6小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞細胞試驗體重增重測量結果 單位g 表7 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞細胞試驗吞噬百分率、吞噬指數測定結果 2.4小鼠血清溶血素測定結果(血凝法)由表8和表9可見，各實驗組體重、體重增重與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)；由表10可見，1.00g/kgbw、0.67g/kgbw實驗組的抗體積數與樣品溶劑對照組比較，差異顯著(P＜0.05)；0.33g/kgbw實驗組的抗體積數與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)。
表8 小鼠血清溶血素試驗體重測量結果 單位g 表9 小鼠血清溶血素試驗體重增重測定結果 表10 小鼠血清溶血素試驗抗體積數測定結果 2.5小鼠NK細胞活性測定結果由表11和表12可見，各實驗組體重、體重增重與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)；由表13可見，1.00g/kgbw實驗組的NK細胞活性與樣品溶劑對照組比較，差異顯著(P＞0.05)；0.67g/kgbw、0.33g/kgbw實驗組的NK細胞活性與樣品溶劑對照組比較，差異不顯著(P＞0.05)。
表11 小鼠NK細胞活性試驗體重測量結果 單位g 表12 小鼠NK細胞活性試驗體重增重測量結果 單位g 表13小鼠NK細胞活性試驗測定結果 3小結 試驗結果表明試驗用樣品對各項試驗的實驗動物體重和體重增重無明顯影響，對小鼠胸腺/體重、脾重/體重的比值無明顯影響；能增強小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力、能提高小鼠血球凝集程度、能增強高劑量組小鼠NK細胞活性；未能促進二硝基氟苯(DNFB)誘導小鼠遲發性變態反應(DTH)形成。
人體試食報告 1、對象和方法 1.1受試物實施例1產品。
1.2受試對象按自愿原則選擇18-65歲具有黃褐斑受試者30例。
1.2.1診斷標準頭面部肉眼觀察可見黃褐色，多發于顴、頰、額、鼻、唇周等處，無痛癢等癥狀。
1.2.2納入者標準凡生有黃褐斑的自愿受試者，經體檢合格均可進行試食觀察。
1.2.3排除者標準 1.2.3.1年齡在18歲以下或者65歲以上者，妊娠或哺乳期婦女，對本保健品過敏者。
1.2.3.2合并有心肝腎和造血系統等嚴重原發性疾病，精神病患者。
1.2.3.3不符合納入標準，未按規定用受試物，無法判定功效或資料不全影響功效或安全判斷者。
1.3對照形式采用自身前后對照形式。
1.4服用劑量及時間每次2粒，每日2次，連續30天，受試者在實驗期間停止服用有關養顏祛斑的藥物或其他保健品及化妝品。
1.5儀器與試劑F-820型血球計數儀，MIDIRON尿十項分析儀(德國產)，Olympus全自動化分析儀(日本產)，型號AU600，中國科學院地理研究所設計研制，測繪出版社1992處出版《實用標準色卡》(第1版)，生化試劑盒全部由中生公司提供。
2、觀察指標 實驗前后各檢查一次。
2.1功效性觀察 2.1.1一般情況 詳細詢問病史，了解受試者飲食情況，觀察主要臨床癥狀疲勞感、煩躁、睡眠等。按癥狀輕重(重癥3分、中度2分、輕癥1分)在試食前后統計積分值，并就其主要癥狀改善(每一癥狀改善2分顯效，改善1分為有效)計算改善率。
2.1.2頭面部黃褐斑檢測 2.1.2.1面積大小改變用標尺測量受試前后同一黃褐斑的長徑和寬徑，計算面積(cm2)。
2.1.2.2顏色深淺變化 按照中國科學院地理研究所設計研制，測繪出版社1992年出版的《實用標準色卡》(第1版)中的棕色(Y+M+Bk即黃+品紅+黑的疊色)色卡為黃褐班顏色深淺的判斷標準I度(15、20、5)，II度(30、40、10)III(40、60、15)。
2.3安全性觀察 2.3.1血液及尿常規檢查 紅細胞計數，血紅蛋白，白細胞計數，尿十項檢測。
2.3.2生化指標測定 血清白蛋白ALB，總蛋白TO，心肝腎功能(谷草轉氨酶AST，谷丙轉氨酶ALT，尿素UREA，肌苷CRE，血糖GLU、血脂(總膽固醇TC，甘油三脂TG)。
2.3.3腹部B超，心電圖，X線胸部透視。
3、祛斑功效判定 顯效黃褐斑顏色下降II度，或面積縮小≥30％，不產生新黃褐斑。
有效黃褐斑顏色下降I度，或面積縮小＜30％，≥10％不產生新的黃褐斑。
無效黃褐斑面積縮小＜10％，顏色無明顯變化。
4、實驗結果 4.1一般狀況 共觀察黃褐斑受試者30例，均為女性，年齡最小19歲，最大62歲，平均42.33±9.99歲，平均病程6.0±3.51年。
4.2黃褐斑顏色深淺變化 表14 黃褐斑顏色深淺變化 **P＜0.01 4.3黃褐斑面積大小變化表15 黃褐斑面積大小變化 **P＜0.01 4.4功效評定 表16 功效判定 4.5主要癥狀改善情況 表17 主要癥狀改善情況 4.6癥狀積分變化 表18 癥狀積分變化 **P＜0.01 4.7安全指標檢測 表19 安全性指標檢測 試食前后各項指標在正常范圍。
4.8腹部B超，心電圖，X線胸部均在正常范圍。
5、結論 5.130例黃褐斑受試者按要求服用本膠囊30天，黃褐斑面積平均縮小6.94±8.04cm2(P＜0.01)，顏色變淺，色卡平均降低0.13±0.22度(P＜0.05)，其中顯效3例，有效16例，總有效率63.33％，說明本膠囊有美容(祛黃褐斑)的作用。
5.2本膠囊對黃褐斑受試者的疲勞感、煩躁、睡眠等癥狀有改善作用。
5.3本膠囊試食前后，血紅蛋白、紅細胞、白細胞、血清總蛋白、白蛋白、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、肌苷、尿素、血糖、血脂及尿常規等檢測指標均在正常范圍，說明本品對受試者身體健康無不良影響。
5.4本膠囊試食后，未見過敏及其它不良反應。

具體實施例方式 實施例1 取市售的蝙蝠蛾擬青霉菌粉2500克、紅景天提取物1250克、銀杏葉提取物1250克，分別碾成100目篩的細粉，將三種細粉充分混勻，過100目篩，用85％的乙醇制成軟材。通過制粒機14目篩制粒，濕粒經60℃干燥，整粒，灌裝制成10000粒膠囊，拋光檢驗得成品，包裝，每粒膠囊0.5克。經Co60輻照滅菌5KGY，入庫。取空心硬膠囊符合GB13731-1992《藥品明膠硬膠囊》的要求。生產環境符合GB17405-1998保鍵食品良好生產規范。所用乙醇符合GB/39412-1994食用酒精。需在十萬級潔凈生產車間進行。
適宜人群免疫力低下者、有黃褐斑者。
不適宜人群兒童。
食用方法及食用量每次2粒，每日2次，溫開水送服。
保質期24個月。
儲藏方法密封、置陰涼干燥處。
注意事項本品不能代替藥物。
實施例2取市售的蝙蝠蛾擬青霉菌粉2300克、紅景天提取物1350克、銀杏葉提取物1350克，其余同實施例1。
實施例3取市售的蝙蝠蛾擬青霉菌粉2700克、紅景天提取物1150克、銀杏葉提取物1150克，其余同實施例1。
權利要求
1、一種養顏保健食品，其特征在于由以下重量配比的成分組成蝙蝠蛾擬青霉菌粉2300-2700、紅景天提取物1000-1400、銀杏葉提取物1000-1400，每100克保健食品含總黃酮≥2100mg、紅景天甙≥1650mg、腺苷≥10.19mg。
全文摘要
本發明涉及一種具有養顏作用的復方保健食品。由以下重量配比的成分組成蝙蝠蛾擬青霉菌粉2300－2700、紅景天提取物1000－1400、銀杏葉提取物1000－1400，每100克保健食品含總黃酮≥2100mg、紅景天甙≥1650mg、腺苷≥10.19mg。本發明富含多糖、腺苷、黃酮、甙類，通過平衡營養、增強代謝共同發揮調節免疫、美容祛黃褐斑、緩解更年期綜合癥等的保健功能。
文檔編號A61P17/00GK101066130SQ20071006592
公開日2007年11月7日 申請日期2007年5月31日 優先權日2007年5月31日
發明者梁珍惠, 陳翔 申請人:梁珍惠