一種中藥組合物在制備治療血管微栓塞的藥物中的應用的制作方法

專利名稱：：一種中藥組合物在制備治療血管微栓塞的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種中藥組合物的新用途，具體地，本發明涉及一種中藥組合物在制備治療血管微栓塞的藥物中的應用，屬中藥應用領域。
背景技術：
：血管微栓塞是指微血管栓塞，微血管是指血管直徑小于200nm的血管，主要是指動脈血管。血管微栓與多種心腦血管病密切向關，嚴重影響心腦血管病患者的預后。常見的血管微栓塞主要發生在冠狀動脈和顱內，發生在冠狀動脈的血管微栓塞稱為冠脈微栓塞(CME)，發生在顱內的血管微栓塞稱為顱內微栓子(CMS)。病理資料證實無心臟病而死于交通事故者、高血壓病者、糖尿病患者及心原性猝死者均可見不同程度的冠脈微栓塞(CME)。臨床資料顯示約15-43%不穩定型心絞痛患者發生CME或微小心梗。溶栓治療中血栓溶解不全及溶栓后的致栓環境是CME的重要原因。各種冠狀動脈介入治療(PCI)在疏通冠狀動脈達到血運重建的同時，由于機械作用使血管壁損傷，幾乎都伴有斑塊破裂及微小栓子或微血栓的形成，并由此導致CME及圍手術期微小心梗。臨床上，我們經常發現許多有明顯胸痛、ECG或/和活動平板負荷試驗具有典型心肌缺血表現的患者，但冠脈造影無或無顯著導血冠脈狹窄而僅表現為TIMI血流降低，推測這些患者可能為心肌微血管病變或微栓塞。長期以來人們更多關注的是心臟表面較大的導血冠脈狹窄或閉塞對心肌灌注的影響。近年來，通過對溶栓后冠脈造影的TIMI血流觀察及無再流現象的研究發現CME—旦發生，解決辦法有限、對預后的影響甚至超過導血冠脈狹窄或閉塞。更深入的研究發現在急性心梗溶栓治療及各種PCI包括急性心肌梗死直接PCI后，如果發生TIMI血流減少，其原因多為CME;若發生CME則患者預后較差，隨后發生缺血性心肌病可能性顯著增加，生存率明顯降低。因此，CME嚴重影響患者的預后。栓塞是弓I起缺血性卒中的主要原因之一，而腦動脈中發現微栓子往往是腦栓塞的前兆。顱內血管狹窄是微栓子產生的主要原因，提示微栓子的來源之一是動脈粥樣硬化斑塊。顱內外動脈同時伴有病變時微栓子檢出率增高,這也即腦卒中動脈-動脈栓塞的機制。目前臨床對于血管微栓的治療并無特效藥，主要采用阿司匹林、低分子肝素鈉等治療，使用這些藥物治療存在出血傾向等嚴重不良反應。本發明是在第01131203.3號和第200410048292.2號專利的基礎上進行的改進發明，在此全文引用該兩專利文件記載的內容。上述兩項專利未公開該中藥組合物在治療血管微栓塞中的應用。
發明內容本發明目的是提供一種中藥組合物在制備治療血管微栓塞的藥物中的應用，所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成-人參3-10水蛭3-11土鱉蟲5-10乳香(制)1-5赤芍3-9降香l-5檀香l-5全蝎3-9蟬蛻3-12蜈蚣l-3冰片l-7酸棗仁(炒)3-10;優選地，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參6水蛭10土鱉蟲7乳香(制)2赤芍5檀香2全蝎7蟬蛻7蜈蚣l冰片5酸棗t降香2人參10水蛭8土鱉蟲7乳香(制)2赤芍5檀香2全蝎9蟬蛻7蜈蛇1冰片5酸棗t降香2粉；人參6水蛭11土鱉蟲7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎3蟬蛻7蜈蚣1冰片5酸棗仁(炒)5;上述中藥組合物的活性成分由下列成分組成a平均粒徑小于100pm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲、蟬蛻及制乳香藥b冰片藥粉；c由降香和檀香提取的揮發油；d人參用乙醇提取后的醇提液經濃縮后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香藥渣的水提液、赤芍和炒酸棗仁加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人參藥渣的水提液過濾、混勻后濃縮成的水提浸膏。本發明還公開了含有上述中藥組合物作為活性組分的藥物制劑為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。本發明提供了該中藥組合物制備治療血管微栓塞藥物中的應用，優選為該中藥組合物制備治療冠脈微栓塞藥物中的應用或者該中藥組合物制備治療顱內微栓子藥物中的應用。本發明中藥組合物中，作為活性組分的原料藥的拉丁名及其加工方法來自《中藥大辭典》(1977年7月，第一版，上海科學技術出版社)和《中國藥典》(2005年版，化學工業出版社)。本發明中藥組合物還可以按常規的提取和制劑工藝，例如，范碧亭《中藥藥劑學》(上海科學出版社1997年12月第1版)記載的制備工藝，制成藥劑學可接受的任意常規劑型，例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑等。本發明的應用中，所述中藥組合物為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑，為使上述劑型能夠實現，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質等。填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯垸酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括聚乙烯吡咯垸酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括甜味劑及各種香精；防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質包括PEG6000，PEG4000，蟲蠟等。本發明膠囊劑優選通過以下制備方法制成將上述配比的水蛭、全蝎、蟬蛻、土鱉蟲、蜈蚣等五味藥洗凈，低溫烘干，備用；檀香、降香提取揮發油，藥渣及水溶液備用；人參用70%乙醇加熱回流提取二次，第一次3小時，第二次2小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味；人參藥渣與檀香、降香的藥渣以水溶液合并，加入赤芍、酸棗仁(炒)，加水煎煮二次，第一次3小時，第二次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20-1.25(60°C)的清膏，加入上述人參醇提液，混勻，低溫干燥，粉碎成細粉；乳香(制)與水蛭等五味共粉碎成細粉；冰片研細，分別與上述細粉配研，混勻，噴入揮發油，混勻，裝入膠囊，即得。或者，本發明膠囊劑優選通過以下制備方法制成a)原料藥的重量比為人參3-10份、水蛭3-ll份、土鱉蟲5-10份、制乳香l-5份、赤芍3-9份、降香l-5份、檀香l-5份、全蝎3-9份、蟬蛻3-12份、蜈蚣l-3份、冰片l-7份、炒酸棗仁3-10份；b)藥材粉碎工藝將全蝎、水蛭、蜈峻、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經凈選、水洗處理后和凈選炮制后的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上;粗粉后的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑小于ioo^m;待粉碎的藥材經清洗烘干滅菌后，配料；c)提取濃縮和干燥工藝降香和檀香先加水提取揮發油后再用水提取，赤芍和酸棗仁加水煎煮，水提液過濾后，待濃縮成浸膏；人參用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，濃縮成醇提浸膏，水提液過濾與所有的水提液混勻后濃縮成水提浸膏；d)制劑工藝在沸騰制粒干燥機中加入超微粉碎粉，再將步驟c)所得提取浸膏噴入制粒；將制成的顆粒經整粒，加入冰片細粉，噴入由降香和檀香提取的揮發油，混勻后由膠囊充填機充填，制成膠囊。或者，本發明膠囊劑優選通過以下制備方法制成a)原料藥的重量比為人參3-10份、水蛭3-ll份、土鱉蟲5-10份、乳香(制)l-5份、赤芍3-9份、降香l-5份、檀香l-5份、全蝎3-9份、蟬蛻3-12份、蜈蚣l-3份、冰片l-7份、炒酸棗仁3-10份；b)藥材粉碎工藝將全蝎、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經凈選、水洗處理后和凈選炮制后的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上;粗粉后的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑小于IOOHm;待粉碎的藥材經清洗烘干滅菌后，配料；c)提取濃縮和干燥工藝降香和檀香先加水提取揮發油后再用水提取，赤芍和酸棗仁加水煎煮，水提液過濾后，待濃縮成浸膏；人參用乙醇提取后，再用水提取，醇提液回收乙醇后，濃縮成醇提浸膏，水提液過濾與所有的水提液混勻后濃縮成水提浸膏，將浸膏直接噴霧干燥成噴霧粉；d)制劑工藝將超微粉碎粉與步驟c)所得噴霧干燥粉一起加到沸騰制粒干燥機中，再噴溶媒制成顆粒；將制成的顆粒經整粒，加入冰片細粉，噴入由降香和檀香提取的揮發油，混勻后由膠囊充填機充填，制成膠囊。本發明藥物組合物的用量，折算成原料藥材的重量，為每次0.8-3克，每日服用2-4次，優選為每次l.ll-2.22克，每日服用三次。具體實施例方式實施例l:a)原料藥配方為人參39.6g水蛭72.6g土鱉蟲46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎19.8g蟬蛻46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸棗仁(炒)33g;b)藥材粉碎工藝將全蝎、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經凈選、水洗處理后和凈選炮制后的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上;粗粉后的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑小于30-40pm;待粉碎的藥材經清洗烘干滅菌后，配料；C)提取濃縮和千燥工藝降香和檀香先加水提取揮發油后再用水提取，赤芍和酸棗仁加適量水煎煮二次，每次3小時，合并水提液，過濾后，濃縮成浸膏；人參用適量70%的乙醇提取二次，每次3小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，再用水提取，醇提液濃縮成6(TC測定相對密度為0.91.1醇提浸膏，水提液過濾與上述所有水提液混勻后濃縮至6(TC測定相對密度為0.91.1的清膏，備用；d)制劑工藝在沸騰制粒干燥機中加入超微粉碎粉，再將步驟c)所得提取浸膏噴入制粒；將制成的顆粒經整粒，加入冰片細粉，噴入由降香和檀香提取的揮發油，混勻后由膠囊充填機充填，制成1000粒膠囊。本發明藥物的用量，為每次2-4粒，每日服用三次。實施例2a)原料藥配方為人參66g水蛭52.8g土鱉蟲46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎59.4g蟬蛻46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸棗仁(炒)33gb)藥材粉碎工藝將全蝎、水蛭、蜈蛇、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經凈選、水洗處理后和凈選炮制后的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上;粗粉后的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑小于70-90pm;待粉碎的藥材經清洗烘干滅菌后，配料；c)提取濃縮和干燥工藝降香和檀香先加水提取揮發油后再用水提取，赤芍和酸棗仁加適量水煎煮二次，每次3小時，合并水提液，過濾后，待濃縮成浸膏；人參用適量70%的乙醇提取二次，每次3小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，再用水提取，醇提液濃縮成相對密度在6(TC測定為1.01.05醇提浸膏，水提液過濾與上述所有水提液混勻后濃縮至60。C測定相對密度為1.01.1的清膏，備用；d)制劑工藝在沸騰制粒干燥機中加入超微粉碎粉，再將步驟C)所得提取浸膏噴入制粒；將制成的顆粒經整粒，加入冰片細粉，噴入由降香和檀香提取的揮發油，按常規制劑工藝壓制成1ooo片。本發明藥物的用量，為每次2-4片，每日服用三次。實施例3:丸劑的制備a)原料藥配方為人參39.6g水蛭66g土鱉蟲46.2g乳香(制)13.2g赤芍33g降香13.2g檀香13.2g全蝎46.2g蟬蛻46.2g蜈蚣6.6g冰片33g酸棗仁(炒)33gb)藥材粉碎工藝將全蝎、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲和蟬蛻五種蟲藥經凈選、水洗處理后和凈選炮制后的制乳香按處方配料，由粉碎機進行粉碎，藥粉細度達到80目以上;粗粉后的藥粉經各種超微粉碎技術進行超微粉碎，使藥粉平均粒徑10-20nm;待粉碎的藥材經清洗烘干滅菌后，配料；c)提取濃縮和干燥工藝降香和檀香先加水提取揮發油后再用水提取，赤芍和酸棗仁加適量水煎煮二次，每次3小時，合并水提液，過濾后，待濃縮成浸膏；人參用適量70%的乙醇提取二次，每次3小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，再用水提取，醇提液濃縮成60。C測定相對密度為0.91.0醇提浸膏，水提液過濾與上述所有水提液混勻后濃縮至6(TC測定相對密度為1.01.1的清膏，備用；d)制劑工藝按常規制劑工藝，制成1000粒丸劑。本發明藥物的用量，為每次2-4粒，每日服用三次。為闡明本發明中藥組合物對血管微栓塞的治療活性，用按上述實施例l方法制得的膠囊劑(以下稱本發明藥物)進行了下列藥理和臨床試驗以證明其療效，但其不能對本發明的范圍構成任何限制。實驗例l:1材料1.1實驗動物SPF級SD雄性大鼠64只，體重280320g。由河北醫科大學實驗動物中心提供，實驗動物及實驗步驟符合國家實驗動物管理條例。1.2實驗試劑Timd試劑盒由Roche公司提供，免疫組織化學配套試劑如胃蛋白酶、檸檬酸抗原修復緩沖液、核快紅復染液、顯色液、PBS緩沖液、多聚賴胺酸等由福州邁新生物有限公司提供，本發明藥物由河北以嶺醫藥研究院提供。2.實驗方法2.1冠脈微栓塞模型制備體重約300克的SPF級大鼠，每只取尾靜脈血lml加腎上腺素2ml促凝固成血栓，在60。C的烤溫箱烘干，玻璃研磨器研磨5min，經50100um大小的過濾網過濾后使之成為直徑為10100"m較均勻的微栓子顆粒。腹腔注射氯胺酮(66.7mg/Kg)和安定(6.67mg/Kg)復合麻醉后，取仰臥位，術區備皮消毒，氣管插管，呼吸機輔助通氣(300ml/min)。取第2肋間水平橫切口，剪斷胸骨，切開心包，暴露主動脈根部，鉗夾升主動脈暫時阻斷血流，以細針向心尖部注射微栓子lmg，10s后松開鉗夾的升主動脈，壓迫穿刺口止血，關胸復蘇。為防止術后感染，每天肌注青霉素40萬U/只，連續3天。2.2動物分組與給藥64只大鼠隨機分成4組，即對照組(CL組)、假手術組(SO組)、冠脈微栓塞組(ME組)和本發明藥物治療組(TL組)，每組16只。(1)TL組冠脈微栓塞模型制備后，以本發明藥物內容物每天450mg生藥/Kg，用生理鹽水稀釋到5ml灌胃，每日一次，詞養28天后處死；(2)ME組冠脈微栓塞模型制備后，予生理鹽水灌胃，每日一次，一次5ml，飼養28天后處死；(3)SO組手術方法同ME組，自主動脈根部注入生理鹽水替代血栓微粒，術后予生理鹽水灌胃，每日一次，一次5ml，飼養28天后處死；(4)CL組未進行手術的大鼠做為正常CL組，術后予生理鹽水灌胃，每日一次，一次5ml，飼養28天后處死。3.觀察指標與方法3.1HE染色法及微小心肌梗死灶計數、所占觀察面積百分比測定CL組、SO組、ME組及TL組大鼠，術后28天氯胺酮和安定腹腔注射麻醉，切開股靜脈，靜脈注射10%KC12ml使心臟停搏于舒張末期，迅速開胸取出心臟，肝素生理鹽水沖洗后，10n/。中性甲醛恒壓(90mmHg)灌注冠脈15min。去除大血管及心房組織，平行房室間溝方向將心室橫切為2mm厚的組織塊，10%中性甲醛固定24}1，埋蠟、切片、HE染色。指標及觀察方法如下微梗死定義為顯微鏡下為散在、局灶性分布的小梗死灶；顯微圖象微機分析系統(IMAGINGPRO4)隨機觀察100個X100視野，計算每百視野微小心肌梗死灶數量(Nmmi，個)，每視野微小心肌梗死灶所占百分比，取其平均值(Ammi，％)。3.2心肌組織膠原纖維占觀察面積百分比測量CL組、SO組、ME組和TL組，術后28天心室組織石蠟切片常規脫蠟至水，天青石藍液染核3分鐘，蒸餾水洗3次，天狼星紅飽和苦味酸液染色15分鐘，無水乙醇分化和脫水，二甲苯透明和中性樹膠封固。指標及觀察方法膠原纖維蛋白染成紅色，心肌細胞黃色。顯微圖象微機分析系統(IMAGINGPR04)觀察100個X100視野，計算每個視野下膠原纖維所占面積的百分比，取其平均值(Fcf，％)。3.3超聲心動圖及心功能指標測量CL組、SO組、ME組和TL組大鼠，超聲心動圖扇掃角度15度，幀頻>360/Min。術前、術后第l、2、4周各觀察1次，獲得左室短軸系列切面圖象。觀察指標及方法室間隔及左室后壁收縮期和舒張期厚度(IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD)、左心室收縮期和舒張期內徑(LVEESD、LVEED)、左室短軸縮短率(LVFS)及左室射血分數(LVEF)。3.4心肌細胞凋亡檢測方法與指標3.4.1免疫組化檢測CL組、SO組、ME組及TL組大鼠，術后28天心室組織石蠟切片常規脫蠟至水，微波抗原修復(檸檬酸緩沖液，PH6.0)，1%過氧化水阻斷內源性過氧化酶IO分鐘，并按SP免疫組化試劑盒加入活化型caspase-3(l:50稀釋)，4t:孵育過夜,加二抗、三抗，DAB顯色，蘇木素復染。不加一抗代以PBS為陰性對照。觀察指標及方法正常心肌細胞染成淡綠色，染成棕黃色的為凋亡心肌細胞。計算機顯微圖像分析系統隨機觀察100個X200高倍視野活化型caspase-3免疫組化陽性心肌細胞數，計算每個視野下凋亡心肌細胞數占總心肌細胞數的百分比(Rapol，％)，取平均值。3.4.2原位末端標記(TUNEL)檢測CL組、SO組、ME組及TL組大鼠,術后1天及28天心室組織石蠟切片常規脫蠟、水化，0.5%胃蛋白酶室溫孵育30min透膜，PBS沖洗，TUNEL反應液37t:孵育1小時，PBS沖洗，堿性磷酸酶抗體37'C孵育30min，PBS沖洗，BCIP/NBT顯色，核快紅復染，封片鏡檢。步驟中不加TdT酶者為陰性對照，正常心肌組織片經DNA聚合酶I(lU/ml，37。C孵育30min)消化產生DNA鏈斷裂作為陽性對照。觀察指標及方法正常心肌細胞核染成淡紅色，凋亡的心肌細胞核呈藍黑色。顯微鏡結合計算機顯微圖像分析系統隨機觀察100個X400視野TUNEL陽性心肌細胞數，計算每個視野下凋亡心肌細胞數占總心肌細胞數的百分比(Rapo2，％)，取平均值。3.5VDI因子染色觀察心肌細胞內小冠脈密度CL組、SO組、ME組及TL組大鼠，術后l、28天心室組織石蠟切片常規脫蠟，胃蛋白酶抗原修復(檸檬酸緩沖液，PH6.0)，P/。過氧化水阻斷內源性過氧化酶10分鐘，并根據SP免疫組化試劑盒說明書依次加入兔抗鼠W因子相關抗原多克隆抗體(l:100稀釋),4。C孵育過夜，加二抗、三抗，DAB顯色，蘇木素復染。步驟中不加一抗代以PBS為陰性對照。觀察指標及方法冠脈血管內皮細胞染成黃棕色。微機顯微圖像分析系統隨機觀察100個X200倍視野，計算單位面積10100pm微小冠狀動脈數量(Nmv,個/mm2)。3.6統計分析方法應用SPSS12.0軟件包進行統計分析。計量資料以？士S表示，組間比較采用e-WayANNOVA分析，方差齊者用LSD檢驗，方差不齊者用Game-Howell檢驗，組均數間比較采用成組t檢驗。PO.05差異具有顯著性。4實驗結果4.1HE染色與微小心肌梗死灶定量分析術后28天，CL組、SO組、ME組和TL組每百視野微小心肌梗死灶數量Nmmi分別是0.04±0.01個、0.03±0.01個、4.76±1,28個和U3±0.65個；每視野微小心肌梗死灶所占百分比Ammi分別是(1.55±0.09)%、(1.67±0.07)%、(37.02±13.11)%和(6.77±2.49)%。與CL組比，ME組Nmmi和Ammi明顯增多(P〈0.01);與ME組比，TL組Nmmi和Ammi顯著減少(PO.01);CL組與SO組比，Nmmi無明顯差異(P〉0.05)。結果表明，本研究所制作的大鼠CME模型是成功的，形成了微小心肌梗死灶；本發明藥物治療28天后顯著減少微小心肌梗死結果見表1。表1CME后Nmmi、Ammi及本發明藥物的治療效果(i±S)組別NNmmi(個)Ammi(%)CL組160.04±0.011.55±0.09SO組160.03±0.011.67±0.07廳組164.76±1.28*37.02±13.11*TL組161.13±0.65#6.77±2.49#注承與SO組比較，PO.01;存與ME組比較，PO.014.2心肌間質膠原纖維定量分析結果術后28天，CL組、SO組、ME組和TL組Fcf分別是(0.55士0.43)0/0、(0.57±0.41)%、(27.99±5.37)%和(2.44±0.77)%。與CL組比，ME組Fcf明顯增多(PO.01);與ME組相比，TL組Fcf顯著減少(P〈0.01);CL組與SO組比，Fcf無明顯差異(PX).05)。術后28天，各組心肌外膜區Fcf分別是(0.27±0.12)%、(0.22±0.10)%、(0.30±0.15)%和(0.28±0.09)%，差異無顯著性(P>0.05)。內膜區Fcf分別是(0.25士0.11)0/0、(0.28±0.13)0/0、(28.06±8.03)%和(10.47±2.01)%;與CL或SO組比，ME組Fcf明顯增多(PO.01);與ME組相比，TL組Fcf顯著減少(PO.Ol)。結果表明，CME后死亡的心肌細胞被膠原纖維取代，形成微纖維化灶，14多分布于心內膜下層心肌；本發明藥物干預28天明顯抑制膠原纖維增生，結果見表2。表2CME后各組及其內外膜區Fcf變化及本發明藥物治療效果(^±S)組別N28天Fcf(%)28天內膜區Fcf(。/。)28天外膜區Fcf(%)CL組160.55±0.430.25±0.110.27±0.12SO組160.57±0.410.28±0.130.22±0.10廳組1627.99±5.37*28.06±8.03*0.30±0.15TL組162.44±0.77#10.47±2.01#0.28±0.09注承與SO組比較，PO.01;弁與ME組比較，PO.014.3超聲心動圖心功能變化及指標測量術前，CL組、SO組、ME組和TL組LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF各指標的差異無顯著性(P均>0.05)。術后1周、2周和4周，ME組與CL組比，LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF差異顯著(PO.01);TL與ME組比，LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF差異顯著(PO.01);CL組與SO組無明顯差異(PX).05);ME組內比較顯示術后1周、2周、4周LVEDD、LVESD、IVSS、IVSD、LVPWS、LVPWD、LVFS、LVEF進行性改變(P〈0.01)。結果表明，CME后左室功能進行性的降低，本發明藥物治療4周后明顯減少左室功能惡化結果見表3。表3CME后超聲心動圖心功能指標改變及本發明藥物治療效果(i±S)時間組別LVEDD(mm)LVESD(mm)LVPWD(mm)LVPWS(mm)IVSD(mirOIVSS(mm)LVEF(0/0)LVFS(%)CL組4.8±0.52.1±0.43.5±0.24.3±0.42.1±0.34.4±0.591.1±7.662.9±5.6術SO組4.2±0.31.7±0.33.8±0.74.3±0.92.1±0.54.5±0.892.9±8.163.9±4.7前ME組4.2±0.61.7±0.63.8±0.94.1±0.62.0±0.24.5±0.793.7±7.361.0±4.5TL組4.6±0.82.0±0.44.0±0.74.2±0.72.4±0.34.6±0.594.3±6.959.2±5.1CL組4.1±0.42.0±0.23.4±0.64.2±0.52.3±0.64.3土0.692.0±6.160.5±4.94SO組4.5±0.62.2±0.83.9±0.54.2±0.82.3±0.74.3±0.490.4±7.660.3±5.7周ME組7.0±1.1*4.3±1.0*2.3±0.2*1.7±0.3*1.6±0.2*2.5±0.3*49.5±3.1*22.6±2.7*TL組4.6±0.8#2.1±0.2#4.0±1.1#3.5±0.9#2,1±0.2#4.1±0.9#82.1±7.2#48.6士4.1#注承與SO組比較，PO.01;弁與ME組比較，PO.01154.4心肌細胞凋亡檢測方法與指標4.4.1免疫組化檢測術后28天，CL組、SO組、ME組和TL組心肌細胞Rapol分別是(1.33±0.31)%、(1.48±0.41)%、(5.17±0.44)%和(3.02±0.25)%;與CL組比，ME組Rapol顯著增高(PO.01);CL組與SO組比，Rapol無明顯差異(PX).05);TL組與ME組比，TL組Rapol顯著降低(PO.Ol)。說明本發明藥物治療28天可顯著減少心肌細胞凋亡。術后28天，CL組、SO組、ME組和TL組外膜區心肌細胞Rapol分別是(1.59±0.42)%、(1.46±0.38)%、(1.61±0.32)%和(1.53±0.09)%;各組外膜區Rapol無明顯差異(PX).05)。CL組、SO組、ME組和TL組心內膜區Rapol分別是(1.45±0.37)%、(1.57±0.43)°/o、(6.43±0.31)%和(3.61±0.27)%;與CL組比，ME組心內膜區心肌細胞Rapol顯著升高(PO.01);與ME組比，TL組心內膜區心肌細胞Rapol顯著低于ME組(PO.Ol)。總結果表明，CME后心內膜區caspase-3表達及心肌細胞凋亡明顯高于外膜區；本發明藥物治療28天顯著減少caspase-3表達及心肌細胞凋亡，結果見表4。表4各組及各組外膜和內膜區Rapol和本發明藥物治療效果(7士S)組別28天Rapol(%)內膜區Rapo1(。/。)外膜區Rapol(%)CL組1.33±0.311.45±0.371.59±0.42SO組1.48±0.411.57±0.431.46±0.38ME組5.17±0.44*6.43±0.31*1.61±0.32TL組3.02±0.25#3.61±0.27#_1.53±0.09注承與SO組比較，PO.01;存與ME組比較，PO.014.4.2原位末端標記(TUNEL)檢測結果術后28天，CL組、SO組、ME組和TL組Rapo2分別是(1.51±0.27)%、(1.56±0.37)%、(4.88±0.29)%和(2.15±0.18)%;與CL組比，ME組Rapo2明顯升高(PO.01);CL組與SO組比，Rapo2無明顯差異(PX).05);與ME組比，TL組Rapo2明顯降低(PO.Ol)。說明本發明藥物治療28天顯著減少心肌細胞凋亡。組外膜區Rapo2分別是(1.58±0.26)%、(1.51±0.24)%、(1.53±0.16)%和(1.47±0.10)%;各組外膜區Rapo2無明顯差異(PX).05)。CL組、SO組、ME組和TL組心內膜區Rapo2分別是(1.59±0.22)%、(1.55±0.21)%、(10.21±0.51)%和(3.37±0.15)0/0;與CL組比，ME組心內膜區Rapo2明顯升高(PO.01);與ME組比，TL組心內膜區Rapo2顯著降低(PO.Ol)。總結果表明，CME后心內膜區心肌細胞凋亡明顯高于外膜區，本發明藥物治療28天顯著減少心肌細胞凋亡，結果見表5。表5各組及各組外膜和內膜區Rapo2和本發明藥物治療效果(i±S)組別28天Rapo2(。/。)內膜區Rapo2(。/。)外膜區Rapo2(%)CL組1.51±0.271.59士0.221.58±0.26SO組1.56±0.371.55±0.211.51±0.24ME纟且4.88±0.29*10.21±0.51*1.53±0.16TL組2.15±0.18#3.37±0.15#_1.47±0.10注承與SO組比較，PO.01;存與ME組比較，PO.014.5VDI因子染色觀察心肌細胞內小冠脈密度術后28天，CL組、SO組、ME組和TL組Nmv分別是4.47±1.37根/mm2、4.21±1.29根/mm2、1.18±0.36根/mm2、2.88±0.56根/mm2。與CL組比，ME組心肌Nmv顯著減少(PO.01);與ME組比，TL組心肌Nmv顯著增高(PO.01);CL組與SO組比Nmv無明顯差異(PX).05)。結果表明，大鼠CME后慢性過程中心肌內微血管床密度的減少；本發明藥物治療28天可顯著增加心肌內微小冠脈數量，結果見表6。表6CME后心肌內微小冠脈密度變化及本發明藥物治療效果(7±S)組別28天Nmv(根/mm2)CL組4.47±1.37SO組4.21±1.29廳組1.18±0,36*TL組2.88±0.56#:承與SO組比較，PO.01;存與ME組比較，PO.015結論冠脈微栓塞后，因心肌細胞凋亡、間質微血管丟失及膠原纖維增殖產生心肌和心功能的損害，本發明藥物降低心肌細胞凋亡、減少心肌微小血管丟失及抑制間質膠原纖維增生，減少心肌損害，進而可改善心功能，可有效治療冠脈微栓。實驗例2:1資料與方法1.1一般資料共觀察60例，隨機分為治療組和對照組。治療組30例，男18例，女12例，年齡46-72歲，平均年齡59.6士5.3歲；對照組30例，男11例，女19例；年齡45-73歲，平均年齡58.5±5.1歲。1.2診斷及排除標準經顱彩色多譜勒(TCD)檢測顱內微栓子(MES)陽性患者；缺血性腦卒中診斷符合全國腦血管病學術會議修訂的診斷標準[全國腦血管病學術會議.各類腦血管疾病診斷要點.中華神經科雜志，1996，29(6):379.]，并經頭顱CT(和/或)MRI證實,排除心源性腦栓塞、腦動脈炎、血液系統疾病等其他原因引起的腦梗死。2方法2.1治療方法對照組急性期給予低分子肝素鈉，每次4250-6400IUaXa，皮下給藥，每天兩次，急性期過后給予阿司匹林腸溶片，每次50mg，口服，每日一次，同時給予對癥治療，治療組在對照組給藥的基礎上加用本發明藥物，每次3粒，每日3次，兩組療程均為4周。2.2觀察指標及方法60例患者治療前進行均常規做TCD檢測。方法如下用2MHz探頭和spencer監護頭架固定兩側顳窗，同步探測左、右MCA，顯示左右4個不同深度位點頻譜，選擇頻譜清晰的兩個位點，相鄰兩位點距離相差4mm以上，打開栓子自動記錄及4個位點的血流速度曲線開關，關掉偽跡開關，栓子記錄可靠度定為75%，每個患者監測3060min，一般為40min。栓子監測系統將自動記錄下栓子總數及每一個栓子的可靠度、強度、速度、持續時間、位置等并在離線狀態下加以人工識別真偽栓子，標準采用第九屆國際腦血液動力學會議制訂的MES識別標準[ConsensusCommitteeofthe9thInternationalCerbralHemodynamicSymposium.BasicidentificationcriteriaofDopplermicroembolicsignals[J].Stroke,1995,26(6):923-925.]。在治療2周后和4周后再做同樣的TCD檢測，觀察MES陽性率的變化。所有患者隨訪l年，記錄腦梗死的復發率。2.3統計分析采用SPCS10.0統計軟件，計數資料用f檢驗，P<0.05差異具有顯著性。3治療結果3.1MES陽性率的變化治療組和對照組的MES陽性率在治療2周后出現顯著性差異，治療組在治療兩周后MES陽性率顯著低于對照組，結果見表7表7兩組治療后MES陽性數結果N(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>注*與對照組比較？<0.053.2兩組隨訪結果對照組1年內復發腦梗死為6例，治療組無一例復發，可見本發明藥物可有效治療顱內微栓子。3.3不良反應檢測治療組發現出血傾向3例，胃腸道反應2例，對照組發現出血傾向2例，胃腸道反應2例，經統計兩組不良反應無顯著性差異。4.結論本發明藥物對于顱內微栓子療效確切，可有效清除顱內微栓子，降低腦梗死的復發率，并且不會增加出血傾向等不良反應發生率。權利要求1.一種中藥組合物在制備治療血管微栓塞的藥物中的應用，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參3-10水蛭3-11土鱉蟲5-10乳香(制)1-5赤芍3-9降香1-5檀香1-5全蝎3-9蟬蛻3-12蜈蚣1-3冰片1-7酸棗仁(炒)3-10。2.如權利要求l所述的應用，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參6水蛭10土鱉蟲7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎7蟬蛻7蜈蚣1冰片5酸棗仁(炒)5。3.如權利要求l所述的應用，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參10水蛭8土鱉蟲7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎9蟬蛻7蜈蚣1冰片5酸棗仁(炒)5。4.如權利要求l所述的應用，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參6水蛭11土鱉蟲7乳香(制)2赤芍5降香2檀香2全蝎3蟬蛻7蜈蚣1冰片5酸棗仁(炒)5。5.如權利要求l-4中任一項所述的應用，其特征在于，所述中藥組合物的活性成分由下列成分組成a平均粒徑小于100pm的全蝎、水蛭、蜈蚣、土鱉蟲、蟬蛻及乳香(制)藥粉；b冰片藥粉；c由降香和檀香提取的揮發油；d人參用乙醇提取后的醇提液經濃縮后的醇提浸膏；e提取成分c后的降香和檀香藥渣的水提液、赤芍和酸棗仁(炒)加水煎煮后的水提液以及提取成分d后的人參藥渣的水提液過濾、混勻后濃縮成的水提浸膏。6.如權利要求l-4中任一項所述的應用，其特征在于，該中藥組合物作為活性成分的藥物制劑為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液或丸劑。7、如權利要求l-4中任一項所述的應用，其特征在于，該中藥組合物在制備治療冠脈微栓塞的藥物中的應用。8、如權利要求l-4中任一項所述的應用，其特征在于，該中藥組合物在制備治療顱內微栓子的藥物中的應用。全文摘要本發明公開了一種中藥組合物在制備治療血管微栓塞的藥物中的應用。本發明中藥組合物由人參、水蛭、蜈蚣、全蝎、土鱉蟲、蟬蛻、赤芍、冰片等組成，具有益氣活血、化瘀通絡的功效。本發明中藥組合物對于治療血管微栓塞有顯著療效，通過臨床試驗證明該藥物組合物治療血管微栓塞安全有效，且未發現不良反應。文檔編號A61K36/725GK101632726SQ20081005543公開日2010年1月27日申請日期2008年7月21日優先權日2008年7月21日發明者安軍永,李向軍,超王,鄭立發申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司