冬凌草甲素制劑及其制備方法和用途的制作方法

專利名稱：：冬凌草甲素制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
：本發明總的涉及二辟類藥物制劑及其制備方法和用途。更具體地，本發明公開了一種藥物制劑，其中包含二薛類藥物和兩親性表面活性物質，以及任選地其它藥學可接受的載體和/或賦型劑。本發明另外涉及所述藥物制劑的制備方法及其在疾病治療中的用途。
背景技術：
：冬凌草甲素是從唇形科香茶菜屬植物中分離出的一種貝殼杉烯二萜類天然有機化合物，具有較強的抗腫瘤活性，對多種轉移性腫瘤有效，臨床上主要用于肝癌、食管癌、胰腺癌等的治療(冬凌草曱素的藥學研究進展，張典瑞，任天池，中國藥學雜志，2003，38(11):817-820)。新的研究發現，冬凌草甲素對治療急性白血病也有較好的效果(一種治療M2型急性髓性白血病的藥物及其注射液的制備，中國專利申請200410016890.1)。冬凌草甲素為二萜類成分，在水溶液中溶解度以及溶出效率均較低，難以達到抗癌作用需要的濃度。因此，在本領域中一般釆用加入助溶劑的方法提高冬凌草曱素在水中的溶解度，如加入乙醇、丙二醇(一種治療M2型急性髓性白血病的藥物及其注射液的制備，中國專利申請200410016890.1)、二甲亞砜(冬凌草甲素注射液及其制備工藝，中國專利申請200410061309.8)。盡管如此制備的制劑療效有所提高，但是，注射有機溶劑引發的炎癥和疼痛等血管刺激性反應，使患者難以耐受，同時也限制了使用劑量。為了解決這個問題，有研究采用乳劑(冬凌草甲素乳劑及其制備方法，中國專利CN1222285C)，或者脂質載體(冬凌草甲素微粒給藥制劑及其制備方法，中國專利申請，200510046253.3)制備冬凌草甲素制劑。這些載體避免了用刺激性溶劑進行增溶，但是，這些載體普遍存在載藥效率偏低的問題，需要大5量的具有表面活性作用的輔料對冬凌草甲素進行分散、乳化或穩定.同時，其中使用大量的油脂和脂質成分在制備、滅菌和儲存過程中容易因氧化、水解等產生有害物質，特別是溶血磷脂，顯著影響到注射制劑的安全性。因此，制備一種載藥量高并具有良好穩定性和安全性的藥物制劑非常必要。
發明內容本發明提供了一種二萜類藥物制劑，其中包含二萜類藥物和兩親性表面活性物質，以及任選地其它藥學上可接受的載體和/或賦型劑。在一個實施方式中，所述藥物制劑是二辟類藥物與表面活性物質自組裝形成的膠束樣自組裝結構納米粒子制劑。在又一個實施方式中，所述藥物制劑為凍干粉形式，其可以在臨用前通過加入水或其它水性溶劑而制備成膠束樣自組裝粒子懸浮制劑的形式以供使用。本發明進一步涉及一種二辟類藥物制劑，其可以是注射劑的形式，其中包含二萜類藥物和兩親性表面活性物質，其中所述二薛類藥物以分子或微晶狀態存在于膠束樣自組裝結構納米粒子。本發明另一方面涉及一種制備二薛類藥物制劑的方法，其中包括將二薛類藥物與表面活性物質自組裝形成膠束樣自組裝結構的步驟。在一些實施方案中，其特別的包括將二薛類藥物、表面活性物質分散于允許其分散的分散介質中的步驟。在一些實施方案中，其還包括除去分散介質的步驟。本發明另外涉及一種預防或治療疾病、尤其是癌癥的方法，其包括對有此需要的患者施用本發明的二薛類藥物制劑。本發明還涉及本發明所述藥物制劑在制備用于預防或治療患者中疾病、尤其是癌癥的藥物中的用途。圖1圖示說明了HPLC法測定冬凌草甲素濃度的典型圖鐠。具體實施例方式在本發明中，"二薛類藥物，，指的是在水性溶劑、例如水中的溶解度較低或不溶的藥物活性劑，其中具有二薛基本結構，其實例有例如冬凌草總二萜、香茶菜總二萜、冬凌草甲素、毛萼乙素等，及其任何組合。本發明所用術語"膠束樣自組裝結構"、"膠束樣粒子"、"膠束樣結構"、"膠束樣藥物"或"自組裝結構"是指，由表面活性物質，并任選地結合藥物分子，在介質中的界面上自發定向排列形成的分散體系。表面活性物質的表面活性源于其分子的兩親結構，親7jC基團使分子有進入水相的趨向，而憎水基團則竭力阻止其在水中溶解而從水的內部向外遷移，有逃逸7jC相的傾向，而這兩種傾向平衡的結果是使表面活性劑在界面富集。當表面吸附達到飽和后，在憎水基團的作用下，表面活性物質分子在溶液內部自聚，即疏水基在一起形成內核，親水基朝外與水接觸，形成最簡單的膠束樣自組裝結構。關于膠束形成和膠束表面活性物質的類型，在本領域中有眾多的教導。簡單的說，當兩親性分子(包括表面活性物質)遇到選擇性溶劑(即僅能溶解親水段或疏水段中的一種，而不能溶解另一種)時，便可能形成膠束。通常可使用的選擇性溶劑有很多種，包括例如水。在本發明中，術語"裝載于膠束樣自組裝結構中，，和"與表面活性物質自組裝形成膠束樣自組裝結構"可互換使用，是指二辟類藥物例如冬凌草甲素與表面活性物質相互作用，膠束顆粒，其中藥物分子被包裹在二者所形成的顆粒內，形成穩定的載藥膠束樣結構。雖然不希望本發明局限于一種特定的理論，但推測本發明中的二萜類藥物膠束樣自組裝結構不是常規意義上的膠束，即并非二辟類藥物包封在表面活性物質形成的顆粒結構內部，而是該二萜類藥物分子與表面活性物質分子相互作用，再共同自組裝形成較大的顆粒。因此，與單純表面活性物質形成的膠束顆粒較小的內徑相比，本發明的二萜類藥物與表面活性物質組合后自組裝形成的膠束樣自組裝結構的粒徑一般較大，一般7在100nm以上，例如100-500nm,優選150-400nm，更優選200-350線作為藥物活性成分的二碎類藥物如冬凌草甲素可以從多種合適的來源獲得，包括例如從唇形科香茶菜屬植物中采用常規方法分離，或者可以通過商業途徑購得。本發明所用術語"有機溶劑"是指，能溶解本發明水難溶性或水不溶性藥物活性劑的有機物質，包括例如乙醇、丙二醇、氯仿、丙酮、戊烷等，或者其任意混合物。本發明所用術語"有機溶液"是指含有所述有機溶劑的溶液。本發明所用術語"注射劑"是指用于注射給人體或其它哺乳動物的藥劑或其使用前用于儲存的形式，其包含但不限于溶液、混懸液、乳劑、粉末形式、凍干粉針形式、溶媒結晶形式、和濃有機溶液形式等。本發明的膠束樣自組裝結構藥物制劑可以由合適的、能穩定膠束樣結構的兩親性表面活性物質制成，主要分為天然高分子和合成高分子兩大類。前者主要是脂類和蛋白，包括例如卵磷脂、膽鹽、白蛋白、脂蛋白等；后者主要有聚酯類，例如聚山梨醇酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯、脫水山梨糖醇三油酸酯、膽酸鹽等。在該兩親性表面活性物質中，親水部分可以采用例如PEG、PEO或PVP,疏水部分可以是聚內酯類如PLA、PDLLA、PLLA、PLG、PLGA、PCL、聚氨基酸(例如P(His)，P(Glu)，P(Asp)，？(Lys)，P(PBLA)等)。或者，該兩親性表面活性物質中，親水部分可以是羥丙纖維素、支鏈淀粉、殼聚糖、海藻酸鹽、凝膠多糖、葡聚糖、肝素等，而疏水部分可以是二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰乙醇胺、膽固醇、膽酸、脫氧膽酸、石膽酸、酪蛋白、清蛋白等。應當指出，在本發明中，兩親性表面活性物質既可單獨使用，也可以混合物形式使用。本領域普通技術人員可以容易地確定合適的組合和用量比例。可以根據其親水親油性來選擇適用于本發明的膠束樣自組裝結構藥物制劑中的表面活性物質。優選地，其親水親油平衡值(hydrophileandlipophilebalance,HLB)在6-40之間，優選10-35，尤其優選15-30，例如15-25。在一些實施方案中，所述表面活性物質選自離子型、非離子型表面活性物質及其混合物。優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐溫)、脫水山梨醇脂肪酸酯(司盤)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。在本發明的膠束樣藥物制劑中，冬凌草甲素和表面活性物質可以是任何合適的用量和配比，條件是允許兩者在水溶液中組裝形成膠束樣自組裝結構的形式，或者是可以在溶于適當的水性溶劑后自組裝形成膠束樣自組裝結構的形式。在一個實施方案中，本發明的膠束樣藥物制劑是注射劑的形式。注射劑是指使用前用于儲存的形式，其在加入注射用溶劑后，藥物以分子或微晶狀態裝載于表面活性物質形成的膠束樣自組裝結構中。所述注射劑包含但不限于粉末形式、凍干粉針形式、溶媒結晶形式和濃有機溶液形式等。在本發明的一個實施方案中，該注射劑不含有機溶劑。在本發明的另一個實施方案中，該注射劑中僅含有較低濃度的有機溶劑。在本發明的二萜類藥物注射劑中，二萜類藥物的濃度為O.Ol-lOmg/ml，優選0.1-5mg/ml，更優選0.5-2mg/ml，表面活性物質濃度為0.05-500mg/ml，優選0.1國100mg/ml，更優選1-10mg/ml。在本發明的二萜類藥物制劑中，膠束樣自組裝結構的粒徑可以是任何合適大小。優選地，其平均粒徑為100-500nm，更優選100-300nm,尤其優選150-250nm。在本發明中，可以通過本領域已知的膠束載藥工藝將藥物活性劑如冬凌草甲素裝載到膠束中。適用的工藝包括例如物理包埋法、油/9水乳化法、溶劑揮發法、共溶劑揮發法、凍干法、化學綴合法、靜電作用法等。因此，本發明的冬凌草藥物制劑可以制成溶液形式，或者是凍干形式。在本發明的膠束樣藥物制劑中，除了二萜類藥物以及表面活性物質之外，還可以可選地包含一種或多種其它的藥物活性劑和/或一種或多種其它的藥學可接受載體和/或賦型劑，包括例如一種或多種緩沖劑、穩定劑和/或張度劑。如果制劑為溶液形式，則可還存在溶劑。溶劑通常選自能對哺乳動物安全地胃腸外給藥的溶劑類型，包括例如水、甘油、丙二醇、乙醇等及其各種可能的組合。一般地，安全溶劑是無毒的含水溶劑。在本發明中，所述其它的藥物活性劑可以是例如腫瘤治療劑、細胞因子、免疫增強劑等，只要其不干擾二薛類藥物的活性以及制劑的穩定性即可。普通技術人員十分清楚如何選擇這樣的藥物活性劑，這在其能力范圍內。本發明的二萜類藥物制劑中還可以可選地包含穩定劑。術語"穩定劑"是指能增強藥物制劑中活性成分(如藥物活性成分與表面活性物質形成的膠束樣粒子)的化學和物理穩定性的藥學上可接受的賦型劑。合適的穩定劑包括例如多元醇(例如甘露糖醇、聚乙二醇、聚丙二醇以及糖類如蔗糖、果糖、乳糖等)、氨基酸等或者其各種組合。優選地，所述穩定劑在本發明的膠束樣藥物制劑中的含量為0.5-50wt/wt%，更優選為2-40wt/wt。/0，例如5國35wt/wt%、8-30wt/wt%、10-25wt/wt%、10-20wt/wty。等。本發明的膠束樣藥物制劑中還可選地包含緩沖劑。在本發明中，術語"緩沖劑"是指任何能將溶液的pH值保持在所需pH范圍內的藥學上可接受的賦型劑，包括例如乙酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、氨基酸等或者其任意組合。普通技術人員可以常規地確定本發明的二辟類藥物制劑中緩沖劑的合適含量，例如可以是制劑的約0.01-5.0wt/vo1,優選約0.05-3.0wt/vo10/0，更優選約0.1-2.0wt/vo10/0。本發明的二萜類藥物制劑優選地被配制成易于施用和均勻給藥的單位劑型。"單位劑型"指適于待治療患者的治療劑的物理離散單位。然而，應當理解，根據本發明的二薛類藥物制劑的每日總劑量將由主治醫生在合理的醫學判斷范圍內進行確定。本發明的二萜類藥物制劑還可以任選地與其它藥物活性劑聯用。所述其他藥物活性劑包括例如抗腫瘤劑、免疫增強劑等。可以將本發明的二萜類藥物制劑以任何合適的有效量施用給患者。治療任何特定患者所需的實際量將取決于多種因素，包括待治療的病癥及其嚴重程度；所施用的特定藥物劑型；患者的年齡、體重、總體健康、性別和飲食；施用方式；施用時間；施用途徑；和冬凌草甲素的代謝速度；治療持續時間；與所施用的特定化合物相組合或同時使用的任何藥物；以及醫學領域中熟知的其它這樣的因素。本發明的二萜類藥物制劑可以任何合適的途徑施用，包括例如胃腸外注射如靜脈注射、肌內注射、腹膜內注射，以及口服、噴霧等方式。醫務人員可以根據已知的多個參數確定適合于患者的合適給藥頻率、給藥途徑和給藥量等。本發明的二萜類藥物制劑可以通過多種方法制備，包括例如物理包裹法如自組裝溶劑蒸發法、透析法、乳化法，以及化學結合法。因此，本發明還提供了一種制備二萜類藥物制劑的方法，其中包括將二萜類藥物與兩親性表面活性物質復合自組裝形成膠束樣自組裝結構的步驟。在一個實施方案中，所述兩親性表面活性物質是兩親性聚合物。本發明提供了另一種制備本發明的二辟類藥物制劑的方法，其包括將二萜類藥物、表面活性物質分散于允許其分散的分散介質中的步驟。所述分散介質是例如水、有機溶劑等。在一些實施方案中，其還包括除去分散介質的步驟。在一個優選的實施方案中，根據本發明的二薛類藥物制劑的制備方法包括以下步驟使用含二薛類藥物的有機溶液、含表面活性物質的水溶液制備水包油乳劑；除去有機溶劑，將二辟類藥物與表面活性物質自組裝形成膠束樣自組裝結構，制成二萜類藥物注射劑。任選地，在上述方法中，在二辟類藥物的有機溶液中還可以加入部分表面活性物質，以便增強該二薛類藥物的溶解。在一些實施方案中，所述有機溶劑可以選自與水不混溶或低混溶的有機溶劑或者其混合物，優選選自以下的一種或多種氯仿、乙醚、二氯曱烷、乙酸乙酯和其混合物。在上述方法中，可以通過任何常規的方法除去有機溶劑。例如，在一些實施方案中，可以采用通氮氣或減壓蒸發的方法除去有機溶劑。在現有技術中，這方面有眾多的文獻可供參考。本發明的膠束樣二辟類藥物制劑優選地為注射劑的形式。優選地，其中二辟類藥物的濃度為0.01-50mg/ml，優選0.1-5mg/ml，更優選0.5-2mg/ml;表面活性物質濃度為0.05-500mg/ml，優選0.1-100mg/ml，更優選1-10mg/ml。特別的，在上述制備二薛類藥物注射劑的方法中，所述表面活性物質選自離子型、非離子型表面活性物質及其混合物。優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種磺酸鹽、季銨化合物、卵磷脂、脂肪酸酯、多元醇、醚類、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等。更優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐溫)、脫水山梨醇脂肪酸酯(司盤)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。。特別的，本發明提供了一種制備所述二萜類藥物注射劑的方法，其包括以下步驟將二薛類藥物溶解于與水不混溶或低混溶的有機溶劑中，例如氯仿、乙醚，二氯甲烷，乙酸乙酯等，制備冬凌草甲素的高濃度有機溶液，作為油相。另外，也可任選地同時在油相中加入部分表面活性物12質，如脫水聚山梨醇酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油等，以提高二萜類藥物在油相中的濃度。將起主要乳化作用的表面活性物質例如普朗尼克，聚氧乙烯氫化蓖麻油等溶解在水中，作為水相。將油、水兩相混合，制備為水包油乳劑。在加熱條件下，采用通氮氣或減壓蒸發的方式，調節氣流速度和加熱溫度，快速除去有機溶劑，使二辟類藥物快速結晶析出，并被表面活性物質分子包裹和穩定，形成載藥膠束樣結構，制成均勻、穩定的二萜類藥物靜脈注射劑。其中，載藥膠束樣結構的平均粒徑為100-200nm，可以經0.22um濾膜無菌過濾。以生理鹽水為介質，371C進行的體外釋放度實驗研究表明，在l:IOO稀釋下，所制備的二辟類膠束注射劑在2小時內快速釋放約70%，而后緩慢釋放，至60小時釋放完全。將緩慢釋放曲線進行Higuchi擬合，相關度為0.9899,說明緩釋部分符合被動擴散。在本發明的另一個方面中，提供了另一種制備根據本發明的二辟類藥物注射劑的方法，其包括以下步驟將二萜類藥物、表面活性物質溶解于允許其溶解的溶劑中，得到溶液；加入注射用溶劑，將二辟類藥物與表面活性物質自組裝形成膠束樣結構，制成二薛類藥物注射劑。特別的，在上述制備根據本發明的二萜類藥物注射劑的方法中，其中二辟類藥物與表面活性物質比例為l:i-i:100w/w，優選l:5-1:80w/w，更優選l:20-1:50w/w;其中所加入的二辟類藥物在允許其溶解的溶劑中濃度為0.5-500mg/ml，優選5-200mg/ml，更優選IO-IOOmg/ml;所加入的表面活性物質在允許其溶解的溶劑中濃度為0.01-20g/ml，優選O.l-lOg/ml，更優選0.5-2g/ml。特別的，在上述制備根據本發明的二辟類藥物注射劑的方法中，所述表面活性物質選自離子型、非離子型表面活性物質及其混合物。優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種磺酸鹽、季銨化合物、卵磷脂、脂肪酸酯、多元醇、醚類、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等。更優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐溫)、脫水山梨醇脂肪酸酯(司盤)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。特別的，在上述制備根據本發明的二碎類藥物注射劑的方法中，所述允許其溶解的溶劑選自以下一種或多種乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亞砜、水和其混合物；優選的，選自乙醇、丙二醇和其混合物。特別的，本發明提供了一種制備根據本發明的二辟類藥物注射劑的方法將表面活性物質溶解在乙醇等允許注射的有機溶劑中，按照適宜比例(1:5-1:100，w/w)加入二薛類藥物，超聲溶解，得到藥物-表面活性物質濃溶液，其中二薛類藥物的濃度為5-50mg/ml。臨用前，用水或生理鹽水等注射用溶劑稀釋到所需濃度，得到二辟類藥物注射劑。其中，載藥膠束樣結構的平均粒徑為100-200nm，可以經0.22um濾膜無菌過濾。二薛類藥物的濃有機溶液中不含水，因此可以避免藥物在儲存過程中析出，具有更好的穩定性。臨用前加入水或生理鹽水稀釋后，可將有機溶劑的濃度降低到注射許可的范圍內，提高使用的安全性。在本發明的另一個方面中，提供了另一種制備根據本發明的二萜類藥物注射劑的方法，其包括以下步驟將二辟類藥物、表面活性物質溶解于允許其溶解的溶劑中，得到溶液；將溶液干燥，得到二薛類藥物注射劑粉末；加入注射用溶劑，使二薛類藥物與表面活性物質自組裝形成膠束樣自組裝結構，制成二薛類藥物注射劑。特別的，在上述制備4艮據本發明的二薛類藥物注射劑的方法中，二薛類藥物與表面活性物質的比例為l:0.01-1:100w/w，優選l:0.1-1:10w/w，更優選l:0.5-1:5w/w;其中所加入的二辟類藥物在允許其溶解的溶劑中濃度為0.5-500mg/ml，優選5-200mg/ml,更優選10-100mg/ml;所加入的表面活性物質在允許其溶解的溶劑中濃度為0.01-20g/ml，優選0.1國10g/ml,更優選0.5畫2g/ml。特別的，在上述制備才艮據本發明的二薛類藥物注射劑的方法中，所述表面活性物質選自離子型、非離子型表面活性物質及其混合物。優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種磺酸鹽、季銨化合物、卵磷脂、脂肪酸酯、多元醇、醚類、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物等。更優選的，所述表面活性物質選自以下一種或多種白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐溫)、脫水山梨醇脂肪酸酯(司盤)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。特別的，在上述制備才艮據本發明的二薛類藥物注射劑的方法中，所述允許其溶解的溶劑選自以下一種或多種乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亞砜、水和其混合物；優選的，選自叔丁醇、水和其混合物。在干燥溶液制備注射劑粉末的情況下，優選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，最優選冷凍干燥，當然也可釆用本領域普通技術人員熟知的任何其它合適方法。優選的，在上述制備根據本發明的二辟類藥物注射劑的方法中，另外在溶液中加入多羥基化合物，所述多羥基化合物選自以下一種或多種甘露醇、蔗糖、聚乙二醇和海藻糖。特別的，本發明提供了一種根據本發明的二薛類藥物注射劑的制備方法在無菌條件下，將二薛類藥物和表面活性物質按照適宜比例(1:5-1:100，w/w)溶解在叔丁醇或者叔丁醇和水的混合溶劑中，得到澄明溶液。為了得到良好的凍干粉針形態，也可在溶液中加入多羥基化合物，如甘露醇，蔗糖，海藻糖。將溶液冷凍干燥，得到二薛類藥物無菌凍干粉針。臨用前，加入水或生理鹽水等注射用溶劑充分水合，將二辟類藥物裝載到膠束樣結構中，成為澄明或半透明略帶淺藍色的二辟類藥物注射劑。其中，載藥膠束樣粒子的平均粒徑為300—500腿。本發明適用于任何合適的二萜類藥物，包括例如冬凌草甲素、冬凌草總二薛、香茶菜總二薛、毛萼乙素等，或者其任意混合物。在一個優選的實施方案中，所述二辟類藥物是冬凌草總二辟。在另一個優選實施方案中，所述二萜類藥物是冬凌草曱素。本發明方法的優點在于筒便，適合工業化大生產。在使用叔丁醇或叔丁醇-水體系作為溶劑時，由于叔丁醇在冷凍過程中形成針狀結晶，產生很多孔道，有利于溶劑的升華，因此，和單純用水作溶劑相比，可大大縮短凍干時間。同時，得到的凍干粉針疏松，水合過程中具有更大的表面積，有利于得到均勻的載藥膠束樣溶液。另外，所制得的固體凍干粉針是固體制劑形式，臨用前才稀釋，穩定性好，便于長期保存。也便于通過改變加入的水合溶劑的體積，調整注射劑最終的藥物含量，靈活給藥。根據本發明的注射劑的施用途徑的實例包含胃腸外，例如，靜脈內、皮層內、皮下、穿過皮膚的(局部)、穿過粘膜的、和直腸施用。靜脈內施用是優選的。用于胃腸外、皮層內或皮下施用的溶液或混懸液可包含以下成分無菌稀釋劑(例如注射用水、鹽溶液、不揮發油、聚乙烯乙二醇、甘油、丙烯乙二醇或其它合成溶劑)；抗菌劑(例如苯甲醇或對羥基苯曱酸甲酯)；抗氧化劑(例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉)；螯合劑(例如乙二胺四乙酸)；緩沖劑(例如醋酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽)以及用于改變滲透壓的物質(例如氯化鈉或葡萄糖)。使用酸或堿調節pH，例如鹽酸或氫氧化鈉。胃腸外制備物可封裝在玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。根據本發明的注射劑包含無菌水溶液(水溶的)或分散體系、用于使用時制備無菌注射溶液或分散體系的無菌粉末、以及用于使用時制備無菌注射溶液或分散體系的濃縮無菌水溶液或分散體系。用于靜脈內施用時，合適的載體包含生理鹽水、抑菌水、CremophorELTM(BASF;Parsippany，NJ)或磷酸鹽緩沖溶液(PBS)。根據本發明的上述膠束樣結構注射劑的優點在于通過制備水包油型乳劑，使含有二薛類藥物的有機溶劑相與表面活性物質在乳滴表面充分接觸，大大提高了二者的接觸面積；表面活性物質定向排列在乳滴表面，也有利于在有機溶劑的揮干過程中，盡可能地與二萜類藥物分子相互作用，將藥物增溶到膠束樣粒子中。由于二辟類藥物的裝載過程始終在具有納米尺度的乳滴和膠束樣結構中進行，因此，只需要少量的表面活性物質就可大大增加膠束樣結構中二萜類藥物的裝載量，避免分散過程中冬凌草二萜類藥物因膠束樣結構包裹不完全造成析出、沉淀。同時，采用這一制備方法進行二薛類藥物裝載時，由于作為油相的有機溶劑被迅速除去，而分散在水中的膠束樣結構對顆粒生長也具有限制作用，使得溶解在有機溶劑中的二薛類藥物尚來不及聚集形成大顆粒即以分子或微晶的狀態有效地裝載到膠束樣結構內部。微晶狀態的藥物不僅有利于大大提高載藥量，也進一步提高了注射劑的儲存穩定性，并具有一定的緩釋作用。這主要是由于以微晶狀態分散的藥物在釋放的過程中，必須先溶解，而后再逐步擴散。根據本發明的膠束樣藥物制劑避免了使用大量的油脂和脂質成分，具有良好的穩定性和安全性，同時克服了現有技術中載藥效率偏低、溶劑引發炎癥和疼痛等血管刺激性反應等不足。本發明的藥物制劑不含有機溶劑(或其含量較低，達到注射許可的范圍)、載藥量高，可用于二薛類藥物的靜脈注射。通過下述實施例對本發明作進一步的舉例說明。這些實施例僅是示例性的，它們不以任何方式限定本發明的范圍。實施例l冬凌草曱素注射劑冬凌草甲素濃度為lmg/ml，選用脫水聚山梨醇酯和普朗尼克F68做表面活性物質，總濃度為4mg/ml，生理鹽水作溶劑。具體制備方法為將100mg冬凌草甲素和100mg脫水聚山梨醇酯溶解于30ml氯仿中，作為油相；將300mg普朗尼克F68溶解于去離子水中，定容到lOOml，作為水相。將油、水兩相在40X:等溫混合，采用轉速為10000rpm的組織勻漿器混合3分鐘，在40"C水浴中，旋轉蒸發快速除去氯仿，即可得到濃度為lmg/ml澄明的冬凌草甲素注射劑，載藥膠束樣粒子的平均津立徑為150nm。取制備的lmg/ml冬凌草甲素注射劑2ml，放入截止分子量為10000的透析袋中，以200ml生理鹽水為介質，37"C磁力攪拌進行體外釋放度研究。在不同時間點取生理鹽水各lml，并及時補充新鮮生理鹽水。測定生理鹽水中冬凌草曱素的濃度，計算各個取樣點的釋放度。結果表明，從0到3小時，累計釋放約70%,至60小時，累計完全釋放。將時間單位換算為秒，對4-60小時的釋放曲線進行Higuchi擬合，結果表明累計釋放度與時間的平方根具有良好的線性，相關度為0.9899。說明，4-60小時的緩慢釋放符合被動擴散原理。取制備的lmg/ml冬凌草甲素注射劑20ml，冷凍干燥，進行DSC研究。發現存在結晶峰。實施例2冬凌草曱素注射劑冬凌草甲素濃度為0.5mg/ml，選用普朗尼克F68和聚氧乙烯氫化蓖麻油做表面活性物質，總濃度8mg/ml，去離子水作溶劑。具體制備方法為將50mg冬凌草甲素和2mg聚氧乙烯氫化蓖麻油溶解于40ml氯仿中，作為油相；將6mg普朗尼克F68溶解于去離子水中，并定容到100ml，作為水相。將油、水兩相在40"C等溫混合，采用轉速為10000rpm的組織勻漿器混合3分鐘。在50"C水浴中，通氮氣快速除去氯仿。即可得到濃度為0.5mg/ml，平均直徑為120nm的澄明的冬凌草曱素注射劑。實施例3冬凌草甲素注射用凍干粉針具體制備方法為將20mg冬凌草甲素和lg普朗尼克F68溶解于10ml叔丁醇中，加熱到35匸左右，避免叔丁醇凝固，趁熱灌裝到西林瓶中，每瓶分裝2ml，在-70X:預凍2小時后，-20"C干燥10小時，10*€干燥2小時，壓膠塞，從凍干機中取出，壓鋁蓋。得到白色疏松糕狀凍干粉，其中每瓶中冬凌草甲素的質量為4mg，臨用前加入2ml無菌生理鹽水，充分水合，得到半透明略帶淺藍色的冬凌草注射劑，平均粒徑為450nm，終濃度為2mg/ml。實施例4冬凌草曱素注射劑冬凌草甲素濃度為50mg/ml，選用聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(換成具體商品名)、聚氧乙烯氫化蓖麻油做表面活性物質，總濃度為1000mg/ml,藥用無水乙醇作為溶劑，制備為冬凌草甲素濃溶液。具體制備方法為將4g聚氧乙烯一聚氧丙烯嵌段聚合物和lg聚氧乙烯氫化蓖麻油溶解于藥用無水乙醇中，加熱充分溶解，冷卻后定容到5ml。加入250mg冬凌草甲素，水浴超聲溶解，得到無色透明的藥物濃溶液。臨用前，按照1:IO的比例，將水加入到濃溶液中，邊加邊混合均勻，最終得到濃度為5mg/ml,平均粒徑為200nm的冬凌草甲素注射液。實施例5冬凌草甲素注射劑具體制備方法為將iomg冬凌草曱素和300mg聚氧乙烯氫化蓖麻油(CremophorRH40)溶解于2ml丙酮中，與10ml水混合均勻。35匸水浴，通氮氣，除去丙酮，即可得到澄明的，濃度為lmg/ml的冬凌草甲素注射劑。實施例6冬凌草甲素注射劑具體制備方法為將10mg溶解于2ml丙酮中，將400mg普朗尼克F68溶解在10ml水中；將含藥的丙酮溶液與F68水溶液混合均勻。35X:水浴，通氮氣，除去丙酮，即可得到澄明的，濃度為lmg/ml的19冬凌草甲素注射劑。實施例7毛萼乙素注射劑具體制備方法為將10g普朗尼克F68溶解于5g藥用無水乙醇中，加入500mg毛萼乙素，超聲，使毛萼乙素充分溶解，制備為注射劑濃縮液。逐滴加入到生理鹽水中，混合均勻，并加生理鹽水定容到100ml，即可得到濃度為5mg/ml澄明的毛萼乙素注射液。實施例8冬凌草總二辟注射用凍千粉針總二薛是混合物，直接制備為注射劑時，不同組分的穩定性不同，有的成分會先沉淀析出，所以均制備為凍干粉針或者噴霧干燥顆粒劑。具體制備方法為將按照常規方法從冬凌草中提取的冬凌草總二萜20mg和600mg普朗尼克F68溶解于10ml叔丁醇-水(8:2，v/v)中，加熱到35C左右，避免叔丁醇凝固，趁熱灌裝到西林瓶中，每瓶分裝2ml，在-70r預凍2小時后，-20匸干燥10小時，10匸干燥2小時，壓膠塞，從凍干機中取出，壓鋁蓋。得到淺棕色疏松糕狀凍干粉，其中每瓶中冬凌草總二萜的質量為4mg,臨用前加入2ml無菌生理鹽水，充分7jC合，得到半透明略帶淺藍色的冬凌草總二萜注射劑，平均粒徑為150nm,終濃度為2mg/ml。實施例9冬凌草總二辟注射用凍干粉針具體制備方法為將20mg冬凌草總二辟，300mg聚氧乙烯氫化蓖麻油(CremophorRH40)和1.5g海藻糖溶解于lOml叔丁醇—水(6:4,v/v)中，加熱到35"C左右，避免叔丁醇凝固，趁熱灌裝到西林瓶中，每瓶分裝2ml，在-70"C預凍2小時后，-20C干燥10小時，10n干燥2小時，壓膠塞，從凍干機中取出，壓鋁蓋。得到淺棕色疏松糕狀凍干粉，其中每瓶中冬凌草總二薛的質量為4mg,臨用前加入2ml無菌生理鹽水，充分水合，得到半透明略帶淺藍色的冬凌草總二薛注射劑，平均粒徑為200nm,終濃度為2mg/ml。實施例10香茶菜總二辟注射用凍干粉針具體制備方法為將按照常規方法從香茶菜中提取的香茶菜總二薛20mg,200mg聚氧乙烯氫化蓖麻油(CremophorRH40)和2g甘露醇溶解于lOml叔丁醇-水(6:4,v/v)中，加熱到35C左右，避免叔丁醇凝固，趁熱灌裝到西林瓶中，每瓶分裝2ml，在-70"C預凍2小時后，-20"C干燥10小時，10t:干燥2小時，壓膠塞，從凍干機中取出，壓鋁蓋。得到淺黃色疏松糕狀凍干粉，其中每瓶中香茶菜總二萜的質量為4mg，臨用前加入2ml無菌生理鹽水，充分水合，得到透明淺黃色的香茶菜總二萜注射劑，平均粒徑為180nm，終濃度為2mg/ml。實施例ll香茶菜總二辟注射用凍干粉針具體制備方法為將20mg香茶菜總二薛，400mg普朗尼克F68溶解于10ml叔丁醇-水(9:1，v/v)中，加熱到35"C左右，避免叔丁醇凝固，趁熱灌裝到西林瓶中，每瓶分裝2ml，在-70C預凍2小時后，-20匸千燥10小時，10X:干燥2小時，壓膠塞，從凍干機中取出，壓鋁蓋。得到淺黃色疏松糕狀凍干粉，其中每瓶中香茶菜總二辟的質量為4mg，臨用前加入2ml無菌生理鹽水，充分7JC合，得到透明淺黃色的香茶菜總二萜注射劑，平均粒徑為160nm，終濃度為2mg/ml。實施例12香茶菜總二薛口服顆粒具體制備方法為將20mg香茶菜總二萜，200mg普朗尼克F68和100mg聚氧乙烯氫化蓖麻油溶解于10ml乙醇中；將4g乳糖溶解在100ml水中。將香茶菜總二薛乙醇溶液與乳糖水溶液混合均勻后噴霧干燥，得到香茶菜總二萜口服顆粒。實施例13冬凌草甲素注射用凍干粉針具體制備方法為將20mg冬凌草甲素溶解于10ml叔丁醇中，將500mg白蛋白和2g海藻糖溶解于10ml水中，將藥物叔丁醇溶液與水溶液混合，并加熱到35"C左右，趁熱灌裝到西林瓶中，每瓶分裝4ml，在-70"C預凍2小時后，-30r干燥15小時，5n干燥2小時，壓膠塞，從凍干機中取出，壓鋁蓋。得到白色疏松糕狀凍干粉，其中每瓶中冬凌草的質量為4mg，臨用前加入2ml無菌生理鹽水，充分水合，得到半透明略帶淺藍色的冬凌草甲素注射劑，平均粒徑為250nm，終濃度為2mg/ml。實施例14冬凌草甲素注射劑具體制備方法為將iomg冬凌草甲素和200mg磷脂溶解于10ml丙酮中，將200mg普朗尼克F68溶解在10ml水中；將含藥的丙酮溶液與F68水溶液混合均勻。40TC水浴，通氮氣，除去丙酮，即可得到澄明的，濃度為lmg/ml的冬凌草甲素注射劑。實施例15冬凌草甲素注射劑具體制備方法為將5mg冬凌草甲素和100mg磷脂和100mg普朗尼克F68溶解于10ml無水乙醇中，得到澄明溶液。將該溶液放入透析袋中，對生理鹽水透析24小時，除去乙醇。得到濃度為0.5mg/ml的冬凌草甲素注射劑。實施例16冬凌草甲素載藥粒子載藥量的測定通過高效液相色語法(HPLC)進行，色鐠條件如下高效液相色i普儀Agilent1100Series;色鐠柱AgilentZORBAXSB-C18(4.6xl50mm，5um);流動相甲醇水(55:45);流速lml/min;檢測波長238nm;溫度30"C;進樣量20ul。此條件下冬凌草甲素的保留時間為4.2min左右，輔料對藥物的測22定無干擾，方法的專屬性強，典型圖鐠如圖l所示。首先繪制標準曲線，具體操作如下配制0.5mg/ml冬凌草甲素曱醇儲備液，分別吸取200、400、600、800、1000、1200、1400ju1至10.0ml容量瓶中，加無水乙醇定容，得IO、20、30、40、50、60、70"g/ml濃度。取革樣品進行HPLC法測定，以峰面積(Y)對濃度(X)作圖。進行線性回歸，得到oridonin的HPLC回歸方程y=28.279x國25.171(n=7)，相關系數R2-0.9989，結果表明oridonin在10-70jng/ml范圍內有良好的線性關系，載藥量測定如下對制備得到的冬凌草甲素載藥粒子溶液，取溶液250ul于10ml容量瓶中，加無水乙醇定容。進樣量20ul，取三次進樣后積分面積的平均值計算濃度。將溶液凍千后，得到載藥粒子干粉質量。載藥粒子中的藥物質量=載藥粒子溶液中藥物濃度x溶液體積載藥量-載藥粒子中的藥物質量/干粉質量xlO(T/。取按照實施例1制備的冬凌草甲素注射劑樣品批號060808,測得其濃度為2.47mg/ml，體積為20ml，載藥粒子干粉質量為1000mg，載藥量為4.94%;按照實施例1制備的冬凌草甲素注射劑樣品批號060906濃度為2.48mg/ml，體積為20ml，干粉質量為1002mg，載藥量為4.95%。按照下式計算包封率包封率=載藥粒子中冬凌草的量/制備載藥粒子時加入的重量x100%計算得到060808樣品的包封率為2.47mg/mlx20ml/50mgxioo%=98.8%實施例17冬凌草甲素膠束樣制劑溶液的儲存穩定性研究取實施例1中制備的冬凌草甲素注射劑樣品40ml，于4C冰箱內保存。在不同時間點取樣，0.22um濾膜過濾后-22X:保存，也可取樣后立即測定。用前述HPLC方法測定其中的冬凌草甲素含量。Plu函icF68組:<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>采用與實施例1類似的方法，以SDS為表面活性物質制備冬凌草甲素注射劑。對制得的注射劑進行穩定性測定后發現，得到的載藥粒子不夠穩定，制備完成后靜置約2min藥物即沉淀析出。以上通過舉例說明的方式描述了本發明。但是，應當理解，本發明絕不僅僅限于這些具體實施方式。普通技術人員可以對本發明進行各種修改和改動，而不背離本發明的精神和范圍。權利要求1.一種二萜類藥物制劑，其中含有二萜類藥物和表面活性物質，以及任選地藥學上可接受的其它載體和賦型劑，該二萜類藥物裝載于表面活性物質形成的膠束樣自組裝結構中。2.根據權利要求1的藥物制劑，其中膠束樣自組裝結構的平均粒徑為10-500nm，優選50-300nm，更優選100-250nm。3.根據權利要求1的藥物制劑，其中所述二辟類藥物選自冬凌草總二萜、香茶菜總二萜、冬凌草甲素、毛萼乙素或者其任意組合，優選冬凌草甲素。4.根據權利要求1-3中任一項的藥物制劑，其中二薛類藥物濃度為0.01-50mg/ml，優選0.1-5mg/ml，更優選0.5-5mg/ml。5.根據權利要求l-3中任一項的藥物制劑，其中所述表面活性物質濃度為0.05-500mg/ml,優選0.1-100mg/ml，更優選0.l-10mg/ml。6.根據權利要求1-3中任一項的藥物制劑，其中所述表面活性物質的表面活性親水親油平衡值為6-40,優選IO-35,尤其優選15-30，例如15-25。7.根據權利要求l-3中任一項的藥物制劑，其中所述表面活性物質選自離子型、非離子型表面活性物質、蛋白質和其混合物，優選選自以下一種或多種白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐溫)、脫水山梨醇脂肪酸酯(司盤)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。8.—種制備權利要求1-7中任一項所述二萜類藥物制劑的方法，其包括將二辟類藥物與表面活性物質相混合而組裝成膠束樣自組裝結構的步驟。9.根據權利要求8的方法，其包括將二辟類藥物、表面活性物質分散于允許其分散的分散介質如有機溶劑例如乙醇、丙酮等中的步驟。10.根據權利要求9的方法，其還包括除去分散介質的步驟。11.根據權利要求10的方法，其包括以下步驟使用含二薛類藥物的有機溶液、含表面活性物質的水溶液制備水包油乳劑；除去有機溶劑，二萜類藥物與表面活性物質自組裝形成膠束樣自組裝結構納米粒子，制成二薛類藥物注射劑。12.根據權利要求9或IO的方法，其包括以下步驟將二萜類藥物、表面活性物質溶解于允許其溶解的溶劑中，得到溶液；加入注射用溶劑，二辟類藥物與表面活性物質形成膠束樣自組裝結構粒子，制成二辟類藥物注射劑。13.根據權利要求12的方法，其包括以下步驟將二萜類藥物、表面活性劑溶解于允許其溶解的溶劑中，得到溶液；將溶液干燥，得到二萜類藥物與表面活性物質的混和粉末；加入注射用溶劑，二薛類藥物與表面活性物質自組裝形成的膠團結構粒子，制成二辟類藥物注射劑。14.根據權利要求11至13中任一項的方法，其中表面活性物質選自離子型或非離子型表面活性劑、蛋白質或其混合物，優選選自下述中的一種或多種白蛋白、酪蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、山梨醇脂肪酸酯(吐溫)、脫水山梨醇脂肪酸酯(司盤)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物(普朗尼克)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯氫化蓖麻油和磷脂分子，及其任意混合物。。15.根據權利要求11的方法，其中二辟類藥物與表面活性物質的比例為1:1-1:100w/w,優選1:5-1:80w/w，更優選1:20-1:50w/w，例如1:25w/w。16.根據權利要求11的方法，其中所述有機溶劑選自與水不混溶、低混溶的有機溶劑和其混合物，優選選自以下一種或多種氯仿、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和其任意混合物。17.根據權利要求11的方法，其中采用通氮氣或減壓蒸發的方法除去有機溶劑。18.根據權利要求11的方法，其中所述有機溶液含有表面活性劑。19.根據權利要求12或13的方法，其中所述允許其溶解的溶劑選自以下一種或多種乙醇、丙二醇、叔丁醇、丙酮、二甲亞砜、水和其混合物。20.根據權利要求12的方法，其中所加入的二辟類藥物在允許其溶解的溶劑中濃度為0.5-500mg/ml，優選5-200mg/ml，更優選10-100mg/ml。21.根據權利要求13的方法，其中在所述溶液中加入多羥基化合物，優選所述多羥基化合物選自以下的一種或多種甘露醇、蔗糖、聚乙二醇、海藻糖和其混合物。22.—種預防或治療疾病、尤其是癌癥的方法，其包括對由此需要的患者施用權利要求1-7中任一項所述的二薛類藥物制劑。23.根據權利要求22的方法，其中還包括對所述患者同時或依次施用其它的治療劑，例如腫瘤治療劑、免疫增強劑等。全文摘要本發明總的涉及二萜類藥物制劑及其制備方法和用途。更具體地，本發明公開了一種藥物制劑，其中包含二萜類藥物如冬凌草甲素和兩親性表面活性物質，以及任選地其它藥學可接受的載體和/或賦型劑。本發明另外涉及所述藥物制劑的制備方法及其在疾病治療中的用途。文檔編號A61K31/35GK101536980SQ20081008513公開日2009年9月23日申請日期2008年3月21日優先權日2008年3月21日發明者徐宇虹,魏曉慧申請人:上海交通大學