專利名稱：：一種乙酰半胱氨酸注射液及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種乙酰半胱氨酸制劑，具體而言涉及一種乙酰半胱氨酸注射液及其制備方法。乙酰半胱氨酸(Acetylcysteine,N-乙酰基-3-巰基丙氨)為還原型谷胱甘肽(GSH)的前體，屬體內氧自由基清除劑。其肝臟保護作用的機制尚不十分清楚，可能與維持或恢復谷胱甘肽水平有關。另外，乙酰半胱氨酸也可能通過改善血液動力學和氧輸送能力，擴張微循環發揮肝臟保護作用。乙酰半胱氨酸(MC)的大多數有益的效應源于其具有減少細胞外胱氨酸轉化為半胱氨酸的能力，以及可作為巰基代謝的來源。乙酰半胱氨酸能刺激谷胱甘肽(GSH)合成，增強GSH-S-基轉移酶的活性，促進解毒以及對氧自由基反應的直接作用。體內及體外的證據均提示，乙酰半胱氨酸能提高細胞內GSH的生物合成。在細胞培養實驗中，乙酰半胱氨酸從GSH生物合成的培養基中促進胱氨酸的攝取。在體內，乙酰半胱氨酸能提高紅細胞、肝細胞、肺臟細胞的細胞內GSH的水平以及補充實驗性GSH貯存的耗損。乙酰半胱氨酸糾正膽道梗阻大鼠的GSH濃度導致對膜的流動性以及過氧化氫酶、線粒體超氧化物歧化酶、不同形式的GSH過氧化物酶的重要保護作用。這些效應提示乙酰半胱氨酸可能是一種保護膽道梗阻患者肝功能的有效藥物。乙酰半胱氨酸在當GSH需要增加時顯示出對GSH合成的支持。表明乙酰半胱氨酸在GSH缺少的狀態下才能發揮促進GSH合成的作用。在實驗條件下乙酰半胱氨酸還能提高單磷酸環鳥苷的濃腎景技術H陽c度。Harrison等報道了乙酰半胱氨酸通過提高內源性血管擴張劑一氧化氮水平及增加可溶性鳥苷酸環化酶系統活性而在急性肝功能衰竭時表現出良好的血液動力學活性。Nagasaki等報道乙酰半胱氨酸能保護GSH缺失時的肝損傷，而且能維護缺血/再灌注損傷時肝臟的完整性。此作用不是作為GSH生物合成的底物而是作為直接的自由基清除劑而發揮的，且與其直接抑制庫普弗細胞激活有關。有研究表明乙酰半胱氨酸可以阻斷細胞凋亡的過程。其機制是乙酰半胱氨酸能清除參入凋亡信號轉導的活性氧中間體；作為還原型GSH的前體提供抗細胞毒性的作用；還可以干擾凋亡出現后下游的信號。乙酰半胱氨酸的制劑在臨床上應用比較廣泛，已知具有祛痰止咳功效。現亦開始應用于治療各種肝臟疾病，特別是肝功能衰竭。但乙酰半胱氨酸注射液在使用時易引起機體過敏反應，包括皮膚瘙癢、紅瘆等。為此，本領域亟需獲得致敏性低的乙酰半胱氨酸注射用水溶液，而制備致敏性低的乙酰半胱氨酸注射液難度極大，一直是制藥界亟待攻克的難題。
發明內容本發明人在研制過程中意外地發現，將穩定劑量的氨丁三醇OH〈，,2添加至乙酰半胱氨酸溶液中，可以獲得一種穩定的乙酰半胱氨酸注射液，從而成功地解決了上述乙酰半胱氨酸注射液易引起過敏反應的問題。因此，本發明提供了一種致敏性低的乙酰半胱氨酸注射液，其中含有穩定劑量的氨丁三醇。本發明還提供了上述乙酰半胱氨酸注射液的制備方法。所述方法包括如下步驟1)在通氮保護條件下，配制含有除乙酰半胱氨酸之外的所有成分的水溶液;2)在通氮保護條件下，配制乙酰半胱氨酸水溶液，并用氫氧化鈉水溶液調pH至6-8;3)在通氮保護條件下，將步驟1)制得的溶液與步驟2)制得的溶液混合調pH至6-8，過濾、灌裝后滅菌。具體實施方式本發明提供了一種致敏性低的乙酰半胱氨酸注射液，其中^^有穩定劑量的氨丁三醇。在本發明的優選實施方案中，氨丁三醇在上述乙酰半胱氨酸注射液中的濃度為0.01%-2.0%(W/V)，以乙酰半胱氨酸注射液的體積計。在一個更優選的實施方案中，氨丁三醇在上述乙酰半胱氨酸注射液中的濃度為0.05%-0.5%(W/V)。在本發明的優選實施方案中，所述乙酰半胱氨酸注射液還包括抗氧化劑和滲透壓調節劑。在本發明的優選實施方案中，上述抗氧化劑可選自乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸4丐鈉或其混合物，它們的總濃度優選為0.001%-0.1%(W/V)。在本發明的優選實施方案中，上述滲透壓調節劑可以是氯化鈉，其濃度優選為0.2-1.oy"w/v)。在本發明的優選實施方案中，所述乙酰半胱氨酸注射液中乙酰半胱氨酸濃度為1%-50%(W/V),在一個更優選的實施方案中，所述乙酰半胱氨酸注射液中乙酰半胱氨酸濃度為1%-20'/fl(W/V)。在本發明的優選實施方案中，所述乙酰半胱氨酸注射液的滲透壓為250-350m0smol/kg，pH為6.0-8.0。優選地，其有關物質總含量不超過5%，以該注射液中所含的乙酰半胱氨酸的重量計。本說明書中所使用的術語"有關物質"與中國藥典2000年版二部附錄XIX中記載的藥物穩定性試驗指導原則中的所述"有關物質"的定義相同，是指乙酰半胱氨酸的分解產物及其他變化所產生的物質。本發明還提供了上述乙酰半胱氨酸注射液的制備方法。所述方法包括如下步驟1)在通氮保護條件下，配制含有除乙酰半胱氨酸之外的所有成分的水溶液；2)在通氮保護條件下，配制乙酰半胱氨酸水溶液，并用氬氧化鈉水溶液調pH至6-8;3)在通氮保護條件下，將步驟1)制得的溶液與步驟2)制得的溶液混合調pH至6-8，過濾、灌裝后滅菌。優選的滅菌條件為就注射液而言的常規滅菌條件，例如，115'C下滅菌30分鐘。本發明乙酰半胱氨酸注射液中的乙酰半胱氨酸致敏性低，并且在高溫(115'C，30分鐘)滅菌后和長期存放后仍然能夠保持穩定不分解，其pH值亦能在長期存放后保持穩定。乙酰半胱氨酸注射液質量測定方法(乙酰半胱氨酸及有關物質含量測定方法)按照如下方法測定乙酰半胱氨酸注射液中乙酰半胱氨酸和有關物質的含量，以對注射液的質量進行評價。乙酰半胱氨酸含量測定按照中國藥典2000年版二部附錄VD中記載的高效液相色譜法進行測定。色諳法測試條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，曱醇-0.02mol/L戊垸磺酸鈉的0.5%硫酸銨溶液(1:9)并用2mol/L鹽酸溶液調節PH值至2.0為流動相；檢測波長為205nm。理論塔板數按乙酰半胱氨酸峰計算應不低于2000。測定方法精密量取乙酰半胱氨酸適量，加流動相制成每lml中含乙酰半胱氨酸8(Ug的溶液，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液，準確量取上述溶液20jjl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取經減壓干燥至恒重的乙酰半胱氨酸對照品，同法測定，按外標法以峰面積計算得乙酰半胱氨酸含量。有關物質取乙酰半胱氨酸適量，加流動相稀釋制成lml中含乙酰半胱氨酸2mg的溶液(l),另分別稱取乙酰半胱氨酸適量，加流動相制成每lml中含2mg的溶液(2)，溶液(2)室溫放置2小時成溶液(3)。再取L-半胱氨酸20mg與L-胱氨酸20mg，加lmol/L鹽酸溶液10ml溶解。再加乙酰半胱氨酸40mg溶解后，立即用流動相稀釋制成每lml中各含L-半胱氨酸、L-胱氨酸及乙酰半胱氨酸分別為10jug、10Hg及20jug的溶液(4)。除溶液(3)應在室溫放置2小時，其他溶液均應在分析前臨時制備。按照中國藥典2000年版二部附錄VD的高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，曱醇-0.02mol/L戊烷磺酸鈉的0.5%硫酸銨溶液(l:9)并用2mol/L鹽酸溶液調節PH值至2.0為流動相；檢測波長為205nm。理論塔板數按乙酰半胱氨酸峰計算應不低于2000。取上述溶液(2)和(3)各20ju1分別進樣，溶液(3)所顯示的二乙酰胱氨酸的峰面積應大于溶液(2)色i普圖上相對應的峰。取溶液(4)20n1注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使乙酰半胱氨酸色鐠峰的峰高約為記錄儀滿量程的20%，L-半胱氨酸與L-胱氨酸色i普峰間谷的高度應小于乙酰半胱氨酸峰高的1/4。再準確量取溶液(l)和(4)各20jLi1分別進樣，記錄色譜圖至乙酰半胱氨酸主成分峰保留時間的3倍。應當理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據上述說明對于本發明加以改變或變換，而所有這些改變或變換都應屬于權利要求的保護范圍。通過以下實施例對本發明做進一步具體說明，但并非意在限制本發明的范圍。對比實施例乙酰半胱氨酸溶液的穩定性測試乙酰半胱氨酸溶液暴露于空氣中時極不穩定，易被氧化分解產生L-胱氨酸、L-半胱氨酸、二乙酰胱氨酸等雜質。在本實施例中測定了乙酰半胱氨酸溶液暴露于空氣中(氧氣)中的穩定情況。1.測定儀器色鐠儀日本島津LC-10AT;紫外檢測器SPD-10AVP;電子分析天平；色譜柱AgilentC185p，4.6x250mm;2.測定方法如前文所述，按照中國藥典2000年版二部附錄VD沖記栽的高效液相色i普法進行測定。3.實驗結果表l:乙酰半胱氨酸溶液的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由上表中的結果可以看出，乙酰半胱氨酸溶液暴露于空氣中2小時以后，溶液中的L-半胱氨酸和二乙酰胱氨酸含量升高明顯，表明該溶液在空氣(氧氣)中不穩定，易被氧化。實施例1:本發明乙酰半胱氨酸注射液的制備1.乙酰半胱氨酸注射液配方為檢驗本發明的乙酰半胱氨酸注射液的穩定性，在本實施例中制備了七種示例性的乙酰半胱氨酸注射液。這些示例性注射液的配方如下表2所示。表2示例性乙酰半胱氨酸注射液的配方編號組分各組分用量<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注氫氧化鈉分別配制成20%及5%溶液2.乙酰半胱氨酸注射液的制備1)按上述配方分別量稱上表中除乙酰半胱氨酸和氬氧化鈉溶液以外的所有成分，將其充分溶解于注射用水中，煮沸，活性碳吸附(活性炭用量為0.4%，W/V),脫碳過濾，使濾液降溫至50-60。C，持續通氮備用。2)取80TC的脫氧水(預先通氮30分鐘)，稱取上述配方中相應量的乙酰半胱氨酸原料，溶解配成20。/。(W/V)的濃溶液；取適量的氫氧化鈉配成20。/。(W/V)氫氧化鈉溶液，用該氳氧化鈉溶液調節乙酰半胱氨酸濃溶液的pH值至6-8。3)室溫及通氮狀態下，將步驟1)中制得的溶液和步驟2)中制得的溶液混合，攪拌均勻。4)定容及pH值調節添加注射用水至配方規定的容量，用5%氳氧化鈉溶液(W/V)調節pH值至6-8。5)過濾、灌裝用濾膜過濾，灌裝，可灌裝成每袋或每瓶IOO、250或500ml。6)滅菌滅菌條件115X:，30分鐘。實施例2:本發明乙酰半胱氨酸注射液的穩定性測試將實施例1中制得的乙酰半胱氨酸注射液產品置于容器中，40。C下放置六個月，測定產品的穩定性，結果示于表2。表2:乙酰半胱氨酸注射液的加速試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>上表的結果表明本發明乙酰半胱氨酸注射液經6個月的加速穩定性試驗，有關物質含量低于3%，且各項指標未見明顯變化，產品穩定。實施例3:本發明乙酰半胱氨酸注射液對動物的刺激性與過敏反應測試本實施例通過動物實驗，考察了乙酰半胱氨酸氯化鈉注射液靜脈給藥后，對血管及周圍組織的刺激反應。1.試驗材料試劑實施例1中制備的NQ5號乙酰半胱氨酸氯化鈉注射液，規格250ml/瓶；另外使用購自回音必集團(江西)東亞制藥有限公司的0.9%氯化鈉注射液(批號2006121515)作為陰性對照。試驗動物雄性成年新西蘭兔3只，體重分別為2.8kg、2.6kg、2.4kg,由浙江省實驗動物中心提供，生產許可證號SCXK(浙)2003-0002。2.試驗方法取上述新西蘭兔，固定，右耳靜脈注射樣品液(測試組)，注射劑量按新西蘭兔體重10ml/kg，注射速度為2ml/min，每次在同一部位進針，連續給藥3天，1次/天。同法，各兔左耳注入0.9%氯化鈉注射液作為陰性對照(對照組)，劑量及其他注射條件均同右耳一致。末次給藥16小時后，頸動脈放血處死動物，分別取每兔左、右耳進針點前約1.5cm(近端)和3.Ocm(遠端)耳緣靜脈及周圍組織，進行編號后，置于10%福爾馬林溶液中固定，作病理組織學檢查，觀察耳緣靜脈及周圍組織的炎性反應等情況。3.結果肉眼觀察雙側耳靜脈周圍組織均無明顯水肺、充血等現象。組織病理學檢查結果如下對照組l號兔近端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，輕度增厚，血管內皮細胞輕度水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見中等量紅細胞。2號兔近端血管周圍偶見炎癥細胞浸潤，血管壁完整，無明顯增厚，血管內皮細胞輕度水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見極少量紅細胞。3號兔近端血管周圍散在炎癥細胞浸潤，血管壁完整，無明顯增厚，血管內皮細胞無水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。l號兔遠端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，輕度增厚，血管內皮細胞無水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見中等量紅細胞。2號兔遠端血管周圍偶見炎癥細胞浸潤，血管壁完整，輕度增厚，血管內皮細胞輕度水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見中等量紅細胞。3號兔遠端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，無明顯增厚，血管內皮細胞輕度水肺變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。測試組l號兔近端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，無明顯增厚，血管內皮細胞輕度水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。2號兔近端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，無明顯增厚，血管內皮細胞無水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。3號兔近端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁基本完整，無明顯增厚，血管內皮細胞輕度水肺變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。l號兔遠端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，輕度增厚，血管內皮細胞無水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。2號兔遠端血管周圍無炎癥細胞浸潤，血管壁完整，血管內皮有增生，管壁無明顯增厚，血管內皮細胞無水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見少量紅細胞。3號兔遠端血管周圍偶見炎癥細胞浸潤，血管壁完整，輕度增厚，血管內皮細胞無水腫變性，管腔內無血栓形成，血管腔內見中等量紅細胞。由上述動物試驗結果可以看出，本發明的乙酰半胱氨酸注射液的刺激性小，無過敏反應。權利要求1.一種乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于，所述注射液中含有穩定劑量的氨丁三醇。2.根據權利要求1的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于，所述氨丁三醇的量為0.01%-2.0%(W/V),優選為0.05%-0.5%(W/V)，以乙酰半胱氨酸注射液的體積計。3.根據權利要求1的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于所述注射液還含有抗氧化劑和滲透壓調節劑。4.根椐權利要求3的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于所述抗氧化劑選自乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸4丐鈉或它們的混合物，所述抗氧4t劑的總濃度為0.001°/。-0.1%(W/V)。5.根據權利要求3的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于所述滲透壓調節劑為氯化鈉，其濃度為0.2-1.0°/。(W/V)。6.根據權利要求1的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于所述乙酰半胱氨酸濃度為1%一50%訓，優選為1°/「20%(W/V)。7.根據權利要求1-6任一項的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于所述乙酰半胱氨酸注射液的滲透壓為250-350mOsmol/kg,pH為6.0-8.0。8.根據權利要求1-6任一項的乙酰半胱氨酸注射液，其特征在于所述乙酰半胱氨酸注射液中有關物質含量不超過5%，以該注射液中所含的乙酰半胱氨酸的重量計。9.根據權利要求7的乙酰半M^酸注射液，其特征在于所述乙酰半胱氨酸注射液中有關物質含量不超過5%。10.制備根據權利要求l-9任一項的乙酰半胱氨酸注射液的方法，所述方法包括如下步驟1)在通氮保護條件下，配制含有除乙酰半胱氨酸之外的所有成分的水溶液；2)在通氮保護條件下，配制乙酰半胱氨酸水溶液，并用氫氧化鈉溶液調節pH值至6-8;3)在通氮保護條件下，將步驟l)與步驟2)制得的溶液混合，調節pH值至6-8，過濾、灌裝后滅菌。全文摘要本發明涉及一種乙酰半胱氨酸注射液，其含有穩定劑量的氨丁三醇；還涉及這種注射液的制備方法。本發明的乙酰半胱氨酸注射液致敏性低，并且在高溫(115℃，30分鐘)滅菌后和長期存放后仍然能夠保持穩定不分解，其pH值亦能在長期存放后保持穩定。文檔編號A61P11/14GK101239037SQ20081008553公開日2008年8月13日申請日期2008年3月17日優先權日2008年3月17日發明者樓金芳,新蔡,金三九申請人:杭州盛友醫藥技術開發有限公司