專利名稱：：NF-κB抑制劑在治療逆轉錄病毒感染的應用的制作方法
技術領域：
：本發明屬于化學合成物在治療疾病中的應用領域，特別涉及利用抑制NF-kB的功能的化學合成物在治療和防治哺乳動物的病毒性疾病，癌癥，慢性炎癥和自身免疫性疾病中的應用。
背景技術：
：NF-kB是一重要的轉錄因子，在調節免疫系統和其他非免疫系統的基因表達中起著重要的作用。激活的NF-kB可調節以下基因的表達，如cytokines,生長因子，T-細胞受體，B-細胞受體，腫瘤壞疽因子阿爾發受體，CD40,BAFF-BAFF受體，淋巴毒素-貝它受體(lymphotoxin-betarec印tor)，和Toll/白細胞介素(interleukin-l)受體。調節NF-kB的活性發生在幾個層面，包括控制NF-kB細胞質-細胞核的穿梭及調控其轉錄活性。雖然NF-kB在維持細胞的許多功能中起著非常重要的作用。然而NF-kB能否作為有效的耙點來治療疾病卻未知。更無以NF-kB為靶點并應用其抑制劑來治療目前尚無有效治療方法的病毒性疾病，癌癥，慢性炎癥和自身免疫性疾病的先例。
發明內容本發明的目的是為多種疾病尋找新的有效藥物，提出一種利用NF-kb抑制劑在治療多種疾病上的應用，使用NF-kb抑制劑有效地抑制病毒感染和復制，尤其對人類免疫缺損病毒造成的艾滋病，和治療人類癌癥如乳腺癌，白血病，淋巴瘤，肺癌，皮膚癌，前列腺癌，肝癌，腦瘤，子宮頸癌，胰腺癌，以及消化道癌癥包括胃癌和腸癌效果顯著。本發明提出一種以NF-kB為耙點，使用NF-kB化合物抑制劑在治療哺乳動物的病毒感染，癌癥，慢性炎癥和自身免疫性疾病的應用。所說的病毒感染為逆轉錄酶病毒造成的感染。所說的病毒感染為HIV(H畫nImmunodeficiencyVirus)造成的艾滋病(AcquiredImmuneDeficiencySyndrome)。所說的癌癥包括肺癌，乳腺癌，皮膚癌，肝癌，消化道癌(包括胃癌，肝癌，腸癌，和食道癌)，腎癌，前列腺癌，腦癌，子宮頸癌，胰腺癌，白血病，淋巴瘤，膀胱癌，鼻咽癌，骨癌，和內分泌腫瘤。所說的化合物抑制劑是喹唑啉衍生物。所說的化合物抑制劑是從由3-羥基-24-去甲基-2-酮-l(10)，3，5，7-木栓四烯-29-羧酸(南蛇藤醇)(Tripterin;Celastrol,Celastrusscandens),咖啡酸苯乙基酯(cape)(CaffeicAcidPhenethylEster),(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈(BAY說明書第2/6頁11-7082)，7-甲氧基-5,11,12-三羥基-氧茚香豆素之中的任一種，或從它們組成的組群中選擇的，及其衍生物或其可制藥鹽作為活性成分。本發明的特點及效果本發明首次以NF-kb為靶點，使用NF-kb抑制劑如喹唑啉衍生物，南蛇藤醇，咖啡酸苯乙基酯，通過對NF-kB轉錄因子的抑制來有效地抑制病毒感染和復制，尤其對人類免疫缺損病毒造成的艾滋病，和治療人類癌癥如乳腺癌，白血病，淋巴瘤，肺癌，皮膚癌，前列腺癌，肝癌，腦瘤，子宮頸癌，胰腺癌，以及消化道癌癥包括胃癌和腸癌效果顯著。本發明所述抑制NF-kB的功能的化學合成物及它們的衍生物可單獨或聯合現臨床應用的療法合并治療多種疾病。其特點是高療效和低毒性。圖1為NF-icB抑制劑對逆轉錄酶病毒感染和復制的抑制。圖2為NF-kB抑制劑對HIV病毒感染和復制的抑制。具體實施方式本發明結合附圖及實施例詳細說明如下本發明所述應用NF-kB抑制劑來治療病毒性疾病，癌癥，慢性炎癥和自身免疫性疾病。所述的NF-kB抑制剤包括(一)6-氨基喹唑啉衍生物(quinazolinederitives),，.(二)3-羥基-24-去甲基-2-酮-1(10)，3，5，7-木栓四烯-29-羧酸(南蛇藤醇)(Tripterin;Celastrol,Celastrusscandens)(3-Hydroxy-24-nor-2-oxo-1(10),3,5，7-friedelatetraen-29-oicAcid)，(三)咖啡酸苯乙基酯(c鄰e)(CaffeicAcidPhenethylEster)，(四)(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈(BAY11-7082)(7-Methoxy-5,11,12-trihydroxy-coumestan，(E)3-[(4-Methyiphenyl)sulfony1〗-2-propenenitrile)，(五)7—甲氧基-5,11,12-三羥基-氧茚香豆素(7-Methoxy-5,11，12-trihydroxy-coumestan)所述喹唑啉衍生物(quinazolinederitives)是具有以下結構式或在此基礎上的衍生物及其可制藥鹽作為活性成分的化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中，R'代表OR2,取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環芳基，取代或未取代的烴基，取代或未取代的鏈烯烴基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的正-丁氧基，取代或未取代的正-戊氧基，取代或未取代的正-丙氧基，取代或未取代的異丙基，取代或未取代的正-己氧基同系物，取代或未取代的芐氧基，取代或未取代的吡啶甲氧基或喹啉甲氧基，取代或未取代的烯丙氧基，取代或未取代的炔丙氧基，或取代或未取代的乙氧基。R2是一個取代或未取代的具1-6碳的烷烴基，取代或未取代的2-6碳的烯烴基，取代或未取代的2-6碳的炔烴基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環芳基，取代或未取代的芳烷基，或取代或未取代的雜環芳烷基。.上述代表性的喹唑啉衍生物是1、6-Amino-4-(4-phe^oxy)phe^ethyl^lmi^oqui^azoli^e-6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉2、6-Amino-4-(4-/rpentyloxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉3、6-Amino-4-(4-/Hiexyloxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉4、6-Amino-4-(4-/7~butoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉5、6-Amino-4-(4-benzyioxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉6、6-Amino-4-[4-(2-pyridylmethyioxy)phenethy)aminoquinazoline.6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉7、4-(4-Allyloxy)phenethylamino-6-aminoquinazoline.4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉8、6-Amino-4-(4-p^opa^gyloxy)phenethylaminoqui^azoline6-氨基-4-(4-炔丙氧基)苯乙胺喹唑啉9、6-Amino-4-(4-ethoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-乙氧基)苯乙胺喹唑啉10、6-Amino-4—(4-propoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-丙氧基)苯乙胺喹唑啉11、6-Amino—4-(4-_z'5v7~propoxy)phenethylaminoquinazoline.6-氨基-4-(4-異丙氧基)苯乙胺喹唑啉該發明通過以下的應用實施例進行詳細說明，所列舉的實施例僅用于說明本發明的內容，不應被認為是本發明權利要求保護范圍的限制。A、NF-kB抑制剤在病毒感染方面的用途及效果圖1為NF-kB抑制劑對逆轉錄酶病毒感染和復制的抑制，圖中，293T細胞在感染表達一綠螢光標記蛋白質(GFP)逆轉錄酶病毒前,用或不用1.5^M的6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹挫啉(如圖中柱A)，6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉(如圖中柱B),6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉(如圖中柱C)，6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉(如圖中柱D)，6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉(如圖中柱E)，6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉(如圖中柱F)，或4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6_氨基喹唑啉(如圖中柱G)預處理30分鐘。感染48小時后，用螢光顯微鏡對被感染顯示綠螢光的細胞計數。根據3個獨立的實驗計算標準誤差。圖中，柱O為未經處理的情況。以下分別舉例詳細說明實施例1:用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制。293T細胞在感染表達一綠螢光標記蛋白質(GFP)逆轉錄酶病毒前，用或不用[1.5^M]]6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉處理30分鐘。逆轉錄酶病毒按先前已知的方法(LuM.andShenkT.，JVirol.73(1):676-683,1999)制備。感染48小時后，用螢光顯微鏡觀察細胞。只有被感染的細胞顯示綠螢光。如圖1柱A所示，與未處理的細胞相比，6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒對293T細胞的感染和病毒復制。定量數據說明6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了95%的病毒感染和復制。用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉處理未導致明顯的293T細胞死亡。實施例2:用6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制293T細胞在感染逆轉錄酶病毒前用或不用[1.5pM]6-氮基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹挫啉預處理30分鐘。48小時后，計數受感染細胞的數目。如圖1柱B所示，與未處理的細胞相比，定量數據顯示6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了98%的病毒感染和復制且無明顯的細胞死亡。實施例3:用6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制293T細胞在感染逆轉錄酶病毒用或不用[1.5^M]]6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉預處理30分鐘。48小時后，計數受感染細胞的數,。如圖1柱C所示，與未處理的細胞相比，定量數據顯示6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯￡胺喹唑啉抑制了96%的病毒感染和復制且無明顯的細胞死亡。實施例4:用6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制293T細胞在感染逆轉錄酶病毒用或不用[1.5^M]]6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉預處理30分鐘。48小時后，計數受感染細胞的數目。如圖1柱D所示，與未處理的細胞相比，定量數據顯示6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了93%的病毒感染和復制且無明顯的細胞死亡。實施例5:用6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制293T細胞在感染逆轉錄酶病毒前用或不用[1.5nM]]6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉預k理30分鐘。48小時后，計數受感染細胞的數目。如圖1柱E所示，與未處理的細胞相比，定量數據顯示6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了90%的病毒感染和復制且無明顯的細胞死亡。實施例6:用6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹嘩啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制293T細胞在感染逆轉錄酶病毒用或不用[1.5pM]]6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉預處理30分鐘。48小時后，計數受感染細胞的數目。如圖1柱F所示，與未處理的細胞相比，定量數據顯示6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉抑制了85%的病毒感染和復制且無明顯的細胞死亡。實施例7:用4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉抑制逆轉錄酶病毒感染和復制293T細胞在感染逆轉錄酶病毒顯示GFP前用或不用[1.5jaM]4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉預處理30分鐘。48小時后，計數受感染細胞的數目。如圖1柱G所示，與未處理的細胞相比，定量數據顯示4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉抑制了88%的病毒感染和復制且無明顯的細胞死亡。圖2為NF-kB抑制劑對HIV病毒感染和復制的抑制，圖中，293T細胞在感染表達一綠螢光標記蛋白質(GFP)HIV病毒前，用或不用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉(柱A)，6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉(柱B)，6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉(柱C),6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉(柱D)，6-氨基_4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉(柱E)，6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉(柱F),或4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉(柱G)，南蛇藤醇(柱H)，或咖啡酸苯乙基酯(柱I)預處理30分鐘。感染48小時后，用螢光顯微鏡對被感染顯示綠螢光的細胞計數。根據3個獨立的實驗計算標準誤差。圖中，柱0是未經處理的情況。下面舉例詳細說明實施例8:用喹唑啉衍生物，南蛇藤醇和咖啡酸苯乙基酯抑制HIV感染和復制以VSV-G為包膜的表達熒光素酶的HIV病毒按先前描述的方法(Lietal.，2000;44:1019-25，Naldinietal.，93:11382-11388,1996)制備。293T細胞在感染HIV病毒前用6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如圖2中柱A),6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5nM)(如圖2中柱B),6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如圖2中柱C)，6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如圖2中柱D),6_氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如圖2中柱E),6-氨基_4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉(1.5pM)(如圖2中柱F),4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉(1.5^M)(如圖2中柱G),南蛇藤醇(400nM)(如圖2中柱H),..或咖啡酸苯乙基酯(5pg/ml)(如圖2中柱I)預處理30分鐘。如圖2所示，所有試驗的抑制劑抑制了HIV-l-引發熒光素酶活性。這意味著抑制了HIV-l病毒的感染和復制。實驗用的劑量未發現明顯的細胞死亡。B.NF-kB抑制劑在癌癥治療上的用途及效果實施例子9:喹唑啉衍生物在癌細胞生長和存活方面的作用。用5pM的6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉處理不同種類的4X1(T癌細胞并在第6天計數活細胞。不同種類的4X1(^癌細胞包括LNCAP人類前列腺癌細胞，MDA-MB-468人類乳腺癌細胞，H1299人類肺癌細胞，HT29人類腸癌細胞，AGS人類胃癌細胞，H印G2人類肝癌細胞，PANC-1人類胰腺癌細胞，Jurkat人類急性T-細胞白血病細胞，A431人類皮膚癌細胞，U251人類神經膠質瘤細胞，NBT-II人類膀胱癌細胞，和Hela海拉人類子宮頸癌細fe。如表1所示，未處理的癌細胞增生幾倍，而用6-氨基_4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉處理的細胞生長被抑制了10-90%。根據3個獨立的實驗計算標準誤差。表1:6~氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉對癌細胞生長和存活的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表1列出的細胞也用其他喹唑啉衍生物包括6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4_正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉，4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉,6-氨基-4-(4-炔丙氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-乙氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-丙氧基)苯乙胺喹唑啉，6-氨基-4-(4-異丙氧基)苯乙胺喹唑啉的喹唑啉衍生物進行處理。這些化合物對癌細胞生長和存活的作用可與6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉相似。實施例10:7-甲氧基-5,11，12-三羥基-氧茚香豆素對癌細胞生長和存活的作用。7-甲氧基-5，11,12-三羥基-氧茚香豆素通過抑制lKB的磷酸化和降解抑制NF-KB-引發的基因轉錄。用5pM的7-甲氧基-5，11，12-三羥基-氧茚香豆素處理不同種類的4Xl(T癌細胞并在第6天計數活細胞。與未經處理的細胞比較，7-甲氧基-5,11,12-三羥基-氧茚香豆素對A431皮膚癌細胞的生長抑制率為51M，對H印G2人類肝癌細胞的生長抑制率為25呢，對H1299人類肺癌細胞的生長抑制率為31%，對海拉人類子宮頸癌細胞的生長抑制率為29%，對MDA-MB-468人類乳癌細胞的生長抑制率為10呢。實施例ll:南蛇藤醇對癌細胞生長和存活的作用。用5pM的南蛇藤醇處理不同種類的4X10癌細胞并在第6天計數活細胞。處理的LNCAP人類前列腺癌細胞，MDA-MB-468人類乳腺癌細胞，H1299人類肺癌細胞，HT29人類腸癌細胞，AGS人類胃癌細胞，H印G2人類肝癌細胞，PANC-1人類胰腺癌細胞，A431人類皮膚癌細胞，U251人類神經膠質瘤細胞，，NBT-II人類膀胱癌細胞和海拉人類子宮頸癌細胞的各種癌細胞的細胞全部死亡和90%Jurkat人類白血病細胞死亡。[使用臺盼藍著色方法(CYChen,等人在J.Biol.Chem.273:16700-16709)評估細胞的存活和死亡。]實施例12:(E)3_[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈對癌細胞生長和存活的作用。用5pM的(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈處理不同種類的4X10'癌細胞并在第6天計數活細胞。處理的LNCAP人類前列腺癌細胞，H1299人類肺癌細胞，H印G2人類肝癌細胞，PANC-1人類胰腺癌細胞，A431人類皮膚癌細胞，和U251人類膠質瘤細胞的細胞全部死亡，其在AGS人類給癌細胞中抑制了90%的細胞生長，在MDA-MB-468人類乳腺癌細胞，在NBT-II人類膀胱癌細胞和海拉人類白血病細胞的各種癌細胞中抑制了9-12%的細胞生長。由于NF-kB在慢性炎癥和自身免疫性疾病中的介入，因此以上化合物對治療慢性炎癥和自身免疫性疾病有作用。權利要求1、一種NF-κB抑制劑在治療逆轉錄病毒感染的應用，其特征在于，所說的抑制劑是喹唑啉衍生物，所說的喹唑啉衍生物具有以下的結構式及其衍生物或其可制藥鹽作為活性成分id="icf0001"file="S2008100936406C00011.gif"wi="74"he="45"top="70"left="40"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>式中，R1代表OR2，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環芳基，取代或未取代的烴基，取代或未取代的鏈烯烴基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的苯氧基，取代或未取代的正-丁氧基，取代或未取代的正-戊氧基，取代或未取代的正-丙氧基，取代或未取代的異丙基，取代或未取代的正-己氧基同系物，取代或未取代的芐氧基，取代或未取代的吡啶甲氧基或喹啉甲氧基，取代或未取代的烯丙氧基，取代或未取代的炔丙氧基，或取代或未取代的乙氧基；R2是一個取代或未取代的具1-6碳的烷烴基，取代或未取代的2-6碳的烯烴基，取代或未取代的2-6碳的炔烴基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的雜環芳基，取代或未取代的芳烷基，或取代或未取代的雜環芳烷基。2、如權利要求1所述的應用，其特征在于，所說的抑制劑是6-氨基-4-(4-苯氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-正-戊氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-正-己氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-正-丁氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-卞氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-[4-(2-吡啶甲氧基)苯乙胺喹唑啉、4-(4-烯丙氧基)苯乙胺-6-氨基喹唑啉、6_氨基-4-(4-炔丙氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-乙氧基)苯乙胺喹唑啉、6-氨基-4-(4-丙氧基)苯乙胺喹唑啉或6-氨基-4-(4-異丙氧基)苯乙胺喹唑啉之中的任一種。3、如權利要求l所述的應用，其特征在于，所說的病毒感染為HIV造成的艾滋病。全文摘要本發明涉及利用NF-κB抑制劑在治療逆轉錄病毒感染的應用，屬于化學合成物在治療疾病中的應用領域，本發明以NF-κB為靶點，使用NF-κB抑制劑在治療哺乳動物的病毒感染，癌癥，慢性炎癥和自身免疫性疾病的應用。使用的抑制劑包括喹唑啉衍生物，南蛇藤醇，咖啡酸苯乙基酯，(E)3-[(4-甲基苯)磺酰]-2-丙烯腈，和7-甲氧基-5，11，12-三羥基-氧茚香豆素等抑制NF-κB的功能的化學合成物和它們的衍生物可單獨或聯合現臨床應用的療法合并治療病毒性疾病，尤其是由逆轉錄酶病毒引發的病毒感染和HIV引發的艾滋病，癌癥，慢性炎癥和自身免疫性疾病。文檔編號A61P31/12GK101269077SQ200810093640公開日2008年9月24日申請日期2005年6月17日優先權日2005年6月17日發明者呂志民申請人:呂志民