一種傷科接骨藥物的質量控制方法

專利名稱：一種傷科接骨藥物的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥制劑的質量控制方法，具體涉及中藥傷科接骨藥物的 質量控制方法。
背景技術：
藥品應具有安全性、有效性、穩定性及可控性。完善的質量控制標準能夠 保證藥品質量的可靠性和均一性。本發明藥物由紅花、土鱉蟲、朱砂、馬錢子 粉、炙沒藥、三七、炙海星、炙雞骨、冰片、煅自然銅、炙乳香、甜瓜子十二 味藥組成，具有活血化瘀、消腫止痛、舒筋壯骨功效。用于趺打損傷，閃腰岔 氣，傷筋動骨，瘀血腫痛，損傷紅腫等癥，具有較好的治療效果。在公開號為CN1709463A的中國專利申請文件中公開了一種傷科接骨藥物， 由上述十二味藥組成，但沒有公開其質量控制方法。在公開號為CN1806820A的 中國專利申請文件中也公開了 一種傷科接骨藥物，也是由上述十二味藥組成， 并公開了其質量控制方法。該質量控制方法中除了具有顯微鑒別項外，還增加 了三七藥材中人參皂苷Rgl、三七皂苷Rl和乳香藥材的薄層色譜鑒別及馬錢子 中士的寧和朱砂中硫化汞的含量測定。但該質量控制方法中存在一些不足，如 (1)在三七薄層色譜鑒別中，樣品取樣量大；且采用人參皂苷Rgl、三七皂苷 Rl作為三七藥材薄層鑒別的對照品，按照其公開的方法實驗，結果三七陰性 對照溶液的色譜中，在與人參皂苷Rgl對應的位置上存在干擾；且樣品色譜中， 在與三七皂苷R1對應的位置上，存在未分開的多個斑點，無法判定是否有對應 斑點，故不適宜用于三七的定性鑒別，見附圖2; (2)乳香為進口藥材，不同品種的乳香成份是有差異的，故所對應的鑒別方法也不相同，從而對該藥味在制 劑中的鑒別方法也不應相同。根據該公開文件中所公開的內容無法確定對照藥 材所使用的乳香品種，所以無法選用相應的對照藥材進行鑒別試驗。另外，該 方法中樣品的提取是釆用乙醚超聲處理20分鐘，污染太大，無法操作(因乙醚沸點低易揮發)；(3)馬錢子中士的寧含量測定方法設計有缺陷，如對照品取 量不合適，遠超出其所制定的樣品含量上限，會增加測定誤差；樣品前處理后， 殘渣用流動相無法完全溶解，故不能定量轉移進行含量測定；(4)朱砂中硫化汞含量測定方法存在檢出靈敏度低，檢驗周期長，樣品化學反應不完全，易造成檢驗誤差等缺陷，如①樣品取樣量10g，硫酸僅用了50ml，中藥粉末具有質輕體 積大的特點，樣品取樣量偏大，浸潤不完全，會導致測定結果偏低；②該方法中釆用凱氏燒瓶作為容器，并且自始至終未轉移至其它合適的容器，該容器不適合化學滴定操作；③按其檢驗方法"加硫酸50ml與硝酸鉀5g，加熱使溶 解......"，實際無法達到所述的溶解狀態，不具備可操作性。因而無法保證含量測定的準確性。眾所周知，馬錢子和朱砂均具有毒性，因此精確控制二者的用量極其重要。發明內容本發明在公開號為CN1709463A的中國專利申請文件藥物制劑的基礎上，提 供了上述發明藥物的質量控制方法，通過此方法可以控制該發明藥物及含相同 組分傷科接骨藥物的質量。本發明所述的傷科接骨藥物的中藥原料藥是由紅花、土鱉蟲、朱砂、馬錢子 粉、炙沒藥、三七、炙海星、炙雞骨、冰片、煅自然銅、炙乳香、甜瓜子十二 味藥組成，其制劑可為膠囊劑、片劑或丸劑等。該藥物的中藥原料藥的重量份 配比為紅花4-15份土鱉蟲13-50份朱砂3-15份馬錢子粉6-30份炙沒藥卜6份三七26-100份炙海星13-30份炙雞骨13-60份冰片0. 5-3份煅自然銅6-30份炙乳香1-5份甜瓜子1-5份優選的，各原料藥的重量配比 紅花 4-9份 土鱉蟲13-30份馬錢子粉 6-15份炙沒藥1-3份 炙海星 13-30份 炙雞骨13-30份煅自然銅 6-15份 炙乳香 比較優選的，各原料藥的重量配比 紅花 12份 土鱉蟲馬錢子粉 20份 炙沒藥 炙海星 20份 炙雞骨煅自然銅 20份 炙乳香 更優選的，各原料藥的重量配比 紅花 6份 土鱉蟲馬錢子粉 10份 炙沒藥 炙海星 20份 炙雞骨煅自然銅 1Q份 炙乳香 2份朱砂 3-7. 5份 三七 26-60份 冰片 Q. 5-1.5'1-3份甜瓜子1-3份40份朱砂io份4份三七80份40份冰片2份4份甜瓜子4份20份朱砂5份2份三七40份20份冰片l份甜瓜子2份以上組成是按照重量份作為配比的，在生產時可按照相應比例增大或減少， 如大規模生產時可以以公斤為單位，或以噸為單位。本發明藥物可通過文獻公開的方法制得，也可采用以下方法得到，如將上述 配方的原料經過提取或其他加工方式加工，制成藥物活性物質，隨后，以該物質為原料，需要時加入藥物可接受的載體，按照制劑學的常規技術制成膠囊、 片劑、口服液、顆粒劑、丸劑等。所述的活性物質可以通過選自以下方法得到， 如粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過篩、滲漉、萃取、水提、醇提、酮提、層析 等方法得到，這些活性物質可以是浸膏形式的物質，也可以是干浸膏或者流浸 膏，還可以是高純度提取物，根據制劑的不同需要決定制成不同的濃度。優選的，本發明藥物的制備方法，包括如下步驟(1) 稱取所述重量配比的原料藥備用；(2) 將除朱砂和冰片外的原料藥粉碎，過100-250目篩；(3) 將朱砂制成朱砂極細粉，將冰片研細，都兌入過篩后的上述原料藥藥 粉中混合均勻，即制得本發明藥物。優選的，本發明藥物的另一制備方法，包括如下步驟(1) 稱取所述重量配比的原料藥備用；(2) 將除紅花、朱砂和冰片外的原料藥粉碎，過100-250目篩；(3) 將紅花加6-10倍水煎煮兩次，每次l-2小時，合并煎液，過濾，將濾 液濃縮至相對密度為1. 05-1. 35 ( 40-85°C )的浸膏；(4) 將上述浸膏及步驟(2)所制得的藥粉混合，干燥成細粉；(5) 將朱砂制成朱砂極細粉，將冰片研細，然后都兌入步驟(4)所制得的 細粉中，混合均勻，即制得本發明藥物。優選膠囊劑的制備方法以上十二味藥，除朱砂、冰片外，其余紅花等十味 粉碎，過條成細粉；朱砂水飛成極細粉，兌入過篩后的細粉中，過篩，混勻； 冰片研細，與上述粉末配研，混勻，裝入膠囊，即得。本發明所述可接受的載體包括淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、 木糖醇、聚乙二醇、異丙醇、土溫-80、甘油、丙二醇、微晶纖維素鈉、糊精、環糊精、氯化鈉、維生素C、半胱氨酸、檸檬酸、硫代硫酸鈉、亞硫酸鈉、硬脂 酸鹽和明膠等常規輔料，制劑的后期制備工藝均屬制藥領域的常規技術，本發 明對此不作限定，故在此不予詳述。為了有效控制所述的傷科接骨藥物的質量，本發明人制定了如下所述質量控 制方法的技術方案。所述的質量控制方法適用于本發明十二味藥組成的組合物， 也適用于包括各種制劑輔料在內的藥物制劑，具體可包括膠囊劑、片劑和丸劑 等。該質量控制方法的特征在于包括如下鑒別方法中的一種、至少兩種、至少三種性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、電泳鑒別；對本發明藥物的一種或幾種成分進行含量測定，其方法包括氣相色譜、高效液相色譜及化學滴定。其中所述性狀鑒別包括如下內容 性狀鑒別所述傷科接骨藥物為片劑時，其片芯為灰褐色至棕褐色；味苦， 腥；所述傷科接骨藥物為膠囊劑時，其內容物為淺褐色至褐色；味苦，腥；所 述傷科接骨藥物為丸劑時，其丸芯為淺褐色至褐色；味苦，腥。顯微鑒別取本發明藥物，置顯微鏡下觀察花粉粒類圓形或橢圓形，直徑 43-66)im，外壁有齒狀突起，具有3個萌發孔；樹脂道碎片含棕黃色分泌物； 體壁碎片棕色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8-24jum，有的具長短不一的剛毛； 不規則細小顆粒暗紅棕色，有光澤，邊緣暗黑色。非腺毛單細胞，多碎斷，壁 極厚，木化，基部膨大似石細胞；不規則形碎片，無色，有光澤，完整者表面 有圓形窩孔，多數碎塊邊緣呈半圓環狀，有突起；或者，取本發明藥物，置顯微鏡下觀察樹脂道碎片含棕黃色分泌物；體壁 碎片棕色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8-24jam，有的具長短不一的剛毛；不規 則細小顆粒暗紅棕色，有光澤，邊緣暗黑色。非腺毛單細胞，多碎斷，壁極厚， 木化，基部膨大似石細胞；不規則形碎片，無色，有光澤，完整者表面有圓形窩孔，多數碎塊邊緣呈半圓環狀，有突起。本發明所述的質量控制方法，其特征在于還包括對藥物中三七、紅花、冰片 和/或馬錢子粉的薄層色譜鑒別，包括如下內容，其中對三七的鑒別是釆用三七對照藥材作為陽性對照； 對紅花的鑒別是釆用紅花對照藥材作為陽性對照；對冰片的鑒別是釆用冰片對照品作為陽性對照；對馬錢子粉的鑒別是釆用士的寧和馬錢子堿對照品作為陽性對照。 具體薄層色譜鑒別方法包括如下步驟三七的鑒別取本發明藥物粉末1.5-3. 0g，加甲醇10ml，超聲處理10-30 分鐘(160w、 50kHz),濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材粉末lg, 同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B) 試驗，吸取上述兩種溶液各4-8m1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑 的硅膠G薄層板上，以4-6: 2-4: 1-2: 1-2的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在95°C-ll(TC加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 占.優選的三七的鑒別取本發明藥物粉末2. 0g,加甲醇10ml,超聲處理20 分鐘(160w、 50kHz),濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材粉末lg, 同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B) 試驗，吸取上述兩種溶液各5)il，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的 硅膠G薄層板上，以5: 3: 1: 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105'C加熱至斑點顯色清晰；供試品 色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；紅花的鑒別取本發明藥物粉末3. 0-5. 0g,加80%丙酮溶液lOml，密塞， 超聲處理15分鐘(160w、 50kHz)，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅花對照 藥材O. 5g,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附 錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各lOjal,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉 為粘合劑的硅膠H薄層板上，以7: 2: 3: 0. 4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇為展 開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯相 同顏色的斑點；優選的紅花鑒別取本發明藥物粉末4. Og，加80%丙酮溶液10ml,密塞， 超聲處理15分鐘(160w、 50kHz)，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅花對照 藥材O. 5g,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附 錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各lO)al,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉 為粘合劑的硅膠H薄層板上，以7: 2: 3: 0. 4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇為展 開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯相 同顏色的斑點；冰片的鑒別取本發明藥物粉末2. 0-4. Og，加三氯甲烷15ml，振搖，浸漬2 小時，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加三氯甲烷每lml約含 2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各3jal，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9: 1 的苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105°C 加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同 顏色的斑點；或者，取本發明藥物粉末2. 0-4. Og,加三氯甲烷15ml，振搖，超聲處理15-30 分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇制成每lml約含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附 錄VI B)試驗，吸取供試品溶液4-8 jal，對照品溶液2jal，分別點于同一硅 膠G薄層板上，以15-20: 2-5的環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾 干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在95-110。C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜 中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；優選的冰片的鑒別 取本發明藥物粉末3. Og，加三氯甲烷15ml，振搖， 超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇 制成每lml約含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005 版一部，附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5jul，對照品溶液2yl，分別點 于同一硅膠G薄層板上，以17: 3的環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出， 晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105i:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；馬錢子粉的鑒別取本發明藥物粉末3. 0-5. Og,加9-ll: l的三氯甲烷-乙 醇混合液15ml與濃氨水試液1. 5ml，密塞，超聲處理10-30分鐘(160w、 50kHz),濾過，濾液作為供試品溶液；另取士的寧和馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005 版一部，附錄vi b)試驗，吸取上述供試品溶液10-20 m1、對照品溶液5jul， 分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以3-5: 4-6: 0.5-0.7: 0. 3-0. 5的甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同 顏色的斑點。優選的馬錢子粉的鑒別取本發明藥物粉末4. Og,力口 10: 1的三氯甲烷-乙醇混合液15ml與濃氨水試液1. 5ml，密塞，超聲處理20分鐘(160w、 50kHz),濾過，濾液作為供試品溶液；另取士的寧和馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005 版一部，附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液15m1、對照品溶液5jal，分 別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以4: 5: 0.6: 0.4 的甲苯-丙酮-乙醇-濃氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液； 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。本發明所述的質量控制方法，還包括對海星的鑒別，主要為電泳鑒別，包 括如下步驟提取方法取本發明藥物粉末1.5-3. Og和海星對照藥材0.2-1. 0 g，分別 加入6ml熱水，蓋上保鮮膜，IO(TC煮20-40 min，放冷后4000 rpm離心20分 鐘，取上清液各5-15jal;照電泳法(中國藥典2005版三部，附錄IV C)試驗， 按下述電泳條件進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應 的位置上顯相同的蛋白條帶；其中所述的電泳條件分離膠9-14%;濃縮膠4-6%;恒電流30 mA; 電壓200 V;電泳時間2-3小時；用考馬斯亮藍R250染色3-5h,搖床脫色。優選的海星電泳鑒別提取方法取本發明藥物粉末2. 0g和海星對照藥材0. 5g,分別加入6 ml 熱水，蓋上保鮮膜，10(TC煮30min，放冷后4000 rpm離心20分鐘，取上清液 各10jul;照電泳法(中國藥典2005版三部，附錄IVC)試驗，按下述電泳條 件進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應的位置上顯相 同的蛋白條帶；其中所述的電泳條件分離膠12.5%;濃縮膠5%;恒電流30mA;電 壓200 V;電泳時間2小時；用考馬斯亮藍R250染色4h，搖床脫色。本發明傷科接骨藥物的質量控制方法中的檢查項應符合中國藥典膠囊劑、 片劑和丸劑等項下有關的各項規定。本發明所述的質量控制方法，其特征在于還包括對馬錢子粉和/或朱砂和/ 或冰片中主要成分進行含量測定，具體包括如下內容馬錢子粉中士的寧的含量測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈 -0. 01mol/L庚烷磺酸鈉與0. 02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調 節pH值2. 8)(21: 79)為流動相，檢測波長為260nm,理論板數按士的寧峰計 算應不低于5000;對照品溶液的制備精密稱取士的寧對照品10mg,置25ml量瓶中，加三氯 甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lml，置25ml量瓶中，用甲醇 稀釋至刻度，搖勻，即得，每lml含有士的寧16pg;供試品溶液的制備取本發明藥物粉末0.5-1. 5g，精密稱定，置具塞錐形 瓶中，加氫氧化鈉試液3ml，混勻，放置30分鐘，精密加三氯甲烷20ml，密塞， 稱定重量，置水洛中回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減 失的重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量硫酸鈉的濾紙濾過，棄去 初濾液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度； 測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10nl,注入液相色譜儀，測 定，即得；朱砂中硫化汞的含量測定取本發明藥物粉末2. 0-3. Og,精密稱定，置250ml燒瓶中，加硫酸20ml與 硝酸鉀2.5g,加熱使呈黃白色，放冷，加水50ml，滴加1%高錳酸鉀溶液至顯 粉紅色，超聲處理5分鐘，若粉紅色消失，繼續滴加高錳酸鉀溶液顯粉紅色至2分鐘不消失，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失，加硫酸鐵銨指示液2ml，用 0. lmol/L硫氰酸銨滴定液滴定，即得； 冰片的含量測定色譜條件與系統適用性試驗聚乙二醇(PEG) -20M毛細管柱(柱長30m, 內徑0.32 mm,膜厚度0. 5 M m),柱溫140 °C。理論板數按龍腦峰計算應不低 于8000;校正因子測定取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含O. 25 mg的溶液，作為內標溶液；另取冰片對照品15 mg，精密稱定，置50 ml量瓶 中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取0.5 m,注入氣相色譜儀，測 定，計算校正因子；測定法取本發明藥物粉末0.5-2. 0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入內標溶液10ml，混勻，密塞，稱定重量，超聲處理10-30分鐘，放至室溫， 再稱定重量，用內標溶液補足減失的重量，搖勻，離心10-30分鐘，吸取上清 液O. 5pl，注入氣相色譜儀，測定，以龍腦、異龍腦峰面積之和計算，即得；優選的，冰片的含量測定色譜條件與系統適用性試驗聚乙二醇(PEG) -20M毛細管柱(柱長30 m, 內徑0.32 mm,膜厚度0. 5 p m)，柱溫140 °C。理論板數按龍腦峰計算應不低 于8000;校正因子測定取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含O. 25 rag的溶液，作為內標溶液；另取冰片對照品15 mg，精密稱定，置50 ml量瓶 中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取0.5 W,注入氣相色譜儀，測 定，計算校正因子；測定法取本發明藥物粉末l.Og,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入內標溶液10ml，混勻，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放至室溫，再稱 定重量，用內標溶液補足減失的重量，搖勻，離心20分鐘，吸取上清液0.5)i1, 注入氣相色譜儀，測定，以龍腦、異龍腦峰面積之和計算，即得。本發明所述的質量控制方法，其特征在于每單位制劑含馬錢子以士的寧 (C21H22N202 )計，應為0. 10-0. 20mg,含朱砂以硫化汞(HgS )計，應為7.00-12. OOmg;含冰片(d。HlsO )應不少于O. 60 mg。本發明質量控制方法中包含了對組方中三七、海星等君藥的定性鑒別，以 及對貴重藥材紅花和易揮發藥物冰片及有毒藥材馬錢子的定性鑒別，更大程度 保證該組方藥物質量的穩定；同時因為組方中含有馬錢子和朱砂兩味有毒藥材， 因此增加了對這兩種藥味的含量測定項目，以確保本發明的用藥既有效又安全； 此外，還增加了對藥物中易揮發成分冰片的含量測定。相對于現已公開的文獻, 本發明質量控制的范圍更大，方法更簡便可靠，易于操作，靈敏度、精密度及 重現性好，體現在產品質量效果上表現為各種成分的檢出穩定可靠，可有效地 防止造假行為的發生，更好地保證療效及用藥安全。例如，馬錢子中所含的士 的寧既是有效成分也是有毒成分，因而建立其可靠的含量測定標準，對保證用 藥安全性及有效性非常重要，可確保產品質量的"安全、均一、穩定、有效、 可控"。同公開文獻(公開號為CN1806820A)相比，本發明的優點，在對三七的薄 層色譜鑒別中采用三七對照藥材作為對照品，能夠檢出三七中特征性成分；另 展開系統中無三氯甲垸，展開劑為乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:L1),可即刻 使用，方法快速、簡便易行。而在該公開文獻中，所用展開劑為三氯甲烷-乙酸 乙酯-甲醇-水(15: 40: 22: 10 )需放置12小時后分取下層，步驟繁瑣，液體還需分離，當天無法檢測，還使用了毒性較大的三氯甲烷。綜合對比結果，本發明樣品用量少(最高取樣量為3. 0g)，提取試劑甲醇用量少(為10ml),檢驗周期短，結果重現性好，檢出結果靈敏度高，參見圖l。而在該對比公開文獻，按照樣品取樣量為8-12g;提取甲醇用量為30ml;超聲時間30分鐘；展開劑 為三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15: 40: 22: 10 ),放置12小時后分取下層； 對照品為人參皂苷Rgl和三七皂苷Rl;點樣量為樣品10pl，對照品5"1的條 件進行薄層鑒別。該方法檢出靈敏度低、樣品取樣量大、提取試劑甲醇用量多， 按此條件復核結果還發現同板比較，三七陰性對照溶液的色譜中，在與人參皂 苷Rgl對應的位置上存在干擾(Rf值0.45);且樣品色譜中，在與三七皂苷R1對應的位置上，存在未分開的多個斑點，無法判定是否有對應斑點Uf值0. 31), 參見附圖2。此外，增加了對馬錢子粉、冰片、紅花的薄層色譜鑒別，增加了對海星的 電泳鑒別，增加了對冰片的含量測定；檢測范圍大，控制指標多。同時在對馬 錢子粉和朱砂的定量檢測方法中克服了該公開文獻中存在的缺陷。通過本方法制備得到的傷科接骨藥物，具有治療趺打損傷、閃腰岔氣、傷筋 動骨、瘀血腫痛、損傷紅腫等作用，可用于治療傷科疾病。同時，本發明所述 的傷科接骨藥物的半數致死量LD5。= 3. 9066 ± 0. 2518g/kg，相當于人臨床用量的 56倍，臨床人用量為0. 07g/kg。


圖l本發明三七的薄層色譜鑒別圖，其中1:本發明供試品溶液2:三七對照藥材溶液3:三七陰性對照溶液 圖2公開文獻(公開號CN1806820A)中三七的薄層色譜鑒別圖，其中1:三七陰性對照溶液2:對比文獻供試品溶液3:人參皂苷Rgl和三七皂苷R1對照品混合溶液 4:對比文獻供試品溶液5:人參皂苷Rgl和三七皂苷Rl對照品混合溶液 圖3本發明對照品士的寧高效液相色譜圖 圖4本發明供試品高效液相色譜圖具體實施方式
以下通過實施例來進一步闡述本發明所述藥物的質量控制方法，但并不作 為對本發明的限制。實施例1傷科接骨藥物的質量控制方法所述傷科接骨藥物中各原料藥的重量配比紅花 6份 土鱉蟲 20份 朱砂 5份馬錢子粉 10份 炙沒藥 2份 三七 40份炙海星 20份 炙雞骨 20份 冰片 l份煅自然銅 10份 炙乳香 2份 甜瓜子2份性狀鑒別對于片劑產品片芯為灰褐色至棕褐色；味苦，腥；對于膠囊 劑產品內容物為淺褐色至褐色；味苦，腥；對于丸劑產品丸芯為淺褐色至 褐色；味苦，腥。顯微鑒別取本發明藥物，置顯微鏡下觀察花粉粒類圓形或橢圓形，直 徑43-66 Mm,外壁有齒狀突起，具有3個萌發孔；樹脂道碎片含棕黃色分泌物。 體壁碎片棕色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8-24"m，有的具長短不一的剛毛；不規則細小顆粒暗紅棕色，有光澤，邊緣暗黑色；非腺毛單細胞，多碎斷，壁極厚，木化，基部膨大似石細胞；不規則形碎片，無色，有光澤，完整者表面 有圓形窩孔，多數碎塊邊緣呈半圓環狀，有突起；或者，取本發明藥物，置顯微鏡下觀察樹脂道碎片含棕黃色分泌物；體 壁碎片棕色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8-24pm,有的具長短不一的剛毛；不 規則細小顆粒暗紅棕色，有光澤，邊緣暗黑色；非腺毛單細胞，多碎斷，壁極 厚，木化，基部膨大似石細胞；不規則形碎片，無色，有光澤，完整者表面有 圓形窩孔，多數碎塊邊緣呈半圓環狀，有突起；三七的薄層色譜鑒別取本發明藥物粉末2. 0g，加甲醇10ml,超聲處理20 分鐘(160w、 50kHz),濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材粉末lg, 同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B) 試驗，吸取上述兩種溶液各5m1,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的 硅膠G薄層板上，以5: 3: 1: 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開， 取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105。C加熱至斑點顯色清晰；供試品 色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；參見附圖l;冰片的薄層色譜鑒別取本發明藥物粉末2. 0-4. 0g,加三氯甲烷15ml，振 搖，浸漬2小時，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加三氯甲烷 每lml約含2mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一 部，附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各3jal，分別點于同一硅膠G薄層板 上，以9: l的苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液， 在105'C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；紅花的薄層色譜鑒別取本發明藥物粉末4. 0g,加80%丙酮溶液10ml,密塞，超聲處理15分鐘(160w、 50kHz )，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅花 對照藥材O. 5g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部， 附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各IOmI,分別點于同一以羧甲基纖維素 鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以7: 2: 3: 0. 4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇為 展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯 相同顏色的斑點；檢查符合中國藥典膠囊劑、片劑和丸劑等項下有關的各項規定。馬錢子粉中士的寧的含量測定色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈 -0. 01mol/L庚烷磺酸鈉與0. 02mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液(用10%磷酸調 節pH值2.8)(21: 79)為流動相，檢測波長為260nm,理論板數按士的寧峰計 算應不低于5000;對照品溶液的制備精密稱取士的寧對照品10mg,置25ml量瓶中，加三氯 甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lml，置25ml量瓶中，用甲醇 稀釋至刻度，搖勻，即得，每lml含士的寧16ng;供試品溶液的制備取本發明藥物粉末1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 加氫氧化鈉試液3ml，混勻，放置30分鐘，精密加三氯甲垸20ml，密塞，稱定 重量，置水洛中回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的 重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量硫酸鈉的濾紙濾過，棄去初濾 液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10pl，注入液相色譜 儀，測定，即得；結果每片中含馬錢子粉以士的寧計，為0.15mg;每粒膠囊含 馬錢子粉以士的寧計，為O. 16mg;每丸含馬錢子粉以士的寧計，為O. l5mg。照品色譜圖和供試品色譜圖參見附圖3和附圖4。 實施例2傷科接骨藥物的質量控制方法除了上述實施例1中所述的內容外，還包括如下內容馬錢子粉的鑒別取本發明藥物粉末4. 0g，加10: 1的三氯甲烷-乙醇混合液15ml與濃氨水 試液1.5ml,密塞，超聲處理20分鐘U60w、 50kHz)，濾過，濾液作為供試品 溶液；另取士的寧和馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合 溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B) 試驗，吸取上述供試品溶液15|al、對照品溶液5yl，分別點于同一以羧甲基 纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以4: 5: 0.6: 0. 4的甲苯-丙酮-乙醇-濃氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中， 在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。朱砂中硫化汞的含量測定取本發明藥物粉末2. 5g，精密稱定，置250ml燒瓶中，加硫酸20ml與硝酸 鉀2.5g,加熱使呈黃白色，放冷，加水50ml，滴加1%高錳酸鉀溶液至顯粉紅 色，超聲處理5分鐘，若粉紅色消失，繼續滴加高錳酸鉀溶液顯粉紅色至2分 鐘不消失，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失，加硫酸鐵銨指示液2ml，用 0. lmol/L硫氰酸銨滴定液滴定，即得；每片含朱砂以硫化汞計，為9. OOmg;每 粒膠囊含朱砂以硫化汞計，為9. 02mg;每丸含朱砂以硫化汞計，為8. 78mg。 實施例3傷科接骨藥物的質量控制方法除了實施例2中所述的內容外，還包括海星的鑒別，具體如下 提取方法取本發明藥物粉末2. 0g和海星對照藥材0. 5g,分別加入6 ml 熱水，蓋上保鮮膜，10(TC煮30min，放冷后4000 rpm離心20分鐘，取上清液各10pl;照電泳法(中國藥典2005版三部，附錄IVC)試驗，按下述電泳條 件進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應的位置上顯相 同的蛋白條帶；其中所述的電泳條件分離膠12.5%;濃縮膠5%;恒電流30 mA;電壓200 V;電泳時間2小時；用考馬斯亮藍R250染色4h，搖床脫色。實施例4傷科接骨藥物的質量控制方法除了實施例3中所述的內容外，還包括對冰片的含量測定，具體如下 色譜條件與系統適用性試驗聚乙二醇(PEG) -20M毛細管柱(柱長30 m，內徑0.32 mm,膜厚度0. 5 m m),柱溫140 。C。理論板數按龍腦峰計算應不低于8000;校正因子測定取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含0.25 mg的溶液，作為內標溶液；另取冰片對照品15 mg，精密稱定，置50 ml容量 瓶中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取0.5 m，注入氣相色譜儀， 測定，計算校正因子；測定法取本發明藥物粉末1. Og,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 內標溶液10ml，混勻，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放至室溫，再稱 定重量，用內標溶液補足減失的重量，搖勻，離心20分鐘，吸取上清液O. 5pl， 注入氣相色譜儀，測定，以龍腦、異龍腦峰面積之和計算，即得；每片含冰片 為1.0mg;每粒膠囊含冰片為1.2mg;每丸含冰片為0. 9mg。實施例5傷科接骨藥物的質量控制方法實施例1-4中所述的質量控制方法，其中冰片的鑒別方法可按照如下方 法進行鑒別冰片的鑒別取本發明藥物粉末3. 0g,加三氯甲烷15ml，振搖，超聲處理 20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇制成每lml 約含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附 錄VI B)試驗，吸取供試品溶液5jul，對照品溶液2pl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以17: 3的環己垸-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5 %香草醛硫酸溶液，在105C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品 色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； 實施例6傷科接骨藥物的質量控制方法實施例1中所述的內容，其中對三七的薄層色譜鑒別中，可取本發明藥物粉末3. Og,加甲醇10ml，超聲 處理30分鐘，其它條件同實施例l,結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位置上，顯相同顏色的斑點；對冰片的薄層色譜鑒別中，可取本發明藥物粉末4.0g,其它內容同實施例 1，結果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；對馬錢子粉中士的寧的含量測定方法中，取另外批號的膠囊劑、片劑或丸 劑1.5g,按照實施例l所述的方法進行測定，結果每片含馬錢子粉以士的寧計， 為O. 18mg;每粒膠囊含馬錢子粉以士的寧計，為O. 18mg;每丸含馬錢子粉以士 的寧計，為0. 16mg。實施例7傷科接骨藥物的質量控制方法 同實施例1中所述的內容，除了對三七的薄層色譜鑒別中，可取本發明藥物粉末1.5g,加甲醇10ml，超聲 處理10分鐘，其它條件同實施例1,結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位置上，顯相同顏色的斑點；對冰片的薄層色譜鑒別中，可取本發明藥物粉末2.0g，其它內容同實施例 1,結果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；對馬錢子粉中士的寧的含量測定方法中，取另外批號的膠囊劑、片劑或丸 劑O. 5g，按照實施例1所述的方法進行測定，結果每片中含馬錢子粉以士的寧計，為O. 14mg;每粒膠囊含馬錢子粉以士的寧計，為O. 15mg;每丸含馬錢子粉以士的寧計，為0. 15mg。實施例8傷科接骨藥物的質量控制方法同實施例2中所述的內容，除了朱砂中硫化汞的含量測定項中取本發明藥 物粉末3. Og外，結果每片含朱砂以硫化汞計，為9. llmg;每粒膠囊中含朱砂以 硫化汞計，應為9. 40mg;每丸中含有朱砂以硫化汞計，為9. "mg。 實施例9傷科接骨藥物的質量控制方法同實施例3中的內容，除了取本發明藥物粉末3. Og和海星對照藥材1. Og， 分別加入6ml熱水，蓋上保鮮膜，10(TC煮40min，放冷后4000rpm離心20分 鐘，取上清液各5m1;照電泳法(中國藥典2005版三部，附錄IVC)試驗， 按下述電泳條件進行sds-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應 的位置上顯相同的蛋白條帶；其中所述的電泳條件分離膠14.0%、濃縮膠 6%;恒電流30 mA,電壓200 V;電泳時間2小時；用考馬斯亮藍R250染 色6h，搖床脫色。實施例10傷科接骨藥物的質量控制方法同實施例3中的內容，海星的鑒別方法如下除了取本發明藥物粉末1.5g 和海星對照藥材O. 2g，分別加入6ml熱水，蓋上保鮮膜，10(TC煮20min,放 冷后4000 rpm離心20分鐘，取上清液各15m1;照電泳法(中國藥典2005版 三部，附錄IV C)試驗，按下述電泳條件進行sds-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應的位置上顯相同的蛋白條帶；其中所述的電泳條件 分離膠9.0°/。、濃縮膠4%;恒電流30mA,電壓200 V;電泳時間2小時； 用考馬斯亮藍R250染色3h,搖床脫色。實施例11傷科接骨藥物的質量控制方法同實施例5中的內容，冰片的鑒別方法如下取本發明藥物粉末4. Og，加三氯甲烷15ml，振搖，超聲處理30分鐘，濾 過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇制成每lml約含lmg 的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B) 試驗，吸取供試品溶液8jul，對照品溶液2jnl，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以20: 5的環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫 酸溶液，在IIO'C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的 位置上，顯相同顏色的斑點。 實施例12傷科接骨藥物的質量控制方法同實施例5中的內容，冰片的鑒別方法如下取本發明藥物粉末2.0g,加三氯甲烷15ml，振搖，超聲處理15分鐘，濾 過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇制成每lml約含lmg 的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005版一部，附錄VI B) 試驗，吸取供試品溶液4"1，對照品溶液2nl，分別點于同一硅膠G薄層板上， 以15: 2的環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫 酸溶液，在95'C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的 位置上，顯相同顏色的斑點。
權利要求
1. 一種傷科接骨藥物的質量控制方法，所述傷科接骨藥物是由紅花、土鱉蟲、朱砂、馬錢子粉、炙沒藥、三七、炙海星、炙雞骨、冰片、煅自然銅、炙乳香、甜瓜子十二味藥組成，其特征在于包括如下鑒別方法中的一種或幾種性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、電泳鑒別；對本發明藥物的一種或幾種成分進行含量測定，其方法包括氣相色譜、高效液相色譜及化學滴定。
2、 根據權利要求1所述的質量控制方法，所述藥物的制劑為膠囊劑、片劑和 丸劑。
3、 根據要求2所述的質量控制方法，所述性狀鑒別和顯微鑒別包括如下內容: 性狀鑒別所述傷科接骨藥物為片劑時，其片芯為灰褐色至棕褐色；味苦,腥；所述傷科接骨藥物為膠囊劑時，其內容物為淺褐色至褐色；味苦，腥；所 述傷科接骨藥物為丸劑時，丸芯為淺褐色至褐色；味苦，腥；顯微鑒別取本發明藥物，置顯微鏡下觀察花粉粒類圓形或橢圓形，直 徑43-66iam,外壁有齒狀突起，具有3個萌發孔；樹脂道碎片含棕黃色分泌物； 體壁碎片棕色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8-24ym，有的具長短不一的剛毛； 不規則細小顆粒暗紅棕色，有光澤，邊緣暗黑色；非腺毛單細胞，多碎斷，壁 極厚，木化，基部膨大似石細胞；不規則形碎片，無色，有光澤，完整者表面 有圓形窩孔，多數碎塊邊緣呈半圓環狀，有突起；或者，取本發明藥物，置顯微鏡下觀察樹脂道碎片含棕黃色分泌物；體 壁碎片棕色或棕紅色，有圓形毛窩，直徑8-24ym，有的具長短不一的剛毛；不 規則細小顆粒暗紅棕色，有光澤，邊緣暗黑色；非腺毛單細胞，多碎斷，壁極 厚，木化，基部膨大似石細胞；不規則形碎片，無色，有光澤，完整者表面有 圓形窩孔，多數碎塊邊緣呈半圓環狀，有突起。
4、 根據權利要求3所述的質量控制方法，其特征在于還包括對本發明藥物中三七、紅花、冰片和/或馬錢子粉的薄層色譜鑒別。
5、 根據權利要求4所述的質量控制方法，其特征在于薄層色譜鑒別包括如下內容其中對三七的鑒別是釆用三七對照藥材作為陽性對照； 和對紅花的鑒別是釆用紅花對照藥材作為陽性對照； 和對冰片的鑒別是釆用冰片對照品作為陽性對照； 和/或對馬錢子粉的鑒別是釆用士的寧和馬錢子堿對照品作為陽性對昭
6、 根據權利要求5所述的質量控制方法，其特征在于薄層色譜鑒別方法包括 如下步驟三七的鑒別取本發明藥物粉末1.5-3. 0g，加甲醇10ml,超聲處理10-30 分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材粉末lg，同法制成對照 藥材溶液；照中國藥典2005版一部附錄VIB中薄層色譜法試驗，吸取上述兩 種溶液各4-8y 1,分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上， 以4-6: 2-4: 1-2: l-2的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾 干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在95-ll(TC加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜 中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；紅花的鑒別取本發明藥物粉末3.0-5. Og,加80%丙酮溶液10ml,密塞， 超聲處理15分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取紅花對照藥材0.5g，同法 制成對照藥材溶液；照中國藥典2005版一部附錄VIB中薄層色譜法試驗，吸 取上述兩種溶液各10 ju 1 ，分別點于同 一 以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄 層板上，以7: 2: 3: 0.4的乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇為展開劑，展開，取出， 晾干；供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯相同顏色的斑點；冰片的鑒別取本發明藥物粉末2. 0-4. 0g,加三氯甲烷15ml，振搖，浸漬2 小時，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加三氯甲烷每lml約含 2mg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005版一部附錄VI B中薄層色譜 法試驗，吸取上述兩種溶液各3Ml，分別點于同一硅膠G薄層板上，以9: l的 苯-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105'C加 熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏 色的斑點；或者，取本發明藥物粉末2. 0-4. Og,加三氯甲烷15ml，振搖，超聲處理15-30 分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇制成每lml 約含lmg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005版一部附錄VI B中薄層 色譜法試驗，吸取供試品溶液4-8jal，對照品溶液2nl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以15-20: 2-5的環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干， 噴以5%香草醛硫酸溶液，在95-ll(TC加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；馬錢子粉的鑒別取本發明藥物粉末3. 0-5. Og,加9-ll: 1的三氯甲垸-乙 醇混合液15ml與濃氨水試液1.5ml，密塞，超聲處理10-30分鐘，濾過，濾液 作為供試品溶液；另取士的寧和馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每lml各含 2mg的混合溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005版一部附錄VI B中薄層 色譜法試驗，吸取上述供試品溶液10-20 pl、對照品溶液3-7pl，分別點于同 一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以3-5: 4-6: 0. 5-0. 7: 0. 3-0. 5 的甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試 液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
7、根據權利要求6所述的質量控制方法，其特征在于對三七、冰片和馬錢子粉的鑒別方法包括如下步驟三七的鑒別取本發明藥物粉末2. 0g,加甲醇10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取三七對照藥材粉末lg，同法制成對照藥材溶 液；照中國藥典2005版一部附錄VIB中薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液 各5)al，分別點于以同一羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以5: 3: 1: 1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛 硫酸溶液，在105。C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相 應的位置上，顯相同顏色的斑點；冰片的鑒別取本發明藥物粉末3. Og，加三氯甲烷15ml，振搖，超聲處理 20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取冰片對照品，加無水乙醇制成每lml 約含lmg的溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005版一部附錄VI B中薄層 色譜法試驗，吸取供試品溶液5m1，對照品溶液2Ml，分別點于同一硅膠g薄 層板上，以17: 3的環己烷-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5% 香草醛硫酸溶液，在105X:加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；馬錢子粉的鑒別取本發明藥物粉末4. Og,加10: 1的三氯甲烷-乙醇混合 液15ml與濃氨水試液1.5ml,密塞，超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品 溶液；另取士的寧和馬錢子堿對照品，加三氯甲烷制成每lml各含2mg的混合 溶液，作為對照品溶液；照中國藥典2005版一部附錄VI B中薄層色譜法試驗， 吸取上述供試品溶液15m1、對照品溶液5jal，分別點于同一以羧甲基纖維素 鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以4: 5: 0.6: 0. 4的甲苯-丙酮-乙醇-濃氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對 照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
8、 根據權利要求4所述的質量控制方法，還包括對海星進行電泳鑒別。
9、 根據權利要求8所述的質量控制方法，其特征在于對海星的電泳鑒別包括 如下步驟提取方法取本發明藥物粉末1.5-3.0 g和海星對照藥材0.2-1. 0g,分別 加入6ml熱水，蓋上保鮮膜，IO(TC煮20-40 min,放冷后4000 rpm離心20分 鐘，取上清液各5-15M1;照電泳法(中國藥典2005版三部，附錄IV C)試驗， 按下述電泳條件進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應 的位置上顯相同的蛋白條帶；其中所述的電泳條件分離膠9-14%;濃縮膠4-6%;恒電流30 mA; 電壓200 V;電泳時間2-3小時；用考馬斯亮藍R250染色3-5h,搖床脫色。
10、 根據權利要求9所述的質量控制方法，其特征在于對海星的電泳鑒別包 括如下步驟提取方法取本發明藥物粉末2. Og和海星對照藥材0. 5g,分別加入6 ml 熱水，蓋上保鮮膜，IO(TC煮30 min,放冷后4000 rpm離心20分鐘，取上清液 lOul;照電泳法(中國藥典2005版三部，附錄IV C)試驗，按下述電泳條件 進行SDS-聚丙酰胺凝膠電泳，即得；供試品與對照藥材在相應的位置上顯相同 的蛋白條帶；其中所述的電泳條件分離膠12.5%;濃縮膠5%;恒電流30 mA;電 壓200 V;電泳時間2小時；用考馬斯亮藍R250染色4h，搖床脫色。
11、 根據權利要求4和8所述的質量控制方法，其特征在于還包括如下馬錢 子粉和/或朱砂和/或冰片中主要成分的含量測定方法1)馬錢子粉中士的寧的含量測定色譜條件與系統適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以21: 79的乙腈-O. 01raol/L庚烷磺酸鈉與0. Q2mol/L磷酸二氫鉀等量混合溶液為流動相， 檢測波長為260nm，理論板數按士的寧峰計算應不低于5000;對照品溶液的制備精密稱取士的寧對照品10mg，置"ml量瓶中，加三氯 甲烷適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取lml,置25ml量瓶中，用甲醇 稀釋至刻度，搖勻，即得，每lml含士的寧16ng;供試品溶液的制備取本發明藥物粉末0.5-1. 5g，精密稱定，置具塞錐形 瓶中，加氫氧化鈉試液3ml，混勻，放置30分鐘，精密加三氯甲垸20ml，密塞， 稱定重量，置水洛中回流提取2小時，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減 失的重量，搖勻，分取三氯甲烷提取液，用鋪有少量硫酸鈉的濾紙濾過，棄去 初濾液，精密量取5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各lO]al，注入液相色譜 儀，測定，即得；2)朱砂中硫化汞的含量測定取本發明藥物粉末2. 0-3. 0g,精密稱定，置250ml燒瓶中，加硫酸20ml與 硝酸鉀2.5g,加熱使呈黃白色，放冷，加水50ml，滴加1%高錳酸鉀溶液至顯 粉紅色，超聲處理5分鐘，若粉紅色消失，繼續滴加高錳酸鉀溶液顯粉紅色至2 分鐘不消失，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失，加硫酸鐵銨指示液2ml，用 0. lraol/L硫氰酸銨滴定液滴定，即得；3)冰片的含量測定色譜條件與系統適用性試驗聚乙二醇(PEG) -20M毛細管柱(柱長30 m， 內徑0.32 ,，膜厚度0.5 jam),柱溫140 °C。理論板數按龍腦峰計算應不低 于8000;校正因子測定取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加乙醇制成每lml含O. 25mg的溶液，作為內標溶液；另取冰片對照品15 mg,精密稱定，置5G ml量瓶 中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取0.5 W，注入氣相色譜儀，測 定，計算校正因子；測定法取本發明藥物粉末0.5-2. 0g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入內標溶液10ml，混勻，密塞，稱定重量，超聲處理10-30分鐘，放至室溫， 再稱定重量，用內標溶液補足減失的重量，搖勻，離心10-30分鐘，吸取上清 液0. 5pl，注入氣相色譜儀，測定，以龍腦、異龍腦峰面積之和計算，即得。 12、 根據權利要求11所述的質量控制方法，其特征在于每單位制劑含馬錢子 粉以士的寧(C21H22N202 )計，應為0. 10-0, 20mg，含朱砂以硫化汞(HgS )計，應 為7. 00-12. 00 mg;含冰片(C10H18O )應不少于0. 60 mg。
全文摘要
本發明公開了一種傷科接骨藥物的質量控制方法。該方法用薄層色譜法對三七、冰片、紅花、馬錢子粉進行定性鑒別，用電泳法對海星進行定性鑒別，并分別用高效液相色譜法和氣相色譜法對士的寧和冰片進行定量檢測，用化學滴定法對硫化汞進行定量檢測，擴大了該傷科接骨藥物的質量控制范圍。本發明質量控制方法簡單易行，具有較強的專屬性，定量檢測方法精密度高、重現性好，確保了該復方藥物質量的“均一、穩定、有效、可控”。
文檔編號A61K33/26GK101278976SQ200810097488
公開日2008年10月8日 申請日期2008年5月30日 優先權日2008年5月30日
發明者周文波, 偉 姜, 張成海, 李延成, 李曉艷, 羅國良, 心 陳 申請人:大連美羅中藥廠有限公司