專利名稱：一種透明質酸-幾丁糖生物膜的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種透明質酸-幾丁糖生物膜的制備方法。
背景技術：
透明質酸(Hyaluronic Acid，簡稱HA)凝膠廣泛應用于眼科、骨科、婦外科、整 形外科等領域，其在臨床已有十多年的歷史，其的安全性及有效性得到了醫學各界的普 遍認可。天然的外源性的透明質酸分子量大約在10萬 500萬Dalton，在體內的存留時 間大約在3~15天左右，很大程度上限制了其在某些領域的應用。
幾丁聚糖是生物界僅次于纖維素的第二大類多糖，國內外研究已經證實幾丁聚糖j: 有生物粘附性和多種生物活性，包括幾丁聚糖能夠促進上皮細胞的生長，抑制成纖維細 胞的增殖，抑制腫瘤細胞的增殖，抑制細菌等微生物的生長，促進組織創面的修復等多 種作用。
青光眼是我國首位的不可逆性致盲眼病，手術仍是我國抗青光眼質量的首選策略。 但是，山于生物故有的創傷愈合機制，青光眼術后濾過通道的瘢痕化是青光眼手術治療 成功的最大障礙。近幾年來針對原發性開角型青光眼所設計的新的手術——非穿透小梁 切除術聯合SK膠植入在臨床上得到了廣泛的應用，其中SK膠的植入起到了機械支撐濾 過通道的作用，SK膠成分為交聯透明質酸鈉，在濾過手術后的早期，維持了濾過通道， 由于房水的持續流動，在一定程度上也延緩和抑制了成纖維細胞的生長，提高了手術成 功率。
交聯透明質酸凝膠是透明質酸與交聯劑的交聯產物，具有良好的生物相容性及良好 的生物可降解性，根據交聯透明質酸凝膠的上述性質，將其應用于防粘連、骨關節潤滑、藥物緩釋制劑及組織填充劑等領域。
發明內容
本發明的目的是提供一種透明質酸一幾丁糖生物膜的制備方法，以克服現有技術存在的上述缺陷。
本發明的方法包括如下歩驟
(1) 取純化好的無菌無熱原的透明質酸、羧甲基殼聚糖、聚乙烯醇，三者質量比為7-8: 1-2: 1-2,溶于水中；
(2) 按計算好的量加入交聯劑丁二醇二縮水甘油醚溶液，攪拌均勻。
(3) 流涎法制膜。
(4) 真空干燥器中干燥。
(5) 膜干后，無菌刀片切成小塊。
(6) 無菌包裝，用時放在pH7.4的PBS緩沖液中浸泡。所說的透明質酸的分子量為100萬 300萬道爾頓；透明質酸溶液中，交聯劑的濃度為0.0002 0.02g/mL;
所說的交聯劑選自用具有2個以上官能團的化合物，其官能團可以與透明質酸分子所具有的羧基、羥基、乙酰氨基等反應性官能團反應并形成共價鍵的官能團；
優選的，所說的交聯劑為環氧化物、酸、二縮水甘油醚或二乙烯砜等中的一種以上，考慮到交聯劑對人體的副作用并結合LD50指標，最優選毒性較小的1， 4-丁二醇二縮水甘油醚(BDDE)。
本發明中，交聯劑的使用量沒有特別限制，但考慮到交聯透明質酸凝膠的生物體適應性，優先選用盡可能少量的交聯劑進行交聯反應，交聯劑在混合物中的濃度優選為0.0002~0.02g/mL;
所說的透明質酸是由N-乙酰氨基葡糖-D-葡萄糖醛酸為雙糖單位組成的直鏈高分子多糖，包括透明質酸鈉、透明質酸鎂或透明質酸鈣等；
本發明中，透明質酸原料選用細菌發酵法生產或組織提取的均可，為降低抗原性，優先選用細菌發酵法原料，采用如透明質酸及其發酵生產概述(郭學平等)的方法；
本發明利用透明質酸和幾丁糖的生物特性，合成透明質酸-幾丁糖生物膜，該生物膜既具有國外產品SK膠在濾過手術通道的機械支撐作用，同時又具有抑制成纖維細胞增殖的作用，并且原材料價格低廉，產品成本大大低于國外進口產品，將會有利于青光眼濾過手術成功率的提高和非穿透小梁手術的廣泛推廣開展，并且會降低患者的醫療費用。
具體實施例方式
以下給出本發明的實施例，進一歩對本發明進行詳細說明，但本發明并不限于此。
實施例1
取純化好的無菌無熱原的透明質酸2g、羧甲基殼聚糖0.25g、聚乙烯醇0.25g，溶于水中；
加入交聯劑丁二醇二縮水甘油醚1。/o溶液6.5ml，加水至100ml，攪拌均勻。
流涎法制膜。
真空干燥器中干燥。
膜干后，無菌刀片切成小塊。
無菌包裝，用時放在pH7.4的PBS緩沖液中浸泡。
實施例2
取純化好的無菌無熱原的透明質酸1.5g、羧甲基殼聚糖0.15g、聚乙烯醇0.15g，溶于水中；
加入交聯劑丁二醇二縮水甘油醚P/。溶液5ml，加水至100ml，攪拌均勻。流涎法制膜。
真空干燥器中干燥。
膜干后，無菌刀片切成小塊。
無菌包裝，用時放在pH7.4的PBS緩沖液中浸泡。
實施例3實施例2
取純化好的無菌無熱原的透明質酸2g、羧甲基殼聚糖0.15g、聚乙烯醇0.15g，溶于水中；
加入交聯劑丁二醇二縮水甘油醚in/o溶液5ml，加水至100ml，攪拌均勻。流涎法制膜。真空干燥器中干燥。膜干后，無菌刀片切成小塊。無菌包裝，用時放在pH7.4的PBS緩沖液中浸泡。
權利要求
1.一種透明質酸-幾丁糖生物膜的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)取純化好的無菌無熱原的透明質酸、羧甲基殼聚糖、聚乙烯醇，三者質量比為8∶1∶1，溶于水中；(2)按計算好的量加入交聯劑丁二醇二縮水甘油醚溶液，攪拌均勻。(3)流涎法制膜。(4)真空干燥器中干燥。(5)膜干后，無菌刀片切成小塊。(6)無菌包裝，用時放在pH7.4的PBS緩沖液中浸泡。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的透明質酸的分子量為150萬 300萬道爾頓。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，透明質酸溶液中，交聯劑的濃度為 0扁2 0.02g/mL。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所說的交聯劑為l， 4-丁二醇二縮水 甘油醚。
5. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于，交聯劑在混合物中的濃度為 0.0002 0.02g/mL。
6. 根據權利要求1 6任一項所述的方法，其特征在于，選用細菌發酵法生產的透 明質酸或組織提取的透明質酸。
7. 根據權利要求1 6任一項所述的方法，其特征在于，透明質酸為透明質酸鈉、 透明質酸鎂或透明質酸鈣。
8. 根據權利要求1 8任一項所述方法制備的交聯透明質酸凝膠。
全文摘要
本發明提供了一種透明質酸-幾丁糖生物膜制備方法，該生物膜含有透明質酸和羧甲基殼聚糖，是將透明質酸、羧甲基殼聚糖和聚乙烯醇經交聯劑發生交聯反應而制備的。本發明具有良好的生物相容性及較長的半衰期，將會有利于青光眼濾過手術成功率的提高和非穿透小梁手術的廣泛推廣開展。
文檔編號A61L31/14GK101676000SQ20081020014
公開日2010年3月24日 申請日期2008年9月19日 優先權日2008年9月19日
發明者玲 丁, 任彩霞, 孔淑靜 申請人:上海建華精細生物制品有限公司