專利名稱：：透明質酸結合物在局部治療過度增殖皮膚病中的應用的制作方法
技術領域：
：光化性角化病(AK)或日光性角化病是一種實質上由長期暴露于太陽輻射下、特別是暴露于紫外線照射下所引起的疾病。其癥狀是大部分地位于主要暴露于太陽下的區域中的皮膚損害；幾乎所有的皮膚損害包括具規模的斑塊，其具有干燥的和不規則的鱗狀表面。該基底可以是亮或暗的，棕紅色，粉色，紅色，但它也可能與皮膚具有相同的顏色；在后一種情況中，由于所形成的鱗狀表面是干燥的和粗糙的，該損害通過觸摸來識別。皮膚損害有存在較厚的發育不良性角化細胞群的角化過度類型或角化不全類型。光化性角化病被認為是更嚴重的和侵襲性的、甚至是轉移性的疾病的前驅期；實際上，在AK和鱗狀細胞癌(亦稱棘細胞惡性腫瘤)之間具有流行病學相關性。然而，AK被定義為是癌前病理，每一次必須相對于惡性變性的風險仔細評價其根除。AK的治療手段基本上包括除去角化過度區域，并且可通過外科手術/磨削方式(冷凍療法、化學去皮、刮除術、磨皮術、激光)或藥理學方法來實現。在現有技術中，被最廣泛使用的藥理學方案涵蓋了以下的應用·維甲酸類，局部和系統給藥，然而特征是有關的和嚴重的副作用，因此其給藥必須進行仔細評價；·局部免疫調節劑，諸如咪喹莫特(Al-dara)，其存在顯著的局部副作用(發癢，發紅，刺激)；·甲基氨基乙酰丙酸的衍生物，其可進行光動力學治療。這些衍生物適用于面部或頭皮的具有輕微厚度或非角化過度的、無色素的角化病，因此具有相對有限的應用范圍；·基于雙氯芬酸的抗炎藥(So-laraze)，適用于嚴重性較低的場合；局部5-氟尿嘧啶(Efudex軟膏劑)；如同維甲酸類和免疫調節劑的情況，在局部作用(發紅，發癢，形成水泡，脫屑，接觸性皮炎)和系統作用兩方面，副作用都相當嚴重。5-氟尿嘧啶實際上被不斷地吸收，尤其可引起精子改變和白細胞增多。因此其應用限于高風險場合。因此，強烈地需要局部的藥理學治療，其有效對抗各種形式的光化性角化病，并且具有低毒性，其容易給藥并且具有有限的局部副作用和/或系統副作用。因此，本發明的目的是尋找克服上述缺陷的藥物組合物，所述缺陷存在于本領域被描述和使用的、用于局部藥理學治療各種形式的光化性角化病、更一般是其它類型的過度增殖皮膚病的藥物組合物中。本發明由于基于透明質酸(或其衍生物)和抗腫瘤藥物的結合物而滿足了這一需要。本申請人實際上令人驚訝地發現了這些藥物組合物的應用具有以下特征在局部治療所述的癌前病理即光化性角化病中，以及在治療其它類型的過度增殖皮膚病諸如銀屑病中，或在治療原位腫瘤形式諸如鱗狀細胞惡性腫瘤中，具有高的有效性、安全性和低毒性。因此本發明的一個目的涉及透明質酸或其衍生物與抗腫瘤藥物的結合物在制備用于局部治療過度增殖皮膚病、優選用于局部治療光化性角化病、銀屑病或治療原位腫瘤形式諸如鱗狀細胞惡性腫瘤、甚至更優選用于局部治療光化性角化病的藥物組合物中的應用。該藥物組合物優選基于透明質酸或其衍生物與抗腫瘤藥物的結合物，所述抗腫瘤藥物選自紫杉醇或5-氟尿嘧啶，更優選抗腫瘤藥物是紫杉醇。甚至更優選地，HA-紫杉醇結合物相當于具有20%w/w的取代度的HA/紫杉醇結合酯。HA-5-氟尿嘧啶結合物優選相當于具有15%w/w的取代度的結合酯。透明質酸或其衍生物與紫杉醇的結合物是現有技術已知的(專利申請EP1560854)并且已被證明在為數眾多的腫瘤形式的系統治療中是有效的。HA-5-氟尿嘧啶結合物在W02007/14784中有述，在本文中引用該文獻分別用于與所述化合物的化學合成及其特征有關的特征。如現有技術中所述，5-氟尿嘧啶在光化性角化病中的應用極大地受到顯著的副作用的限制。與HA結合使得所述活性成分在局部給藥后的毒性小得多，因為這使得所述活性成分的持久性僅保持在待治療的損害處，避免了其系統積聚。根據本發明使用的藥物組合物的基本優點是它們留在施用部位并逐漸釋放，沒有系統吸收。根據本發明使用的藥物組合物的另一個優點是所用活性成分的嚴重副作用被大幅度降低。它們還使得在所述病理的治療中常常出現的刺激和脫屑作用最小化。發明詳述本發明描述并要求保護透明質酸或其衍生物與對細胞增殖有活性的抗腫瘤藥物的結合物在制備用于局部治療過度增殖皮膚病、特別是光化性角化病的藥物組合物中的應用，所述抗腫瘤藥物優選是紫杉醇或5-氟尿嘧啶，甚至更優選是紫杉醇。正如已經提及的，HA-紫杉醇結合物是現有技術已知的；它們的制備和在各種類型的瘤形成中的系統應用在EP1560854中有述，涉及該結合物的合成的每一方面，該文獻的內容構成了本發明的不可分割的一部分。HA-紫杉醇結合物是從透明質酸或其衍生物與紫杉醇的結合即產生酯或酰胺類型的化學鍵而獲得的分子。當HA和藥物彼此之間連接時該化學鍵是直接的，或者當該化學鍵借助于充當分子橋的“間隔基”存在時該化學鍵是間接的。通常使用具有各種長度的脂肪鏈作為間隔基，其尤其可以是溴代丁酸鏈或溴代丙酸鏈。所述結合改進了紫杉醇的藥代動力學性質，使得紫杉醇更加穩定和可溶于水；使用水性媒介物進行操作的可能性使得在各種制劑中所采用的油性增溶劑諸如Cremofor變得無效，并且這大幅度降低了與這些物質的毒性有關的不希望的副作用的形成。就HA-5-氟尿嘧啶而言，其制備和特征在W02007/14784中有述；并且，在該情況下，藥理學活性成分和HA借助于間隔基(所述間隔基可以是溴代丁酸或溴代丙酸)，通過形成酯或酰胺鍵發生結合。從而獲得的HA-5-氟尿嘧啶結合物是相對于活性成分本身而言具有更好的水溶性特征和抗降解性的分子，因為所述活性成分被與其結合的透明質酸“保護”起來。獲得具有的流變性質在彼此之間是廣泛不同的藥物組合物的可能性是用于本文所述應用的基本重要性這取決于HA的固有特征，該分子在與藥物活性成分結合之前可以通過各種化學反應進行很大改性。現有技術中已知的化學改性尤其是如下描述的那些化學改性在EP1，560，854等中描述的那些，更特別是與有機堿和/或無機堿的成鹽作用(EP0138572B1)，與脂族、芳脂族、環脂族、芳族、環狀和雜環系列的醇的Mi(Hyaff，EP216453B1)，與脂族、芳脂族、環脂族、芳族、環狀和雜環狀系列的胺的酰Ml(HYADD.,EP1095064B1),0-硫酸化(EP0702699B1),內酯化(ACP@,EP0341745B1),脫乙酰基化，過氧羧酸化(HyOXX，EP1313772B1)。通過這些反應獲得的衍生物保持了起始多糖的生物學特性，但是具有更好的機械性質它們還可容易地被配制成水凝膠、霜劑、軟膏劑、膜劑、硬膏劑、非織造布等等的形式，并因此可允許生產各種各樣的局部藥物形式，完全適于每個個體的治療要求。就用于本發明目的的透明質酸的特征而言，應當參見在EP1560854和W02007/14784中的描述。簡而言之，可用于本發明的透明質酸可來自任何來源，例如從公雞雞冠中提取(EP0138572)或通過發酵獲得(EP0716688)，并且具有400到3，000，OOODa、特別是50，000到1,000,OOODa的分子量。可用于制備本發明的結合物目標的透明質酸的衍生物如下1)與有機堿和/或無機堿形成的鹽，其也具有生物活性(EP138572B1)；2)HYAFF:透明質酸與脂族、芳脂族、環脂族、芳族、環狀和雜環系列的醇以一定的酯化百分數形成的酯，所述酯化百分數根據所用的醇的類型和醇的長度的不同而異(EP216453B1)；3)HYADD:透明質酸與脂族、芳脂族、環脂族、芳族、環狀和雜環系列的胺形成的酰胺(EP1095064B1)；4)透明質酸(AP0971961A1)的O-硫酸化衍生物(EP0702699B1)；5)ACP:透明質酸的內酯，具有的酯化百分數不高于20%(EP0341745B1)；6)HA的脫乙酰化物N-乙酰基-葡糖胺級分以優選0.1到30%的脫乙酰百分數進行脫乙酰化(EP1313772B1)；7)以0.1到100%的過羧酸化程度將N-乙酰基-葡糖胺級分的伯羥基進行氧化獲得的HA的過羧酸化物(ΗΥ0ΧΧ，EP1339753A1)。特別地，HA-紫杉醇結合物優選借助于在紫杉醇與HA的酯之間的共價鍵被獲得，其可從未經化學改性的HA分子開始并且只有在與活性成分合成結合物之后才實現HA的可能改性而被獲得。在HA-紫杉醇結合物的情況下，共價鍵可以是直接的或者還可借助于間隔基。特別地，用于生產其中活性成分紫杉醇與HA或其衍生物共價結合的HA-紫杉醇結合物的方法可以是采用在紫杉醇和HA或其衍生物之間引入間隔基的間接合成方法；或在紫杉醇和HA或其衍生物之間的直接合成方法。用于合成HA-紫杉醇結合物的可能的直接或間接反應路線已經在文獻W02004/035629中被詳細描述，并且該文獻被認為是本專利申請的不可分割的一部分。HA-紫杉醇結合物的合成借助于以下的路線1中所述方法進行僅用于說明性目的的描述<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>如前所述，優選使用的HA-紫杉醇結合物相當于具有20%w/w的取代度的HA/紫杉醇結合物的酯。在下面還提供了涉及HA-紫杉醇結合物的合成的路線2(20%的HA與紫杉醇通過溴代丁酸間隔基成酯)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>路線2另一方面，HA-5-氟尿嘧啶結合物通過在HA或其衍生物與活性成分之間借助于間隔基形成間接的共價鍵被獲得，所述間隔基與HA或其衍生物的羧基形成了酯或酰胺鍵。優選的間隔基是溴代丁酸或溴代丙酸。特別地，HA-5-氟尿嘧啶結合物根據以下過程由在HA或其衍生物與5_氟尿嘧啶之間借助于間隔基通過形成酯鍵形成間接的化學鍵而獲得間隔基的合適的官能團(該間隔基還包含能夠與HA的羧基官能團起反應的第二基團)與活性成分的官能團起反應。該反應可能要求活化。在隨后階段，通過在無水環境中在HA的四烷基銨鹽之間直接接觸，含有被改性的活性成分的化合物起反應，導致在HA的羧基處發生離去基團(outgoinggroup)的親核取代，在HA和間隔基之間形成酯鍵。作為替代，有可能首先使HA的羧基與間隔基反應(親核取代)，然后使間隔基與抗腫瘤活性成分的官能團結合。用于通過形成酰胺鍵形成結合物的其它方法是本領域技術人員公知的并且在W02007/014784中有詳細描述。如前所述，通過這些反應獲得的衍生物保持了起始多糖的生物學特性，但是它們具有更好的機械性質它們還可容易地被配制成水凝膠、霜劑、軟膏、膜劑、硬膏劑、非織造布等等的形式，并因此可允許生產各種各樣的局部藥物形式，其可以完全適于每個單一的治療要求。因此，特別地，根據本發明使用的局部藥物組合物被配制成含有所述結合物的霜齊U、水凝膠、軟膏劑的形式或藥用硬膏劑或膜劑的形式。這些制劑涵蓋了相對于組合物的總重量為0.05到10重量％、優選0.2到5重量％的量的、HA或其衍生物與抗腫瘤藥物或活性成分的結合物。將本發明的組合物補足到100的其余組分包括典型地用于局部制劑的藥理學可接受的添加劑和水。本發明的藥物組合物的局部制劑的實例在下表中進行表示，其僅用于說明性目的(所示的百分數是重量％)。表1霜劑La<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>1.c<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2.水凝膠制劑2.a<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.b<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.c<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表4·水凝膠制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表5.軟膏劑5.a<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>5.b<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>5.c<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>下面的體外試驗和在誘導光化性角化病的小鼠上進行的體內試驗證明了，與HA或其衍生物結合的抗腫瘤藥物或活性成分是有效的，其留在施用部位并逐漸釋放，統吸收。以這種方式，所使用的發揮抗增殖作用的活性成分的嚴重的副作用被大幅度降低；另外，由于HA的再生、生疤和潤濕性質，在所述病理的治療中常常出現的刺激和脫屑作用被最小化。現在特定參考附圖，根據本發明的優選的實施方案來非限制性地、示例性地描述本發明，在附圖中圖1顯示了在永生化系角化細胞(NCTC-2544)上進行的MTT試驗的結果的圖表，其證明了角化細胞響應不同濃度的結合物(5ng/ml，50ng/ml和500ng/ml)的增殖活性；圖2顯示了在健康的原代角化細胞上進行的MTT試驗的結果的圖表，其證明了角化細胞響應不同濃度的結合物(5ng/ml，50ng/ml和500ng/ml)的增殖活性；圖3顯示了在照射8-9周后損害的組織學檢查；圖4顯示了在照射8-9周后損害的組織學檢查的上部放大圖；圖5顯示了在施用基于本發明結合物的制劑后損害皮膚的組織學檢查，可以觀察到存在嗜酸性細胞多形核(以紅色可見，并用箭頭表示)，其是正在進行中的、皮膚修繕階段之前的炎性過程的指標。實施例1評價具有20%w/w的取代度的HA/紫杉醇結合酯對NCTC-2544角化細胞的永生化細胞系和原代人角化細胞的抗增殖活性。為了檢驗HA/紫杉醇結合物的抗增殖活性，進行了多種適于評價NCTC-2544角化細胞的永生化細胞系和原代人角化細胞的增殖活性的體外實驗。實驗設計特別地，進行試驗旨在鑒定健康的原代角化細胞和永生化細胞系NCTC-2544的角化細胞具有以下表現時的HA/紫杉醇結合物的濃度·死亡；·減緩它們的增殖活性；·存活。首先確定了最佳的細胞接種條件以確保在培養第5天時已實現細胞鋪滿。然后將細胞在先前已被溶解在培養基中的不同濃度的HA/紫杉醇結合物的條件下進行單層培養。在預定時間即第1、3和5天，通過溴脫氧尿苷引入試驗和MTT試驗來評價處理后的細胞增殖。材料和方法材料HA/紫杉醇結合物具有20%w/w取代度的HA/紫杉醇結合酯。細胞系-NCTC-2544角化細胞的永生化細胞系-原代人角化細胞方法從人皮膚活組織分離健康的角化細胞在含抗生素的PBS中進行多次洗滌后，從皮膚活組織清除掉脂肪皮下組織并將其切成小條。將這些小條用中性蛋白酶消解30分鐘。在處理結束時將皮膚與下層真皮分離并用永胰蛋白酶消解10分鐘。NCTC-2544培養細胞在補充有胎牛血清20%；P/S(青霉素/鏈霉素)1%；谷氨酰胺1%的DMEM培養基(Dulbecco改進的Eagle培養基)中進行體外培養。溴脫氧尿苷引入試驗(BRDU)在引入溴脫氧尿苷(BrdU，胸腺嘧啶的類似物)之后，將細胞用抗BrdU抗體進行標記并隨后使用板進行分析。用BrdU的標記用作細胞增殖指數。MTT試驗將細胞與MTT(3-(4，5_二甲基噻唑_2_基)_2，5_二苯基四唑)0.5mg/ml的溶液溫育3小時。在溫育結束時，使用提取溶液(90%異丙醇，10%DMS0)從細胞提取出MTT染料。在540nm/660nm進行染料讀數。細胞接種試驗將所述細胞系細胞(NCTC)和健康的角化細胞在24孔板上在三個不同濃度下進行鋪板3，000-6,000-12,000個細胞/孔。然后通過顯微鏡分析來評價細胞MwοHA/紫杉醇結合物的溶液的制備將HA/紫杉醇結合物以5重量％溶解在葡萄糖溶液中。然后通過用Cellulose-AcetateCod制成的過濾器將HA/紫杉醇結合物的溶液進行過濾。Albet具有25毫米的直徑和0.20微米的截斷值。5重量％的葡萄糖溶液的制備稱重5克的無水葡萄糖并將其溶解在100毫升的蒸餾水中。使用0.22微孔過濾器將溶液進行滅菌。使用HA/紫杉醇結合物進行的處理在不同濃度的HA/紫杉醇結合物下進行了6個系列的實驗a)1Omg/ml；6mg/ml,2mg/ml,b)2mg/ml；lmg/ml,0.5mg/ml,c)0.125mg/ml；0.050mg/ml，0.025mg/ml，d)0.025mg/ml；0.0125mg/ml和0.005mg/ml，e)0.OOlmg/ml和0.0005mg/ml，f)500ng/ml，50ng/ml和5ng/ml3。結果如材料和方法一節中所述的，將細胞以三個不同的濃度接種在24孔板中3，000-6，000-12，000個細胞/孔。然后通過顯微鏡分析來評價細胞鋪滿。在這一評價后，確認了初始接種濃度等于6，000個細胞/孔，使得在接種后第5天可實現鋪滿。HA/紫杉醇結合物的活件第1系列的所選濃度-1Omg/ml，6mg/ml和2mg/ml；第2系列的所選濃度-2mg/ml，lmg/ml和0.5mg/ml。在上面的濃度下，在施用藥物后24小時，在顯微鏡下觀察孔時，證明細胞在所有的處理濃度下死亡。在任何情況下，使用作為陽性對照的用0.4%的SDS(十二烷基硫酸鈉)溶液處理的細胞進行細胞增殖試驗。這一分析的結果證實了對于所有被處理的樣品，細胞死亡。第3系列的所選濃度-0.125ml/ml，0.050mg/ml和0.025mg/ml；第4系列的所選濃度-0.025mg/ml,0.0125mg/ml和0.005mg/ml；第5系列的所選濃度-0.00lmg/ml和0.0005mg/ml。在所有的這些試驗中，在細胞接種后在上午10.00點施用HA-抗腫瘤結合物；在15.00點，即5小時后，在施用BrdU用于引入到細胞部分上的時刻，這些細胞已經看起來變圓；即使仍粘著于基底，盡管如此，進行已決定的試驗。通過引入BrdU來評價細胞增殖的試驗提供了在所有的供試濃度下可與陽性對照孔(與死亡細胞)相比的值，因此，在HA/紫杉醇結合物存在下，發現無細胞增殖活性。使用MTT試驗獲得了相同的結果。第6系列的所選濃度-500ng/ml，50ng/ml和5ng/ml。從圖1和圖2所示的圖表可以觀察到，這些濃度影響所述系的角化細胞和健康的原代角化細胞二者的增殖活性。特別地，500ng/ml的濃度導致細胞增殖發生大規模的經時下降。關于增殖的值實際上從第1天到第5天大幅度減少。50ng/ml的濃度引起細胞增殖的減緩，特別是從第5天開始。這一事件在所述系的角化細胞中是明顯的，而在原代角化細胞中，從處理第3天開始已觀察到細胞增殖有所下降。5ng/ml的濃度在所述系的角化細胞(NCTC-2544)中似乎不引起任何明顯的對增殖活性的影響細胞存活并保持其增殖活性直到第5天為止，而在健康的原代角化細胞的情況中，觀察到從第3天開始細胞增殖有所下降。Mrk根據上述結果，可以得出結論高于500ng/ml的濃度對于細胞具有高毒性，因為它們在施用24小時內引起細胞死亡；低于5ng/ml的濃度不對所述系細胞造成任何抗增殖影響，而比5ng/nl低得多的濃度不對健康角化細胞造成任何抗增殖影響。還進行了與實施例1類似的試驗，用來評價具有15%w/w的取代度的HA/5-氟尿嘧啶結合物酯對NCTC-2544角化細胞的永生化細胞系和原代人角化細胞的抗增殖活性。這些初步試驗給出的結果證實了可與HA/紫杉醇結合物的結果相比的趨勢。實施例2評價HA/紫杉醇結合物在光化性角化病體內模型中的活性。為了評價HA/紫杉醇生物結合物在治療過度增殖皮膚學病理、更特別是在治療光化性角化病中的活性，準備了光化性角化病(AK)模型，該模型在SHK-Rl'無毛小鼠中，在相對短的時段內不可避免地變性形成鱗狀細胞癌(SCC)，在文獻中被認為適于這類實驗(DeGruijlFR和ForbesPD.BioEssays1995；17651-60；KligmanLH和KligmanAM.·JNCI1981；671289-97)0如已具體說明的，實際上，光化性角化病被認為是癌癥前期形式，變性形成鱗狀細胞癌(亦稱棘細胞惡性腫瘤)。材料和方法實驗規程使用20只6-7周齡的SHK-Rl‘小鼠，分成四組，每組五只-A組對照。-B組用根據制劑1.a制備的HA/紫杉醇結合物霜劑處理的動物-C組用Efudex軟膏劑(5-氟尿嘧啶)處理的動物-D組用Connettivina霜齊[j(haο.2%)處理的動物。后一組使得能夠評價供試制劑的積極效果是否完全由透明質酸的存在所導致，透明質酸的痊愈性質是公知的。由于紫杉醇的過度刺激作用，完全不適用于局部給藥形式，不可能局部使用單獨的該活性成分，因為必需將其在Cremofor中增溶(BeriR，RosenFR,PaciniMj,DesaiSR.Severedermatologicreactionsatmultiplesitesafterpaclitaxeladministration.Ann.Pharmacother2004；38,238-41；BaycalC,ErkelΕ,TutarE,YuceK,AyhanΑ.Cutaneousfixeddrugeruptiontopaclitaxel；acasereport.Eur.J.Gynaecol.Oncol.2000；21，190-1)。所有的動物在其背部區域，用帶有距離小鼠30厘米處的寬帶的UVB照射源JelolampFS40-(JelosilSkinUVS311nmJelosilsrl，Vimodrone-Italy)，每周照射三次，歷時30分鐘。通過計算每只小鼠距離照射源的距離，該距離當小鼠位于輻照源下的不同位置時是可變的，計算的照射等于540-1080mJ/cm2。在約2周后，小鼠在其背部具有明顯的皮膚紅斑跡象。在所有的動物中，在8-9周后，損害發展到其背部和頭，其臨床表現為過度角化斑塊(尺寸為2.5cmxlcm)，具有不規則的、幾乎是疣壯的表面。揭示了這些損害的組織學檢查(圖3和圖4)·表皮增生，罹患顆粒層增厚、棘皮癥和表皮角化病。·不存在細胞學非典型性和皮膚侵襲跡象。·存在大型孢囊，含有大量的角蛋白性物質，有時外傾到表皮外。在15-16周后，在小鼠的背部和頭部可見丘疹狀、杯形損害，具有半透明外觀和1-2毫米的尺寸。在uvb照射15-18周后，所有的動物都在皮膚表面上發展成過度角化斑塊，這可被歸屬于正被討論的病理表現形式此時，b、c和d組用如上所述的制劑進行處理。將所述制劑施用于損害皮膚上，歷時14個連續日。在處理期間，在用Efudex軟膏劑處理的組c中的所有動物，在第10-13天之間發生死亡，進一步證實了大規模系統吸收的5-fu的高毒性；相比之下，在其它組中沒有一只動物顯示任何對制劑有不耐受跡象，并且沒有自發性死亡。用ha/紫杉醇結合物進行處理，在動物中未引起任何可見的皮膚反應，不象用單獨的紫杉醇處理時所發生的那樣。從組織學觀點來開，在上述制劑中觀察到存在為數眾多的嗜酸性細胞多形核，顯示了正在進行中的、皮膚修繕期之前的炎性過程(圖5)。另一方面，在用Connettivina霜劑處理的動物組和非治療組中，都觀察到皮膚損害的進展。mm從在取自上述處理組的活體上進行的組織學分析，可以得出以下的結論-相對于非治療參考組而言，connettivina霜劑在減緩see中的ak變性方面沒有優越性；-相對于connettivina霜劑和非治療參考組而言，ha/紫杉醇結合物在顯著減緩所述變性方面顯示明顯的優越性。嗜酸性細胞多形核的存在作為肉芽組織形成階段、上皮再形成和重塑的前兆并是它們不可分割的一部分，對于ak的過度角化斑塊的痊愈是必不可少的。因此，可以斷言-用含ha/紫杉醇結合物1%的霜劑媒介物進行處理，在所選的動物模型中顯著減緩過度角化斑塊向scc的變性；-另外，用含ha/紫杉醇結合物的霜劑媒介物進行處理，誘導嗜酸性細胞多形核的存在，該嗜酸性細胞多形核是罹患斑塊的皮膚組織的肉芽形成、上皮再形成和重塑所必不可少的；-所提供的制劑在局部施用后不產生任何皮膚刺激問題；-因為沒有動物死亡或顯示患病跡象，可以得出結論，即紫杉醇基本上逐漸(inloco)釋放，并且不經歷顯著的系統吸收。結論總之，本文所述的含ha/紫杉醇結合物的霜劑媒介物被證明在治療ak中是有效的，因為其修復過度角化損害并同時顯著減緩病理朝著其瘤形成形式的變性。權利要求透明質酸或其衍生物與抗腫瘤藥物的結合物在制備用于局部治療過度增殖皮膚病的藥物組合物中的應用。2.權利要求1的應用，特征在于抗腫瘤藥物選自紫杉醇或5-氟尿嘧啶。3.權利要求1的應用，特征在于抗腫瘤藥物是紫杉醇。4.權利要求1的應用，用于治療光化性角化病、銀屑病或原位腫瘤形式諸如鱗狀細胞癌。5.權利要求1的應用，用于治療光化性角化病。6.權利要求1的應用，特征在于所述藥物組合物為含有所述結合物的霜劑、水凝膠、軟膏劑的形式或藥用硬膏劑或膜劑的形式。7.權利要求1的應用，特征在于HA或其衍生物與抗腫瘤藥物的所述結合物相對于所述組合物的總重量為0.05到10重量％。8.權利要求1的應用，特征在于HA或其衍生物與抗腫瘤藥物的所述結合物相對于所述組合物的總重量為0.2到5重量％。9.權利要求1的應用，其中HA-紫杉醇結合物相當于具有20%w/w的取代度的結合酯。10.權利要求1的應用，其中HA-5-氟尿嘧啶結合物相當于具有15%w/w的取代度的結合酯。全文摘要本發明描述了透明質酸或其衍生物與抗腫瘤藥物的結合物在制備用于局部治療過度增殖皮膚病的藥物組合物中的應用。文檔編號A61K47/48GK101835495SQ200880101357公開日2010年9月15日申請日期2008年6月19日優先權日2007年6月22日發明者D·熱尼爾,S·潘菲羅申請人:費迪亞醫藥股份公司