專利名稱：：一類萘內酰胺衍生物及其在腫瘤細胞增殖抑制上的應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一類萘內酰胺衍生物及其在腫瘤細胞增殖抑制上的應用，屬于藥物化學
技術領域：
。技術背景萘內酰胺以其特殊的內酰胺結構具有特別的生物活性，一直吸引生物有機化學家們的興趣和關注。Man'aL.Lo'pez-Rodn'guez等將結構優化的N-取代萘內酰胺與5-HT7R受體作用，其pKi值均小于7.3(man'aL.Lo'pez-Rodn'guez,etal.J.Med.Chem.2003,46,5638-5650)。YansongGu等在萘內酰胺6位引入烷基取代的1，4-環庚二胺，合成了用于調節5-HT2C受體的紊亂或缺乏的萘內酰胺系列衍生物(Guetal.U.S.Patent6,667,303Bl)。然而基于萘內酰胺的固有結構不容易進行修飾，雖然其具有廣泛且良好的的生物活性，目前已經見諸報道的萘內酰胺衍生物數量仍然有限。
發明內容為了克服現有技術中的不足，本發明提供一類萘內酰胺衍生物及其在腫瘤細胞增殖抑制上的應用。以萘內酰胺為母體做進一步修飾，以期篩選出具有更強腫瘤細胞增殖抑制活性的新衍生物。本發明的技術方案是一類萘內酰胺衍生物具有化學結構通式為其中\^~NU2=N-(\';~COOHRi為=C(CN)2、=C(COOCH3)2、R2為—H、_C1、—Br、一CN或-N02;R3為一CH2CH20CH、—CH2CH2Br、—CH2CH2NH2、一CH2CH2NHCH2CH2N(CH3)2、一CH2CH2NHCH2CH2N(CH2CH3)2、-NNH一CH2CH2NCH2CH2CH2CH3或,HN」把所述萘內酰胺衍生物配制成具有不同濃度的藥液，用四氮唑鹽還原法對7721人體肝癌細胞、MCF-7人體乳腺癌細胞、Hela人體宮頸癌或BGC-823人體胃癌細胞進行試驗，方法是按不同腫瘤生長速度，將一定數量處于對數生長期的腫瘤細胞以90^1/孔接種于96孔微量培養板內，培養24h后加入配制好的藥液10nl/孔，對每個細胞株，每個濃度均為三個復孔。另設無細胞調零孔。如果配制好的藥液有顏色要做相應藥液濃度無細胞調零孔。腫瘤細胞在37°C、5%(202條件下培養48小時后，加用生理鹽水配制的5mg/ml四氮唑鹽液20inl/孔；繼3續培養4小時后，加入由10。/。十二烷基磺酸鈉-5。/。異丁醇-0.01mol/lHCl配制的三聯液50pl/孔，于C02培養箱中過夜。然后用酶標儀測OD570值。按下列公式計算所述萘內酰胺衍生物對癌細胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(對照組OD值-治療組OD值)/對照組OD值xlOO°/。。所述的衍生物如下2-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(lH)-叉]丙二腈(衍生物1)、2-[(1-溴乙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物2)、2-{[(2-氨基乙基)-苯并[c,d]吲哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物3)、(E)-N-([l-(2-氨基乙基)-苯并[(:，(1]吲哚]-2(1H)-叉}-4-硝基苯胺(衍生物4)、(E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物5)、(E)-N-{[1-(2-氨基乙基)-苯并[<;,￡1]吲哚]-2(1H)-叉}-4-羧基苯胺(衍生物6)、(E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]-4-羧基苯胺(衍生物7)、2-[(l-炔丙基-苯并[c，d]口引哚)-2(1H)-叉]丙二酸二甲酯(衍生物8)、2-{[2-(N,N'-二甲基-乙二胺)-乙基-苯并[c，d]口引哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物9)、2-{[2-(N，N，-二乙基-乙二胺)-乙基-苯并[c,d]吲哚]-2(m)-叉}丙二腈(衍生物10)、2-[(2-丁胺-乙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物ll)、2-[(2-哌嗪-乙基-苯并[c，d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物12)、2-[苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物13)、2-[6-氯-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物14)、2-[6-溴-苯并[c，d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物15)、2-[6-氰基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物16)、2-[6-硝基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物17)、(E)-!^-[苯并["￡1]吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物18)、(E)->1-[6-硝基-苯并[(;,d]吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物19)、(E)-]^-[6-氰基-苯并吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物20)。所述的萘內酰胺衍生物的合成方法如下衍生物1-8的合成分為兩步進行即以萘內酰胺為原料，以苯、甲苯或氯苯作為溶劑，加入lmLPOCl3作為脫水劑，反應溫度在100-120'C間，分別選擇具有活潑亞甲基的丙二腈或丙二酸甲酯，或者帶有吸電子基的芳香伯胺如對硝基苯胺或對羧基苯胺進行脫水縮合，得到的相應中間體。其中，與丙二腈的反應得到衍生物13，與對硝基苯胺的反應得到衍生物18。上述中間體經過純化后，與鹵代垸烴如溴乙胺、溴乙炔或二溴乙垸反應，得到相應的脫HBr產物，反應環境按照反應進行難易程度選擇乙腈/t-BuOK體系或者DMF/NaOCH3體系。衍生物9-12是以衍生物2為原料，堿性條件催化，分別與相應的胺在乙腈中回流，脫HBr得到相應產物。衍生物14-20合成路線為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>仍以萘內酰胺為原料，分別與S02Cl2在乙酸中50。C下反應0.5h、與液Br2在1，2-二氯乙烷中50'C下反應0.5h或者與濃HN03在濃H2S04中冰浴下反應3h,得到R2為~0，一Br，一N02的中間體。上述中間體與丙二腈/P0Cl3在10(TC反應，即得衍生物14、15、17。上述中間體中的6-硝基-l,8-萘內酰胺，與對硝基苯胺/POCl3在120。C反應，即得衍生物19。上述中間體中的6-溴-l,8-萘內酰胺與CuCN在N-甲基吡咯烷酮(NMP)中130'C下反應4h，得到6-氰基-I，8-萘內酰胺。6-氰基-l,8-萘內酰胺與丙二腈/POCl3在100'C反應，即得衍生物16。6-氰基l,8-萘內酰胺與對硝基苯膨POCl3在12(TC反應，即得衍生物20。衍生物對腫瘤細胞體外抑制生長活性實驗采用四氮唑鹽(microculturetetrozolium,MTT)還原法對7721人體肝癌細胞、MCF-7人體乳腺癌細胞、Hela人體宮頸癌細胞和BGC-823人體胃癌細胞進行體外抑制試驗。本發明的有益效果是該類衍生物是以萘內酰胺為母體，分別通過用不同鹵代烷烴先將2位羰基與具有活潑亞甲基的化合物進行脫氫縮合，并6位引入不同親電取代基團，然后將l位亞胺的活潑氫進行取代的合成方法，得到一類具有炔鍵、氰基、胺基或酰胺結構等高生物學活性基團的衍生物。該類衍生物對腫瘤細胞增殖抑制的實驗，是選用四氮唑鹽還原法，針對7721人體肝癌細胞、MCF-7人體乳腺癌細胞、Hela人體宮頸癌或BGC-823人體胃癌細胞進行，結果表明，該類萘內酰胺衍生物對抑制腫瘤細胞增殖具有良好的活性和選擇性。具體實施方式下面通過實施例對本發明做進一步的說明。實施例12-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物l)的合成(1)1.69g萘內酰胺(O.Olmol)、0,6g丙二腈(O.Olmol)、UmLPOCl3加入到25mL兩口瓶中，加入15mL甲苯，磁力攪拌下加熱到IO(TC，恒溫反應4h后，將反應液倒入甲醇中，冷卻后直接抽濾，得到棕色固體粗品。真空干燥后，柱層析法對粗品進行分離，得到黃色綿狀晶體1.82g，產率83%，熔點>300°C。ESI-HRMS(m/z):計算值217.064，實驗值217.0639。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):5.30(s,1H)，7.21(d，J=7.2Hz,1H),7.58(t,J,-7.6Hz，J2=8.0Hz，1H),7.68(d,J=8.0Hz，1H)，7.83(t,J尸8.0Hz,J2=7.2Hz，1H),8.17(d，J:8.0Hz,1H),8.55(d,J=8.0Hz，1H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)將0.217g衍生物13(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.067gNaOCH3(1.2mmol)，磁力攪拌下升溫至6(TC后，滴加lmL溴乙炔，薄板層析跟蹤反應，約45min后，反應完全。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，用二氯甲烷對水相萃取，用無水MgS04干燥有機相后，旋轉蒸發得到粗品。柱層析法純化，得到金黃色晶體0.18g，產率71%。熔點>300°C。ESI-HRMS(m/z):計算值255.0796,實驗值255.0797。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):2.50(s,1H)，5.23(s，2H),7.23(d，J=7.2Hz,1H),7.62(tJ產8.0Hz，J2=7.2Hz，1H),7.70(d,J=8.4Hz，1H),7.81(t,J產8.0Hz,J2=8.4Hz,1H),8.14(d,J=8.0Hz，2H),8.69(d,J=7.6Hz,1H)。將0.217g衍生物13(lmmol)溶于10mL無水乙腈，加入0.2gK2CO3、lmL二溴乙烷，磁力攪拌下加熱至回流，5h后反應完全，直接真空蒸發得到固體粗品，水洗后真空干燥，得到黃色固體。柱層析法純化，得到黃色晶體0.175g，產率80%，熔點232.3°C。ESI-HRMS(m/z):計算值323.0058，實驗值323.0067。'HNMR(CDC13，400MHz):5(ppm):3,83(t，J產6.4Hz,J2=6.8Hz,2H),4.85(t，J產6.4Hz，J2=6.8Hz，2H)，7.25(d,J=7.6Hz,1H),7.61(t,J產8.0Hz,J2=7.6Hz,1H),7.70(d,.T=8.0Hz,1H),7.82(t,J「8.0Hz,J2=7.6Hz,1H),8.15(d,J=8.4Hz,2H),8.71(d,J=7.6Hz，1H)。實施例32-{[(2-氨基乙基)-苯并[(;,￡1]吲哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物3)的合成實施例22-[(l-溴乙基-苯并[c，d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物2)的合成:將0.217g衍生物13(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.134gNaOCH3(2.4mmol),升溫至100'C，反應半個小時后，加入0.243g溴乙胺的氫溴酸鹽(1.2mmol)，回流反應4h。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，用二氯甲烷對水相萃取，用無水MgS04干燥有機相后，旋轉蒸發得到粗品。柱層析法純化，得到黃色晶體0.176g,產率68%，熔點213.2°C。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):1.84(t>N//2，2H),2.54(m,NCH2C//2N,2H),2.87(m，NC//2CH2N，2H)，6.32(d,J=7.6Hz，1H)，6.54(t,Jf7.6Hz，J2=8.8Hz,1H),7.54(d，J=8.8Hz，1H)，7.34(d,J=7.6Hz,1H)，7.35(t，J產7.6Hz，J2=7.2Hz，1H),7.82(d，J=7.2Hz，1H)。ESI-HRMS(m/z):計算值260.1062，實驗值260.1045。(E)-N-U1-(2-氨基乙基)-苯并[c，d]吲哚]-2(1H)-叉}-4-硝基苯胺(衍生物4)的合成(1)1.69g萘內酰胺(O.Olmol)、1.65g對硝基苯胺(0.012mol)加入到25mL兩口瓶中，加入10mL氯苯，磁力攪拌下加熱到120°C。向攪拌均勻的反應體系中滴加l.lmLPOCl3，恒溫反應2h后，溶液呈棕色，冷卻到室溫后，向反應液滴加2mL甲醇，混合均勻并冷卻后，直接抽濾，用大量甲醇洗，水洗，得到紅色固體粗品。真空干燥后，用乙酸重結晶，得到紅色品體2.62g，產率卯％。(2)將0.289g衍生物18(lmmol)溶入10mL乙腈，加入0.269gt-BuOK(2.4mmo1)，升溫至回流，反應半個小時后，加入0.243§漠乙胺的氫溴酸鹽(1.2mmo1)，回流反應5h。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，抽濾，真空干燥得到粗品。柱層析法純化，得到紅棕色晶體200mg，產率60%，熔點152.3453.6°C。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):2.05(t，N//2，2H),2.94(m，NCH2C//2N，2H),3.07(m，NC//2CH2N，2H),6.85(d,J=7.6Hz,1H),7.10(d,J-7.6Hz，1H),7.24(d,J=8.4Hz，2H)，7.428(t,實施例4J產8.0Hz，J尸7.6Hz，1H)，7.46(d,J=7.6Hz，1H),7.51(t,J尸7.6Hz,J2=8.4Hz，1H),7.89(d,J=8.0Hz，1H),8.31(d，J=8.4Hz，2H)。ESI-HRMS(m/z):計算值332.1273，實驗值332.1258。實施例5E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c，d]吲哚)-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物5)的合成將0.289g衍生物18(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.067gNaOCH3(1.2mmol)，磁力攪拌下升溫至8(TC后，滴加lmL溴乙炔，薄板層析跟蹤反應，2h后，反應完全。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，用二氯甲垸對水相萃取，用無水MgS04干燥有機相后，旋轉蒸發得到粗品。柱層析法純化，得到棕色顆粒晶體0.27g，產率70%，熔點170.5-171.8°C。ESI-H脂S(m/z):計算值327.1008，實驗值327.0988。"HNMR(CDC13,400MHz):S(ppm):2.3l(s，2H)，4.90(s，2H)，6.96(d,J=7.2Hz,1H),7.07(d，J=7.2Hz，1H),7.22(d，J=8.8Hz,2H),7.38(t，J產7.6Hz,J2=8.0Hz，1H),7.46(d,J-8.4Hz，1H)，7.51(t,J尸8.8Hz,J2=7.2Hz,1H),7.89(d,J=8.0Hz,1H)，8.31(d，J=8.8Hz，2H)。(E)-N-{[1-(2-氨基乙基)-苯并[c,d]吲哚]-2(1H)-叉}-4-羧基苯胺(衍生物6)的合成(1)1.69g萘內酰胺(O.Olmol)、1.63g對氨基苯甲酸C0.012mo1)加入到25mL兩口瓶中，加入10mL氯苯，向攪拌均勻的反應體系中滴加l.lmLPOCl3,磁力攪拌下，回流反應4h.冷卻到室溫后，向反應液滴加2mL甲醇，混合均勻并冷卻后，直接抽濾，用大量甲醇洗，水洗，得到棕色固體粗品。真空干燥后，用乙酸重結晶，得到棕色固體1.7g，產率59%。(2)將0.288g歩驟(1)所得中間體(lmmol)溶入10mL乙腈，加入0.269gt-BuOK(2.4mmo1)，升溫至回流，反應半個小時后，加入0.243g溴乙胺的氫溴酸鹽(1.2mmd)，回流反應5h。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，用二氯甲烷萃取，旋轉蒸發得到褐色粗品。柱層析法純化，得到棕色晶體150mg，產率45%，熔點176.8-178.rC。實施例6COOHESI-H腿S(m/z):計算值331.1231，實驗值331.1274。'HNMR(d6墨DMSO，400MHz):S(ppm):2.14(t,N//2，2H),2.84(m，NCTLCttN,2H),2.98(t，NC//2CH2N，2H),6.86(d,J=7.2Hz，1H),7.08(d，J=7.2Hz，1H)，7.12(d，J=8.8Hz，2H),7.28(t,J產8.0Hz，J2=7.2Hz，1H)，7.42(d,J=8.4Hz，1H),7.53(t,J產7.2Hz，J2=8.4Hz，1H)，7.89(d，J=8.0Hz，IH)，8.31(d，J=8.8Hz,2H)，8.44(s，O仏1H)。實施例7(E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(m)-叉]-4-羧基苯胺(衍生物7)的合成<image>imageseeoriginaldocumentpage9</image>將衍生物6步驟(l)中所得的中間體0.288g(lmmol)溶入10mL乙腈，加入0.269gt-BuOK(2.4mmo1)，升溫至回流，反應半個小時后，滴加lmL溴乙炔，反應3h。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，用二氯甲烷萃取，旋轉蒸發得到棕色粗品。柱層析法純化，得到棕色晶體170mg，產率52%。ESI-H腿S(m/z):計算值326.1055，實驗值326.1089。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):2.31(s，1H)，4.89(s，NC//2,2H)，6.96(d,J=7.6Hz，1H),7.07(d,J=7.2Hz，1H)，7.22(d,J=8.8Hz，2H),7.38(t,J產8.0Hz,J2=7.6Hz，1H)，7.46(d,J=8.4Hz，1H),7.51(t，J廣7,2Hz，J2=8.4Hz，1H)，7'89(d，J=8.0Hz，1H),8.31(d,J=8.4Hz，2H)，8.5(s,0//，1H)。實施例82-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二酸二甲酯(衍生物8)的合成(1)1.69g萘內酰胺(O.Olmol)、1.32g丙二酸二甲脂(O.Olmol)加入到25mL兩口瓶中，加入15mL甲苯，磁力攪拌下加熱到120°C。向反應體系中逐滴滴加l.lmLPOCl3，恒溫反應4h后，向反應體系加入2mL甲醇中，冷卻后，直接抽濾，用大量甲醇洗，水洗，得到棕色固體粗品。真空干燥后，柱層析法對粗品進行分離，得到黃色晶體1.55g，產率54%。<image>imageseeoriginaldocumentpage9</image>(2)步驟(1)中所得中間體0.283g(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.067gNaOCH3(1.2mmol)，磁力攪拌下升溫至IO(TC后，滴加lmL溴乙炔，反應2h。將冷卻的反應液傾入150mL冰水中，抽濾，真空干燥得到粗品。柱層析法純化，得到黃色晶體0.2g，產率63%，熔點257.6°C。'HNMR(d6陽DMSO，400MHz):S(ppm):1.88(s,1H),3.75(s，NCf/2，2H)，6.58(d,J=7.8Hz，1H)，7.15(t，J產6.8Hz,J2=6.3Hz，1H),7.17(d，J=6.3Hz，1H)，7.52(d,J=7.2Hz，1H)，7.45(t，K.2Hz,J產7.6Hz,1H)，7.63(d,J-7.6Hz，1H)，4.76(s,OCtt，6H)。ESI-HRMS(m/z):計算值321.1001,實驗值321.1045。2-{[2-(N，N'-二甲基-乙二胺)-乙基-苯并[c,d][i引哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物9)、2-{[2-(N，N，-二乙基-乙二胺)-乙基-苯并["(1]吲哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物10)、2-[(2-丁胺-乙基-苯并[c,d]吲哚)陽2(m)-叉]丙二腈(衍生物ll)、2匿[(2-哌嗪-乙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物12)的合成取0.324g衍生物2(lmmol)溶入10mL乙腈中，加入相應的胺2mmo1和2mL三乙胺，6(TC回流，薄層色譜跟蹤反應至完全，一般需要20-30h。反應完后，將冷卻的反應液倒入150mL冰水中，用二氯甲垸萃取，有機相用無水MgS04干燥后旋蒸得到粗品。真空干燥后，粗品經過柱層析法純化，得到相應的純目標衍生物。衍生物9:'HNMR(d6-DMSO,400MHz):5(ppm):2.31(s,NC私，6H),2.52(t,NCH2C//2N，2H)，2.70(m，NCftCHzN,2H)，4.0(m，N/f，1H),2.82(m，NCILCftN,2H),3.22(t，NCffiCILN，2H)，7.32(d,J=7.6Hz，1H)，7.10(t，Jf7.6Hz，J2=7.6Hz，1H)，7.18(d，J=8.0Hz，1H)，7.34(d,J=8.8Hz，1H)，7.17(t，J產7.6Hz，J2=8.0Hz，1H)，7.75(d,J=8.4Hz，1H)。ESI-HRMS(nVz):計算值331.1797，實驗值331.1763。衍生物10:ESI-HRMS(359.2145m/z)，衍生物ll:ESI-HRMS(316.1662m/z)，衍生物12:ESI-HRMS(329.168m/z)。實施例910實施例102-[6-氯-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物14)的合成(1)將1.69g萘內酰胺(O.Olmol)完全溶于25mL乙酸，升溫至50°C，將0.8mLSO2Cl2(0.01mol)緩慢滴加至反應液，反應體系溫度升高，突然變黃生成大量固體，繼續攪拌0.5h，直接抽濾，干燥的亮黃色固體1.90g,產率94%。Cl(2)實驗方法同衍生物l的步驟(1)，產率78%。NCClCl14衍生物12:ESI-HRMS(251.027m/z),熔點〉30(TC。實施例112-[6-溴-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物15)的合成(1)1.69g萘內酰胺(O.Olmol)溶于20mLl，2-二氯乙垸。取0.51mL液溴(O.Olmol)溶于10mLl,2-二氯乙烷。將此Br2-ClCH2CH2Cl體系滴加至反應體系，緩慢升溫至50'C，反應3h。冷卻，靜置，直接抽濾，得到黃色固體2.05g，產率83%，熔點254.9°C,Br2>(2)實驗方法同衍生物l的步驟(1)，產率82。/(uCNCH2C、P0Cl3,甲苯^MR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):7.77(d,J:7.6Hz,1H),7.92(t,J產7.6Hz，J產8.4Hz，1H)，8.60(d，J=8.0Hz，1H),8.29(d，J=8.4Hz，1H),7.03(d,J=8.0Hz,1H)，9.88(s,N//，1H)。ESI-HRMS(m/z):計算值297.9745，實驗值297.9711。實施例122-[6-氰基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物16)的合成(l)將衍生物15合成步驟(l)所得中間體6-溴-l，8-萘內酰胺1.24g(5mmol)溶于15mLN-甲基吡咯垸酮(NMP)，攪拌下加入0.627g氰化亞銅(7mmo1)，恒溫130'C反應4h。反應液冷卻后傾入200mL冰水中，抽濾，用氨水洗掉淡綠色，干燥得到黃色固體0.91g，產率94%。CuCNN-甲基吡咯烷酮(2)實驗方法同衍生物l的步驟(1)，產率75%。CNCH2CNPOCl3,甲苯—'HNMR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):7.82(d,J=7.6Hz，1H)，7.99(t，J,=7.6Hz，J尸8.4Hz，1H),8.63(d，J=7.6Hz，1H),8.34(d，J=8.4Hz，1H),7.12(d,J=7.6Hz，1H)，9.95(s，N仏1H)。ESI-HRMS(m/z):計算值242.0592，實驗值242.0574。實施例132-[6-硝基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物17)的合成(1)將1.69g萘內酰胺(O.Olmol)溶于lOmL濃硫酸，冰水浴使溫度控制低于l(TC，攪拌均勻后，向其滴加2.4mL濃硝酸，溶液顏色變淺，反應3h后，將反應液傾入冰水中，析12出黃色固體，抽濾，真空干燥得固體19.0g，產率89%<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>(2)實驗方法同衍生物l的步驟(1)，產率78%<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>ESI-HRMS(m/z):計算值262.0491，實驗值262.0434。實施例14(E)-^[6-硝基-苯并[￡;,d]吲哚-2(m)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物19)的合成取衍生物7合成歩驟(1)所得中間體6-硝基-l，8-萘內酰胺，實驗操作如衍生物4合成步驟(1)，產率72%。ESI-HRMS(m/z):計算值334.0702,實驗值334.0775。(E)-1^-[6-氰基-苯并吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物20)的合成取衍生物16合成步驟(1)所得中間體6-氰基-l，8-萘內酰胺，實驗操作如衍生物4合成步驟(1)，產率68%。ESI-HRMS(m/z):計算值314.0804，實驗值314.0844。'HNMR(d6-DMSO,400MHz):S(ppm):4.31(s，1H),6.56(d,J=7.2Hz，1H),7.67(d，J=7.2Hz，1H)，7.28(d，J=8.8Hz，2H),7.50(d,J=8.4Hz，1H)，7.57(t，J尸7.6Hz，J2=8.4Hz，1H)，7.85(d,J=8.0Hz，1H)，8.41(d，J=8.8Hz，2H)。實施例16實施例15測定衍生物的體外抑制腫瘤細胞生長活性用四氮唑鹽(microculturetetrozolium,MTT)還原法對7721人體肝癌細胞、MCF-7人體乳腺癌細胞、Hela人體宮頸癌細胞和BGC-823人體胃癌細胞進行體外抑制試驗。四氮唑鹽(MTT)還原法的具體操作是按不同腫瘤生長速率，將一定數量處于對數生長期的腫瘤細胞90^1/孔接種于％孔微量培養板內，培養24h后加入藥液10W/孔，對每個細胞株，每個濃度均為三個復孔。另設無細胞調零孔。如果藥物有顏色要做相應藥物濃度無細胞調零孔。腫瘤細胞在37。C、5%(:02條件下培養48小時后，力nMTT(Sigma)液5mg/ml用生理鹽水配制20pl/孔繼續培養4小時后，加入三聯液nO。/。SDS-5。/。異丁醇-0.01mol/lHCl)50-孔，于CCb培養箱中過夜。然后用酶標儀測OD570值。按下列公式計算被測物對癌細胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(對照組OD值-治療組OD值)/對照組OD值xi00%從列表數據可以看出，衍生物3、4、9、19表現出良好的抑制腫瘤細胞增殖活性，衍生物7對7721人體肝癌細胞、衍生物11對MCF-7人體乳腺癌細胞都呈現選擇性地增殖抑制作用。表1.衍生物對7721人體肝癌細胞的生長抑制率1010.10.01衍生物138.4514.9812.616.54衍生物210.647.793.810衍生物359.2442.2833.1625.86衍生物573.8155.126.443.88衍生物673.5155.142.6536.40衍生物780.0768.5532.9115.89衍生物867.6253.9429.029.76衍生物939.475.613,902.22衍生物1035.1721.2221.293.63衍生物1139.3233.0223.0520.14衍生物1239.0724.5520.4112.89衍生物1341.0528.7410.207.04衍生物1443.5929.2818.458.75衍生物1637.6128.5524.2211.81衍生物1954.7721.5416,877.10表2.衍生物對MCF-7人體乳腺癌細胞的生長抑制率0.0114<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>衍生物126.8712.528.042.44衍生物229.2528.2421.0217.55衍生物336.5933.5722.9221.77衍生物536.1626.9915.5814.91衍生物643.6620.3316,1910.25衍生物752.6236.2535.3323.23衍生物833.659,372.520衍生物941.7027.8727.1426.85衍生物1024.7030.6113.318.68衍生物1186.6421.717.960衍生物1339.5424.5323.5217.37衍生物1410.232.710.230衍生物1545.0234.5513.692.42衍生物1632.069.1320.2511.74衍生物1993.0235.01001權利要求1、一類萘內酰胺衍生物，其特征在于該類衍生物具有化學結構通式為其中R1為＝C(CN)2、＝C(COOCH3)2、id="icf0002"file="A2009100122500002C2.tif"wi="36"he="11"top="77"left="87"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或id="icf0003"file="A2009100122500002C3.tif"wi="40"he="12"top="77"left="129"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>R2為-H、-Cl、-Br、-CN或-NO2；R3為-CH2CH2C≡CH、-CH2CH2Br、-CH2CH2NH2、-CH2CH2NHCH2CH2N(CH3)2、-CH2CH2NHCH2CH2N(CH2CH3)2、-CH2CH2NCH2CH2CH2CH3或id="icf0004"file="A2009100122500002C4.tif"wi="37"he="10"top="113"left="81"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>2、據權利要求1所述的一類萘內酰胺衍生物在腫瘤細胞增殖抑制上的應用，其特征在于把所述萘內酰胺衍生物配制成具有不同濃度的藥液，用四氮唑鹽還原法對7721人體肝癌細胞、MCF-7人體乳腺癌細胞、Hela人體宮頸癌或BGC-823人體胃癌細胞進行試驗，方法是按不同腫瘤生長速度，將一定數量處于對數生長期的腫瘤細胞以90^1/孔接種于96孔微量培養板內，培養24h后加入配制好的藥液10pl/孔，對每個細胞株，每個濃度均為三個復孔；如果配制好的藥液有顏色要做相應藥液濃度無細胞調零孔；腫瘤細胞在37°C、5%002條件下培養48小時后，加用生理鹽水配制的5mg/ml四氮哇鹽液20nl/孔；繼續培養4小時后，加入由10。/c)十二烷基磺酸鈉-5。/。異丁醇-0.01mol/lHCl配制的三聯液50^1/孔，于(202培養箱中過夜；然后用酶標儀測OD570值；按下列公式計算所述萘內酰胺衍生物對癌細胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(對照組OD值-治療組OD值)/對照組OD值x100%。全文摘要一類萘內酰胺衍生物及其在腫瘤細胞增殖抑制上的應用，屬于藥物化學
技術領域：
。該類萘內酰胺衍生物是以萘內酰胺為母體，分別通過用不同鹵代烷烴先將2位羰基與具有活潑亞甲基的化合物進行脫氫縮合，并6位引入不同親電取代基團，然后將1位亞胺的活潑氫進行取代的合成方法，得到一類具有炔鍵、氰基、胺基或酰胺結構等高生物學活性基團的衍生物。該類萘內酰胺衍生物對腫瘤細胞增殖抑制的實驗，是選用四氮唑鹽還原法，針對7721人體肝癌細胞MCF-7人體乳腺癌細胞Hela人體宮頸癌或BGC-823人體胃癌細胞進行，結果表明，該類萘內酰胺衍生物對抑制腫瘤細胞增殖具有良好的活性和選擇性。文檔編號A61K31/403GK101602707SQ200910012250公開日2009年12月16日申請日期2009年6月23日優先權日2009年6月23日發明者張英利,李曉蓮申請人:大連理工大學