專利名稱：姜黃素的含量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種姜黃素的含量測定方法，特別是復方姜黃降脂膠囊的中所含姜 黃素的含量測定方法。
背景技術：
姜黃是一種藥食兩用的傳統藥材，具有破瘀、行氣、消積和止痛的功效以及抗 癌、抗早孕、抗凝血、抗氧化和保肝等生理活性。姜黃的主要有效成分為姜黃素。銀杏又名公孫樹或白果樹等，為古代孑遺植物，其葉和果具有重要的藥用價 值。銀杏在我國被用作藥物已有約5000年的歷史，銀杏葉提取物主要有效成分為植物黃 酮類類。國內外基礎和臨床研究表明，銀杏葉提取物對多種不同動物種類、動物模型及 人類均有著明顯而廣泛的藥理活性。紅曲在中國的應用源遠流長，是我國先人巧奪天工的偉大發明，是祖國寶貴的 科學文化遺產，自古至今就是一個具有藥用和食用價值的典型代表。本品性溫、味甘， 具有活血化瘀、健脾消食之功效，主治產后惡露不凈、瘀滯腹痛、食積飽脹、赤白下 痢、跌打損傷等癥。姜黃提取物，銀杏葉提取物，紅曲粉復配后制成的復方姜黃降脂膠囊，必需建 立新的質量控制方法。其目的在于檢查生產過程的中間體，成品中各項質量指標是否符 合規定，生產工藝是否合理。有關制劑中姜黃素的質量控制，一般采用紫外-可見分光光度法(UV)，薄層掃 描法(TLCS)及高效液相色譜法(HPLC)。以下是部分文獻的公開報道劉渝等使用薄層掃描法測定三黃前列貼中姜黃素含量。樣品經過適當提取后點 于硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(9.6 0.3 0.1)為展開劑，檢測波長Xs =425am, λ Γ = 560nm。。劉彥等對安宮牛黃中姜黃素進行含量測定。具體方法為色譜柱C18柱， 200mmX 4.6mm,粒徑5 μ m ；流動相乙腈-4%冰醋酸溶液(50 50)；流速l.OmL/ min ；柱溫室溫；檢測波長430nm。甘賓賓等建立了高效液相色譜法測定保健食品中姜黃素含量的方法。用甲醇對 樣品進行超聲提取，以C18柱(4.6X250mm)為分析柱，乙腈磷酸鹽緩沖液=50 50 為流動相，流量l.OmL · min1,檢測波長為425nm。李維等建立高效液相色譜測定傣藥雙姜胃痛丸中姜黃素的含量。方法采用C18 柱(250nmX4.6nm，5 μ m),以乙腈_4 %乙酸溶液(40 60)為流動相；檢測波長為 430nm，流速1.0ml · miiT1，檢測波長為 430nm。金城等建立高效液相色譜法測定姜參膠囊中姜黃素含量的方法。方法采用色 譜柱為C18(250mmX 4.6mm，5 μ m),流動相為乙腈_8 %醋酸溶液(47 53)，流速為 l.OmL · mm1,檢測波長為254nm，柱溫為室溫。
崔紅彬等建立HPLC法測定姜黃片中姜黃素含量的方法。方法采用ODS2ClS色 譜柱，乙腈-4%冰醋酸(48 52)為流動相；流速1.0ml · min1 ；檢測波長430nm.李玲等采用反相色譜法，測定七味姜黃膠囊中姜黃素的含量。色譜柱 C18 (250nmX4.6nm, 5 μ m),流動相四氫呋喃_5 %醋酸溶液(42 58)，流速 ImL · min"1,檢測波長 428nm，柱溫 35°C王靜等以薄層掃描法測定散結乳癬貼膏中姜黃素含量。方法展開劑為氯 仿-甲醇-冰醋酸(96 3 1)，掃描波長為Xs 425nm、λ s2 650nm,掃描速度為 IOmm · min \申凱采用高效液相色譜法測定“七種熊膽膠囊”中姜黃素含量。方法色譜柱 為ODS分析柱(4.6mmX 200mm，5 μ m)，乙腈一 0.2 %磷酸溶液(45 55)為流動相， 流速為ImL · mm1,檢測波長為430nm，進樣量為10L。王玉峰等建立益智膠囊中姜黃素的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法， 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以乙腈-2%冰乙酸(49 51)為流動相，檢測波長 425nm,流速 l.OmL · miiT1。2005版中國藥典規定姜黃中姜黃素的含量測定方法為高效液相色譜法，用辛烷 基硅烷鍵合硅膠為固定相，以乙腈-4%冰乙酸(48 52)為流動相，檢測波長430nm，流 速 l.OmL · mirf1。從上述方法中可以看出，HPLC法為較常使用的分析手段。TLCS法樣品處理 繁瑣，使用頻率較少。UV法主要用于姜黃素生產過程質量控制，因為復方產品中可能 有其他成分干擾，所以很少用于制劑成品中姜黃素的含量測定。在實際操作中我們發 現，HPLC法的色譜條件選擇所獲得的分離效果有較大不同。上述文獻報導所采用的乙 腈-酸_水系統及等度洗脫的方式，經我們用來測試復方姜黃降脂膠囊中姜黃素，發現分 離效果不及本專利所提供的色譜條件(見圖4)。
發明內容
本發明的目的是提供一種新的姜黃素的含量測定方法，特別是適用于在具有多 種有效成分的組合物中測定姜黃素的方法。根據本發明提供的一種姜黃素含量測定方法，其采用的色譜條件為用十八烷 基硅烷鍵合硅膠為固定相；流動相梯度洗脫程序A:乙腈；B: O.Olmol · I/1的磷酸 二氫鉀溶液，pH為2.5)；在O 20分鐘內B相從55%按一級線性梯度(即時間-流動 相比例按直線方程變化)增加到60% ；第20 30分鐘B相從60%按一級線性梯度降低 到 55% ；流速l.Oml.miiT1;檢測波長425nm，柱溫30°C。本測定方法做了大量方法學驗證試驗，結果認為該方法準確可靠，分別開展了 線性關系考察，穩定性試驗，精密度試驗，重現性試驗和加樣回收試驗對方法進行驗 證。與同類方法比較，姜黃素的分離度更高，可達到基線分離。不但可用于復方姜黃降 脂膠囊的質量控制，也可延展至含姜黃素的藥品，保健食品制劑中應用。
圖1是本發明提供的姜黃素檢測方法的標準曲線；
圖2是根據本發明提供的姜黃素檢測方法測定的姜黃素對照品HPLC圖；圖3是采用本發明方法分離姜黃素的HPLC效果圖，其中1:雙去甲氧基姜黃 素；2:去甲氧基姜黃素；3:姜黃素；圖4是采用現有技術中的分析方法乙腈_酸-水系統色譜條件分離姜黃素的 HPLC圖，其中1 雙去甲氧基姜黃素；2 去甲氧基姜黃素；3 姜黃素。
具體實施例方式實施例1色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；流動相梯度洗脫程序A :乙 腈；B: 0.0 Imol .I/1的磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調整PH至2.5)；在0 20分鐘內B相 從55% (體積百分濃度)按一級線性梯度(即時間-流動相比例按直線方程變化)增加到 60%；第20 30分鐘B相從60%按一級線性梯度降低到55%。流速1.OmLmm1 ；檢 測波長425nm，柱溫30°C。理論板數以姜黃素計不得低于5000，分離度不低于1.5。對照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的姜黃素對照品6.4mg置IOml容量瓶 中，加甲醇至刻度，搖勻，作為貯備液；精密吸取0.5ml置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋 至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備精密稱定復方姜黃降脂膠囊內容物約30mg，置25ml的容 量瓶中，用甲醇溶解，超聲處理20分鐘，放冷后定容，再稀釋5倍，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即得。現有方法與本發明的方法相比較本發明改用緩沖鹽溶液作為流動相，同時針 對姜黃素類3個成分保留時間較為接近特點，以梯度洗脫的淋洗方式對其進行分離。結 果顯示(參考圖2、3、4)，采用本發明所分離的姜黃素色譜分離度明顯優于現有方法。實施例21.線性關系考察精密吸取姜黃素對照品儲備溶液，用甲醇稀釋分別配制成濃度為 4.0 μ g · mL1，8.0 μ g · mL1， 16.0 μ g · mL1，32.0 μ g · mL1，64.0 μ g · mL1，
的一系列對照品溶液，搖勻，過濾，分別注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定 峰面積，結果見表1，以姜黃素濃度ChgrnL—1)為橫坐標，峰面積A為縱坐標，繪 制標準曲線(見圖1)，結果姜黃素峰面積與濃度呈良好線性關系，回歸方程為y = 90714738.58x-67033.08, r = 0.9999.表1線性關系考察結果
權利要求
1. 一種姜黃素含量測定方法，其采用的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固 定相；流動相梯度洗脫程序A:乙腈；B: O.Olmol · L—1的磷酸二氫鉀溶液，pH為 2.5 ；在0 20分鐘內B相從55%按一級線性梯度增加到60% ；第20 30分鐘B相 從60%按一級線性梯度降低到55% ；流速l.Oml.miiT1;檢測波長425nm ；柱溫 30°C。
全文摘要
本發明涉及一種姜黃素的含量測定方法，特別是復方姜黃降脂膠囊的中所含姜黃素的含量測定方法。其采用的色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；流動相梯度洗脫程序A乙腈；B0.01mol·L-1的磷酸二氫鉀溶液，pH為2.5；在0～20分鐘內B相從55％按一級線性梯度增加到60％；第20～30分鐘B相從60％按一級線性梯度降低到55％；流速1.0ml.min-1；檢測波長425nm；柱溫30℃。本測定方法做了大量方法學驗證試驗，結果認為該方法準確可靠，分別開展了線性關系考察，穩定性試驗，精密度試驗，重現性試驗和加樣回收試驗對方法進行驗證。
文檔編號A61P3/06GK102018929SQ20091004436
公開日2011年4月20日 申請日期2009年9月18日 優先權日2009年9月18日
發明者張勝, 曠春桃, 李湘洲, 楊國恩 申請人:中南林業科技大學, 李湘洲