一種中藥組合物中四種成分的含量測定方法

專利名稱：一種中藥組合物中四種成分的含量測定方法
技術領域：
本發明涉及到一種中藥組合物中四種成分的含量測定方法，該方法采用高效液相 色譜法同時測定芍藥苷、馬錢苷、小檗堿、丹酚酸B的含量。
背景技術：
中藥是我國傳統防治疾病的重要武器，千百年來，在我國人民的健康生活中發揮 著重大的作用。隨著現代科學技術的發展，傳統中藥也面臨著現代化的問題。近年來，全世 界對中藥的認識也逐漸加深，開始重視，這表明中藥國際市場的快速發展時期已經來臨。當 前，中藥要進入世界市場，實現中藥現代化，首當其沖是其質量的控制，而含量測定是質量 控制最關鍵的部分。由于中成藥中化學成分十分復雜，因此在檢測前需要提取、分離、精制， 又由于所含有效成分量甚微，故目前多采用色譜、光譜法進行檢測。傳統中藥含量測定儀薄 層掃描為主，薄層掃描的方法定量存在較大的誤差。現階段的中藥質量控制模式基本上是借鑒化學藥品質量控制的模式，含量測定作 為中藥質量標準中的要害內容之一，對于有效成分制劑而言，可在很大程度上控制藥品質 量，但對于復方制劑采用多種不同提取方式或多條提取路線的工藝以及多個有效部位制成 的新藥而言，僅建立某單一成分的含量測定在很大程度上帶有較大的片面性。雖然研究者 越來越熟悉到中藥新藥工藝過程的控制對于質量控制的重要性，但是多數制劑的質量標準 仍然不能全面反映制劑的過程控制結果，即難以全面控制中藥制劑的質量。因此，從中藥質 量標準的技術要求方面，全面提高質量標準仍然有很大的發展空間。因此，從中藥研究的 技術要求方面，將來的新藥研究有必要在質量標準中建立多指標含量測定，目的之一是實 現對多數成份指標的控制，并將對中藥制劑工藝過程的控制直接在質量標準中得到體現。 即處方中含有多個明確有效成分的，或者處方中藥味分別按不同路線提取等各種不同情況 下，均有必要研究建立多個指標的含量測定。但是，這就對質量控制的效率帶來了挑戰，如 果均采用快捷的薄層掃描定量，則準確度會較差，如果均采用色譜法測定，則非常耗費時間 并且顯著增加質量控制的成本，在同一色譜系統中同時測定幾種成分，則是比較理想的質 量控制方法。專利ZL02146572. X公開了一種治療冠心病室性早搏的藥物組合物及其制備方 法，本專利申請就是針對該中藥組合物進行的質量控制方法研究。

發明內容
本發明的目的是提供一種中藥組合物四種有效成分的含量測定方法。該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參45-180份、麥冬50-200份、山茱萸125-450份、丹參125-450份、炒酸棗仁 95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鱉蟲；35_150份、甘松45-200份、黃連25-90 份、南五味子35-150份、龍骨75-300份。在質量控制方面，本發明提供的測定方法可同時測定該中藥組合物的芍藥苷、馬錢苷、小檗堿和丹酚酸B四種成分的含量，方法簡便可行、測定結果準確可靠。本發明的含量測定方法如下色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為C18柱，規格為250mmX4. 6mm，流動相A為0. 18%甲酸/甲醇，B為 0. 30%甲酸/水，洗脫梯度0 15min，流動相A由5 %增至20% ;2 7min，流動相A保 持20% ;7 37min，流動相A由20%增至；37 47min，流動相A由增至42% ； 47 50min, A保持42% ；檢測波長為230nm，流速:1. OmL/min，柱溫30-50°C ；芍藥苷、馬 錢苷、小檗堿、丹酚酸B與各自相鄰峰的分離度均大于1. 5 ；對照品溶液的配制精密稱取芍藥苷對照品、馬錢苷對照品、小檗堿對照品、丹酚酸B對照品，加甲醇 分別制成每Iml含芍藥苷0. IOmg,馬錢苷0. 04mg,小檗堿0. 08mg,丹酚酸BO. 16mg的混合溶 液，即得；供試品溶液配制取本中藥組合物制劑，必要時去除膠囊殼或包衣，研細，充分混勻，取0.8g，精密稱 定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用70%甲 醇補足重量，搖勻，取aiil，0. 22 μ m微孔濾膜過濾，即得；測定方法將對照品混合溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，對照品混合溶液進樣量 10 μ L，供試品液進樣量為20 μ L，記錄色譜峰面積，外標法計算含量。采用本發明方法測定含量，所述中藥組合物中原料藥的重量比優選為人參89份、麥冬112份、山茱萸2 份、丹參2 份、炒酸棗仁186份、桑寄生186 份、赤芍89份、土鱉蟲75份、甘松89份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。或者人參45份、麥冬112份、山茱萸2 份、丹參225份、炒酸棗仁186份、桑寄生186 份、赤芍89份、甘松45份、土鱉蟲35份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。或者人參90份、麥冬135份、山茱萸270份、丹參200份、炒酸棗仁150份、桑寄生150 份、赤芍100份、土鱉蟲100份、甘松95份、黃連60份、南五味子75份、龍骨150份。上述優選的中藥組合物采用本方法測定含量均能取得良好的精密度和準確性。為使本發明含量測定方法得以實現，本發明中藥組合物需要制成成型的制劑，為 此，有必要對其活性成分進行提取。該中藥組合物的活性成分由下列步驟制成a)人參加70%乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過，濃縮，烘干，粉碎成的細粉；b)南五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松共同加70%乙醇回流提取3次，合并提取 液，濾過，濃縮的浸膏；c) 土鱉蟲粉碎成的細粉；d)麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水煎煮2次，合并提取液，濃縮的浸膏。e)將步驟b)與d)所得浸膏合并，加入步驟C)所得的藥物細粉，烘干，粉碎成細 粉，加入步驟a)所得藥物細粉，混勻即得該中藥組合物活性成分。
本發明的應用中，所述中藥組合物制劑劑型為膠囊劑、片劑、沖劑或散劑中的一 種，為使上述劑型能夠實現，需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料，例如填充劑、崩 解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等，填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、 乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧 甲基淀粉鈉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉等，潤滑劑包 括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等，助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶 纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等，粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲 基纖維素等，甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矯味劑包括甜味 劑及各種香精，防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸 氯乙定、桉葉油等。優選的，本發明膠囊劑的制備方法為(1)、人參加8倍量70%乙醇回流提取三次，第一次3小時，以后每次2小時，合并 提取液，濾過，回收乙醇，濃縮，烘干，粉碎成80目粉；(2)、五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松加8倍量70%乙醇回流提取3次，合并提取 液，濾過，回收乙醇；(3)、土鰲蟲粉碎成80目粉；0)、麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水9倍量煎煮2次，合并提取液，濾過， 與步驟O)的提取液合并，濃縮，與步驟(1)、(3)粉混勻，烘干，粉碎成80目粉，裝膠囊即得。為證實本發明含量測定方法的效果，發明人進行了大量的實驗進行優選，并對最 終確定的測定方法進行了科學的驗證，驗證實驗如下1儀器與材料高效液相色譜儀(Waters U695)、紫外檢測器(Waters 2489)、KQ3200DE型醫用 數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、芍藥苷對照品(批號110736-200933， 中國藥品生物制品檢定所)、馬錢苷對照品(批號110706-200505，中國藥品生物制品檢定 所)、鹽酸小檗堿對照品(批號110713-200208，中國藥品生物制品檢定所)、丹酚酸B對 照品(批號111562-200807，中國藥品生物制品檢定所)，甲醇為色譜純，水為重蒸水，其 余試劑為分析純。本發明中藥組合物膠囊劑為石家莊以嶺藥業股份有限公司按照實施例1 制劑的制備方法制得的(批號:090247、090316、090242、09(^45、090247、090312、090307、 090240、090239、090241、090311)。2方法與結果2. 1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱AgilentExtend C18 Q50mmX 4. 6mm，5 μ m)。流動相 A 為 0· 18% 甲酸 / 甲 醇，B 為 0. 30% 甲酸 / 水，洗脫梯度0 15min，20% ) ；2 7min，A(20% ) ；7 37min, A(20%^ 35% ) ；37 47min，A(35% — 42% ) ；47 50min，)。檢測波長 為230nm，流速1. OmL ·π η-1，柱溫35°C。在此色譜條件下，得到芍藥苷、馬錢苷、小檗堿、 丹酚酸B混合對照品色譜圖及本發明中藥組合物膠囊劑供試品色譜圖，芍藥苷、馬錢苷、小 檗堿、丹酚酸B的保留時間分別為16.9、18. 1,29.9,45. 2min，各自相鄰峰的分離度均大于 1. 5。6
2. 2對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品、馬錢苷對照品、小檗堿對照品、丹酚酸B對照品，加甲醇 分別制成每Iml含芍藥苷0. 1004mg,馬錢苷0. 0404mg,小檗堿0. 0824mg,丹酚酸BO. 1610mg 的混合溶液，即得。2. 3供試品溶液的制備取本品20粒，傾出內容物，充分混勻，取0. 8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加 入70 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用70 %甲醇補足重量，搖勻，取aiil， 0. 22 μ m微孔濾膜過濾，即得。2. 4線性化范圍試驗分別精密吸取芍藥苷(0. 1004mg/ml)，馬錢苷(0. 0404mg/ml)，小檗堿(0. 0824mg/ ml)，丹酚酸B (0. 1610mg/ml)對照品混合溶液各4、6、8、10、12、14 μ L注入液相色譜儀，記錄 色譜峰面積，以峰面積對進樣量進行線性回歸，結果見表1，可見該方法在試驗范圍內線性 關系良好。表1標準曲線和線性范圍實驗結果
權利要求
1.一種中藥組合物中四種成分的含量測定方法，該四種成分分別為芍藥苷、馬錢苷、小 檗堿、丹酚酸B，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參45-180份、麥冬50-200份、山茱萸125-450份、丹參125-450份、炒酸棗仁95-400 份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鱉蟲35-150份、甘松45-200份、黃連25-90份、南 五味子35-150份、龍骨75-300份，其特征在于，該方法采用高效液相色譜的方法進行測定， 色譜條件及測定方法如下色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為C18柱，規格為250mmX 4. 6mm,流動相A為0. 18%甲酸/甲醇，B為0. 30%甲 酸/水，洗脫梯度0 15min，流動相A由5%增至20% ;2 7min，流動相A保持20% ;7 37min，流動相A由20%增至；37 47min，流動相A由增至42% ；47 50min，A 保持42% ；檢測波長為230nm，流速1. OmL/min，柱溫30-50°C ；芍藥苷、馬錢苷、小檗堿、丹 酚酸B與各自相鄰峰的分離度均大于1. 5 ；對照品溶液的配制精密稱取芍藥苷對照品、馬錢苷對照品、小檗堿對照品、丹酚酸B對照品，加甲醇分別 制成每Iml含芍藥苷0. IOmg,馬錢苷0. 04mg,小檗堿0. 08mg,丹酚酸BO. 16mg的混合溶液， 即得；供試品溶液配制取本中藥組合物制劑，必要時去除膠囊殼或包衣，研細，充分混勻，取0. 8g，精密稱定， 置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用70 %甲醇 補足重量，搖勻，取aiil，0. 22 μ m微孔濾膜過濾，即得；測定方法將對照品混合溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，對照品混合溶液進樣量10 μ L， 供試品液進樣量為20 μ L，記錄色譜峰面積，外標法計算含量。
2.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原 料藥制成人參89份、麥冬112份、山茱萸2Μ份、丹參2Μ份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、 赤芍89份、土鱉蟲75份、甘松89份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
3.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原 料藥制成人參45份、麥冬112份、山茱萸2Μ份、丹參225份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、 赤芍89份、甘松45份、土鱉蟲35份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
4.如權利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原 料藥制成人參90份、麥冬135份、山茱萸270份、丹參200份、炒酸棗仁150份、桑寄生150份、 赤芍100份、土鱉蟲100份、甘松95份、黃連60份、南五味子75份、龍骨150份。
5.如權力要求1-4所述的含量測定方法，其特征在于，該中藥組合物的活性成分由下 列步驟制成a)人參加70%乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過，濃縮，烘干，粉碎成的細粉；b)南五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松共同加70%乙醇回流提取3次，合并提取液，濾過，濃縮的浸膏；c)土鱉蟲粉碎成的細粉；d)麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水煎煮2次，合并提取液，濃縮的浸膏；e)將步驟b)與d)所得浸膏合并，加入步驟c)所得的藥物細粉，烘干，粉碎成細粉，加 入步驟a)所得藥物細粉，混勻即得該中藥組合物活性成分。
6.如權利要求1-4中任一項所述的含量測定方法，其特征在于，所述中藥組合物的制 劑劑型為膠囊劑、片劑、沖齊U、散劑或口服液制劑中的一種。
全文摘要
本發明提供了一種中藥組合物中四種成分的含量測定方法，該中藥組合物由人參、麥冬、山茱萸、丹參、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、土鱉蟲、甘松等中藥組成，臨床用于治療心律失常。本發明采用高效液相的方法同時測定該中藥組合物的芍藥苷、馬錢苷、小檗堿、丹酚酸B的含量，方法簡便可行、測定結果準確可靠，可用來評價該中藥組合物的質量。
文檔編號A61K35/64GK102038856SQ20091007566
公開日2011年5月4日 申請日期2009年10月13日 優先權日2009年10月13日
發明者陳玉平 申請人:北京以嶺藥業有限公司