專利名稱：丹酚酸b在制備治療腫瘤藥物中的應用的制作方法
技術領域：
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背景技術：
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0, 附
3本發明所要解決的技術問題是現有技術中，大多數制藥廠把丹參素和原兒 茶醛作為丹參注射劑的質量控制指標，盡管也有將丹酚酸B鹽用于預防心腦血管 疾病、預防老年性癡呆，治療腎衰竭，改善尿毒癥狀、抗氧化、抗血栓、抗心腦缺 血、保護肝臟及調節血脂等藥物中，但未見過將其用于制備治療腫瘤的藥物中的應 用。本發明為解決已有技術中的上述技術問題，所采用的技術方案是提供丹酚酸B 的新的用途，即丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用。在本發明所述的丹酚酸 B的鹽類中，其陽離子可以為鐵離子、鈉離子、鉀離子，鎂離子，優選的為鎂離子。 本發明所述的制備治療腫瘤的藥物的劑型可以為任何一種藥劑學上所述的劑型，可 以為口服液型，針劑型、片劑型或膠囊型。體外研究表明丹酚酸B對腫瘤細胞有 殺傷作用，動物體內實驗證明其具有抗腫瘤療效。
圖1為丹酚酸B抑制腫瘤細胞生長的劑量效應關系圖。
其中，橫坐標表示丹酚酸B溶液的濃度，單位為umol/L;縱坐標表示 吸光度值(A) 。 1為SK-Hepl細胞株，2為Huh-7細胞株，3為SMMU-7721 細胞株，4為H22細胞株，5為Hela細胞株。 圖2為丹酚酸B對移植性肝癌小鼠存活時間的影響。 其中，橫坐標表示時間(天數)，縱坐標表示存活小鼠的只數，
國為不給藥組，A為給藥組。— 圖3為丹酚酸B對化學誘癌大鼠肝癌的治療作用圖。 其中，困為腫瘤組，口治療組， 為正常組。
具體實施方式
.-實施例1 丹參的提取方法
丹參(Salvia miltionrrhizaBge.)去除泥沙等雜質后粉碎成100目粉，用水 加熱提取三次，合并水提取液，減壓濃縮，濃縮液加醇(甲醇、乙醇)至70—80 0%含醇量，放冷過夜；用離心機去除沉淀，溶液除去醇，過大孔樹脂(型號Diaion HP20或400—I型)，用水、乙醇洗脫，收集酚酸性部分，濃縮至小體積，再通過 凝膠柱(MCIgel， TSKHF40w， Sephadex LH—20， Silica gel 0DSG3等)，用 水一乙醇洗脫，收集含丹酚酸B部分的洗脫液。將洗脫液真空旋轉蒸發，除去乙醇，冷凍干燥得到丹酚酸B干粉。 實施例2
丹酚酸B抑制腫瘤細胞生長的劑量效應關系圖 選擇人肝癌細胞株SK—Hepl， Huh 7， SMMU-7721,小鼠肝癌細胞株H22， 人子宮頸癌細胞株Hela進行實驗(除Hda細胞株購自中科院上海細胞生物學研究 所細胞庫外，以上細胞株皆由瑞德肝臟疾病研究所饋贈)。用含10%小牛血清的 RPMI—1640(購自Sigma)培養液分別培養上述細胞，以0. 25%胰酶(購自Sigma) 消化單層細胞，制備細胞懸液，并將細胞濃度調至1X 105/ml。取96孔培養板， 每孔加入100ul細胞懸液，培養過夜，使細胞貼壁。吸去培養液，加入含丹酚酸 B的培養液，丹酚酸B終濃度分別為0.27、 2.7、 27、 270umol / L, 48小時后用 四氮唑鹽(MTT)(購自Sigma)還原法觀察其對腫瘤細胞的作用。圖1顯示各濃 度的丹酚酸B對腫瘤細胞都有抑制作用，并具有劑量效應關系。
實施例3
丹酚酸B對動物接種性腫瘤的治療作用
取20只C57小鼠(雌雄兼用，體重18—22g，購自上海實驗動物中心)，每 只小鼠皆皮下接種濃度為1X107/ml的Hepl—6肝癌細胞；16天后小鼠體內 長出直徑為l一2cm的腫瘤。此時將小鼠分為兩組，即對照組和治療組，每組10 只。從第17天起治療組小鼠腹腔注射丹酚酸B溶液，每天一次，劑量為100mg/kg (丹酚酸B溶液的濃度為5mg/ml，用生理鹽水配制)；對照組小鼠每天腹腔注射 等容積生理鹽水一次作為對照。如圖2所示，結果表明，治療組小鼠的生存時間延 長。
實施例4
丹醋酸B對動物化學誘導性腫瘤的治療作用
將36只Wistar大鼠(雌雄兼用，體重180—220g，購自上海實驗動物中心) 分為三組，即正常對照組、模型對照組和丹酚酸B治療組，每組12只。正式實驗 開始前，先給予模型對照組和丹酚酸B治療組大鼠飲用O. 01%二乙基亞硝胺溶液 3個月，以達到誘發體內產生腫瘤的目的；而正常組大鼠在此期間仍給予正常的飲
食。造模成功后，依下列方法對各組大鼠進行處理1.正常對照組腹腔注射生 理鹽水2.腫瘤對照組腹腔注射生理鹽水；3、丹酚酸B治療組腹腔注射濃度為5mg/ml的丹酚酸B溶液，每天一次，劑量為50mg/kg (丹酚酸B溶液釆用生 理鹽水配制)。治療30天后將各組大鼠處死取血，檢測血中血清白蛋白(albumin， ALB)、谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase, ALT) 、 y —谷氨酰轉肽酶(y —glutamyl transferase, y —GT)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的 含量。如圖3所示，結果表明丹酚酸B治療組的化驗指標較腫瘤對照組明顯好轉。
權利要求
1.丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用。
2. 如權利要求1所述的丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用，其特征在于:所述的丹鼢酸B的鹽類中，其陽離子為鐵離子、l丐離子、鈉離子、鉀離子或鎂離子。
3. 如權利要求1或2所述的丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用，其特征在于所述的丹酚酸B的鹽類中，其陽離子為鎂離子。
4. 如權利要求1所述的丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用，其特征在于:所述的制備治療腫瘤的藥物的劑型為任何一種藥劑學上所述的劑型。
5. 如權利要求1所述的丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用，其特征在于所述的制備治療腫瘤的藥物的劑型為口服液型、針劑型、片劑型或膠囊型。
全文摘要
本發明提供了一種丹酚酸B的新的用途，即丹酚酸B在制備治療腫瘤藥物中的應用。體外研究表明丹酚酸B對腫瘤細胞有殺傷作用，動物體內實驗證明其具有抗腫瘤療效。在本發明中所述的丹酚酸B鹽類中的陽離子可以為鐵離子、鈣離子、鈉離子、鉀離子，鎂離子，優選的為鎂離子。本發明所述的制備治療腫瘤的藥物的劑型可以為任何一種藥劑學上所述的劑型，可以為口服液型，針劑型、片劑型或膠囊型。
文檔編號A61K31/343GK101664400SQ200910139519
公開日2010年3月10日 申請日期2002年9月13日 優先權日2002年9月13日
發明者季紅光, 謝天培, 顧心彬 申請人:上海天甲生物醫藥有限公司;北京東方天甲科技發展有限公司