一種姜黃素包覆脂質體制劑及其制備方法

專利名稱：一種姜黃素包覆脂質體制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種姜黃素包覆脂質體制劑及其制備方法，屬于醫藥應用技術領 域。
背景技術：
姜黃素(curcumin)是從姜科姜黃屬(curcuma L.)植物姜黃、莪術、郁金等的根
莖中提取的一種天然有效成分，分子式為C21H2tlO615藥理實驗表明姜黃素除具有抗炎、 抗癌、抗氧化作用外，還具有保護腎臟、抑制肺纖維化、抑制肝纖維化、幫助肌肉損傷 修復、治療白內障、抗寄生蟲病等多種藥理作用，且毒副作用小，使用安全，有良好的 臨床應用前景。但姜黃素幾乎不溶于水，脂溶性也較差，因此經胃腸道吸收少，口服生 物利用度低。因此目前改善姜黃素的口服吸收是擴大姜黃素臨床應用、使其進一步規模 化生產的瓶頸。三甲基殼聚糖包覆脂質體(N-trimethylchitosan chloride coated liposomes)是在傳
統脂質體的基礎上，用三甲基殼聚糖對其表面進行修飾所制備的一種新型給藥系統，其 制備方法主要是滴注法，即將藥物、載體材料，通過薄膜分散法制備出脂質體混懸液， 然后采用滴注法將脂質體混懸液逐滴滴入到三甲基殼聚糖溶液中進行孵育而成。與傳統 脂質體制劑相比，三甲基殼聚糖包覆脂質體有其自身的優點TMC是殼聚糖的季銨鹽衍 生物，安全無毒，與殼聚糖僅在酸性pH條件下具有水溶性相比，三甲基殼聚糖在更廣的 pH值范圍內都具有良好的水溶性。同時，三甲基殼聚糖具有生物可降解性和良好的生物 相容性以及生物粘附性，用其進行脂質體包覆后不僅可以提高脂質體的體內外穩定性， 還可以延長制劑與胃腸道粘膜的吸附時間，促進藥物的吸收；而且三甲基殼聚糖可以通 過打開細胞間的緊密連接實現藥物的細胞旁路轉運，進一步提高藥物的口服吸收。因此 這種給藥系統能夠解決許多與口服生物利用度低相關的問題，尤其適合于難溶性藥物的 口服吸收。

發明內容
本發明針對現有技術的不足，提供一種姜黃素包覆脂質體制劑及其制備方法。術語說明薄膜分散法將磷脂、膽固醇等類脂質及脂溶性藥物溶于有機溶劑中，然后將 有機溶劑在玻璃瓶中旋轉揮發，使在燒瓶內壁上形成薄膜，將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩 沖液中，加入燒瓶中不斷攪拌，即得脂質體。TPGS 水溶性維生素E。TMC:三甲基殼聚糖。PF127 普郎尼克 F127。PF68 普郎尼克 F68。Tween80 吐溫 80。
本發明的技術方案如下本發明的姜黃素包覆脂質體制劑，以姜黃素作為原料藥，采用磷脂、膽固醇為 藥物載體，表面活性劑為藥物增溶劑，通過薄膜分散法制備出脂質體混懸液，以三甲基 殼聚糖作為包覆材料；各組份組成如下姜黃素10 20mg，磷脂100 400mg，膽固醇0 30mg，表面活性劑0 25mg,三甲基殼聚糖溶液濃度為0.1% 0.5% (w/v)，脂質體混懸液與三甲基殼聚糖溶 液體積比1 (1 4)，其中，膽固醇、表面活性劑不同時為0。本發明所述的質量體積比(w/v)單位是g/ml。所述的磷脂為下列之一或它們的組合豆磷脂或卵磷脂。所述的表面活性劑為下列之一或它們的組合水溶性維生素E(TPGS)、普郎尼 克F127(PF127)、普郎尼克F68 (PF68)、吐溫80 (Tween80)、單硬脂酸甘油酯或肉豆蔻異 丙脂，優選水溶性維生素E(TPGS)。優選的原料組成為姜黃素20mg、卵磷脂400mg、膽固醇20mg、水溶性維生 素 E(TPGS)20mg ；或者，姜黃素20mg、卵磷脂400mg、膽固醇20mg、水溶性維生素E(TPGS) 10mg、肉 豆蔻異丙脂10mg。本發明的姜黃素包覆脂質體制劑的制備方法如下(1)取姜黃素、磷脂、膽固醇、表面活性劑溶于有機溶劑20 30ml中，減壓旋 蒸除去有機溶劑，真空干燥箱中干燥過夜；(2)加入20ml pH 5 7的磷酸鹽緩沖液，水化形成脂質體，離心除去結晶性藥 物，所得脂質體混懸液A進行微孔濾膜過濾，勻化，所得脂質體混懸液B粒徑約為300 500nm ；(3)將脂質體混懸液B逐滴滴入到濃度為0.1-0.5 % (w/v)的三甲基殼聚糖 (TMC)溶液C中，孵育時間1 3h，即得本發明的粒徑約為600 800nm的姜黃素包覆 脂質體混懸液D；繼續制備凍干制劑(4)向上述姜黃素包覆脂質體混懸液D中加入質量體積比(w/v)為 4%凍 干保護劑凍干即得凍干制劑E。步驟(1)中所述的有機溶劑選自下列之一或它們的組合甲醇、乙醇、丙酮、 乙酸乙酯或氯仿。步驟(4)中所述的凍干保護劑選自下列之一或它們的組合甘露醇、蔗糖、乳 糖、葡萄糖或海藻糖。優選的，步驟(3)中三甲基殼聚糖(TMC)溶液C的濃度為0.5%，孵育時間為3h。為了改善姜黃素的口服吸收，提高其口服生物利用度，本發明選擇磷脂、膽固 醇作為藥物載體，TPGS作為增溶劑，三甲基殼聚糖作為包衣材料將其制備成姜黃素包 覆脂質體制劑。本實驗中所采用的載體材料、包覆材料、表面活性劑以及凍干保護劑等 均為藥劑學上廣泛應用的藥劑輔料，具有無毒、無刺激性、生物相容性好的特性。由于姜黃素屬于難溶性藥物，很難與水溶性和脂溶性的輔料相容，因此制備起來有相當大的 難度。基于前期長時間艱辛的工作，本發明針對姜黃素本身的理化性質，在脂質體中加 入了對姜黃素具有明顯增溶作用、同時又能穩定保持脂質體特征的特定濃度的表面活性 劑-水溶性維生素E(TPGS)，既提高了姜黃素在脂相中的溶解度，又使脂相和水相具有 一定的互溶性，有利于制備載藥量高的脂質體。根據實驗數據結果選擇合適組分組成 及其用量，本發明以薄膜分散法制備的脂質體包封率可達80% 90%，載藥量能達到 3.14%,而且脂質體成型性較好。TMC在較廣泛的pH范圍內都具有很好的溶解性，并具 有良好的生物粘附性和生物可降解性，最重要的是，TMC可以通過打開細胞間的緊密連 接促進藥物的吸收。在包衣過程中，本發明考察了 TMC用量以及孵育時間、滴注順序、 攪拌速度等包衣工藝對脂質體包覆率的影響。通過篩選，本發明制備的姜黃素包覆脂質 體包覆率可達85%，粒徑在600-800nm之間。這種姜黃素包覆脂質體對胃腸道黏膜具有 很好的粘附性，可以增加藥物的吸收，從而顯著提高藥物的口服生物利用度。體外釋放 實驗表明包覆脂質體48h內僅釋放70% 80%，說明該制劑具有良好的控制藥物釋放的 特性；大鼠口服給藥結果表明，本發明姜黃素包覆脂質體的口服吸收(藥時曲線下面積 AUC為516.58 μ g/L h)是未包覆脂質體(給藥劑量均為50mg/kg) (AUC為226.77 μ g/L h)的2.28倍，是姜黃素混懸液(給藥劑量為100mg/kg) (AUC為44.68 μ g/L h)的23.12 倍，表明包覆脂質體能顯著提高姜黃素的口服生物利用度。本發明姜黃素包覆脂質體制備簡單，在三甲基殼聚糖包覆的姜黃素脂質體混懸 液中加入凍干保護劑，冷凍干燥，可使三甲基殼聚糖包覆的脂質體在載體材料中均勻分 散，大大提高了制劑的穩定性，能夠更好的促進藥物的溶解與吸收。


圖1是本發明實施例5的未進行包衣的姜黃素脂質體混懸液的電鏡照片 (X72000)；圖2是本發明實施例5的姜黃素包覆脂質體的電鏡照片(X72000)。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步說明，但不限于這些具體記載的實施例。所 使用原料沒有特別說明的均為市售。實施例1 精密稱取IOmg姜黃素、IOOmg豆磷脂，IOmg膽固醇，加至20ml無水乙醇中，
40°C條件下減壓去除乙醇，真空干燥箱中干燥過夜，加入20ml磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 5 7)進行水化，離心除去去結晶性藥物，所得脂質體混懸液A進行0.8 μ m的微孔濾膜 過濾，勻化，將所得脂質體混懸液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.1%，w/v),孵育Ih 即得本發明姜黃素包覆脂質體混懸液D。所得脂質體包封率為9.21%，載藥量為0.445%。實施例2 精密稱取IOmg姜黃素、200mg豆磷脂、IOmg膽固醇，加至30ml無水乙醇中，
40°C條件下減壓旋蒸除去乙醇，真空干燥箱中干燥過夜，加入20ml磷酸鹽緩沖液(PBS，pH5 7)進行水化，離心除去結晶性藥物，所得脂質體混懸液A進行0.8μιη的微孔濾膜 過濾，勻化，將所得脂質體混懸液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.2%，w/v),孵育Ih 即得本發明姜黃素包覆脂質體混懸液D。取2ml制備的混懸液D加入甘露醇(1%，w/v) 后裝入西林瓶中，置冰箱中-80°C預凍24h，然后放入冷凍干燥機中_40°C、0.IOmbar 48h 即得凍干制劑。取混懸液適量，滴加于銅網上，用2%磷鎢酸溶液進行負染，自然干燥后在透射 電鏡下(TEM)下觀察，為圓整的類球形實體粒子，表面光滑，粒徑600-800nm之間，根 據粒子的大小和形態可以判定該制劑為姜黃素包覆脂質體。實施例3:精密稱取IOmg姜黃素、400mg豆磷脂、20mg普郎尼克F127(PF127)，加至 20ml乙酸乙酯中，40°C條件下減壓旋蒸除去有機溶劑，真空干燥箱中干燥過夜，加入 20ml磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 5 7)進行水化，離心除去結晶性藥物，所得脂質體混懸 液A進行0.8 μ m的微孔濾膜過濾，勻化，將所得脂質體混懸液B逐滴滴入到TMC溶液 C中(0.5%，w/v)，孵育2h即得本發明姜黃素包覆脂質體混懸液D。分取2ml制備的 混懸液D加入蔗糖(4%，w/v)后裝入西林瓶中，置冰箱中-80°C預凍24h，然后放入冷 凍干燥機中_40°C、0.1 Ombar 48h即得凍干制劑。zeta電位測定結果表明包覆脂質體為+15.64mV，未包覆脂質體為_9.63mV，表 明帶正電荷的TMC已包覆在脂質體的表面。實施例4 精密稱取IOmg姜黃素、400mg卵磷脂、IOmgTPGS,加至20ml氯仿中，30°C條 件下減壓旋蒸除去有機溶劑，真空干燥箱中干燥過夜，加入20ml磷酸鹽緩沖液(PBS， pH 5 7)進行水化，離心除去結晶性藥物，所得脂質體混懸液A進行0.8 μ m的微孔濾 膜過濾，勻化，將所得脂質體混懸液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.2%，w/v),孵育
2h即得本發明姜黃素包覆脂質體混懸液D。體外釋放實驗6h內，包覆脂質體和不包覆脂質體分別釋放了 25%和40%，而 姜黃素原料藥的丙二醇溶液釋放量達到91%，結果表明包覆脂質體進一步降低了藥物 的釋放速率，具有較好的緩控釋特性。實施例5 精密稱取20mg姜黃素、400mg卵磷脂、20mg膽固醇、20mg TPGS，加至20ml
甲醇中，40°C條件下減壓旋蒸除去甲醇，真空干燥箱中干燥過夜，加入20ml磷酸鹽緩沖 液(PBS，pH 5 7)進行水化，離心除去結晶性藥物，所得脂質體混懸液A進行0.8 μ m 的微孔濾膜過濾，勻化，將所得脂質體混懸液B逐滴滴入到TMC溶液C中(0.5%，w/ ν),孵育3h即得本發明姜黃素包覆脂質體混懸液D。分取2ml制備的混懸液D加入適量甘露醇(4%，w/v)后裝入西林瓶中，置冰箱 中-80°C預凍24h，然后放入冷凍干燥機中_40°C、0.10mbar48h即得凍干制劑。粒徑分布實驗表明用TMC溶液對姜黃素脂質體混懸液進行包衣后，脂質體的 平均粒徑由包衣前的400nm變為包衣后的800nm，表明TMC已成功包覆于脂質體表面； TMC包覆姜黃素脂質體大鼠口服相對于不包覆的姜黃素脂質體和姜黃素混懸液的生物利 用度分別為228%和2312%。
實施例6:精密稱取20mg姜黃素、400mg卵磷脂、20mg膽固醇、IOmg TPGS、IOmg肉豆 蔻異丙脂，加至30ml丙酮中，40°C條件下減壓旋蒸除去有機溶劑，真空干燥箱中干燥過 夜，加入20ml磷酸鹽緩沖液(PBS，pH 5 7)進行水化，離心出去結晶性藥物，所得 脂質體混懸液A進行0.8 μ m的微孔濾膜過濾，勻化，將所得脂質體混懸液B逐滴滴入到 TMC溶液C中(0.5%，w/v),孵育Ih即得本發明姜黃素包覆脂質體混懸液D。所得脂質體包封率為75.68%，載藥量為1.86%。結果表明肉豆蔻異丙脂的加 入并沒有很好的改善姜黃素的溶解性。實施例7:不同藥脂比、膽固醇用量對姜黃素脂質體包封率和載藥量的影響實 驗表1藥脂比對姜黃素脂質體包封率和載藥量的影響
權利要求
1.一種姜黃素包覆脂質體制劑，其特征在于以姜黃素作為原料藥，采用磷脂、膽 固醇為藥物載體，表面活性劑為藥物增溶劑，通過薄膜分散法制備出脂質體混懸液，以 三甲基殼聚糖作為包覆材料；各組份組成如下姜黃素10 20mg，磷脂100 400mg，膽固醇0 30mg，表面活性劑0 25mg， 三甲基殼聚糖溶液濃度為0.1% 0.5% (w/v),脂質體混懸液與三甲基殼聚糖溶液體積比 1 (1 4)，其中，膽固醇、表面活性劑不同時為0。
2.如權利要求1所述的姜黃素包覆脂質體制劑，其特征在于所述的磷脂為下列之 一或它們的組合豆磷脂或卵磷脂。
3.如權利要求1所述的姜黃素包覆脂質體制劑，其特征在于所述的表面活性劑為 下列之一或它們的組合水溶性維生素E、普郎尼克F127、普郎尼克F68、吐溫80、單 硬脂酸甘油酯或肉豆蔻異丙脂，優選水溶性維生素E。
4.如權利要求1-3任一項所述的姜黃素包覆脂質體制劑，其特征在于各組份組成如下姜黃素20mg、卵磷脂400mg、膽固醇20mg、水溶性維生素E 20mg。
5.如權利要求1-3任一項所述的姜黃素包覆脂質體制劑，其特征在于各組份組成如下姜黃素20mg、卵磷脂400mg、膽固醇20mg、水溶性維生素E 10mg、肉豆蔻異丙脂 IOmg0
6.如權利要求1-5任一項所述的姜黃素包覆脂質體制劑的制備方法，其特征在于步驟 如下(1)取姜黃素、磷脂、膽固醇、表面活性劑溶于有機溶劑20 30ml中，減壓旋蒸除 去有機溶劑，真空干燥箱中干燥過夜；(2)加入20mlpH 5 7的磷酸鹽緩沖液，水化形成脂質體，離心除去結晶性藥物， 所得脂質體混懸液A進行微孔濾膜過濾，勻化，所得脂質體混懸液B粒徑約為300 500nm ；(3)將脂質體混懸液B逐滴滴入到濃度為0.1-0.5%(w/v)三甲基殼聚糖溶液C中， 孵育時間1 3h，即得本發明的粒徑約為600 SOOnm的姜黃素包覆脂質體混懸液D。
7.如權利要求6所述的姜黃素包覆脂質體制劑的制備方法，其特征在于繼續制備凍干 制劑步驟如下(4)向上述姜黃素包覆脂質體混懸液D中加入質量體積比(w/v)為 4%凍干保 護劑凍干即得凍干制劑E。
8.如權利要求6所述的姜黃素包覆脂質體制劑的制備方法，其特征在于步驟(1)中所 述的有機溶劑選自下列之一或它們的組合甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿。
9.如權利要求6所述的姜黃素包覆脂質體制劑的制備方法，其特征在于步驟(4)中所 述的凍干保護劑選自下列之一或它們的組合甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖或海藻糖。
10.如權利要求6所述的姜黃素包覆脂質體制劑的制備方法，其特征在于步驟(3)中 三甲基殼聚糖溶液C的濃度為0.5%，孵育時間為3h。
全文摘要
本發明涉及一種姜黃素包覆脂質體及其制備方法。該制劑由姜黃素、磷脂、膽固醇、水溶性維生素E、三甲基殼聚糖組成，可制成凍干粉并用于口服給藥。本發明姜黃素包覆脂質體的胃腸道吸收效率顯著高于傳統的姜黃素脂質體制劑，進一步改善了姜黃素的口服吸收，提高了其口服生物利用度。
文檔編號A61K31/12GK102008439SQ20101056166
公開日2011年4月13日 申請日期2010年11月29日 優先權日2010年11月29日
發明者翟光喜, 陳煥蕾 申請人:山東大學