專利名稱：一種中藥組合物、提取物及其制備方法和應用的制作方法
一種中藥組合物、提取物及其制備方法和應用技術領域
本發明屬于中藥提取物及其制備方法技術領域，具體涉及一種中藥組合物、提取 物及其制備方法和應用。
背景技術：
全球攜帶乙肝病毒人數為3. 5億，丙肝的感染人數也達到了 1.5億。在我國，乙肝 感染率約為10%，而感染丙肝的人約有4000萬。
現在為止國內外公認的抗病毒藥物主要是兩類，一類是干擾素，一類是口服的核 苷類藥物。一般國內外的指南認為，如果慢性乙肝患者轉氨酶水平比較高，DNA水平不是很 高，病人又比較年輕，這樣首先可以考慮干擾素治療，有可能取得比較好的療效，盡量優先 考慮長效干擾素，希望通過有限的療程，比如一年、一年半或者兩年，能夠實現e抗原血清 學轉換，停藥后病人能夠比較穩定，可以避免長期服藥。因此干擾素仍是慢性病毒性肝炎治 療的首選藥物之一，但是慢性乙型肝炎患者在使用干擾素抗病毒治療過程中出現白細胞減 少。
醫學上，將以胰島素抵抗為基礎的多代謝癥候群，包括肥胖、高血糖、高血壓、高脂 血癥、高尿酸、脂肪肝等稱為“代謝綜合癥”。
肝臟是人體“物質代謝中樞”，是人體內最大的“化工廠”。肝臟物質代謝發生障礙， 是引發高血脂、高血糖、高尿酸、高血壓等多種疾病的根源。臨床表現在血脂升高或異常、血 糖升高、血壓升高、尿酸值超標、脂肪肝等。脂肪肝不僅僅是肝臟的局部病變，而且是發生在 肝臟的全身性疾病，是引發代謝綜合癥的根源。高血糖、高血脂、高血壓、高血黏、高尿酸等 “五高”疾病均可由脂肪肝引起。甘油三酯增高、向心性肥胖和糖耐量減低，是構成“代謝綜 合癥”的三大危險因素！
肝臟是脂肪代謝中心，脂肪肝患者脂代謝失調，使肝臟變成一個儲油罐，血液經肝 臟凈化解毒時，將肝臟中的膽固醇和甘油三酯帶入血液中使血液黏稠度增加，引發高血壓； 脂代謝異常易引起糖代謝異常，從而導致高血糖向糖尿病發展；而血液中大量膽固醇和甘 油三酯促進動脈粥樣硬化的形成，導致冠心病、腦中風、心絞痛、心肌梗塞等疾病的發生。
因此需要一種藥物既能夠對治療肝臟的代謝綜合癥，又能夠替代目前的干擾素對 肝病進行治療。發明內容
本發明的目的為了解決目前治療肝炎的干擾素會導致外周白細胞減少的以及肝 臟代謝綜合癥的問題，提供了一種代替干擾素對肝炎和肝臟代謝綜合癥進行治療的中藥組 合物和提取物。
本發明的另一個目的是提供了這種中藥提取物的制備方法。
本發明的第三個目的在于提供了這種中藥提取物在制備抗乙型肝炎病毒、降低轉 氨酶水平、調節免疫和代謝綜合征藥物中的應用。3
本發明的技術方案如下
一種中藥組合物，其中，所述中藥組合物包括下列重量份的通關藤和鐮葉西番蓮， 其中通關藤為20 150份，鐮葉西番蓮為10 45份。
上述技術方案中所述的中藥組合物，其中，所述中藥組合物中通關藤為100份，鐮 葉西番蓮為30份。
一種中藥提取物的制備方法，包括下述步驟
(1)、分別稱取上述技術方案中所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮；
(2)、通過下述⑴和(ii)兩種不同路徑獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物， 其中
(i)、將原料藥通關藤粉碎后，加10 20倍量、濃度為60% 90%的乙醇、回流提 取1 3次，每次提取1 3小時獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；
或(ii)、對原料藥通關藤中的總酚酸和總皂苷分別提取，然后將總酚酸和總皂苷 混合，獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；其中總酚酸是通過用10% 95%乙醇加熱 回流提取或超聲提取獲得；總皂苷是通過溶劑法、沉淀法、膽留醇沉淀法或二相酸水解法中 的一種提取獲得；
(3)、將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為20% 95%的乙醇，在溫度為50°C 100°C， 按照料液比1 6 1 60進行提取，提取時間為1 3小時，提取2 3次，獲得含總黃 酮的鐮葉西番蓮提取物；
(4)、將步驟( 中獲得的含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物與步驟( 中獲得含 總黃酮的鐮葉西番蓮提取物混合，即得所述的中藥提取物。
上述技術方案中所述的中藥提取物的制備方法，其中，
所述步驟O)中的途徑(i)的提取物是通過將原料藥通關藤粉碎后，加15 20 倍量、濃度為60% 80%的乙醇、回流提取3次，每次提取2小時獲得；途徑(ii)中的總酚 酸是通過用10% 95%乙醇超聲提取后進行大孔樹脂精制獲得；
所述步驟(3)中將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為60%的乙醇，在溫度為70°C，按照 料液比1 6 1 60進行提取，提取時間為1 3小時，獲得含總黃酮的鐮葉西番蓮提 取物。
上述技術方案中所述的中藥提取物的制備方法，其中，步驟( 中途徑(i)的提取 物是通過將原料藥通關藤粉碎后，加20倍量、濃度為60%的乙醇、回流提取3次，每次提取 2小時獲得。
一種中藥提取物的制備方法，包括下述步驟
(1)、分別稱取上述技術方案中所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮，粉碎后混合；
O)、用10% 95%的乙醇，在溫度為30°C 100°C，按照料液比1 6 1 80 進行提取，提取時間為1 3小時，提取2 3次，獲得含總酚酸、總皂苷和總黃酮的中藥提 取物。其中步驟⑵的優選條件為用60%的乙醇，在溫度為70°C，按照料液比1 40進行 提取，提取時間為2小時，提取2次，獲得含總酚酸、總皂苷和總黃酮的中藥提取物。
一種中藥提取物，其中，所述中藥提取物是由上述技術方案中任一技術方案所述 的提取物制備方法制備所得。
上述技術方案中所述的中藥提取物在制備抗乙型肝炎病毒、降低轉氨酶水平、調節免疫和代謝綜合征藥物中的應用。
本發明的中藥提取物還可以添加藥學上可接受的載體，按照本領域的技術方法制 備成合劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、滴丸劑、丸劑、貼劑、膏劑、酊劑、錠劑、醑劑、栓劑、涂膜齊U、 注射劑等各種劑型，用于制備抗乙型肝炎病毒、降低轉氨酶水平、調節免疫和代謝綜合征藥 物中的應用。
本發明具有以下有益效果
1、調節免疫能力本發明提取物可通過抑制單核-巨噬細胞活化和IL-6過多的分 泌，減輕ConA誘導的免疫性肝損害，并對網狀內皮系統有一定的激活作用，能明顯增強小 鼠單核巨噬細胞的吞噬能力，使單位時間內血液中碳粒清除速率加快，提高實驗小鼠非特 異性免疫能力。
2、提高肝臟解毒和代謝作用對CCl4中毒小鼠肝臟磺溴酞鈉(BSP)潴留量測定結 果表明，高、中、低劑量組均不同程度的降低CCl4中毒小鼠肝臟BSP潴留量。提示通關藤具 有一定的提高肝臟的解毒及代謝作用。
3、具有抗肝炎病毒作用，對感染鴨乙型肝炎病毒(DHBV)的鴨血清中DHBVDNA升高 有較強的抑制作用，并呈一定的量效和時效關系，本發明提取物對乙肝病毒具有一定的抑 制作用。
4、本發明提取物具有防治多種因素實驗性脂肪肝的作用。
具體實施方式
為使本發明的技術方案便于理解，以下結合具體實施方式
對本發明作進一步的說 明。
實施例1 中藥組合物的制備
稱取原料藥通關藤為20g，鐮葉西番蓮為45g，粉碎后混合，即得中藥組合物。
實施例2 中藥組合物的制備
稱取原料藥通關藤為100g，鐮葉西番蓮為30g，粉碎后混合，即得中藥組合物。
實施例3 中藥組合物的制備
稱取原料藥通關藤為150g，鐮葉西番蓮為25g，粉碎后混合，即得中藥組合物。
實施例4 中藥提取物的制備
(1)、分別稱取實施例1所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮；
(2)、將通關藤粉碎過篩，加10倍量、濃度為90%的乙醇、回流提取1次，每次提取 1小時，獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；
(3)、將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為20%的乙醇，在溫度為100°C，按照料液比 1 60進行提取，提取時間為3小時，提取3次，獲得含總黃酮的鐮葉西番蓮提取物；
(4)、將步驟⑵中獲得的含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物與步驟(3)中獲得含 總黃酮的鐮葉西番蓮提取物混合，即得所述的中藥提取物。
實施例5 中藥提取物的制備
(1)、分別稱取實施例2所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮；
(2)、將通關藤粉碎過篩，加20倍量、濃度為60%的乙醇、回流提取3次，每次提取 2小時獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；
(3)、將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為95%的乙醇，在溫度為50°C，按照料液比 1 30進行提取，提取時間為2小時，提取2次，獲得含總黃酮的鐮葉西番蓮提取物；
(4)、將步驟⑵中獲得的含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物與步驟(3)中獲得含 總黃酮的鐮葉西番蓮提取物混合，即得所述的中藥提取物。
實施例6 中藥提取物的制備
(1)、分別稱取實施例2所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮；
(2)、將通關藤粉碎過篩，加15倍量、濃度為75%的乙醇、回流提取2次，每次提取 2小時獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；
(3)、將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為50%的乙醇，在溫度為75°C，按照料液比 1 6進行提取，提取時間為3小時，提取3次，獲得含總黃酮的鐮葉西番蓮提取物；
(4)、將步驟⑵中獲得的含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物與步驟(3)中獲得含 總黃酮的鐮葉西番蓮提取物混合，即得所述的中藥提取物。
實施例7 中藥提取物的制備
本實施例步驟與實施例5相同，區別在于含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物的制 備上，具體步驟為將通關藤粉碎過篩，用10%乙醇加熱回流提取或超聲提取獲得含有效 成分總酚酸的提取物；
對回流提取后的藥渣通過溶劑法進行提取，具體為使用甲醇或稀乙醇作溶劑進行 粗提，提取液經回收溶劑后，用水稀釋，再經正丁醇萃取或大孔吸附樹脂純化，得粗皂苷后， 再用硅膠柱色譜法進行分離獲得含有效成分總皂苷的提取物；
將獲得的含有效成分總酚酸和總皂苷的提取物進行混合，得到含有效成分總酚酸 和總皂苷的通關藤提取物。
實施例8 中藥提取物的制備
本實施例與實施例6相同，區別在于含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物的制備 上，具體步驟為稱取原料藥通關藤，粉碎過篩，用95%乙醇超聲提取，獲得含有效成分總 酚酸的提取物；
對實施例7中獲得的粗皂苷采用沉淀法進行提取，具體為將粗皂苷溶于少量甲醇 或乙醇中，逐滴加入乙醚、丙酮或乙醚一丙酮(1 1)混合物，勻后析出的沉淀劑為含有效 成分總皂苷的提取物，繼續加入乙醚即可得到純度較高的含有效成分總皂苷的提取物；
將獲得的含有效成分總酚酸和總皂苷的提取物進行混合，得到含有效成分總酚酸 和總皂苷的通關藤提取物。
實施例9 中藥提取物的制備
本實施例與實施例7相同，區別在于含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物的制備 上，具體步驟為稱取原料藥通關藤，粉碎過篩，用60%乙醇超聲提取后，采用大孔樹脂精 制，獲得含有效成分總酚酸的提取物；
對實施例7中獲得的粗皂苷采用膽留醇沉淀法進行提取，具體為將粗皂苷溶于少 量乙醇中，加入膽甾醇飽和乙醇溶液，利用利用甾體皂苷可與膽甾醇生成難溶性的分子復 合物而得到沉淀，過濾后得沉淀依次經過水、醇、乙醚洗滌以除去糖類、色素、油脂和游離的 膽甾醇，經過干燥后用乙醚提取出膽留醇，得到的殘留物即為較純的含有效成分總皂苷的 提取物。
將獲得的含有效成分總酚酸和總皂苷的提取物進行混合，得到含有效成分總酚酸 和總皂苷的通關藤提取物。
實施例10 中藥提取物的制備
本實施例與實施例7相同，區別在于含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物的制備 上，具體步驟為稱取原料藥通關藤，粉碎過篩，用60%乙醇超聲提取后，采用大孔樹脂精 制，獲得含有效成分總酚酸的提取物；
對實施例7中獲得的粗皂苷采用二相酸水解法進行提取，使生成的苷元能進入有 機相溶劑中而減少苷元與酸的接觸時間，避免了苷元的破壞。含有效成分總皂苷的提取物。
將獲得的含有效成分總酚酸和總皂苷的提取物進行混合，得到含有效成分總酚酸 和總皂苷的通關藤提取物。
以下通過本發明所述的本發明中藥提取物的藥效學試驗來進一步闡述本發明所 具有的有益效果。
試驗例一中藥提取物對肝損傷的作用
分別以10.54、5.27、2.63g生藥/kg體重的高、中、低三個劑量灌胃給予小鼠。
1、實驗材料
1. 1受試藥物
本發明中藥提取物(以下簡稱本發明提取物)，1克浸膏約相當于2. 70g生藥。
1. 2劑量設計
本發明提取物臨床人日用量為36 45g生藥，取中值為40. 5g，試驗用劑量按動 物與人公斤體重折算(簡略法大鼠按200g，系數0. 018 ；小鼠按20g，系數0. 0026)，中劑 量約相當于人臨床等效劑量，再按1/2和2倍臨床劑量各設一個劑量組。大鼠灌胃劑量為 7. 30,3. 65、1. 82g生藥/kg，小鼠灌胃劑量為10. 54,5. 27,2. 63g生藥/kg。給予2. 2. 15細胞 藥物劑量以出現細胞毒性以下2個劑量級為最高給藥濃度，5個稀釋度分別為4、2、1、0.5、 0.25g/L0
1. 3藥品與試劑
護肝片，黑龍江省五常葵花藥業有限公司，批號20080631 ；動物給藥劑量按動 物與人公斤體重折算，大鼠臨床等效劑量為0. 4g/kg(ig)，小鼠為0. 6g/kg(ig)。鹽酸左 旋咪唑(左旋咪唑)，山東仁和堂藥業有限公司，批號080702 ；小鼠為40mg/kg(ig)。聯 苯雙酯滴丸，北京協和藥廠，批號08030202 ；橄欖油，國藥集團化學試劑有限公司，批號 F20081006 ；印度墨汁，為北京Solarbio公司產品；刀豆蛋白(ConA)，為美國Sigma公司 產品；ANIT(Alfa Aesar, lot 10137323)；丙氨酸氨基轉換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉換 酶(AST)、總膽紅素(TBIL)均為北京北化精細化學品有限公司臨床診斷試劑分廠產品； Na+-K+-ATP酶試劑盒、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒、MDA測定試劑盒、SOD測定試劑盒(均為 南京建成科技有限公司產品，生產批號20090807)；白細胞介素6(IL-6)放免檢測試劑盒， 由北京普爾偉業生物科技有限公司提供，批號080225 ；其余試劑皆為分析純。
1. 4 儀器
BS120全自動生化儀(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司)；安捷倫-8453紫外 分光光度計(美國惠普公司)；SN-695B型放免γ測量儀(上海日環儀器一廠)；TGL-16C 離心機(上海安亭科學儀器廠)。
1. 5實驗動物
SPF級昆明種小鼠，18 22g。由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提 供，許可證號[SCXK-(軍)，2007-004]。
1. 6檢測指標及方法
血清ALT、AST活性、IL_6含量及肝組織SOD活性和MDA含量均按試劑盒說明書操 作。肝組織病理學觀察40g/L甲醛溶液固定肝組織，石蠟包埋切片，常規蘇木素伊紅(HE) 染色，光鏡下觀察、拍照。
1. 7統計學處理軟件
SPSS公司SPSS for Windows 17.0。采用單樣本方差分析統計方法，各組之間采 用最小二乘法進行兩兩比較。
2方法與結果
2. 1本發明提取物杭刀百^SA(ConA)致小鼠免,瘡肝損傷t駘
取健康小鼠60只隨機分為六組，即正常對照組、ConA模型組、護肝片組、本發明提 取物高、中、低三個劑量組，每組10只。除正常對照組外，其余各組小鼠于實驗首日尾靜脈 注射ConA 20mg/kg后，護肝片組和本發明提取物高、中、低劑量組均灌胃相應藥物，每天1 次，連續5天，末次給藥后4h，模型組和各給藥組小鼠再次尾靜脈注射ConA 20mg/kg，禁食 不禁水，他后眼球后靜脈叢取血，離心分離血清測定ALT、AST活性和IL-6含量；取肝左葉 組織，檢測SOD活性和MDA含量。
表1本發明提取物對ConA致小鼠肝損傷的影響(n = 10)
權利要求
1.一種中藥組合物，其特征在于，所述中藥組合物包括下列重量份的通關藤和鐮葉西 番蓮，其中通關藤為20 150份，鐮葉西番蓮為10 45份。
2.根據權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于所述中藥組合物中通關藤為100 份，鐮葉西番蓮為30份。
3.—種中藥提取物的制備方法，包括下述步驟(1)、分別稱取權利要求1或2所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮；O)、通過下述(i)和(ii)兩種不同路徑獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物，其中(i)、將原料藥通關藤粉碎后，加10 20倍量、濃度為60% 90%的乙醇、回流提取 1 3次，每次提取1 3小時獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；或(ii)、對原料藥通關藤中的總酚酸和總皂苷分別提取，然后將總酚酸和總皂苷混合， 獲得含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物；其中總酚酸是通過用10% 95%乙醇加熱回流 提取或超聲提取獲得；總皂苷是通過溶劑法、沉淀法、膽留醇沉淀法或二相酸水解法中的一 種提取獲得；(3)、將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為20% 95%的乙醇，在溫度為50°C 100°C，按照 料液比1 6 1 60進行提取，提取時間為1 3小時，提取2 3次，獲得含總黃酮的 鐮葉西番蓮提取物；G)、將步驟( 中獲得的含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物與步驟C3)中獲得含總黃 酮的鐮葉西番蓮提取物混合，即得所述的中藥提取物。
4.根據權利要求3所述中藥提取物的制備方法，其特征在于所述步驟( 中的途徑(i)的提取物是通過將原料藥通關藤粉碎后，加15 20倍量、 濃度為60% 80%的乙醇、回流提取3次，每次提取2小時獲得；途徑(ii)中的總酚酸是 通過用10% 95%乙醇超聲提取后進行大孔樹脂精制獲得；所述步驟C3)中將鐮葉西番蓮粉碎后，用濃度為60%的乙醇，在溫度為70°C，按照料液 比1 6 1 60進行提取，提取時間為1 3小時，獲得含總黃酮的鐮葉西番蓮提取物。
5.根據權利要求3或4所述中藥提取物的制備方法，其特征在于步驟( 中途徑(i) 的提取物是通過將原料藥通關藤粉碎后，加20倍量、濃度為60%的乙醇、回流提取3次，每 次提取2小時獲得。
6.一種中藥提取物的制備方法，包括下述步驟(1)、分別稱取權利要求1或2所述重量份的通關藤和鐮葉西番蓮，粉碎后混合；O)、用10% 95%的乙醇，在溫度為30°C 100°C，按照料液比1 6 1 80進行 提取，提取時間為1 3小時，提取2 3次，獲得含總酚酸、總皂苷和總黃酮的中藥提取物。
7.根據權利要求6所述的中藥提取物制備方法，其特征在于步驟O)中用60%的乙 醇，在溫度為70°C，按照料液比1 40進行提取，提取時間為2小時，提取2次，獲得含總酚 酸、總皂苷和總黃酮的中藥提取物。
8.—種中藥提取物，其特征在于所述中藥提取物是由權利要求3 7中任一權利要 求所述的提取物制備方法制備所得。
9.權利要求8所述的中藥提取物在制備抗乙型肝炎病毒、降低轉氨酶水平、調節免疫 和代謝綜合征藥物中的應用。
全文摘要
本發明一種中藥組合物、提取物及其制備方法和應用，屬于中藥提取物及其制備方法技術領域。其中所述中藥組合物包括通關藤和鐮葉西番蓮。所述中藥提取物包括含總酚酸和總皂苷的通關藤提取物與含總黃酮的鐮葉西番蓮提取物。本發明的中藥提取物用于制備抗乙型肝炎病毒、降低轉氨酶水平、調節免疫和代謝綜合征的藥物。本發明具有調節免疫能力，提高肝臟解毒和代謝作用，對乙肝病毒具有一定的抑制作用，具有防治多種因素實驗性脂肪肝的作用，并具有抗炎、提高免疫功能的藥理作用。
文檔編號A61P37/02GK102028725SQ20101059893
公開日2011年4月27日 申請日期2010年12月22日 優先權日2010年12月22日
發明者何南, 劉峰群, 周旭, 韓晉 申請人:中國人民解放軍第三○二醫院