作為具有新功能益處的母乳等同性不可消化低聚糖的巖藻糖基乳糖的制作方法

專利名稱：作為具有新功能益處的母乳等同性不可消化低聚糖的巖藻糖基乳糖的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有不可消化的低聚糖的嬰兒營養物，具體涉及其用于刺激免疫系統的用途。
背景技術：
與嬰兒配方喂養的嬰兒相比，人乳喂養的嬰兒具有較低的感染發生率，所述感染包括病毒感染。人乳中的許多組分，包括免疫球蛋白(例如IgA)、白細胞介素(IL)-l、IL-6、 IL-8、IL-10、干擾素-γ (IFN-γ)、免疫活性細胞、轉化生長因子-β (TGF-β )、乳鐵蛋白、 核苷酸和不可消化的低聚糖(NDO)，被認為參與對抗腸道或呼吸系統病原體感染的保護作用。發現TGF-β和膳食核苷酸是負責增加自然殺傷細胞活性的組分。NDO是人乳的主要組分并且是人乳天然免疫系統的主要成分。人NDO促進以雙歧桿菌(bifidobacteria)和乳酸桿菌(lactcAacilli)為主的有益微生物叢的生長。還已知一些人NDO能夠直接防止病原體和毒素的粘附。人乳是優選的嬰兒食物。但是，母乳喂養并不總是可行或合乎需要的。在所述情況下，嬰兒配方或后續配方(follow on formulae)是一個良好的替代品。這些配方應該具有最佳的組成以便盡可能地模擬母乳的有益效果。WO 2007/067053公開了包含植物來源的益生元菊粉和半乳糖醛酸寡糖以及由乳糖合成的益生元反式低聚半乳糖以減少感染的嬰兒配方。WO 2007/010084公開了用于進行免疫刺激的甘露聚糖多糖和甘露聚糖低聚糖。US 6，576，251公開了用于通過腸內途徑或腸胃外途徑給予的飲食食物的碳水化合物混合物，所述混合物包含(a)單糖、(b)低聚糖(至多為己糖)和(c)多糖(至少為庚糖)，其中所述a、b、c的混合比例(按重量計)為a = l，b = 40至1000，c = 1至50，并且所述混合物包含至少1個重量百分比的巖藻糖，其以游離的形式并且/或者與低聚糖和 /或多糖結合的形式存在。據報道所述碳水化合物混合物既具有營養作用也具有生物學作用，其比單獨成分的相應作用明顯更大。EP 1 629 850提供了一種用于治療和/或預防呼吸道感染和/或呼吸道感染疾病的方法和組合物，所述方法包括對哺乳動物口服給予組合物，所述組合物包含一種含不可消化低聚糖和至少5wt%可消化半乳糖的半乳糖。EP 2 072 052涉及一種適合用于預防免疫缺陷個體中的機會性感染的組合物，所述組合物包含益生元和巖藻糖基化低聚糖，所述巖藻糖基化低聚糖選自2’ -巖藻糖基乳糖、3’ -巖藻糖基乳糖、二巖藻糖基乳糖、乳糖基-N-巖藻戊糖、乳糖基-N-巖藻己糖、巖藻糖基乳糖基-N-己糖和巖藻糖基乳糖基-N-新己糖。所述文獻進一步公開了所述組合物在預防免疫缺陷個體的機會性感染中的用途
發明內容
人乳與家畜乳的區別在于人乳包含更多的NDO并且區別在于所述NDO在結構上是不同的。人NDO組是非常復雜的，因為它代表超過130種具有多種糖組成的不同化合物的異質性組。由于其復雜的和多形態的結構，所以大規模合成是復雜的。因此，制備具有與人乳等同的NDO組成的嬰兒營養物在技術上和經濟上尚不可行。最近，新技術已可用于化學合成與具體人NDO等同的具體類型的ND0，從而提供在體內和體外測定中測試具體人NDO的免疫調節能力的機會。發明人意外地發現巖藻糖基乳糖(fucosyllactose ；FL)——一種在人母乳中大量存在的并具有較簡單結構的低聚糖——可特別地增加自然殺傷(NK)細胞的數目并從而增加自然殺傷細胞的活性。NK細胞在對抗病毒感染和腫瘤細胞的天然防御中起著重要作用。 特定低聚糖負責增加NK細胞活性的這一發現使得現在能夠設計含FL (更具體為2’-FL)的營養組合物用于增加NK細胞和/或NK細胞活性。
具體實施例方式因此，本發明涉及一種刺激受試者中的NK細胞活性和/或NK細胞增殖的方法，所述方法包括對所述受試者給予一種含巖藻糖基乳糖的組合物，所述組合物不是人乳。在本發明的一個實施方案中，本發明的方法是用于刺激受試者中的NK細胞活性和/或NK細胞增殖的非醫療方法。在一個實施方案中，本發明方法用于治療和/或預防受試者中的病毒感染。本發明還涉及一種治療和/或預防受試者中的病毒感染的方法，所述方法包括對所述受試者給予含巖藻糖基乳糖的組合物，所述組合物不是人乳。本發明還可被表述為巖藻糖基乳糖在制備用于刺激NK細胞活性和/或NK細胞增殖的組合物中的用途，所述組合物不是人乳。在一個實施方案中，所述組合物用于治療和/ 或預防病毒感染。本發明還可被表述為巖藻糖基乳糖在制備用于治療和/或預防病毒感染的組合物中的用途，所述組合物不是人乳。本發明還可被表述為一種含巖藻糖基乳糖的用于刺激NK細胞活性和/或NK細胞增殖、特別是用于在刺激NK細胞活性和/或NK細胞增殖中使用的組合物，所述組合物不是人乳。在一個實施方案中，所述組合物用于治療和/或預防病毒感染。本發明還可被表述為一種含巖藻糖基乳糖的用于治療和/或預防病毒感染、特別是用于在治療和/或預防病毒感染中使用的組合物，所述組合物不是人乳。本發明還涉及一種通過刺激自然殺傷(NK)細胞活性和/或NK細胞增殖而治療和 /或預防感染的方法，所述方法包括對所述受試者給予一種含巖藻糖基乳糖的組合物，所述組合物不是人乳。本發明還可被表述為巖藻糖基乳糖在制備用于通過刺激自然殺傷(NK)細胞活性和/或NK細胞增殖而治療和/或預防感染的腸內組合物中的用途，所述組合物不是人乳。本發明還可被表述為一種通過刺激自然殺傷(NK)細胞活性和/或NK細胞增殖而用于治療和/或預防感染、特別是在治療和/或預防感染中使用的含巖藻糖基乳糖的組合物，所述組合物不是人乳。本發明還涉及一種用于增強接種應答的方法，所述方法包括對所述受試者給予一種含巖藻糖基乳糖的組合物，所述組合物不是人乳。在一個實施方案中，所述方法用于增強對病毒抗原接種的接種應答。本發明還可被表述為巖藻糖基乳糖在制備用于增強接種應答的腸內組合物中的用途。在一個實施方案中，所述組合物用于增強對病毒抗原接種的接種應答。本發明還可被表述為一種用于增強接種應答、特別是用于在增強接種應答中使用的含巖藻糖基乳糖的組合物。在一個實施方案中，所述組合物用于增強對病毒抗原接種的接種應答。根據本發明方法給予的或根據本發明使用的組合物優選經腸給予，更優選口服給予。或換言之所述組合物優選用于經腸給予、優選用于口服給予；或換言之所述組合物是腸內組合物，優選口服組合物。巖藻糖基乳糖本發明組合物包含巖藻糖基乳糖。巖藻糖基乳糖(FL)是在人乳中存在的不可消化的低聚糖。它不存在于牛乳中。它由連接在一起三個單糖單元巖藻糖、半乳糖和葡萄糖構成。經β 1 — 4鍵(linkage)連接至葡萄糖單元的半乳糖單元稱為乳糖。巖藻糖單元經 α 1，2鍵而連接至乳糖的半乳糖單元(2’ -巖藻糖基乳糖，2’ -FL)或經α 1，3鍵而連接至乳糖的葡萄糖單元(3-巖藻糖基乳糖，3-FL)。本發明組合物優選包含2’ -FL02，_FL，優選 α -L-Fuc-(1 — 2)-β -D-Gal-(1 — 4)-D_Glc，和 3-FL，優選 α -L-Fu c-(1 —⑴-[β -D-Gal- (1-4)] -D-Glc)，可購自例如Mgma-Aldrich。或者，它們可自人乳中分離，例如如 Andersson&Donald, 1981，J Chromatogr. 211 :170-1744 中所述；或由遺傳修飾的微生物產生，例如如 Albermann et al，2001，Carbohydrate Res. 334 :97-103 中所述。優選地，所述組合物包含Img至3g巖藻糖基乳糖/100ml，更優選包含IOmg 至2g/100ml，甚至更優選20mg至IOOmg FL/100ml。以干重計，所述組合物優選地包含 0. 007wt %至20wt %的巖藻糖基乳糖，更優選0. 07wt %至IOwt %，甚至更優選0. 15wt %至
的巖藻糖基乳糖。更少量的巖藻糖基乳糖在增加NK細胞和/或增加NK細胞活性方面效果較低，而過高的量將導致該產品的不必要的高成本。除FL之外的不可消化的低聚糖本發明組合物優選地包含除FL之外的不可消化的低聚糖(NDO)。優選地，所述除 FL之外的NDO刺激雙歧桿菌和/或乳酸桿菌的生長，更優選雙歧桿菌。雙歧桿菌和/或乳酸桿菌的含量增加會刺激形成健康的腸內微生物叢。所述NDO優選地在腸中不被消化，或者僅被部分地消化，所述消化是通過存在于人上消化道(特別是小腸和胃)中的酸或消化酶作用進行的，并且所述NDO會被人腸內微生物叢發酵。例如，人們認為蔗糖、乳糖、麥芽糖和常見的麥芽糖糊精是可消化的。本發明組合物優選地包含DP范圍在2-250、更優選2-60的不可消化的低聚糖。所述不可消化低聚糖優選地為選自以下的至少一種、更優選為至少兩種、優選為至少三種低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、阿拉伯半乳寡糖、低聚葡萄糖、低聚殼糖(chito-oligosaccharides)、葡糖甘露寡糖、半乳甘露寡糖、甘露聚糖寡糖 (marman-oligosaccharide)、含唾液酸的低聚糖，以及糖醛酸低聚糖。低聚果糖組包括菊粉，低聚半乳糖組包括反式低聚半乳糖或低聚半乳糖，低聚葡萄糖組包括環糊精、龍膽寡糖和黑曲霉寡糖和不可消化的聚葡萄糖(polydextrose)，半乳甘露寡糖組包括部分水解的瓜爾膠，糖醛酸低聚糖組包括半乳糖醛酸寡糖和果膠降解產物。更優選地，本發明組合物包含選自以下的至少一種、更優選為至少兩種、最優選為三種低聚果糖、β-低聚半乳糖和糖醛酸低聚糖。更優選地，所述組合物包含β-低聚半乳糖。在一個優選實施方案中，所述組合物包含菊粉和短鏈低聚果糖的混合物。在一個優選實施方案中，所述組合物包含低聚半乳糖和低聚果糖的混合物，其中低聚果糖選自短鏈低聚果糖和菊粉，更優選菊粉。優選地，至少兩種不同的不可消化低聚糖的混合物可更大程度地刺激腸內微生物叢的有益細菌。優選地，所述兩種不同的不可消化低聚糖(優選低聚半乳糖和低聚果糖)的混合物中兩種低聚糖的重量比在25-0. 05之間，更優選在20-1之間。低聚半乳糖，優選β -低聚半乳糖，更能夠刺激雙歧桿菌。優選地，本發明組合物包含聚合度(DP)為2-10的低聚半乳糖(優選β -低聚半乳糖)和/或DP為2-60的低聚果糖。低聚半乳糖優選地為低聚半乳糖。在一個特別優選的實施方案中，本發明組合物包含β -低聚半乳糖([半乳糖]η-葡萄糖；其中η為2-60的一個整數，即2、3、
4、5、6、......、59、60 ；優選地η選自2、3、4、5、6、7、8、9和10)，其中半乳糖單元主要經β
鍵而連接在一起。低聚半乳糖也稱作反式低聚半乳糖(TOS)。低聚半乳糖以例如 Vivinal(TM)的商標名(Borculo Domo Ingredients, Netherlands)市售。另一合適來源為 Bi2Munno (Classado)。優選地，TOS包含以總鍵數計至少80%的β_1，4和β _1，6鍵，更優選至少90%。低聚果糖是包含DP或平均DP為2-250、更優選2-100、甚至更優選10_60的 β -連接的果糖單元鏈的ND0。低聚果糖包括菊粉、果聚糖和/或混合類型的多聚果糖 (polyfructan) 0尤其優選的低聚果糖是菊粉。適合用于所述組合物的低聚果糖也是市售可得的，例如Raftiline HP (Orafti)。優選地，低聚果糖具有的平均DP大于20。糖醛酸低聚糖優選地獲自果膠降解產物。因此本發明組合物優選地包含DP為 2-100的果膠降解產物。所述果膠降解產物優選地是由蘋果果膠、甜菜果膠和/或柑橘果膠制備。優先地，糖醛酸低聚糖是半乳糖醛酸寡糖。優選地，所述組合物包含FL和選自低聚半乳糖和糖醛酸低聚糖中的一種。除FL之外，最優選地，所述組合物包含β -低聚半乳糖、低聚果糖和糖醛酸低聚糖。發現所述結合物與巖藻糖基乳糖(特別是2’ -巖藻糖基乳糖)起協同作用。β-低聚半乳糖低聚果糖糖醛酸低聚糖的重量比優選地為00- 1 (1-20)，更優選地為^)-2) 1 (1-10)，甚至更優選地為O0-2) 1 (1-3)、甚至更優選地為 (12-7) 1 (1-2)。最優選地，所述重量比為約9 1 1. 1。優選地，FL與β -低聚半乳糖(優選TOQ的重量比為5-0. 05，更優選地為5-0. 1，更優選地為2-0. 1。優選地，FL與低聚果糖(優選菊粉)的重量比為10-0. 05，更優選地為10-0. 1，更優選地為2-0. 5。優選地，FL與糖醛酸低聚糖(優選衍生自果膠)的重量比為10-0. 05，更優選地為10-0. 1，更優選地為2-0. 5。優選地，所述組合物包含80mg至4g的不可消化低聚糖(包括巖藻糖基乳糖)/100ml，更優選地含150mg至2g/100ml，甚至更優選地包含300mg至Ig的不可消化低聚糖/100ml。以干重計，所述組合物優選地包含0.25wt%至25wt%的不可消化低聚糖(包括巖藻糖基乳糖)，更優選為0. 5wt %至IOwt %，甚至更優選為1. 5wt %至7. 5wt %。更低量的不可消化低聚糖在刺激微生物叢中的有益細菌方面效果較小，而過高量將導致胃氣脹和腹部不適的副作用。
營養組合物 優選地，所述含巖藻糖基乳糖的組合物是營養組合物。本發明組合物不是人乳。本發明組合物優選地經腸內給予，更優選地口服給予。本發明組合物優選為營養配方，優選嬰兒配方。本發明組合物可有利地用作嬰兒的完全營養物。本發明組合物優選包含脂質組分、蛋白質組分和碳水化物組分，并且本發明組合物優選地以液態形式給予。本發明包括干燥食物，優選粉末，其附有關于將所述干燥食物混合物與合適液體(優選水)混合的說明書。本發明有利地提供了一種組合物，其中脂質組分提供5-50%的總卡路里，蛋白質組分提供5-50%的總卡路里，可消化的碳水化物組分提供15-85%的總卡路里。本發明有利地提供了一種組合物，其中脂質組分提供20-50%的總卡路里，蛋白質組分提供5-30% 的總卡路里，可消化的碳水化合物組分提供30-70%的總卡路里。優選地，在本發明組合物中，脂質組分提供35-50%的總卡路里，蛋白質組分提供7. 5-12. 5%的總卡路里，可消化的碳水化物組分提供40-55%的總卡路里。為計算蛋白質組分的％總卡路里，需要考慮由蛋白質、肽和氨基酸所提供的總能量。本發明組合物優選地包含至少一種選自以下的脂質動物脂質(除了人脂質以外)和植物脂質。優選本發明組合物包含植物脂質與至少一種選自以下的油的結合物 魚油、動物油、藻油、真菌油和細菌油。本發明組合物優選地包含長鏈多不飽和脂肪酸 (LC-PUFA)。LC-PUFA是含兩個或更多個不飽和鍵的長度為20- 個碳原子、優選20或22 個碳原子的脂肪酸和脂肪酰基鏈。更優選地，本發明組合物包含二十碳五烯酸(EPA，n-3)、 二十二碳六烯酸(DHA，n-3)和/或花生四烯酸(ARA，n-6)。優選地，本發明組合物包含以總脂肪含量計至少0. Iwt. %，優選至少0. 25wt. %, 更優選至少0. 6wt. %，甚至更優選至少0. 75wt. %的具有20和22個碳原子的LC-PUFA。LC-PUFA (特別是具有20和22個碳原子的LC-PUFA)的含量優選地不超過總脂肪含量的6wt%，更優選地不超過3wt. %，因為需要盡可能接近地模擬人乳。LC-PUFA可作為游離脂肪酸，以甘油三酯形式、甘油二酯形式、甘油單酯形式、磷脂形式，或作為上述一種或多種的混合物來提供。本發明組合物優選地包含以總脂肪計5-75wt%、優選10-50wt%的多不飽和脂肪酸。在營養組合物中所使用的蛋白質優選地選自非人的動物蛋白質(優選乳蛋白質)、植物蛋白質(優選大豆蛋白質和/或稻蛋白質)、其水解產物、其游離氨基酸以及它們的混合物。本發明組合物優選地包含酪蛋白、乳清、水解的酪蛋白和/或水解的乳清蛋白。 優選地，所述蛋白質包含完整蛋白質，更優選完整牛乳清蛋白和/或完整牛酪蛋白蛋白質。本發明組合物優選地包含選自以下的可消化的碳水化合物蔗糖、乳糖、葡萄糖、 果糖、玉米糖漿固體、淀粉和麥芽糖糊精，更優選地為乳糖。從以上可以看出，同樣重要的是所述液體食物不具有過度的卡路里密度，但仍提供足夠的卡路里以喂養受試者。因此，所述液體食物優選地具有在0. l-2.5kcal/ml之間的卡路里密度、甚至更優選在0. 5-1. 5kcal/ml之間、最優選在0. 6-0. 8kcal/ml之間的卡路里
也/又。
優選地，本發明組合物包含核苷酸和/或核苷，更優選核苷酸。優選地，所述組合物包含5’ -單磷酸胞苷、5’ -單磷酸尿苷、5’ -單磷酸腺苷、5’ -單磷酸鳥苷和/或5’ -單磷酸肌苷，更優選5’ -單磷酸胞苷、5’ -單磷酸尿苷、5’ -單磷酸腺苷、5’ -單磷酸鳥苷和 5，-單磷酸肌苷。優選地，所述組合物包含5-100mg、更優選5-50mg、最優選10_50mg核苷酸和/或核苷/100克所述組合物干重。核苷酸和/或核苷的存在有利地刺激NK細胞活性。 人們認為核苷酸和/或核苷與本發明組合物的巖藻糖基乳糖起協同作用。應用在一個實施方案中，本發明組合物用于刺激自然殺傷細胞活性和/或自然殺傷細胞增殖。在一個實施方案中，本發明組合物用于治療和/或預防病毒感染。在一個實施方案中，用于刺激自然殺傷細胞活性和/或自然殺傷細胞感染，并且/或者用于治療和/或預防病毒感染的所述組合物是用于給予HIV患者、年長患者和/或腫瘤患者。NK細胞是一類細胞毒性淋巴細胞，其構成先天性免疫系統的主要組分。NK細胞在抵御細胞內感染的防御中起著重要作用。NK細胞被定義為在人體中不表達T-細胞抗原受體(TCR)或Pan T標記⑶3或表面免疫球蛋白(Ig)B細胞受體，但通常表達表面標記 CD16 (FcyRIII)和CD56的大顆粒狀淋巴細胞。它們被稱作“自然殺手(nature killer)”， 因為最初的觀點是它們不需要活化以便殺傷不含I型主要組織相容性復合體(MHC)的“自身”標記的細胞。NK細胞具有兩種主要類型的效應子作用細胞殺傷和分泌細胞因子。增加NK細胞活性(通過增加NK細胞的數目和/或增加NK細胞的具體活性)導致對抗病毒感染的抵抗力增加。因此，含巖藻糖基乳糖的營養組合物優選地用于預防和/或治療病毒感染，更優選由以下病毒引起的病毒感染正粘病毒科尤其是流感病毒、皰疹病毒科、輪狀病毒、巨細胞病毒、杯狀病毒科、呼吸道合胞病毒、人免疫缺陷病毒和/或鼻病毒。因此，含巖藻糖基乳糖的營養組合物優選地用于預防和/或治療病毒感染，更優選地所述病毒感染為普通感冒、流行性感冒、麻疹、水痘、病毒性腹瀉、病毒性胃腸炎、HIV感染和/或病毒性呼吸道感染。在一個優選實施方案中，本發明用于HIV患者。在一個實施方案中，本發明涉及對HIV患者提供營養物。本發明組合物用于HIV患者是有利的，因為HIV患者具有降低的自然殺傷細胞活性。因此，含巖藻糖基乳糖的營養組合物用于嬰兒配方是特別有益的。在一個實施方案中，本發明涉及對嬰兒提供營養物。配方喂養的嬰兒與成人相比具有發育不全的免疫系統，并且與人乳喂養的嬰兒相比更易于發生病毒感染。優選地，所述嬰兒為0-36個月大，更優選為0-18個月大，甚至更優選為0-12個月，最優選為0-6個月大。嬰兒越小，免疫系統發育越不健全。含巖藻糖基乳糖的組合物甚至更有利地用于早產嬰兒和/或出生體重非常低或低的嬰兒，因為這些嬰兒甚至更容易受到和/或易于發生病毒感染。含巖藻糖基乳糖的組合物甚至更有利地用于經由剖腹產術分娩的嬰兒。剖腹產術出生的嬰兒是在醫院中具有更多病原體的環境中出生的，所述病原體是由母親給予嬰兒的抗體所無法有效抵抗的。剖腹產術出生的嬰兒具有延遲的和次優的大腸腸道定殖并因此還更易于發生腸內感染。含巖藻糖基乳糖的組合物可有利地用于年長者的營養物。在一個實施方案中，本發明涉及對年長者提供營養。年長者是年齡為陽歲或更高的人，特別是年齡為65歲或更高的人。已證實年長者具有比健康年青成年個體更低的自然殺傷細胞活性。年長者尤其易發生病毒感染并發癥。在一個優選的實施方案中，本發明用于治療和/或預防年長者中的免疫衰老。年長者更易于發生腫瘤。NK細胞活性抑制腫瘤細胞增殖。在一個優選實施方案中，本發明用于癌癥患者的營養物。腫瘤患者具有比健康年青成年個體更低的自然殺傷細胞活性。實施例實施例1 材料和方法對6-8周齡雌性C57BL/6小鼠(Charles River)給予半純化的基于AIN-93G的膳食(Research Diet Service, Wijk bij Duurstede, the Netherlands),其包含1)比例為 9 1 1.1 的β -低聚半乳糖(GOS ;source Vivinal GOS, Borculo Domo)、低聚果糖(F0S ；source RaftilineHP, Orafti)和半乳糖酸酸寡糖(源自 AOS)。AOS 是果膠(Siidzucker AG, Mannheim, Germany)制備的，DP 為 1-20。其包含以總重量計約75%半乳糖醛酸低聚物；2) lwt%乳糖新四糖(lactoneotetraose，LNnT)，3) lwt% 3'-唾液酸基乳糖(3，-SL)，或4) lwt% 2'-巖藻糖基乳糖(2，-FL)。所有組均與未補充的對照膳食進行比較。在第一次接種之前14天開始膳食補充， 持續至試驗結束，即第一次接種之后31天。接禾中試驗是使用 Influvac (Solvay Pharmaceuticals, ffeesp, the Netherlands) 從2005/2006季進行。小鼠接受初次接種和加強接種，其包括皮下注射(sc)總體積為 100μ1的1 1的疫苗和佐劑的混合物。所述加強接種是在初次接種后第21天進行。所述試驗在加強接種后第10天結束。在試驗結束時采集血液樣本。所包括的陰性對照組接受總體積為100μ1的1 1的PBS和佐劑的混合物注射。為測定NK細胞的百分比，將細胞用FITC-標記的抗小鼠⑶3mAb結合PE-標記的抗小鼠NKl. ImAb進行標記。脾細胞懸液中的NK細胞細胞毒性是使用標準的51Cr釋放測定法進行測定的。簡言之，NK細胞細胞毒性是使用YAC-I靶細胞進行測試。特異性51Cr釋放百分比計算為特異性裂解的百分比= (試驗釋放-自發釋放)/(總洗滌劑釋放-自發釋放)X100。自發釋放數值總是低于總裂解的15%。調節T細胞(Treg)的百分比是通過使用別藻藍蛋白(APC-)標記的抗小鼠 ⑶3mAb、Pe-Cy5-標記的抗小鼠⑶4mAb和藻紅蛋白(PE)-標記的抗小鼠⑶25mAb的流式細胞術(FACSCalibur)和異硫氰酸熒光素(FITC)-標記的FoXp3mAb的細胞內染色，根據制造商(eBiosciences，San Diego, CA)提供的說明書進行測定。統計學分析是使用GraphPadPrism軟件進行。測試組和對照組之間的統計學差異是通過ANOVA進行分析，如果多組與單一(對照)組進行比較時則用事后鄧尼特檢驗(post hoc Dunnett' s test)。在所有試驗中？_值< 0. 05被認為是顯著的。結果將三種化學合成的人低聚糖的免疫調節作用與G0S/F0S/A0S進行比較。與對照喂養的動物相比，補充G0S/F0S/A0S、LNnT,2' -FL或3，-SL導致DTH反應——THl依賴性參數——的顯著增加。值得注意的是，與對照和補充G0S/F0S/A0S的小鼠相比，NK細胞在脾臟中的百分比在補充人低聚糖的小鼠中顯著增加，參見表1。使用2’-FL時該作用最高。為檢測NK細胞百分比在補充人低聚糖的組中的增加是否還與功能性活性相關，在小鼠脾細胞中測量NK 細胞活性。與對照相比，在補充2’ -FL的小鼠脾細胞中檢測到顯著增加的NK細胞活性，參見表1。表1 與人乳NDO類似的膳食NDO對NK細胞和NK細胞活性的作用
權利要求
1.巖藻糖基乳糖在制備用于刺激自然殺傷(NK)細胞活性和/或NK細胞增殖的腸內組合物中的用途，所述組合物不是人乳。
2.巖藻糖基乳糖在制備用于治療和/或預防病毒感染的腸內組合物中的用途，所述組合物不是人乳。
3.巖藻糖基乳糖在制備用于通過刺激自然殺傷(NK)細胞活性和/或NK細胞增殖而治療和/或預防感染的腸內組合物中的用途，所述組合物不是人乳。
4.巖藻糖基乳糖在制備用于增強接種應答，優選地用于增強對病毒抗原接種的接種應答的腸內組合物中的用途。
5.前述權利要求任一項的用途，其中所述組合物用于給予嬰兒、HIV患者、年長者和/ 或腫瘤患者。
6.前述權利要求任一項的用途，用于向嬰兒提供營養。
7.前述權利要求任一項的用途，用于向HIV患者、年長者和/或腫瘤患者提供營養。
8.前述權利要求任一項的用途，其中所述組合物另外包含至少一種選自以下的物質 β -低聚半乳糖、低聚果糖和糖醛酸低聚糖。
9.前述權利要求任一項的用途，其中巖藻糖基乳糖為2’-巖藻糖基乳糖。
10.前述權利要求任一項的用途，其中所述組合物包含以所述組合物干重計 0. 07-lwt%的巖藻糖基乳糖。
11.前述權利要求任一項的用途，其中所述組合物包含以總能量計5-50%的蛋白質、 15-85 %的可消化碳水化合物和5-50 %的脂肪。
全文摘要
本發明涉及用于刺激NK細胞的具有巖藻糖基乳糖的營養組合物。所述組合物適合用于嬰兒。
文檔編號A61K31/702GK102497869SQ201080040930
公開日2012年6月13日 申請日期2010年7月12日 優先權日2009年7月15日
發明者A·J·納奧塔, B·斯塔爾, E·薩曼, J·加森, S·德魯亞爾 申請人:N.V.努特里奇亞