專利名稱：用于治療自身免疫性病癥的胰高血糖素樣肽-1受體(glp-1r)激動劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及包括多發性硬化在內的影響中樞神經系統的自身免疫性疾病的治療。 本發明提供用于減少中樞神經系統組織的白細胞侵入的胰高血糖素樣肽-I受體(GLP-IR) 激動劑。
背景技術：
多發性硬化(MS)是中樞神經系統(CNS)的脫髓鞘自身免疫性疾病，其特征在于炎癥、脫髓鞘和軸突損傷。該疾病在全世界影響超過IXIO6人，并且在女性中比男性中更普遍2倍。MS的癥狀通常在20-40歲之間出現。MS的病因不清楚，雖然已研究該疾病的特征。這類特征包括損傷CNS組織，小膠質細胞的活化，促炎細胞因子產生，T細胞遷移和克隆型擴張的停滯，改變的巨噬細胞效應子功能，MHC的產生、上調，以及浸潤T細胞的直接CNS攻擊。實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)被認為是MS的標準模型。小鼠疾病模型已用來研究MS 的病因和評價其治療藥物(Aharoni,R. et al. ,2005, J. Neurosci. 25 :8217-28)。 EAE的臨床特征包括通過大量浸潤淋巴細胞和巨噬細胞的CNS的炎癥和脫髓鞘。用髓鞘的幾種不同蛋白組分(包括髓鞘堿性蛋白(MBP)、蛋白脂質蛋白(PLP)和髓鞘少突膠質細胞糖蛋白(MOG))主動免疫小鼠誘導自身免疫性抗體的產生和上行性麻痹的臨床癥狀。該疾病可以是急性或慢性的，取決于小鼠品系和用于免疫的髓鞘蛋白。EAE已用來研究MS的病因和評價其治療藥物(Aharoni, R. et al.)。MS大部分由T細胞對髓鞘(包括神經組織中豐富的脂質和幾種蛋白)的應答導致。脫髓鞘和臨床麻痹由CNS組織被具有髓鞘抗原特異性的Thl和Thl7表型的T細胞侵入所導致。Thl細胞產生炎性細胞因子，包括TNF-α和IFN-Y。IL-17表達在患有MS的患者以及患有類風濕性關節炎和腸激惹疾病的患者中增加。(Komiyama, Y. et al. , 2006, J. Immunol. 177, 566-573 ；Matusevicius, D. et al.，1999,Mult. Scler. 5,101-104.)這表明 Thl7細胞在自身免疫性疾病中的致病作用。CNS的損傷還可能由其他免疫應答引起，包括自身免疫性抗體的產生和補體活化。MS和EAE的早期和晚期涉及B-細胞，在所述疾病的整個過程中發現各種同種型的MBP-特異性和MOG-特異性抗體。制備自腦和脊髓組織的切片表現出白細胞侵入(特別是淋巴細胞和巨噬細胞)和神經系統的下層組織的破壞)。
胰高血糖素樣肽(7-36)酰胺(GLP-I)在大鼠和人中均為胰高血糖素 (glucoincretin) (Dupre and Ebert and Creutzfeld,1987, Diabetes Metab. Rev. 3 ； Mojsov et al.，1986，J. Biol. Chem. 261 :11880)。除了增加胰島素分泌和減少胰高血糖素分泌，30-氨基酸GLP-I肽刺激胰島素原基因轉錄，減慢胃排空時間，并且減少食物攝入。 GLP-I通過結合至胰高血糖素樣肽I受體(GLP-IR)來發揮其生理效應。GLP-IR屬于B類受體G蛋白偶聯受體(GPCR)超家族亞類，其調控許多重要的生理和病理生理過程。GLP-IR 是偶聯至G-蛋白活化、增加的cAMP生成以及PKA的活化的七跨膜受體。還有通過GLP-IR 啟動的PKA獨立的應答。對GLP-I的作用的其他應答包括例如胰細胞增殖和擴張，伴隨著細胞凋亡的減少。此外，GLP-I活性可以導致胰細胞中葡萄糖轉運蛋白-2 (GLUT2) 和葡糖激酶基因的表達增加。GLP-I還是孤束核(NTS)的尾區中由神經元合成的神經肽(Jin，S. L. et al.， 1988，J Comp Neurol. 271 :519-532)。GLP-I-免疫反應性纖維和GLP-1R看來在整個腦中廣泛表達(Jin, S. L. et al. , 1988 ；Larsen, P. J. et al. , 1997, Neuroscience 77 :257-270 ； Merchenthaler, I. et al.，1999，J Comp Neurol 403 :261-280)。GLP-1R 缺陷小鼠在給予紅藻氨酸鹽之后具有提高的發作嚴重程度和神經元損傷，Glplr基因轉移入海馬體細胞后具有表型校正(During, M. J. et al. ,2003, Nat Med. 9 (9) :1173-9)。發明概沭在一方面，本發明提供一種減少中樞神經系統組織的白細胞侵入的方法，所述方法包括向需要這樣的治療的哺乳動物給予包含對于活化GLP-IR有效的量的GLP-IR激動劑的組合物，從而減少中樞神經系統組織的白細胞侵入。本發明進一步提供GLP-IR激動劑在制備用于減少哺乳動物的中樞神經系統組織的白細胞侵入的藥物中的用途。本發明進一步提供GLP-IR激動劑在制備用于減少哺乳動物中的Thl和Thl7細胞數量的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述哺乳動物患有自身免疫性病癥。在一實施方案中，所述自身免疫性病癥為實驗性自身免疫性腦脊髓炎。在另一實施方案中，所述自身免疫性病癥為多發性硬化。在其他實施方案中，所述自身免疫性病癥與免疫排斥反應、移植物抗宿主疾病、葡萄膜炎、視神經病、視神經炎、橫貫性脊髓炎、炎性腸病、類風濕性關節炎、關節強硬性脊椎炎、系統性紅斑性狼瘡、重癥肌無力或突眼性甲狀腺腫有關。在優選實施方案中，所述哺乳動物為人。在一些實施方案中，給予包含GLP-IR激動劑的組合物減少哺乳動物淋巴結中Thl 和/或Thl7細胞的數量。在一些實施方案中，給予包含GLP-IR激動劑的組合物減少哺乳動物淋巴結中的Terll9+類紅細胞。在優選實施方案中，侵入白細胞包括T細胞和巨噬細胞。在特定實施方案中，侵入白細胞包括CD3表達和CD68表達白細胞。在優選實施方案中，所述中樞神經系統組織為腦組織或脊髓組織。在一些實施方案中，所述GLP-IR激動劑為0AP-189。在其他實施方案中，所述 GLP-IR激動劑為DPP-4抑制劑。在其他實施方案中，所述GLP-IR激動劑為抗GLP-IR激動劑抗體。在一些實施方案中，所述GLP-IR激動劑是天然存在的GLP-IR激動劑。在一些實施方案中，所述天然存在的GLP-IR激動劑為毒蜥外泌肽-4(eXendin-4)。在相關實施方案中，所述天然存在的GLP-IR激動劑包含毒蜥外泌肽-4的片段或衍生物。在一些實施方案中，所述毒蜥外泌肽_4的片段或衍生物結合并活化GLP-1R。在一些實施方案中，所述GLP-IR激動劑包含GLP-IR激動劑抗體綴合物(“GAC”)， 其包含GLP-IR激動劑肽和抗體。在相關實施方案中，所述GAC可以具有以下結構
權利要求
1.一種減少中樞神經系統組織的白細胞侵入的方法，所述方法包括向需要這樣的治療的哺乳動物給予包含對于活化GLP-IR有效的量的胰高血糖素樣肽-I受體(GLP-IR)激動劑的組合物，從而減少中樞神經系統組織的白細胞侵入。
2.如權利要求I所述的方法，其中所述哺乳動物患有自身免疫性病癥。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述自身免疫性病癥為多發性硬化。
4.如權利要求2所述的方法，其中所述自身免疫性病癥與免疫排斥反應、移植物抗宿主疾病、葡萄膜炎、視神經病、視神經炎、橫貫性脊髓炎、炎性腸病、類風濕性關節炎、關節強硬性脊椎炎、系統性紅斑性狼瘡、重癥肌無力或突眼性甲狀腺腫有關。
5.如權利要求I所述的方法，其中所述哺乳動物為人。
6.如權利要求I所述的方法，其中所述GLP-IR激動劑為0AP-189。
7.如權利要求I所述的方法，其中所述GLP-IR激動劑為DPP-4抑制劑。
8.如權利要求I所述的方法，其中所述GLP-IR激動劑為抗GLP-IR激動劑抗體。
9.如權利要求I所述的方法，其中所述GLP-IR激動劑包含毒蜥外泌肽-4的片段或衍生物，其中所述毒蜥外泌肽_4的片段或衍生物結合并活化GLP-1R。
10.如權利要求I所述的方法，其中所述GLP激動劑為GLP-IR激動劑-抗體綴合物 (GAC)，其包含GLP-IR激動劑肽和抗體。
11.如權利要求10所述的方法，其中所述GAC具有以下結構其中所述肽具有式=R1-EH1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 X10 S11 X12 X13 X14 E15 X16 X17 A18 X19X20 X21 F22 X23 X24 X25 X26 X27 X28 X29 X30 X31 X32 X33 X34 X35 X36 X37 X38 X39 X40 (SEQ ID NO 3)]_R2，其中R1 為不存在、CH3> C (O) CH3> C (O) CH2CH3、C (O) CH2CH2CH3 或 C (O) CH(CH3) CH3 ；R2 為 OH、NH2, NH (CH3)、NHCH2CH3^ NHCH2CH2CH3^ NHCH (CH3) CH3> NHCH2CH2CH2CH3、NHCH (CH3) CH2CH3、NHC6H5, NHCH2CH20CH3> NHOCH3> NHOCH2CH3、羧基保護基團、脂質脂肪酸基團或糖，并且 X2為封閉基團，例如六讓、六、5、1\￥、1^、1、0-八1& ；Xici 為 V、L、I 或A ;X12 為 S 或K;X13為Q或Y ;X14 為 G、C、F、Y、W、M或 L;X16 為 K、D、E 或 G;X17為E或Q ;X19 為 L、I、V或 A;X20為鳥氨酸或諸如K(SH)的衍生化賴氨酸基團、R或K ；X21為L或E ;X23為I或L ;X24為A或E ;X25為W或F ;(26為L或I ;(27 為 I、K或 V;(28為R、鳥氨酸、N或K;(29 為 Aib 或 G;(3°為任何氨基酸，優選G或R ; (31為P或不存在 (32為S或不存在 (33為S或不存在 (34為G或不存在 (35為A或不存在 (36為P或不存在 (37為P或不存在 (38為P或不存在 (39為S或不存在并且X40為連接殘基或不存在；并且其中 X10、S11、X12、X13、X14、X16、X17、X19、X20、X21、X24、X26、X27、X28、X32、X33、X34、X35、X36、 χ37、χ38、χ39或χ4°中的一個由連接殘基取代，所述連接殘基包含通過接頭共價連接至所述抗體的結合位點的親核側鏈，其中所述連接殘基選自K、R、Y、C、Τ、S、賴氨酸的同系物(包括 K (SH))、高半胱氨酸和高絲氨酸。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述GAC包含以下結構
13.如權利要求11所述的方法，其中所述GAC包含以下結構抗體
14.如權利要求10-13中任一項所述的方法，其中所述抗體選自全長抗體、Fab、Fab’、 F (ab，) 2、Fv、dsFv、scFv、Vh、雙抗體和微抗體。
15.如權利要求10-13中任一項所述的方法，其中所述抗體包含選自IgGl、IgG2、IgG3 和IgG4的恒定結構域。
全文摘要
本發明提供胰高血糖素樣肽-1受體(GLP-1R)激動劑以用于減少諸如多發性硬化的自身免疫性疾病中的中樞神經系統的白細胞侵入。GLP-1R激動劑包括例如天然存在的激動劑(如毒蜥外泌肽-4)以及連接至抗體的GLP-1R激動劑肽。
文檔編號A61K38/26GK102596229SQ201080048199
公開日2012年7月18日 申請日期2010年8月19日 優先權日2009年8月27日
發明者H·龍, 周靖祖, 林家揚 申請人:瑞納神經科學公司