專利名稱：一種人凝血酶原復合物的生產方法
技術領域：
本發明涉及到一種人凝血酶原復合物的生產方法。
背景技術：
人凝血酶原復合物(PCC)，是一種包含維生素K依賴性凝血因子II、VII、IX、X的制劑，主要是用來治療乙型血友病和由于肝功能異常導致的凝血機能障礙。傳統工藝多采用血液制品生產中的中間體-組分III中提取，由于組分III生產的前期操作對凝血因子的破壞作用，導致產品批間差異大，凝血因子活性不穩定，產品收率低并且部分凝血因子易被激活，在使用上容易引起血栓等不良反應。本發明采用從血漿中直接分離提取，分離條件溫和，產品的批間差異小，凝血因子活性穩定，收獲率高，凝血因子基本沒有激活現象發生。 由于人凝血酶原復合物(PCC)屬于血液制品，理論上存在傳播乙肝、丙肝、艾滋等病毒的風險，所以在工藝中采用有效的病毒滅活工藝是必要的，本發明采用S/D法和熱處理(80°C， 72小時)相結合的雙重滅活方法，充分保證了產品的安全性。
發明內容
本發明提供一種人凝血酶原復合物(PCC)的生產方法，采用從血漿中直接分離， 并采用S/D法和熱處理(80°C，72小時)相結合的雙重滅活方法，一方面使產品批間差異小，凝血因子活性穩定，收獲率高，減少活化因子引起血栓的風險，同時充分保障病毒方面的安全性。本發明的目的是這樣實現的A、分離提取將原料血漿融化，保持血漿溫度在0 4°C，在0 4°C下離心去除冷沉淀，去除冷沉淀的上清升溫至12 14°C，加入溶脹的凝膠攪拌，吸附45分鐘，收集凝膠，用洗滌液快速沖洗凝膠3次或以上，再用洗脫液浸泡10分鐘/次，共洗3次，將制品洗脫下來，收集洗脫蛋白液進行超濾，預濃縮，再用透析液超濾，使殘余氯化鈉濃度小于0. 85% (g/ml)，將制品濃縮至IX因子效價在10IU/ml左右，計量濃縮液的重量；B、病毒滅活將濃縮液邊攪拌邊按10 1比例緩慢加入11% (g/ml)的S/D溶液，使聚山梨酯-80最終濃度為1 % (g/ml)，磷酸三丁酯的最終濃度為0. 3% (g/ml)，加入S/D滅活液后， 給蛋白液加溫，使制品溫度維持在M ^TC,保溫6小時，進行病毒滅活，每半小時記錄蛋白液溫度一次；C、精制將病毒滅活結束的蛋白液加入平衡處理好的凝膠，吸附45 60分鐘。用洗滌液快速洗滌凝膠3次或以上，以去除殘余的S/D。再用洗脫液浸泡10分鐘/次，共洗3次，將制品洗脫下來，收集洗脫蛋白液進行超濾，預濃縮，再3 5倍體積透析液超濾，使殘余氯化鈉濃度小于0. 85% (g/ml)，將制品濃縮至IX因子效價在30IU/ml左右，將超濾濃縮后蛋白液，調整PH值為6. 8 7. 0，補加透析液，使制品的IX因子最終效價為25IU/ml左右，加入保護劑后除菌、分裝、凍干；D、二次病毒滅活凍干后的制品經80°C，72小時干熱處理，進行第二次病毒滅活；步驟A和C中的洗滌液配方為0. 13M 0. 15M氯化鈉和0. OlM 0. 03M檸檬酸三鈉，用鹽酸調溶液的PH值為6. 8。步驟A和C中的洗脫液配方為1. 6M 2. OM氯化鈉和0. OlM 0. 03M檸檬酸三鈉。步驟A和C中的透析液配方為0. OlM檸檬酸三鈉，用鹽酸調溶液的pH值為6. 8。步驟B中的S/D液的配方是11% (g/ml)聚山梨酯-80和3. 3% (g/ml)磷酸三丁酯。步驟C中的保護劑為 5%甘氨酸和2 10單位的肝素/ml。步驟A和C中所用得凝膠是二乙氨乙基交聯瓊脂糖凝膠或者二乙氨乙基交聯葡聚糖凝膠，使用量為血漿總量的1%。本發明的主要優點在于本發明采用從血漿中直接分離提取，并防止了凝血因子在提取過程中被激活，提高了制品的穩定性，增加了凝血因子的收獲率。同時，在工藝中采用有效的病毒滅活工藝，采用S/D法和干熱處理相結合的雙重滅活方法，對脂包膜病毒和非脂包膜病毒均進行了有效的滅活，充分保證了產品的病毒安全性。
下面結合附圖和實施方式對本發明作進一步詳細的說明。圖1是本發明工藝流程示意圖。
具體實施例方式實施例1 A、分離提取將原料血漿融化，保持血漿溫度在0°C，并在0°C下離心去除冷沉淀，去除冷沉淀的上清升溫至12°C，加入1 %溶脹的二乙氨乙基交聯瓊脂糖凝膠攪拌，吸附45分鐘，收集凝膠，用洗滌液快速沖洗凝膠3次，再用洗脫液浸泡10分鐘/次，共洗3次，將制品洗脫下來， 收集洗脫蛋白液進行超濾，預濃縮，再用透析液超濾，使殘余氯化鈉濃度小于0.85% (g/ ml)，將制品濃縮至IX因子效價在10IU/ml左右，計量濃縮液的重量；B、病毒滅活將濃縮液邊攪拌邊按10 1比例緩慢加入11% S/D溶液，使聚山梨酯-80的最終濃度為(g/ml)，磷酸三丁酯的最終濃度為0.3% (g/ml)，加S/D滅活劑后，將蛋白液的溫度維持在M ^TC,保溫6小時，進行病毒滅活。每半小時記錄蛋白液溫度一次；C、精制將病毒滅活結束的蛋白液加入平衡處理好的凝膠，吸附45分鐘。用洗滌液快速洗滌凝膠3次，以去除殘余的S/D。再用洗脫液浸泡10分鐘/次，共洗3次，將制品洗脫下來， 收集洗脫蛋白液進行超濾，預濃縮，再3倍體積透析液超濾，使殘余氯化鈉濃度小于0. 85% (g/ml)，將制品濃縮至IX因子效價在30IU/ml左右將超濾濃縮后蛋白液，調整蛋白液的pH值為6. 9，補加透析液，使制品的IX因子最終效價為25IU/ml左右，加入保護劑后除菌、分裝、凍干；D、二次病毒滅活凍干后的制品經80°C，72小時干熱處理，進行第二次病毒滅活；即得人凝血酶原復合物成品。結果見表1.表1 結果
權利要求
1.一種人凝血酶原復合物的生產方法，包括A.分離提取將原料血漿融化，保持血漿溫度在0 4°C，在此溫度下離心去除冷沉淀，把上清升溫至12 14°C，加入溶脹的凝膠攪拌，吸附45分鐘，收集凝膠，用洗滌液快速沖洗凝膠3次或以上，再用洗脫液浸泡10分鐘/次，共3次，將制品洗脫下來，收集洗脫蛋白液進行超濾，預濃縮，再用透析液超濾，使殘余氯化鈉濃度小于0. 85% (g/ml)，將制品濃縮至IX因子效價在10IU/ml左右，計量濃縮液的重量；B.S/D病毒滅活C.精制將S/D病毒滅活結束的蛋白液加入平衡處理好的凝膠，吸附45 60分鐘。用洗滌液快速洗滌凝膠3次或以上，以去除殘余的S/D。再用洗脫液浸泡10分鐘/次，共洗3次，將制品洗脫下來，收集洗脫蛋白液進行超濾，預濃縮，再用3 5倍體積透析液超濾，使殘余氯化鈉濃度小于0. 85% (g/ml)，將制品濃縮至IX因子效價在30IU/ml左右將超濾濃縮后蛋白液，調整PH值6. 8 7. 0，補加透析液，使制品的IX因子最終效價為25IU/ml左右，加入保護劑后除菌、分裝、凍干；D.二次病毒滅活凍干后的制品經80°C，72小時干熱處理，進行第二次病毒滅活。
2.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟A和C 中的洗滌液配方為0. 13M 0. 15M氯化鈉和0.01M 0. 03M檸檬酸三鈉，用鹽酸調溶液的 PH值為6.8。
3.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟A和C 中的洗脫液配方為1. 6M 2. OM氯化鈉和0. OlM 0. 03M檸檬酸三鈉。
4.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟A和C 中的透析液配方為0. OlM檸檬酸三鈉，用鹽酸調溶液的pH值為6. 8。
5.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟B的步驟是按以下進行的，將濃縮液邊攪拌邊按10 1比例緩慢加入11% (g/ml) S/D溶液，使聚山梨酯-80的最終濃度為(g/ml)，磷酸三丁酯的最終濃度為0. 3% (g/ml)，加入S/D 后，將蛋白液的溫度維持在M°C ^TC,保溫6小時，進行病毒滅活，每半小時記錄蛋白液溫度一次。
6.根據權利要求5所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于S/D液的配方是11% (g/ml)聚山梨酯-80和3. 3% (g/ml)磷酸三丁酯。
7.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟C中的保護劑為 5%甘氨酸和2 10單位的肝素/ml。
8.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟A和C 中所用的凝膠是二乙氨乙基交聯瓊脂糖凝膠，使用量為血漿總量的1%。
9.根據權利要求1所述的一種人凝血酶原復合物的生產方法，其特征在于步驟A和C 中所用的凝膠是二乙氨乙基交聯葡聚糖凝膠，使用量為血漿總量的1%。
全文摘要
本發明涉及到一種人凝血酶原復合物的生產方法。其特點是采用從血漿中直接分離提取，病毒滅活，精制，二次病毒滅活，即得人凝血酶原復合物成品。本發明采用從血漿中直接分離提取，分離條件溫和，產品的批間差異小，凝血因子活性穩定，收獲率高，且基本沒有激活現象發生。病毒滅活工藝采用S/D法和干熱滅活法相結合的方法，充分保證了產品的病毒安全性。
文檔編號A61K38/48GK102151289SQ20111003079
公開日2011年8月17日 申請日期2011年1月28日 優先權日2011年1月28日
發明者于洋, 孫曉東, 李常祿, 楊金平, 郭晶, 陳鳳珠, 魏舒 申請人:哈爾濱派斯菲科生物制藥股份有限公司