專利名稱：吡非尼酮在制備防治眼科手術后增殖性疾病的藥物中的應用及其滴眼液的制作方法
技術領域：
本發明屬于防治眼科疾病的藥物領域，具體涉及吡非尼酮在制備防治眼科手術后增殖性疾病，特別是白內障手術后晶狀體后囊膜混濁的藥物中的應用及其滴眼液。
背景技術：
白內障是全球排名第一位的致盲眼病。白內障的防治研究是防盲治盲及公共衛生工作的重點項目，具有顯著的現實意義。目前白內障的防治以手術治療-白內障囊外摘除或超聲乳化白內障吸出聯合人工晶體植入術為主。隨著手術技術日臻完善及手術器械的不斷發展，白內障手術的成功率和復明質量已大幅提高，絕大部分白內障患者可以通過手術治療復明，但是白內障術后發生的后囊膜混濁(posterior capsule opacification, PCO, 也即后發性白內障)卻不同程度的對患者造成視物遮擋，成為最大的影響白內障患者術后視功能恢復的因素。因此如何預防或減少晶狀體后囊膜或囊袋的纖維化，減少PCO的發生， 是目前白內障防治的重點之一。PCO是白內障術后殘留的晶狀體上皮細胞增殖及膠原產生以及囊袋纖維化皺縮所引起。PCO目前的防治方法主要是針對晶狀體上皮細胞的增殖、分化、遷移，以及晶狀體囊袋纖維化的抗細胞代謝藥和對細胞因子進行適當調控的制劑等(細胞因子受體抑制劑)。近幾年來隨著對預防后發性白內障多途徑的研究，人們發現多肽生長因子在PCO的形成和發展中起著重要的作用，其中TGF-β家族是傷口修復纖維化的系列反應(包括細胞增殖、分化、遷移等)的啟動點之一，TGF-β因子在誘導、調節細胞外基質降解等方面起正性調控作用。如能減少或阻斷TGF-β的表達，將能從該途徑阻斷或干擾晶狀體囊創傷愈合過程的纖維化進程，達到減少PCO的目的。吡非尼酮(pirfenidone，PFD)是一種新型廣譜的抗炎抗纖維化藥物，為吡啶酮衍生物，化學名為5-甲基-1-苯基-2 [1H]-吡啶酮，分子量為185. 23，常溫下為白色或淡黃色粉末。目前PFD的口服制劑已經在歐美、日本和印度上市，被廣泛應用于全身多種組織纖維化疾病治療中，能下調多種細胞因子的產生，抑制膠原合成，以及阻止成纖維細胞增殖，抗纖維化作用顯著，且細胞毒性小，安全、高效。目前吡非尼酮口服制劑已用于特發性肺纖維化、多發性硬化、原發性硬化性膽管炎、慢性丙型肝炎、骨髓纖維變性、神經纖維瘤病、硬化性腹膜炎和纖維變性腎功能障礙的抗纖維化臨床治療中。
發明內容
本發明的第一個目的是提供吡非尼酮在制備防治眼科手術后增殖性疾病的藥物中的應用。所述的吡非尼酮在制備防治眼科手術后增殖性疾病的藥物中的應用，尤其是指吡非尼酮在制備防治白內障術后后囊膜混濁的藥物中的應用。所述的藥物優選為滴眼液。
本發明的第二個目的是提供一種新型、可局部應用、安全高效的用于防治眼科手術后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，包括有效劑量的吡非尼酮和輔料。優選，按總質量分數100%計，所述的吡非尼酮在滴眼液中的含量為0. 5 1 %，進一步優選為0. 5%。優選，所述的滴眼液，按總質量分數100%計，含有吡非尼酮0. 5 1%、NaCl 0. 7 0. 75%、枸櫞酸鈉0. 2%、硫柳汞0. 002%、余量為水。藥理學實驗一、吡非尼酮滴眼液眼內藥代動力學研究取實施例2配制好的質量分數為0. 5%的吡非尼酮滴眼液分別放置于常溫及冰箱冷藏保存6個月，觀察其色澤，顏色、溶解度、pH值及含量的穩定性。取常溫保存6個月、冷藏保存6個月的0. 5%的吡非尼酮滴眼液各1ml，置IOOml 容量瓶中，加入甲醇溶液至稀釋至100ml，搖勻，備用。檢測時再分別取上述溶液O.aiil，加 Λ 1. 8ml甲醇溶液，搖勻，12000rpm離心5min,取上清20 μ 1進樣行HPLC檢測，以吡非尼酮的標準品作為參照。以外標法吡啡尼酮峰面積比計算含量回收率。結果表明0. 5%的吡非尼酮滴眼液常溫保存6月、冷藏保存6月均無色透明，未見有變色、混濁、沉淀物及結晶等改變，HPLC檢測無雜峰。表1表示的是常溫保存6月及冷藏保存6個月后含量回收率測定RSD及RE均小于士的規定值。PH值穩定，常溫保存與冷藏保存無差異。說明該滴眼液穩定好，可以常溫或冷藏保存。表1 0. 5%吡非尼酮滴眼液含量回收率測定結果
ι V 11‘IOO0O)PH Ι Ι,':.;:「。: .Y 6 1·；；,"" I fi.' /,' f 11 . M . I > ； I.5 ■ ( 6 .JΙ'-,Ι' ΙΙΙ ‘ MEAN= RE i % ) RSD (%):SD) 100.8=0,1 0.78 0.06ioas±o.i * 0.84 0.126.76±0.0 -3.38 0.231 6.SO=CKOl -2.86 0.15 女 P > 0. 05將新西蘭大白兔(雌雄不拘，體重2 2. ^g，購自廣東省醫學實驗動物中心)60 只，隨機分為10組，用微量移液器準確量取50 μ 1 0.5%的吡非尼酮滴眼液滴入結膜囊，輕拉下瞼確保液體不溢出。分別于滴眼后2、5、8、10、15、20、30、60、90、120min分鐘處死一組兔子，迅速摘取眼球，抽取房水、玻璃體，剪除結膜、角膜、鞏膜等組織，生理鹽水沖洗，濾紙吸干，置于EP管內稱重，-20°C冷藏備用。組織剪碎勻漿后用500μ1甲醇萃取，離心取上清 40°C溫浴氮氣吹干，IOOyl甲醇重新定容，離心取上清進樣行HPLC檢測藥物濃度。濃度計算采用加權最小二乘法進行回歸分析。均數間的比較采用SPSS 16.0統計軟件分析。藥代動力學參數采用wirmonlin 5. 0軟件進行非房室模型數據處理。研究結果表明吡非尼酮具有較好的眼內穿透性，角膜、結膜、鞏膜、房水中消除半衰期分別為 18. 26,34. 2,39. 48、15. 71min，峰濃度分別達 9. 64mg/g,9. 62mg/g,2. 13mg/ g、34.88mg/L。藥物在這4種組織的半衰期均較短，代謝快。玻璃體內藥物濃度較低為 0. 52mg/L,半衰期相對較長達為70. Qlmin0本實驗發現吡非尼酮在兔眼具有良好的組織穿透性，可在房水中達到較高濃度，能夠從眼內外同時發揮抗瘢痕化的作用。由于它在眼組織中的消除半衰期短，需要頻繁滴眼才能維持有效濃度。為了減少滴眼的次數，可采用在滴眼液中加入賦形劑的方法，增加淚液黏度，使藥物分布更均勻，減少藥物經淚道排出的速率。目前常用的有生物黏附性凝膠，其中包括羥丙纖維素(HPC)、聚丙烯酸類(PAA)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚半乳糖醛酸(PLA)、木質葡聚糖(xyloglucan)、葡聚糖 (Dextrans)等；在位形成凝膠，如溫度敏感型有Poloxamer (泊洛沙姆)等，pH值敏感型有卡波姆(carbopol)，離子敏感型凝膠有海藻酸鹽等。這些賦形劑都可以增加藥物在眼表的停留時間，提高藥物的生物利用度。另外還有脂質體、納米顆粒、眼植入物等多種緩釋或提高眼內通透性的輔助措施可以增強眼內藥物的濃度。因此，吡非尼酮作為滴眼劑在眼部具有廣闊的應用前景。二、吡非尼酮滴眼液眼內毒性研究1、實驗動物新西蘭大白兔，雌雄不拘，體重2-2. 5Kg,隨機分入空白對照、0. 1 %、0. 5 %、1 %的吡非尼酮滴眼液(即分別是實施例1、2和3的滴眼液)，MMC(0. 25mg/ml)(批號:505AGB， Kyowa Hakko Kogyo公司)組各3只。均采用小梁切除術處理。取材時摘除眼球后，迅速用雙面刀片將眼球剖成兩半，取手術對側半眼球分別固定于FFA眼球固定液與2. 5%戊二醛緩沖液中。眼表耐受性試驗采用未經處理的新西蘭白兔，每組3只，共12只。2、實驗方法2. 1給藥方式空白對照組不做任何處理；滴眼液組每日6次，每次1滴，持續28天；MMC組眼球于術中0. 25mg/ml的MMC棉片放置于鞏膜及結膜瓣下5分鐘后大量生理鹽水沖洗凈殘余MMC。2. 2眼表毒性評價眼表毒性采用改良的Draize Test評價方法，眼刺激反應評分和眼刺激評價標準如表2和表3所示。表2:眼刺激反應評分
權利要求
1.吡非尼酮在制備防治眼科手術后增殖性疾病的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的眼科手術后增殖性疾病為白內障術后后囊膜混濁。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的藥物為滴眼液。
4.一種用于防治眼科手術后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，包括有效劑量的吡非尼酮和輔料。
5.根據權利要求4所述的用于防治眼科手術后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，按總質量分數100%計，所述的吡非尼酮在滴眼液中的含量為0. 5 1%。
6.根據權利要求5所述的用于防治眼科手術后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，按總質量分數100%計，所述的吡非尼酮在滴眼液中的含量為0. 5%。
7.根據權利要求5所述的用于防治眼科手術后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，所述的滴眼液，按總質量分數100%計，含有吡非尼酮0. 5 l%、NaCl 0. 7 0. 75%、枸櫞酸鈉0. 2%、硫柳汞0. 002%、余量為水。
全文摘要
本發明公開了吡非尼酮在制備防治眼科手術后增殖性疾病的藥物中的應用及其滴眼液。本發明將吡非尼酮配制成滴眼液，經過實驗發現，其穩定性好，并且具有較好的眼內組織穿透性，能抑制HLECs的遷移和增殖，在作用范圍(0～1mg/ml)內對HLECs無細胞毒性，吡非尼酮在0～1％范圍內，在眼部連續用藥，一個月內用藥安全，無明顯毒副作用。吡非尼酮可延緩兔眼Phaco術后PCO的發生，減少HLECs的增殖，減少PCO對光學區的遮擋，且PFD應用于兔眼Phaco術后未見明顯眼表損傷或術后炎癥加重，未見嚴重不良反應發生。因此本發明的吡非尼酮可以用于防治眼科手術后增殖性疾病，特別是白內障術后發生的后囊膜混濁。
文檔編號A61P7/02GK102349901SQ20111022884
公開日2012年2月15日 申請日期2011年8月10日 優先權日2011年8月10日
發明者余敏斌, 葉成添, 孫國英, 楊揚帆, 林羨釵 申請人:中山大學中山眼科中心