專利名稱：一種丹皮中各活性成分的制備方法
技術領域：
本發明涉及天然藥物領域，特別涉及一種丹皮中各活性成分的制備方法。
背景技術：
中藥丹皮是毛茛科植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)的干燥根皮，其性微寒，味辛，苦，涼，入心、肝、腎經，具有清熱，涼血，和血，消淤的功效。丹皮酚(又稱牡丹酚)、 丹皮多糖和丹皮總苷(主要包括芍藥苷、苯甲酰芍藥苷、丹皮苷、丹皮原苷、丹皮新苷等) 是丹皮中的有效活性成分，丹皮酚具有活血化瘀、清熱涼血、消炎收斂、鎮痛解痙等多方面的藥理作用，在醫藥、日化、香料領域有著廣泛的用途，例如做成霜劑外涂，對急性濕疹、脂溢性皮炎、接觸性皮炎有明顯療效，添加入牙膏中能起到消炎殺菌、抗牙齦過敏的作用，還能消除面部粉刺，對蚊蟲叮咬、夏季皮炎、痱子、頭皮瘙癢，具有殺菌、祛痱、止癢的作用，此外，其對心血管系統和中樞神經系統等具有多方面的藥理作用，可用于開發抗心血管系統疾病的藥物；丹皮多糖具有較高的降血糖活性，可用于開發治療糖尿病藥物，具有重要的臨床實踐價值，還具有增強機體免疫功能及抗炎作用等，有效安全，無藥理毒性；丹皮總苷具有較好的清除氧自由基和肝保護作用，可用于治療肝炎，其免疫調節和抗炎作用，為其開發成為治療類風濕性關節炎的新藥提供可能。目前，對于丹皮的開發應用絕大部分局限于其中的某一種活性成分，所使用的技術手段較為陳舊繁瑣，生產效率較低，能源消耗大，也浪費了原料丹皮，限制了在工業生產上的應用，且從丹皮中同時綜合提取丹皮酚、丹皮多糖和丹皮總苷三種活性物質的專利、文獻報道不多，為了提高得率，往往采用較為繁瑣的方法，需要一定規模的儀器設備，限制了在工業生產中的應用。因此，建立一種簡潔方便、成本較低、能夠同時提取丹皮中三種活性物質、經濟高效、節能環保的方法對實現中藥現代化具有現實意義。
發明內容
本發明目的在于提供一種低成本、高效率、節能環保地從丹皮中同時獲得丹皮酚、 丹皮多糖和丹皮總苷各活性成分的制備方法。本發明是通過以下技術方案實現的包括滲漉、分離以及液相和固相的處理，所述的滲漉是將丹皮生藥粉碎后，用25 45°C水滲漉4-6倍體積，然后分離得到固相藥渣和液相水提取液；所述的液相處理是用凝膠過濾層析對提取液進行分離，根據出峰時間不同得到高分子量組分和低分子量組分，向高分子量組分中加入至少兩倍體積濃度50 90wt% 乙醇，攪拌均勻后靜置、沉淀，收集沉淀，凍干得到丹皮多糖；低分子量組分減壓濃縮，濃縮液用大孔樹脂吸附分離，先水洗脫4 10柱體積(BV)，后用濃度20 50wt%的乙醇洗脫 3 10BV，收集乙醇洗脫液，真空脫溶、干燥后得到丹皮總苷；所述的固相處理是藥渣加水室溫浸泡至少3小時，藥渣與水的重量比不小于1 5，然后用2.0 2. ^g/cm3壓力的蒸氣進行水蒸氣蒸餾，控制釜溫110 120°C，收集蒸餾液并冷卻，分離，收集沉淀得到丹皮酚。所述的大孔樹脂選自D201或寶恩3號或ASD-8或AB-8或HP16型大孔樹脂，優選型號為D201型大孔樹脂。得到的各活性成分可通過重結晶等公知的方法進一步純化。比如丹皮酚可用70% 乙醇溶液重結晶，即85°C水浴加熱溶解，冷凍結晶至少一次。本發明的有益效果在于根據丹皮多糖與丹皮總苷分子量大小的差異(丹皮多糖分子量在IOkDa以上，丹皮總苷分子量小于IOOODa)，使用凝膠過濾層析從中藥丹皮中獲得丹皮多糖和丹皮總苷，實現了對藥材的最大程度的利用，并且成本較低，適合工業化應用； 丹皮總苷純化過程中使用D201型大孔樹脂，成本較低、效果可靠；本發明改善了從中藥丹皮中綜合提取丹皮酚、丹皮多糖和丹皮總苷的方法，設計合理，成本低、易操作、得率高，適合工業化生產，應用前景廣闊。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細說明。實施例一取丹皮生藥100g，洗凈烘干粉碎，裝入滲漉柱中，柱體積90ml，用360mL 35°C溫水，流速200ml/h，滲漉，分離得到藥渣和提取液；提取液使用Superdex G50凝膠過濾層析分離，得到含丹皮多糖的大分子組分和含丹皮總苷的小分子組分；大分子組分使用3倍體積70%乙醇沉淀12小時，收集沉淀冷凍干燥，得丹皮多糖部分，小分子組分減壓濃縮，餾出液保留，濃縮液上大孔樹脂柱D201 (3. 5g芍藥苷/kg濕樹脂)，先用水沖洗6BV除雜，再用 30%乙醇洗脫4BV，收集洗脫液并減壓蒸餾至無醇味，冷凍干燥，即得丹皮總苷部分；藥渣加入9. 5倍水室溫浸泡5小時后，于蒸餾罐內用2. 3kg/cm3壓力的蒸氣進行水蒸氣蒸餾，控制釜溫115°C (并入上一步濃縮透過液時的餾出液)，間歇加熱，循環加水，至罐內排出的原藥液體澄清并伴有少量珠點油花止，收集蒸餾液，冷卻后沉淀得丹皮酚粗品；粗品使用3倍體積70%乙醇于85°C水浴中溶解，完全溶解后移至冷柜中結晶，第一次結晶時間較短，至剛有晶體析出，再重復以上操作3次至徹底結晶，得丹皮酚純品；經液相色譜測定，丹皮多糖的得率為5.0%，純度為83% ；丹皮總苷的得率為6.3%，純度為(以芍藥苷計)85. 3% ； 丹皮酚的提取率為4. 47 %，純度為99 %。實施例二取丹皮生藥500g，洗凈烘干粉碎，裝入滲漉柱中，柱體積450ml，用2700mL35°C溫水，流速200ml/h，滲漉，分離得到藥渣和提取液；提取液使用SuperdeX650凝膠過濾層析分離，得到含丹皮多糖的大分子組分和含丹皮總苷的小分子組分；大分子組分使用3倍體積 80%乙醇沉淀12小時，收集沉淀冷凍干燥，得丹皮多糖部分，小分子組分減壓濃縮后上大孔樹脂柱AB-8 (3. 5mg芍藥苷/g濕樹脂)，先用水沖洗6BV除雜，再用50 %乙醇洗脫!3BV， 收集洗脫液并減壓蒸餾至無醇味，冷凍干燥，即得丹皮總苷部分；藥渣加入9. 5倍水浸泡5 小時后，于蒸餾罐內用2. 4kg/cm3壓力的蒸氣進行水蒸氣蒸餾，控制釜溫115°C (并入上一步濃縮透過液時的餾出液)，至罐內排出的原藥液體澄清并伴有少量珠點油花止，收集蒸餾液，冷卻后沉淀得丹皮酚粗品；粗品使用3倍體積70%乙醇于85°C水浴中溶解，完全溶解后移至冷柜中結晶，得丹皮酚純品；經液相色譜測定，丹皮多糖的得率為5. 3%，純度為86% ； 丹皮總苷的得率為6. 6%，純度(以芍藥苷計)為80. 8%，其中芍藥苷含量為41. 7% ；丹皮酚的提取率為4. 16%，純度為97%。
實施例三取丹皮生藥500g，洗凈烘干粉碎，裝入滲漉柱中，柱體積450ml，用2300mL35°C溫水，流速200ml/h，滲漉，濾得到藥渣和提取液；提取液使用Superdex G50凝膠過濾層析分離，得到含丹皮多糖的大分子組分和含丹皮總苷的小分子組分；大分子組分使用3倍體積 90%乙醇沉淀12小時，收集沉淀冷凍干燥，得丹皮多糖部分，小分子組分減壓濃縮后上大孔樹脂柱D201 (3. 5mg芍藥苷/g濕樹脂)，先用水沖洗6BV除雜，再用50 %乙醇洗脫!3BV， 收集洗脫液并減壓蒸餾至無醇味，冷凍干燥，即得丹皮總苷部分；藥渣加入9. 5倍水浸泡5 小時后，于蒸餾罐內用2.3kg/cm3壓力的蒸氣進行水蒸氣蒸餾，控制釜溫115°C (并入上一步濃縮透過液時的餾出液)，至罐內排出的原藥液體澄清并伴有少量珠點油花止，收集蒸餾液，冷卻后沉淀得丹皮酚粗品。粗品使用3倍體積70%乙醇于85°C水浴中溶解，完全溶解后移至冷柜中結晶，得丹皮酚純品。經液相色譜測定，丹皮多糖的得率為5. 0%，純度為89% ； 丹皮總苷的得率為6. 2%，純度(以芍藥苷計)為85. 8%，其中芍藥苷含量為43. 5% ；丹皮酚的提取率為4. 09 %，純度為95 %。
權利要求
1.一種丹皮中各活性成分的制備方法，包括滲漉、分離以及液相和固相的處理，其特征在于所述的滲漉是將丹皮生藥粉碎后，用25 45°C水滲漉4-6倍體積，得到固相藥渣和液相水提取液；所述的液相處理是用凝膠過濾層析對提取液進行分離，根據出峰時間不同得到高分子量組分和低分子量組分，向高分子量組分中加入至少兩倍體積濃度50 90wt%乙醇，攪拌均勻后靜置、沉淀，收集沉淀，凍干得到丹皮多糖；低分子量組分減壓濃縮，濃縮液用大孔樹脂吸附分離，先水洗脫4 10BV，后用濃度20 50wt %的乙醇洗脫3 10BV，收集乙醇洗脫液，真空脫溶、干燥后得到丹皮總苷；所述的固相處理是藥渣加水室溫浸泡至少3小時，藥渣與水的重量比不小于1 5，然后用2.0 2. ^g/cm3壓力的蒸氣進行水蒸氣蒸餾，控制釜溫110 120°C，收集蒸餾液并冷卻，分離、收集沉淀得到丹皮酚。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于將丹皮生藥粉碎后，用25 45°C水滲漉4-6倍體積。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于用凝膠過濾層析對提取液進行分離， 根據出峰時間不同得到高分子量組分和低分子量組分。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于向高分子量組分中加入至少兩倍體積濃度50 90wt%乙醇，攪拌均勻后靜置、沉淀，收集沉淀，凍干得到丹皮多糖。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于所述的大孔樹脂選自D201或寶恩3 號或ASD-8或AB-8或HP16型大孔樹脂，先用水洗脫5 8BV，再用30 50Wt%乙醇洗脫 3 5BV，收集乙醇洗脫液，真空脫溶、干燥后得到丹皮總苷。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于藥渣加水室溫浸泡至少3小時，藥渣與水的重量比不小于1 5，然后用2.0 2. 5kg/cm3壓力的蒸氣進行水蒸氣蒸餾，控制釜溫110 120°C，收集蒸餾液并冷卻，分離、收集沉淀得到丹皮酚。
全文摘要
本發明公開了一種丹皮中各活性成分的制備方法，是丹皮生藥用25～45℃水中滲漉4～6倍體積，得到固相藥渣和液相水提取液；固相加水室溫浸泡后用水蒸氣蒸餾法制取丹皮酚，液相水浸提液用凝膠過濾層析對浸提液進行分離，分別得到高分子量組分和低分子量組分，高分子量組分用醇沉法制取丹皮多糖，低分子量組分用大孔樹脂吸附分離制取丹皮總苷。本方法從中藥丹皮中綜合提取得到丹皮酚、丹皮多糖和丹皮總苷，所得到的丹皮多糖純度高于80％，丹皮總苷純度高于80％，丹皮酚經純化后純度高于95％。
文檔編號A61K36/71GK102429965SQ20111039979
公開日2012年5月2日 申請日期2011年11月25日 優先權日2011年11月25日
發明者畢云英 申請人:威海天泓農業科技有限公司