專利名稱：一種人用狂犬疫苗的制備的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫療預防領域，具體來說，涉及一種人用的狂犬疫苗。
背景技術：
狂犬病是由狂犬病毒感染所致的急性傳染病，是一種人畜共患急性傳染病。每年有超過5萬人因狂犬病死亡，99%的死亡發生在亞洲、非洲和南美洲。狂犬病毒(RV)是高度嗜神經病毒，是彈狀病毒科彈狀病毒屬中的不分段負鏈RNA病毒，外形呈彈狀，核 衣殼呈螺旋對稱，表面具有包膜，內含有單鏈RNA，是引起狂犬病的病原體。狂犬病毒具有兩種主要抗原:一種是病毒外膜上的糖蛋白抗原，能與乙酰膽堿受體結合使病毒具有神經毒性，并使體內產生中和抗體及血凝抑制抗體，中和抗體具有保護作用；另一種為內層的核蛋白抗原，可使體內產生補體結合抗體和沉淀素，無保護作用。RV的病毒包膜組分由跨膜糖蛋白G和基質M蛋白組成。糖蛋白形成大約400個三聚刺突，這些刺突緊密地排列于病毒表面上。狂犬病疫苗是目前預防狂犬病發生唯一有效的藥品。目前使用的狂犬疫苗主要有三類:經動物腦組織培養的滅活疫苗、經鴨胚培養的滅活疫苗和經細胞(人二倍體細胞、雞胚細胞、地鼠腎原代細胞和VeiO傳代細胞)培養的滅活疫苗。狂犬疫苗大部分是用于暴露后的免疫，因此要求疫苗在人體中產生較快的免疫應答反應。但現有的狂犬疫苗無論是采用何種病毒培養體系，最終都是制成含全病毒顆粒的疫苗。其含有與抗原無關的成分，如病毒雜蛋白、病毒核酸及脂質和培養病毒的組織蛋白的殘余蛋白，當增加病毒的抗原含量時，這些雜蛋白也隨之增加，因此疫苗的副反應就加大了。中國專利CN201010123850(本公司申請)公開了一種磷酸鋁佐劑及制備方法。此發明提供了一種穩定性高，均一性好和包載能力強的磷酸鋁佐劑及其制備方法。此佐劑可誘導產生較強的體液免疫應答反應。同時減少了疫苗和佐劑的劑量，可以降低疫苗毒副作用的發生。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于，為了克服現有技術中的缺陷，提供一種能夠在人體內產生更快、更高的免疫應答反應，且副反應少的的人用新型狂犬疫苗。本發明公開了一種人用狂犬疫苗，其特征在于，所述的疫苗含有狂犬病全病毒顆粒經裂解后的外膜片段及破傷風類毒素。所述的裂解是狂犬病全病毒顆粒通過化學法裂解。所述的外膜片段包括糖蛋白形成的刺突和基質蛋白。破傷風類毒素對狂犬病毒VLP具有快速增強免疫的作用，可以在短期內獲得高中和抗體的作用，而且中和抗體維持時間較長，為狂犬中毒咬傷及潛伏期短的患者，提供一種更為安全有效的人用狂犬病疫苗。所述的人用狂犬疫苗是由狂犬病病毒固定毒株CTN-1V、aGV株或其他經細胞適應的狂犬病病毒固定毒株中任選一株制備的。
本發明中，人用狂犬疫苗每劑量為含有病毒蛋白5-100 μ g,破傷風類毒素的用量為2Lf /劑-1OLf /劑，磷酸鋁佐劑0.5mg/劑。
所述的狂犬疫苗包括狂犬病病毒外膜、基質蛋白，刺突上的糖蛋白，和磷酸鋁佐劑組成。根據中國專利CN201010607735(本公司申請)制備病毒裂解液。本發明將狂犬病病毒固定毒株經過細胞培養、純化獲得的狂犬病毒顆粒用化學方法進行裂解，提取和純化含有刺突和基質蛋白的病毒外膜片段，再混合一定量的破傷風類毒素，配置成一種狂犬病病毒裂解疫苗。本發明還提供了制備這種裂解疫苗的方法。這種病毒裂解疫苗用于預防人因狂犬病病毒感染引發的狂犬病。本發明的狂犬裂解疫苗對現有的狂犬病全病毒疫苗進行了改造和升級使之達到更好的免疫效果和安全性。本發明是將經純化后的狂犬病全病毒加入裂解劑，提取和純化含有刺突和基質蛋白的病毒外膜片段，再混合一定量的破傷風類毒素經配置成為狂犬病病毒裂解疫苗。使這種疫苗中，除含有免疫原性的外膜抗原存在外，極大地降低了其它有可能性引起不良反應的病毒內源性毒性物質，如病毒核酸及脂質。從而能克服現行的全病毒商品疫苗具有免疫局限性及接種后的不良反應。本發明所用的狂犬病病毒固定毒株為:CTN-1V，aGV株。中國藥品生物制品檢定所負責制備和發放上述病毒毒種。當然，本發明的的疫苗也可以采用其它經細胞適應的狂犬病病毒固定毒株。本發明的狂犬病疫苗配置的方法，包括:根據純化病毒液的病毒濃度，將Triton-100加入純化后的病毒液中，使全病毒顆粒充分徹底裂解。裂解后的病毒液進行二次純化，用蔗糖密度梯度離心或柱層析方法，收集含有病毒包膜和刺突的片段。經過濾膜超濾濃縮，透析脫糖后回收病毒裂解液。用緩沖液稀釋，加入I %硫柳汞，經過二次除菌過濾制備出疫苗原液，加入適宜的磷酸鋁佐劑和抗原穩定劑后，。經過無菌試驗、蛋白濃度及純度測定、效力試驗等檢定合格后，分裝即為疫苗。本發明提供了一種人用狂犬疫苗及其制備方法，和現有的病毒純化原液相比，其含有的雜蛋白大大減少降低了副作用，且具有更高的免疫原性和效力，使用更加安全。
具體實施例方式為了使本發明的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合實施例對本發明作進一步闡述。這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。實施例1人狂犬病病毒顆粒裂解蛋白(主要含有裂解病毒顆粒的外膜片段)、破傷風類毒素原液(武漢生物制品研究所)，磷酸鋁佐劑，按照抗原含量的混合比例為:病毒蛋白5-100 μ g/劑；破傷風類毒素的用量為2Lf/劑-1OLf/劑；磷酸鋁佐劑是0.5mg/劑。組合制成液體疫苗，然后封裝，最后檢定包裝。
實施例2用上述實施例1方法的4種組合的疫苗分別免疫小鼠，每次免疫0.5ml，0天、7天分別免疫兩次，觀察14天后采血，檢測血清中和抗體和效價。表I
權利要求
1.一種疫苗組合物，包括蛋白疫苗和磷酸鋁佐劑，其特征在于所述蛋白疫苗包含5-100 μ g/劑的人狂犬病毒蛋白和2Lf-10Lf /劑的破傷風類毒素。
2.根據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于所述磷酸鋁佐劑的含量不超過1.25mg/ 劑。
3.根據權利要求2所述的疫苗組合物，其特征在于所述磷酸鋁佐劑的含量為0.5mg/劑 。
全文摘要
本發明提供了一種人用狂犬疫苗，所述的疫苗含有狂犬病全病毒顆粒經裂解后的外膜片段及破傷風類毒素；外膜片段包括刺突和基質蛋白。其中，人用狂犬疫苗每劑量含有病毒蛋白10-100μg，破傷風類毒素的用量為2Lf/劑-10Lf/劑，磷酸鋁佐劑0.5mg/劑。本發明的人用狂犬病疫苗，相比現有的病毒純化原液含有的雜蛋白大大減少，具有更高的免疫原性和效力，使用更加安全。
文檔編號A61K39/08GK103182081SQ20111045897
公開日2013年7月3日 申請日期2011年12月30日 優先權日2011年12月30日
發明者沈瓊, 張高峽 申請人:上海澤潤生物科技有限公司