專利名稱：一種用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型的用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑。
背景技術：
隨著生活水平的提聞，膽結石的發病率逐年升聞，據統計，目如國內外有10%左右的人群在忍受著結石病帶來的痛苦，因此探索一種 有效治療結石病的方法當務必急。目前手術切除膽囊是治療膽囊結石的主要手段，但膽囊切除術不僅治療費用高，手術風險大，同時切除膽囊會給人們今后的生活帶來一定的不便。除此之外，一些患者，比如年老體弱、肥胖以及患有其他重要臟器疾病，根本不適合進行膽囊切除術的治療，因此，發展非手術治療結石病的方法意義重大。口服藥物治療是最為理想的治療方法，自1937年Neubridge嘗試用口服膽汁酸的方法治療結石病以來，一些其它的藥物也被相繼的開發出來，比如鵝脫氧膽酸，熊脫氧膽酸，Pravastatin，中草藥制劑等。但總起來說，口服藥物溶石具有療效差，療程長，費用高，復發率高等缺點，亟待進一步的發展。直接灌注溶石法也是一種較為理想的治療結石病的方法，由于通過經皮經肝膽道置管(PTCD)或經內鏡下逆行膽囊插管(ERCG)等途徑，溶石劑灌注進入膽囊，能夠直接和膽石接觸，因此直接灌注溶石法治療時間短，收效快。但該治療方法的推廣需要尋找一種對人體安全的溶石劑。乙醚是最早被應用的溶石劑，但由于乙醚沸點低于體溫，進人體內后汽化而產生高壓，使病人產生劇烈腹痛而未被廣泛接受。隨后右旋檸烯，單辛酸甘油酯，乙基丙酸等相繼被用作直接灌注溶石法的溶石劑，但它們或多或少存在溶石率不高或者毒副作用大等問題而未被進一步的應用。目前，最為有效的溶石劑為甲基叔丁醚，其溶石作用較辛酸甘油酯強50倍，對膽固醇類結石完全溶石率為90 96%。自甲基叔丁醚被用作溶石劑以來，國內外很多學者對甲基叔丁醚的毒副作用進行了相關的研究，實驗結果表明甲基叔丁醚對人體基本上是安全的。但甲基叔丁醚作為溶石劑也存在著一定的缺陷，比如盡管甲基叔丁醚的沸點為55. 7V,高于人的體溫，但甲基叔丁醚的揮發性比較強，應用于人體時仍存在揮發而產生高壓這一問題。同時，甲基叔丁醚會產生使人非常不舒服的刺激性氣味。
發明內容
為了克服現有溶石劑的上述問題，本發明人研究發現，通過向甲基叔丁醚中添加卵磷脂，不但可以相應降低甲基叔丁醚的飽和蒸汽壓，而且由于相對而言降低了甲基叔丁醚的百分含量，因此也相應降低了其氣味的刺激性，從而獲得一種新型的用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑，在此基礎上完成了本發明。因此，本發明的主題是提供一種用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑，其包含甲基叔丁醚和卵磷脂，并且基于ImL的甲基叔丁醚計，卵磷脂的量為O. 10 O. 60g，所述卵磷脂優選是大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。
本發明人對膽固醇的溶解情況進行了大量實驗研究，結果發現，在一定量的甲基叔丁醚中隨著卵磷脂加入量的增加，混合溶液對膽固醇的溶解量逐漸增大，而混合溶液的氣味則逐漸變小。
以大豆卵磷脂為例，當相對于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量為O. IOg時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有大豆卵磷脂情況下增加20%以上。隨著混合溶液中大豆卵磷脂加入量的增加，對膽固醇的溶解量起初逐漸增大，慢慢達到一個最高值，然后又有所降低。比如當相對于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量為O. 30g時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有大豆卵磷脂情況下增加50%左右；當相對于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量為O. 40g時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有大豆卵磷脂情況下增加約64%，差不多達到一個相對最大值；但當相對于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量為O. 50g時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有大豆卵磷脂情況下雖然增加50%左右，但比最大值有所降低；而當相對于ImL的甲基叔丁醚而言大豆卵磷脂的量為O. 60g時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有大豆卵磷脂情況下增加20%以上。以蛋黃卵磷脂為例，當相對于ImL的甲基叔丁醚而言蛋黃卵磷脂的量為O. IOg時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有蛋黃卵磷脂情況下增加約62%。隨著混合溶液中蛋黃卵磷脂加入量的增加，對膽固醇的溶解量略有增大，但不明顯，比如當相對于ImL的甲基叔丁醚而言蛋黃卵磷脂的量為O. 20g、0. 30g和O. 40g時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有蛋黃卵磷脂情況下分別增加約64%、67%和74% ;而當相對于ImL的甲基叔丁醚而言蛋黃卵磷脂的量為O. 50g時，混合溶液對膽固醇的溶解量比沒有蛋黃卵磷脂情況下增加近I倍。不受任何理論的束縛，所述混合溶石劑對膽固醇之所以出現上述溶解現象，主要是因為，本發明人發現，卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂對膽固醇產生增溶作用，當甲基叔丁醚中卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂加入量增加時，混合溶液對膽固醇的溶解量會逐漸增大，但同時混合溶液的粘度也逐漸增大。而粘度增大程度視情況有所不同，對于大豆卵磷脂而言，粘度增大導致溶解膽固醇的速度有所減慢，因此當溶解度達到相對峰值后，增大的粘度一定程度上阻礙了膽固醇的溶解；而蛋黃卵磷脂情況下，溶解度受粘度增大的影響不大，因而表現為隨著蛋黃卵磷脂加入量增加，膽固醇的溶解量也一直在增加。雖然事實上當溶解時間足夠長時，溶石劑中卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂的含量越高，其對膽固醇的溶解量越大。但在實際應用中，我們不僅要考慮單位體積的溶石劑對膽結石的溶解量，還需考慮溶石劑對膽結石的溶解速度以及成本問題。因此，根據本發明，所述用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑中，基于ImL的甲基叔丁醚計，卵磷脂，優選大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂的量為O. 10 O. 60g,優選O. 20 O. 50g，更優選O. 3 O. 4g。在實際應用中選擇的溶石劑中卵磷脂的最佳用量視情況有所不同，如對于大豆卵磷脂與甲基叔丁醚量的關系而言，基于ImL的甲基叔丁醚計，大豆卵磷脂的量最優選為O. 30 O. 40g，而蛋黃卵磷脂的量最優選為O. 10 O. 40g。根據本發明優選的實施方式，所述溶石劑由以上所述量的甲基叔丁醚和卵磷脂如大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂兩種成分所組成。本發明另一主題是以上所述溶石劑用于溶解膽固醇型結石的用途。本發明另一主題是以上所述溶石劑在制備治療膽固醇型結石的藥物中的用途。用本發明的溶石劑對膽固醇型結石進行體外溶解，結果發現，膽結石基本溶解，只留下少量的不溶殘渣。通過在紅外譜庫中對殘渣的紅外光譜匹配比對，發現殘渣的紅外光譜與膽紅素的譜圖匹配度最大。而相關文獻中曾報道人膽結石中的主要成分是膽固醇和膽紅素，而膽固醇型結石中膽固醇含量超過70 %，有的甚至高達90 %以上。因此，本發明的溶石劑對于膽固醇型結石的溶石效果更佳。雖然根據本發明的溶石劑對膽紅素的溶解效果不佳，但膽固醇型結石基本溶解后所剩殘渣直徑基本上小于1_，而直接灌注溶石手術中所使用的導管直徑一般在2_左右，膽管的平均直徑大概為2到3_，因此這些不溶殘渣足夠小，完全可以由導管抽出或由膽管系統沖出。本發明的溶石劑可以采用直接灌注溶石法的給藥方式，通過經皮經肝膽道置管(PTCD)或經內鏡下逆行膽囊插管(ERCG)等途徑，將溶石劑灌注進入膽囊，使其直接和膽石接觸，對膽固醇型結石顯示出明顯療效，除了發揮出直接灌注溶石法治療時間短、收效快的效果外，還避免了汽化或揮發產生的高壓給病人帶來的腹痛感，也相應降低了甲基叔丁醚的刺激性氣味及其他副作用。把本發明的新型溶石劑用于溶解人體膽結石的體外實驗研究表明，該新型溶石劑對人體膽結石的溶解能力強于市場上任何溶石劑。由于大豆卵磷脂和蛋黃卵磷脂等卵磷脂是保健產品，對人體沒有任何毒性，結合以往的有關甲基叔丁醚毒性研究的文獻，由于達到同樣的溶石效果相應地減少了甲基叔丁醚的用量，一定程度上會抑制其揮發以及由此可能帶來的腹部脹痛感，同時減弱了其刺激性氣味，因此本發明的新型溶石劑完全能夠用于臨床膽固醇型結石病人的非手術療法的治療。
圖I :膽結石樣品的紅外光譜圖和膽固醇標準紅外光譜圖，其中上圖是膽結石樣品譜，下圖是膽固醇標準譜；圖2 :實施例2中膽結石樣品經包含甲基叔丁醚和大豆卵磷脂的溶石劑溶解后剩下的不溶殘渣的電鏡照片；圖3 :膽結石樣品的紅外光譜圖與膽結石在實施例2的溶石劑中充分溶解后所剩殘渣的紅外光譜圖的比較，其中上圖是膽結石樣品譜，下圖是溶解后所剩殘渣的紅外光譜；圖4 :膽結石被實施例2的溶石劑溶解前的照片；圖5 :膽結石被實施例2的溶石劑充分溶解后的照片；圖6 :膽結石被實施例4的溶石劑溶解前的照片；圖7 :膽結石被實施例4的溶石劑充分溶解后的照片；圖8a :為甲基叔丁基醚的結構式，其中在甲基的碳原子上標有* ；圖8b :為膽固醇的結構式，其中將*標于如圖所示位置的相應碳原子上；圖8c =MTBE溶解膽固醇后，膽固醇中帶*的碳原子所對應的核磁譜，將其中的峰標記為b峰；實施例2所配制溶石劑溶解膽固醇后，膽固醇中帶*的碳原子所對應的核磁譜，將其中的峰標記為a峰；和 圖8d =MTBE溶解膽固醇后，膽固醇中帶*的碳原子所對應的核磁譜，將其中的峰標記為b峰；實施例5所配制溶石劑溶解膽固醇后，膽固醇中帶*的碳原子所對應的核磁譜，將其中的峰標記為a峰。
具體實施方式
下面結合附圖通過具體實施方式
對本發明進行詳細說明。本發明的特點和優點將隨著這些描述變得更為清楚、明確。實施例I :配制溶石劑:為了測定在規定時間內大豆卵磷脂含有量不同的溶石劑對膽固醇的溶解能力，向6支IOmL的具塞比色管中分別加入3mL的甲基叔丁醚，再分別加入O. OOg,O. 30g,0. 60g,O. 90g, I. 20g, I. 50g的大豆卵磷脂制成溶液。溶解膽固醇:向這6支試管中逐漸加入膽固醇，漩渦振蕩3分鐘后，分別計算膽固醇的溶解量。實駘結果:表I中列出了隨著大豆卵磷脂量的增多，膽固醇在該溶石劑中的溶解情況。表I :
甲基叔丁醚的量(mL)~Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 大豆卵磷脂的量(g) OOO 030 060 090 Oo ΓδΟ 溶解膽固醇的量(g)042οΓδ οΓδ 0 600 69063從表I的實驗結果可以看出，溶石劑中隨著大豆卵磷脂的含量增加，溶解膽固醇的量逐漸增加，當大豆卵磷脂的質量增加到I. 5g時，膽固醇在溶石劑中的溶解量反而減小。實施例2 配制溶石劑:按照3mL的甲基叔丁醚對應O. 90g的大豆卵磷脂這一關系配制溶石劑。溶解人體膽結石:取一塊從人體中取出的膽結石樣品，其紅外光譜如圖I中上面的圖所示，下面的圖是膽固醇標準紅外光譜圖。由圖I確定該樣品為膽固醇型結石。該膽結石被溶石劑溶解前的形態照片如圖4所述。將該膽結石樣品逐漸加入所配制的溶石劑中，在超聲下，14至15min后膽結石基本溶解，只留下少量的不溶殘渣。對殘渣進行電鏡分析，其電鏡照片如附圖2所示，表明殘渣的直徑基本上小于Imm0而直接灌注溶石手術中所使用的導管直徑在2_左右，膽管的平均直徑為2到3_，因此這些不溶殘渣足夠小，完全可以由導管抽出或由膽管系統沖出。圖3為膽結石樣品的紅外光譜圖與膽結石在溶石劑中充分溶解后所剩殘渣的紅外光譜圖的比較，其中上圖是膽結石樣品譜，下圖是溶解后所剩殘渣的紅外光譜。兩個譜峰有較大差別，說明膽固醇型結石樣品中的主要成分，即膽固醇基本被溶解，余下不能被溶石劑溶解的殘渣。
通過在紅外譜庫中對殘渣的紅外光譜匹配比對，發現殘渣的紅外光譜與膽紅素的譜圖匹配度最大。相關文獻中曾報道人膽結石中的主要成分是膽固醇和膽紅素，而膽固醇型結石中膽固醇含量超過70%，有的甚至高達90%以上。因此，本發明該實施例制備的溶石劑對于膽固醇型結石的溶石效果更佳。該膽結石被所配制的溶石劑充分溶解后的形態照片如圖5所示，可見膽結石基本溶解。實施例3 配制溶石劑: 按照3mL的甲基叔丁醚對應I. 20g的大豆卵磷脂這一關系配制溶石劑。溶解人體膽結石:取一塊如實施例2那樣來自人體的膽固醇型膽結石樣品。將該膽結石樣品逐漸加入所配制的溶石劑中，在超聲下，12至13min后膽結石基本溶解，只留下少量的不溶殘渣，其形態照片類似圖5那樣，而且這些殘渣的直徑基本上小于1mm。實施例4 配制溶石劑:為了測定在規定時間內，蛋黃卵磷脂含有量不同的溶石劑對膽固醇的溶解能力，向6支IOmL的具塞比色管中分別加入3mL的甲基叔丁醚,再分別加入O. OOg, O. 30g,0. 60g,
O.90g, I. 20g, I. 50g的蛋黃卵磷脂制成溶液。溶解膽固醇:向這6支試管中逐漸加入膽固醇，漩渦振蕩3分鐘后，分別計算膽固醇的溶解量。實驗結果:表2中列出了隨著蛋黃卵磷脂量的增多，膽固醇在該溶石劑中的溶解情況。表2
甲基叔丁醚的量(mL)~Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 Γ1 蛋黃卵磷脂的量(g)OOO030060090 Γ20 ΤδΟ
溶解膽固醇的量(g)0420680690 700 73086從表2的實驗結果可以看出，溶石劑中隨著蛋黃卵磷脂的含量增加，溶解膽固醇的量逐漸增加，即使當蛋黃卵磷脂的質量增加到I. 5g時，膽固醇在溶石劑中的溶解量仍比較大，但觀察到此時溶液體系的粘度也較大。實施例5 配制溶石劑:按照3mL的甲基叔丁醚對應O. 30g的蛋黃卵磷脂這一關系配制溶石劑。溶解人體膽結石:取一塊從人體中取出的膽結石樣品，由紅外光譜圖確定該樣品為膽固醇型結石。該膽結石被溶石劑溶解前的形態照片如圖6所述。將該膽結石樣品逐漸加入所配制的溶石劑中，在超聲下，18至20min后膽結石基本溶解，只留下少量的不溶殘渣。通過在紅外譜庫中對殘渣的紅外光譜匹配比對，發現殘渣的紅外光譜與膽紅素的譜圖匹配度最大。因此，該溶石劑對于膽固醇型結石的溶石效果更佳。該膽結石被所配制的溶石劑充分溶解后的形態照片如圖7所示，可見膽結石基本溶解，而且這些殘渣的直徑基本上小于1mm。實施例6 配制溶石劑:
按照3mL的甲基叔丁醚對應O. 90g的蛋黃卵磷脂這一關系配制溶石劑。溶解人體膽結石:取一塊如實施例5那樣來自人體的膽固醇型膽結石樣品。將該膽結石樣品逐漸加入所配制的溶石劑中，在超聲下，16至17min后膽結石基本溶解，只留下少量的不溶殘渣，其形態照片類似圖7那樣，而且這些殘渣的直徑基本上小于1mm。實施例7 配制溶石劑:按照3mL的甲基叔丁醚對應I. 50g的蛋黃卵磷脂這一關系配制溶石劑。
_3] 溶解人體膽結石:取一塊如實施例5那樣來自人體的膽固醇型膽結石樣品。將該膽結石樣品逐漸加入所配制的溶石劑中，在超聲下，14至15min后膽結石基本溶解，只留下少量的不溶殘渣，其形態照片類似圖7那樣，而且這些殘渣的直徑基本上小于1mm。測丨試實例:碳譜以圖8a的甲基叔丁基醚以及圖Sb的膽固醇中帶星號*的碳原子為研究對象。步驟A:在MTBE中加入足夠多的膽固醇，充分溶解后取一定量的上清液用MTBE稀釋，對稀釋后的溶液進行定量碳譜的測定。把圖8a甲基叔丁醚中帶星號*的碳原子對應峰的面積定為1，測量圖8b的膽固醇中帶星號*的碳原子對應的核磁譜峰的面積，該峰命名為b峰,如圖8c下圖所示。步驟B :在實施例2所配制的大豆卵磷脂和MTBE的溶石劑中加入足夠多的膽固醇，充分溶解后取一定量的上清液，用MTBE稀釋，稀釋倍數為步驟A的I. 3倍，對稀釋后的溶液進行定量碳譜的測定。把圖8a的甲基叔丁醚中帶星號*的碳原子對應峰的面積定為
I,測量圖8b的膽固醇中帶星號*的碳原子對應峰的面積，該峰命名為a峰，如圖8c上圖所
/Jn ο由于在大豆卵磷脂和MTBE形成的溶石劑中溶解較多的膽固醇后，長期放置體系會凝固，不利于做定量碳譜(因為定量碳譜需要掃描較長的時間)，所以相對于A步驟而言，對體系進行了稍加倍的稀釋。經折算后，圖Sc中a峰的積分面積為O. 048，b峰的積分面積為O. 041。因此，通過定量碳譜進一步驗證了在MTB E中加入大豆卵磷脂后，混合溶劑對膽固醇的溶解能力進一步增大。而且由核磁圖發現，當在MTB E中加入大豆卵磷脂后，膽固醇的峰位向高場發生了移動，說明大豆卵磷脂和膽固醇之間存在著一定的相互作用力，而這種作用力可能是導致新型溶石劑對膽固醇的溶解能力增大的直接原因。步驟B’ 在實施例5所配制的蛋黃卵磷脂和MTB E的溶石劑中加入足夠多的膽固醇，充分溶解后取一定量的上清液，用MTB E稀釋與步驟A相同的倍數，對稀釋后的溶液進行定量碳譜的測定。把圖8a的甲基叔丁醚中帶星號*的碳原子對應峰的面積定為1，測量圖8b的膽固醇中帶星號*的碳原子對應峰的面積,該峰命名為a峰,如圖8d上圖所示。圖8d中a峰的積分面積為O. 054，b峰的積分面積為O. 041。因此，通過定量碳譜進一步驗證了在MTB E中加入蛋黃卵磷脂后，混合溶劑對膽固醇的溶解能力進一步增大。而且由核磁圖發現，當在MTBE中加入蛋黃卵磷脂后，膽固醇的峰位向高場發生了移動，說明蛋黃卵磷脂和膽固醇之間存在著一定的相互作用力，而這種作用力可能是導致新型溶石劑對膽固醇的溶解能力增大的直接原因。 以上通過優選的具體實施方式
對本發明進行了范例性說明。不過需要聲明的是，這些具體實施方式
僅是對本發明的闡述性解釋，并不對本發明的保護范圍構成任何限制，在不超出本發明精神和保護范圍的情況下，本領域技術人員可以對本發明技術內容及其實施方式進行各種改進、等價替換或修飾，這些均落入本發明的保護范圍內。
權利要求
1.一種用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑，其特征在于， 該溶石劑包含甲基叔丁醚和卵磷脂，并且基于IrnL的甲基叔丁醚計，卵磷脂的量為O.10 O. 60go
2.根據權利要求I所述的溶石劑，其特征在于，所述卵磷脂是大豆卵磷脂。
3.根據權利要求I所述的溶石劑，其特征在于，所述卵磷脂是蛋黃卵磷脂。
4.根據權利要求I至3之一所述的溶石劑，其特征在于， 基于ImL的甲基叔丁醚計，所述卵磷脂的量為O. 20 O. 50g，優選O. 30 O. 40g。
5.根據權利要求I至4之一所述的溶石劑，其特征在于， 基于ImL的甲基叔丁醚計，大豆卵磷脂的量優選為O. 30 O. 40g，最優選為O. 30g。
6.根據權利要求I至4之一所述的溶石劑，其特征在于， 基于ImL的甲基叔丁醚計，蛋黃卵磷脂的量優選為O. 10 O. 40g。
7.根據權利要求I至6之一所述的溶石劑，其特征在于，所述溶石劑由所述量的甲基叔丁醚和大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂組成。
8.根據權利要求I至7之一所述的溶石劑用于溶解膽固醇型結石的用途。
9.根據權利要求I至7之一所述的溶石劑在制備治療膽固醇型結石的藥物中的用途。
10.根據權利要求I至7之一所述的溶石劑的給藥方式，包括經皮經肝膽道置管(PTCD)或經內鏡下逆行膽囊插管(ERCG)等途徑，將溶石劑灌注進入膽囊，使其直接和膽石接觸。
全文摘要
本發明涉及一種用于溶解膽固醇型結石的混合溶石劑，其特征在于，該溶石劑包含甲基叔丁醚和卵磷脂，并且基于1mL的甲基叔丁醚計，卵磷脂的量為0.10～0.60g，所述卵磷脂優選是大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。本發明的溶石劑不但可以相應降低甲基叔丁醚的飽和蒸汽壓，而且由于相應降低了甲基叔丁醚的百分含量，因此也相應降低了其氣味的刺激性，因此本發明的新型溶石劑能夠用于臨床膽固醇型結石病人的非手術療法的治療。
文檔編號A61P1/16GK102614155SQ20121006519
公開日2012年8月1日 申請日期2012年1月13日 優先權日2012年1月13日
發明者凌曉鋒, 劉微, 吳瑾光, 周孝思, 徐怡莊, 李昕, 李曉佩 申請人:中國科學院過程工程研究所, 北京大學, 北京大學第三醫院, 遼寧中醫藥大學