從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法

專利名稱：從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法
技術領域：
本發明涉及的是一種醫藥技術領域的藥物分離方法，具體是從植物催吐蘿芙木(Rauwolfia vomitoria Afz.)中提取育亨賓(yohimbine)、阿嗎靈(ajmaline)、蛇根喊(serpentine)、利血平(reserpine)、利新胺(rescinnamine)等5種生物堿的方法。
背景技術：
蘿芙木是夾竹桃科蘿芙木屬植物，含有多種藥效成分。催吐蘿芙木是蘿芙木的一種，從非洲引進，其中含有利血平、阿嗎靈、育亨賓、蛇根堿等多種生物堿，這些生物堿可作為藥物，臨床上具有對多種疾病的治療作用。經對現有技術文獻檢索發現，從蘿芙木(包括催吐蘿芙木)中提取藥效成分，報道較多的是提取利血平，早期采用苯萃取，以后用大孔樹脂提取。從催吐蘿芙木中同時提取幾種組分的報道，有提取利血平和育亨賓的研究，但提取出的育亨賓純度較低(劉宇、馮蕾、趙鳳生，藥物生物技術，2008，15 (5) =393-397)。還有從催吐蘿芙木中同時提取利血平、利血匹林、蘿芙木新堿的報道，但提取步驟較多，花費時間長(周雪晴、馮玉紅、張沖、陳四利、林強，海南大學學報自然科學版，2008, 26 (2) 145-148)。

發明內容
本發明針對現有技術存在的上述不足，提供一種從催吐蘿芙木中一次最多可以提取5種生物堿的方法，用酸性乙醇浸提、大孔樹脂吸附、弱酸性陽離子交換樹脂提取、反相層析分離等技術相結合，提取出的生物堿均有較高的純度。本發明是通過如下技術方案實現的本發明提供一種從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，即同時提取育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺；具體包括如下步驟(I)取催吐蘿芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的乙醇水溶液，攪拌、浸提、過濾，得到浸提液，照此程序重復2-3次；(2)將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液用非極性大孔吸附樹脂吸附，然后用水洗滌樹脂，隨后用40%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為Al)，再用80%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為BI)；(3)將上述收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al用弱酸性陽離子交換樹脂吸附，然后用水洗滌樹脂，隨后用50%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為A2);濃縮后的洗脫液BI用弱酸性陽離子交換樹脂吸附，然后用水洗滌樹脂，隨后用50%乙醇洗脫，收集洗脫液(記為B2)；(4)將上述收集的兩部分洗脫液A2和B2分別用濃酸調節到pH 3左右，減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液A2用C18反相層析介質吸附，然后用乙醇水溶液洗脫，分段收集洗脫液(記為A3);濃縮后的洗脫液B2用C18反相層析介質吸附，然后用乙醇水溶液洗脫，分段收集洗脫液(記為B3)；
(5)將上述分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測定其中各種生物堿的含量，將洗脫液A3中含育亨賓或阿嗎靈并且純度較高的部分分別合并；將洗脫液B3中含蛇根堿或利血平或利新胺并且純度較高的部分分別合并；分別減壓加熱濃縮，至液體蒸干，力口入有機溶劑結晶，得到育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺的晶體。步驟(I)中所述的含酸的乙醇水溶液，含有10% -60%的水(體積百分比)，同時含有酸，酸的濃度為0. 02-0. 2mol/L，酸可以是硫酸、鹽酸或乙酸；所述的浸提，每次加入的含酸的乙醇水溶液的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的3-10倍。
步驟(2)中，將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液在常溫下用非極性大孔吸附樹脂吸附，非極性大孔吸附樹脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的40% _50%，然后用水洗滌樹脂，水的體積為非極性大孔吸附樹脂體積的1-5倍，隨后用40%乙醇洗脫，40%乙醇的體積為非極性大孔吸附樹脂體積的2-5倍，收集洗脫液Al，再用80%乙醇洗脫，80%乙醇的體積為非極性大孔吸附樹脂體積的2-5倍，收集洗脫液BI ；所述的用水洗滌樹脂，是用去離子水或純凈水從柱的進口通入柱內，再從柱的出口流出，洗滌時間為0. 5-3h ；所述的40%乙醇，其中含有體積百分比為59%的水及體積百分比為1%的鹽酸；所述的80%乙醇，其中含有體積百分比為19%的水及體積百分比為1%的鹽酸。步驟(3)中，將收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al和BI分別在常溫下用弱酸性陽離子交換樹脂吸附，吸附每一部分洗脫液所用的弱酸性陽離子交換樹脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的20%-30%，然后用水洗滌樹月旨，水的體積為弱酸性陽離子交換樹脂體積的1-5倍，隨后用50%乙醇洗脫，50%乙醇的體積為弱酸性陽離子交換樹脂體積的3-5倍，收集洗脫液A2和B2 ；所述的用水洗滌樹脂，是用去離子水或純凈水從柱的進口通入柱內，再從柱的出口流出，洗滌時間為0. 5-2h ；所述的50%乙醇，其中含有體積百分比為45%的水及體積百分比為5%的氨水。步驟⑷中，將收集的洗脫液A2和B2分別用濃酸調節到pH 3左右，減壓加熱濃縮；濃縮后的洗脫液A2在常溫下用C18反相層析介質吸附，C18反相層析介質的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的10% _20%，然后依次用5%、10%、15%、20%、95%乙醇水溶液洗脫，乙醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液A3 ;濃縮后的洗脫液B2在常溫下用C18反相層析介質吸附，C18反相層析介質的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的10% -20%，然后依次用15%、20%、25%、30%、35%、40^^55^^95%乙醇水溶液洗脫，乙醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液B3 ；所述的濃酸為濃硫酸或濃鹽酸；所述的分段收集洗脫液，是將洗脫時間或洗脫體積分為若干段，每一段洗脫時間或洗脫體積內的洗脫液收集為I份。步驟(5)中所述的加入有機溶劑結晶，對于洗脫液A3中的育亨賓、阿嗎靈或洗脫液B3中的蛇根堿，加入甲醇，攪拌使固體溶解，甲醇加入量能使固體全部溶解,但不宜過量，再加入乙醚，加入體積為甲醇體積的2-5倍，攪拌I_3h，于0-5 °C放置10-20h，析出結晶，過濾或離心去除母液，得到結晶；對于洗脫液B3中的利血平或利新胺，加入乙酸乙酯，攪拌使固體溶解，乙酸乙酯加入量能使固體全部溶解，但不宜過量，再加入甲醇，加入體積為乙酸乙酯體積的2-5倍，攪拌l_3h，于0-5°C放置10-20h，析出結晶，過濾或離心去除母液，得到結晶；按以上步驟所得晶體放入40-50°C烘箱中烘5-10h，至恒重為止；步驟(5)中，分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測定其中各種生物堿的含量，如果某種生物堿的純度不夠高，需要再次提純，可以將洗脫液A3或B3中含有欲再次提純的生物堿的洗脫液合并，作為A2或B2，按照步驟(4)再操作一次。以上所述的減壓加熱濃縮都是在溫度45_65°C、真空度0. 08-0. IOM Pa的條件下進行，除特別說明的以外，一般將液體濃縮至原來體積的一半左右。本發明上述方法中，可以只取40%乙醇洗脫液Al進行所述步驟(3)、(4)、(5)中對應操作，依次得到A2、A3，以及最終的生物堿育亨賓、阿嗎靈；也可以只取80%乙醇洗脫液BI進行所述步驟(3)、(4)、(5)中對應操作，依次得到B2、B3，以及最終的生物堿蛇根堿、利血平、利新胺。與現有技術相比，本發明將酸性乙醇浸提、大孔樹脂吸附、弱酸性陽離子交換樹脂提取、反相層析分離等技術相結合，同時提取育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺5種生物堿，提取出的生物堿均有較高的純度。
具體實施例方式下面對本發明的實施例作詳細說明本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。以下實施例中沒有詳細說明的操作，可以采用現有技術中的常規操作。實施例I取干燥的催吐蘿芙木根部粉末2500g，加入含0. 025mol/L硫酸的50%乙醇溶液浸提，共浸提2次，兩次浸提加入的液體體積分別為25000mL、12500mL，每次浸提時間均為2h，浸提時間歇攪拌，每次浸提后過濾。將2份浸提液合并，體積為31000mL，減壓加熱濃縮為16000mL，過濾。濾液通入裝在柱內的1200mL HZ-818非極性大孔吸附樹脂(華東理工大學華震科技有限公司制)進行吸附，共吸附20h。然后用1500mL去離子水通入樹脂柱中洗滌1.5h。用2400mL 40%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間4h。收集洗脫液，減壓加熱濃縮至840mL。濃縮液通入裝在柱內的700mL D152弱酸性陽離子交換樹脂(南開大學化工廠制)進行吸附，共吸附4h。然后用SOOmL去離子水通入樹脂柱中洗滌I. 5h。用2IOOmL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間4h。收集洗脫液,用10mol/L硫酸調節pH為3,減壓加熱濃縮至llOOmL。濃縮液通入裝在柱內的500mL C18反相層析介質(日本YMC公司制)進行吸附，共吸附2h。然后依次用2000mL 5%乙醇溶液、4000mL 10%乙醇溶液、IOOOmL 15%乙醇溶液、IOOOmL 20%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含0. 01 %三氟乙酸)通入柱中進行洗脫，洗脫時間15h。洗脫液分為13份收集。分段收集的洗脫液經高效液相色譜儀測定，其中5%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液、中育亨賓含量較高，合并，體積lOOOmL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL甲醇溶解固體，再加A 40mL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到育亨賓沉淀,放入40°C烘箱中烘10h，得育亨賓14mg，純度52%。10%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中阿嗎靈含量較高，合并，體積2700mL。減壓加熱濃縮至干，加入15mL甲醇溶解固體,再加入50mL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心lOmin，得到阿嗎靈沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得阿嗎靈406mg，純度63%。實施例2催吐蘿芙木浸提、非極性大孔樹脂吸附與洗脫、弱酸性陽離子交換樹脂吸附與洗脫、結晶與干燥的實施步驟與實施例I相同，不同之處在于C18反相層析收集的洗脫液中育亨賓含量較高的部分合并后，體積lOOOmL，減壓加熱濃縮至700mL,再通入裝在柱內的500mL C18反相層析介質進行吸附,共吸附2h。然后依次用2000mL 5%乙醇溶液、2000mL 10%乙醇溶液、500mL 15%乙醇溶液、500mL 20%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含0. 01 %三氟乙酸)通入柱中進行洗脫，洗脫時間10h。洗脫液分為10份收集。經高效液相色譜儀測定，其中5%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液中育亨賓含量較高，合并，體積800mL。結晶，得育亨賓6mg，純度87 %。C18反相層析收集的洗脫液中阿嗎靈含量較高的部分合并后，體積2700mL，減壓加熱濃縮至1500mL,再通入裝在柱內的500mL C18反相層析介質進行吸附,共吸附2. 5h。然后依次用2000mL 5%乙醇溶液、2000mL 10%乙醇溶液、500mL 15%乙醇溶液、500mL 20%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含0. 01 %三氟乙酸)通入柱中進行洗脫，洗脫時間10h。洗脫液分為10份收集。經高效液相色譜儀測定，其中10%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液中阿嗎靈含量較高，合并，體積700mL。結晶，得阿嗎靈23011^，純度90%。實施例3取干燥的催吐蘿芙木根部粉末2500g，加入含0. 025mol/L硫酸的50%乙醇溶液浸提，共浸提2次，兩次浸提加入的液體體積分別為25000mL、12500mL，每次浸提時間均為2h，浸提時間歇攪拌，每次浸提后過濾。將2份浸提液合并，體積為30000mL，減壓加熱濃縮為15000mL，過濾。濾液通入裝在柱內的1200mL HZ-818非極性大孔吸附樹脂進行吸附，共吸附18h。然后用1500mL去離子水通入樹脂柱中洗滌I. 5h。用2500mL 40%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間4h。再用3000mL 80%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹脂柱中進行洗脫,洗脫時間6h。收集80%乙醇溶液洗脫液，減壓加熱濃縮至680mL。濃縮液通入裝在柱內的600mLD152弱酸性陽離子交換樹脂進行吸附，共吸附4h。然后用SOOmL去離子水通入樹脂柱中洗滌I. 5h。用3000mL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間6h。
收集洗脫液,用10mol/L硫酸調節pH為3,減壓加熱濃縮至1200mL。濃縮液通入裝在柱內的500mL C18反相層析介質進行吸附，共吸附2h。然后依次用800mL 15%乙醇溶液、800mL 20%乙醇溶液、600mL 25%乙醇溶液、600mL 30%乙醇溶液、600mL35%乙醇溶液、600mL 40%乙醇溶液、600mL 55%乙醇溶液、500mL 95%乙醇溶液(均含有0.01%三氟乙酸)通入柱中進行洗脫，洗脫時間10h。洗脫液分為10份收集。
分段收集的洗脫液經高效液相色譜儀測定，其中20%、25%、30%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中蛇根堿含量較高，合并，體積1600mL。減壓加熱濃縮至干，加入15mL甲醇溶解固體，再加入50mL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到蛇根堿沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得蛇根堿780mg，純度95%。35%乙醇溶液洗脫的I份洗脫液中利血平含量較高，體積600mL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL乙酸乙酯溶解固體，再加入45mL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心lOmin，得到利血平沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得利血平107mg，純度98%。40%乙醇溶液洗脫的I份洗脫液中利新胺含量較高，體積300mL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL乙酸乙酯溶解固體，再加入45mL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到利新胺沉淀,放入40°C烘箱中烘IOh,得利新胺8mg,純度98%。實施例4取干燥的催吐蘿芙木根部粉末5000g，加入含0. 05mol/L硫酸的50 %乙醇溶液浸提，共浸提2次，兩次浸提加入的液體體積分別為50000mL、25000mL，每次浸提時間均為2h，浸提時間歇攪拌，每次浸提后過濾。將2份浸提液合并，體積為60000mL，減壓加熱濃縮為30000mL，過濾。濾液通入裝在柱內的2300mL HZ-818非極性大孔吸附樹脂進行吸附，共吸附20h。然后用3000mL去離子水通入樹脂柱中洗滌2h。用5000mL 40%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間5h，收集洗脫液。再用6000mL 80%乙醇溶液(含1%鹽酸)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間6h，收集洗脫液。40%乙醇溶液的洗脫液減壓加熱濃縮至2400mL。濃縮液通入裝在柱內的1200mLD152弱酸性陽離子交換樹脂進行吸附，共吸附4h。然后用1400mL去離子水通入樹脂柱中洗滌I. 5h。用4500mL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間6h。收集洗脫液，用10mol/L硫酸調節pH為3,減壓加熱濃縮至2000mL。濃縮液通入裝在柱內的500mL C18反相層析介質進行吸附，共吸附3. 5h。然后依次用6000mL 5%乙醇溶液、3500mL 10%乙醇溶液、500mL 15%乙醇溶液、IOOOmL 20%乙醇溶液、IOOOmL 95%乙醇溶液(均含0.01%三氟乙酸)通入柱中進行洗脫，洗脫時間20h。洗脫液分為15份收集。分段收集的洗脫液經高效液相色譜儀測定，其中5%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中育亨賓含量較高，合并，體積3300mL。減壓加熱濃縮至干，加入20mL甲醇溶解固體，再加A 8OmL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到育亨賓沉淀,放入40°C烘箱中烘10h，得育亨賓26mg，純度55%。10%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中阿嗎靈含量較高，合并，體積3500mL。減壓加熱濃縮至干，加入30mL甲醇溶解固體，再加入IOOmL乙醚，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心lOmin，得到阿嗎靈沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得阿嗎靈1027mg，純度71 %。HZ-818非極性大孔吸附樹脂用80%乙醇溶液洗脫得到的洗脫液減壓加熱濃縮至1600mL。濃縮液通入裝在柱內的1200mL D152弱酸性陽離子交換樹脂進行吸附，共吸附4h。然后用1500mL去離子水通入樹脂柱中洗滌I. 5h。用6000mL 50%乙醇溶液(含5%氨水)通入樹脂柱中進行洗脫，洗脫時間6h。
收集洗脫液,用10mol/L硫酸調節pH為3,減壓加熱濃縮至3000mL。濃縮液通入裝在柱內的500mL C18反相層析介質進行吸附，共吸附5h。然后依次用1500mL 15%乙醇溶液、1500mL 20%乙醇溶液、3500mL 25%乙醇溶液、1500mL 30 %乙醇溶液、1200mL 35%乙醇溶液、600mL 40%乙醇溶液、600mL 55%乙醇溶液、700mL 95%乙醇溶液(均含有0.01%三氟乙酸)通入柱中進行洗脫，洗脫時間21h。洗脫液分為20份收集。分段收集的洗脫液經高效液相色譜儀測定，其中20%、25%乙醇溶液洗脫的3份洗脫液中蛇根堿含量較高，合并，體積1800mL。減壓加熱濃縮至干，加入30mL甲醇溶解固體，再加入IOOmL乙醚,攪拌Ih,于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到蛇根堿沉淀，放入40°C烘箱中烘10h，得蛇根堿1564mg，純度97%。35%乙醇溶液洗脫的2份洗脫液中利血平含量較高，合并，體積1200mL。減壓加熱濃縮至干，加入20mL乙酸乙酯溶解固體，再加入SOmL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到利血平沉淀，放入40°C烘箱中烘IOh,得利血平309mg,純度99%。40%乙醇溶液洗脫的I份洗脫液中利新胺含量較高，體積600mL。減壓加熱濃縮至干，加入IOmL乙酸乙酯溶解固體，再加入45mL甲醇，攪拌lh，于4°C放置12h。在4000r/min離心IOmin,得到利新胺沉淀,放入40°C烘箱中烘IOh,得利新胺21mg,純度98%。以上為本發明的優選實施例，本發明還有其他可實現的方式。盡管本發明的內容已經通過上述優選實施例作了詳細介紹，但應當認識到上述的描述不應被認為是對本發明的限制。在本領域的技術人員閱讀了上述內容后，對于本發明的多種修改和替代都將是顯而易見的。因此，本發明的保護范圍應由所附的權利要求來限定。
權利要求
1.一種從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征在于，具體包括如下步驟 (1)取催吐蘿芙木根部粉碎而成的粉末，加入含酸的こ醇水溶液，攪拌、浸提、過濾，得到浸提液，照此程序重復2-3次； (2)將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液用非極性大孔吸附樹脂吸附，然后用水洗滌樹脂，隨后用40%こ醇洗脫，收集洗脫液Al，再用80%こ醇洗脫，收集洗脫液BI ； (3)將上述收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al和BI分別用弱酸性陽離子交換樹脂吸附，然后用水洗滌樹脂，隨后用50%こ醇洗脫，收集洗脫液A2、B2 ； (4)將上述收集的兩部分洗脫液A2和B2分別用濃酸調節到pH3左右，減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液A2和B2分別用C18反相層析介質吸附，然后用こ醇水溶液洗脫，分段收集洗脫液A3、B3 ； (5)將上述分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測定其中各種生物堿的含量，將洗脫液A3中含育亨賓或阿嗎靈并且純度較高的部分分別合并；將洗脫液B3中含蛇根堿或利血平或利新胺并且純度較高的部分分別合并；分別減壓加熱濃縮，至液體蒸干，加入有機溶劑結晶，得到育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺的晶體。
2.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(I)中所述的含酸的こ醇水溶液，含有體積百分比為10% -60%的水及0. 02-0. 2mol/L的酸。
3.根據權利要求2所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，所述的酸是硫酸、鹽酸或こ酸。
4.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(I)中，毎次浸提時所用的含酸的こ醇水溶液體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的3-10倍。
5.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(2)中，將所得的浸提液合并，減壓加熱濃縮，濃縮后的浸提液在常溫下用非極性大孔吸附樹脂吸附，非極性大孔吸附樹脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的40% -50%,然后用水洗滌樹脂，水的體積為非極性大孔吸附樹脂體積的1-5倍，隨后用40%こ醇洗脫，40%こ醇的體積為非極性大孔吸附樹脂體積的2-5倍，收集洗脫液Al，再用80%こ醇洗脫，80%こ醇的體積為非極性大孔吸附樹脂體積的2-5倍，收集洗脫液BI。
6.根據權利要求I或5所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(2)中所述的40%こ醇，其中含有體積百分比為59%的水及體積百分比為I%的鹽酸；所述的80%こ醇，其中含有體積百分比為19%的水及體積百分比為1%的鹽酸。
7.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(3)中，將收集的兩部分洗脫液Al和BI分別減壓加熱濃縮，濃縮后的洗脫液Al和BI分別在常溫下用弱酸性陽離子交換樹脂吸附，吸附每一部分洗脫液所用的弱酸性陽離子交換樹脂的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的20% -30%，然后用水洗滌樹脂，水的體積為弱酸性陽離子交換樹脂體積的1-5倍，隨后用50%こ醇洗脫，50%こ醇的體積為弱酸性陽離子交換樹脂體積的3-5倍，收集洗脫液A2和B2。
8.根據權利要求I或7所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(3)中所述的50%こ醇，其中含有體積百分比為45%的水及體積百分比為5%的氨水。
9.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中，將收集的洗脫液A2和B2分別用濃酸調節到pH 3，減壓加熱濃縮；濃縮后的洗脫液A2在常溫下用C18反相層析介質吸附，C18反相層析介質的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重g的10% -20%，然后依次用5%、10%、15%、20%、95%こ醇水溶液洗脫，こ醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液A3 ;濃縮后的洗脫液B2在常溫下用C18反相層析介質吸附，C18反相層析介質的體積mL為催吐蘿芙木根部粉末干重 g 的 10%-20%，然后依次用 15%、20%、25%、30%、35%、40%、55%、95% こ醇水溶液洗脫，こ醇水溶液的體積總和為C18反相層析介質體積的10-30倍，分段收集10-20份洗脫液B3。
10.根據權利要求9所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中所述的5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、55%、95% こ醇水溶液，其中分別含有體積百分比為95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、45%、5%的水，并含有體積百分比為O. 01%的三氟こ酸。
11.根據權利要求I或9所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中所述的濃酸為濃硫酸或濃鹽酸。
12.根據權利要求I或9所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(4)中所述的分段收集洗脫液，是將洗脫時間或洗脫體積分為若干段，每一段洗脫時間或洗脫體積內的洗脫液收集為I份。
13.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(5)中所述的加入有機溶劑結晶，具體操作為對于育亨賓、阿嗎靈或蛇根堿，加入甲醇，攪拌使固體溶解，甲醇加入量能使固體全部溶解，再加入こ醚，加入體積為甲醇體積的2-5倍，攪拌，于0-5 °C放置，析出結晶，去除母液，得到結晶；對于利血平或利新胺，加入こ酸こ酷，攪拌使固體溶解，こ酸こ酯加入量能使固體全部溶解，再加入甲醇，加入體積為こ酸こ酯體積的2-5倍，攪拌，于0-5 °C放置，析出結晶，去除母液，得到結晶；所得晶體放入40-50°C烘箱中烘至恒重為止。
14.根據權利要求I或13所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，步驟(5)中，分段收集的洗脫液A3和B3用高效液相色譜儀測定其中各種生物堿的含量，如果某種生物堿的純度不夠高，需要再次提純，可將洗脫液A3或B3中含有欲再次提純的生物堿的洗脫液合并，作為A2或B2，按照步驟(4)再操作一次。
15.根據權利要求I所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，所述減壓加熱濃縮是在溫度45-65で、真空度O. 08-0. IOM Pa的條件下進行。
16.根據權利要求1-15任一項所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，只取40%こ醇洗脫液Al進行所述步驟(3)、(4)、(5)中對應操作，依次得到A2、A3，以及最終的生物堿育亨賓、阿嗎靈。
17.根據權利要求1-15任一項所述的從催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，其特征是，只取80%こ醇洗脫液BI進行所述步驟(3)、(4)、(5)中對應操作，依次得到B2、B3，以及最終的生物堿蛇根堿、利血平、利新胺。
全文摘要
一種從植物催吐蘿芙木中提取多種生物堿的方法，取催吐蘿芙木根部粉末，加入含酸的乙醇水溶液，攪拌、過濾得到浸提液；濃縮浸提液，用非極性大孔吸附樹脂吸附，洗滌，用40％乙醇和80％乙醇洗脫；分別收集洗脫液，濃縮后用弱酸性陽離子交換樹脂吸附，洗滌，用50％乙醇洗脫；分別收集洗脫液，用濃酸調節到pH3，濃縮后用C18反相層析介質吸附，用濃度逐漸增加的乙醇水溶液洗脫；分段收集洗脫液，將洗脫液中單一生物堿純度較高的部分分別合并，濃縮得到固體，加入有機溶劑結晶，得到育亨賓、阿嗎靈、蛇根堿、利血平、利新胺的晶體。本發明從一種植物中一次最多可提取5種生物堿，步驟少，所用有機溶劑量較少，污染小，所需設備簡單。
文檔編號A61K36/24GK102627641SQ20121009772
公開日2012年8月8日 申請日期2012年4月5日 優先權日2012年4月5日
發明者馮蕾, 岳京麗, 趙鳳生 申請人:上海交通大學