專利名稱：抗菌肽組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗菌肽組合物及其制備方法，具體而言，涉及抗菌肽長效緩釋劑型及其制備方法，屬于生物工程領域。
背景技術：
1981年，這種具有抗菌活性的物質被命名為cecropin，這是人們第一次真正意義上發現抗菌肽。抗菌肽由于其具有高效的抗菌活性和極低的耐藥性，有望成為新一代抗生素。抗菌肽(Antimicrobial Peptides, AMPs)是生物內在免疫的重要組成部分，一般由
6-100個氨基酸殘基組成。抗菌肽一般都有兩親性結構，有I個疏水區域與脂質結合，I個 帶正電荷的親水性區域與水或者帶負電荷的殘基結合。這些特性使得抗菌肽能夠很好地與由兩性分子構成、特別是呈電負性的細胞膜結合，這是抗菌肽與細菌細胞膜發生相互作用的結構基礎。抗菌肽具有廣譜抗菌活性，對大多數革蘭式陽性菌、革蘭氏陰性菌有效，對真菌也有很強的抑制作用，這是其臨床應用潛力被看好的一個重要原因。雖然抗菌肽具有廣譜抗菌活性，并且不容易產生耐藥性，具有良好的應用前景，抗菌肽的研究也有20多年，但到目前為止，還沒有臨床劑型出現，主要原因是抗菌肽的臨床應用面臨著一些問題容易被蛋白酶降解，體內循環半衰期短，從而導致穩定性差等，需要頻繁給藥，不僅給患者帶來了較大的經濟負擔，還給患者帶來了給藥痛苦。中國科學院昆明動物所的賴仞教授通過對多種蛙科的皮膚分泌物進行分離純化，得到了對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌都具有比較好的治療效果的多種抗菌肽，雖然在穩定性方面有一定改善但沒有從根本上解決穩定性問題，并且在提高抗菌肽的持續性殺滅細菌的作用也沒有很好的解決辦法。近年來，生物可降解的高分子材料廣泛應用于蛋白質、多肽類藥物長效劑型的研究，最有效的方法就是通過用生物可降解材料為載體進行控制釋放體系的研究，對增強藥物的穩定性、提高藥物的溶解度以及提高藥物分子的持續穩定輸送具有非常重要的作用。文獻對許多蛋白滅活疫苗或基因工程疫苗如人血清白蛋白(HSA)、霍亂毒素共調菌毛(TCP)、鉤端螺旋體外膜蛋白(0ΜΡ)、傷寒桿菌莢膜蛋白(Vi)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg)等進行控制釋放來達到免疫目的，所用載體為聚乳酸(PLA)、聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)及聚乳酸-聚乙二醇共聚物(PELA)等可降解生物材料(李孝紅.袁明龍等，生物降解聚合物的研究和產業化進展及展望，高分子通報，2008，(8): 109; Li X H et al, Int. J.Pharm. , 1999，178:245; Zhou S B et al, J. Control. Release, 2003，86:195; MarJ. et al, Journal of Controlled Release，1997，43:81; Thejani E，et al, Journalof Controlled Release, 2010,142:196; Karen Fu et al, Pharmaceutical Research,2000，17:1)。在抗菌肽緩釋研究方面，中國專利(CN102274485A)報道了用聚乳酸-羥基乙酸共聚物作載體制備抗菌肽緩釋載體制備了聚乳酸緩釋微球劑型，但由于聚乳酸-羥基乙酸共聚物是屬于脂肪族聚酯，缺乏親水性，不利于穩定抗菌肽的結構，本發明的目的是根 據抗菌肽的結構及性能，應用新材料，對抗菌肽進行控制釋放，以達到解決抗菌肽穩定性、安全性、長效釋放及提高材料對抗菌肽負載量的問題。
發明內容
本發明的內容是提供一種抗菌肽組合物及其制備方法，具體而言，涉及抗菌肽長效緩釋劑型及其制備方法，是用同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料對抗菌肽進行負載，使抗菌肽分子負載到材料上就得到抗菌肽組合物。這種抗菌肽組合物可以用在生物醫學領域及食品保鮮領域作為長效食品保鮮劑。本發明的目的是這樣實現的
這種抗菌肽組合物，用同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料對抗菌肽進行負載，使抗菌肽分子負載到材料上就得到抗菌肽組合物。 這種抗菌肽組合物，所述同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料由疏水材料及親水材料組成的共聚物材料，其中疏水材料為聚乳酸、聚乙醇酸、聚三亞甲基碳酸酯及聚己內酯中的任意一種單獨或幾種混合使用，親水材料為聚乙二醇、側鏈帶羧基的聚氨基酸、側鏈帶羥基的聚氨基酸及側鏈帶氨基的聚氨基酸中的任意一種或幾種混合使用。這種抗菌肽組合物，長效緩釋微球適合于包裹所有目前依據公眾知識得到的抗菌肽，而所述的抗菌肽主要為單功能抗菌肽和雙功能抗菌肽即Pexiganan, Hlfl-Il,Plectasin, Neuprex, Iseganan, Brevinin-1, Brevinin—2，Esculentin—1，Esculentin—2，Ranacycl in等中的任意一種或幾種的混合物。這種抗菌肽組合物的制備方法，同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料對抗菌肽的具體負載方法是文獻廣泛研究的物理包裹的方法，把抗菌肽包裹在可降解高分子材料的中心制備成納米到微米級的微球，當材料開始降解后逐步釋放抗菌肽，微球的制備采用文獻中研究別的包裹對象時所采用的雙乳液W1/0/W2 (水相I/油相/水相2)或O/W (油相/水相)體系制備(李孝紅.袁明龍等，生物降解聚合物的研究和產業化進展及展望，高分子通報，2008，(8): 109; Li X H et al, Int. J. Pharm. , 1999，178:245;Zhou S B et al, J. Control. Release, 2003，86:195; Mar J. et al, Journal ofControlled Release， 1997，43:81; Thejani E，et al, Journal of Controlled Release,2010, 142:196; Karen Fu et al, Pharmaceutical Research, 2000，17:1)，具體操作方法如下(除特別說明外，所涉及的份數均為重量份數，百分比均為重量百分數)
(I)將抗菌肽溶于超純水或PH為5. 5 -7.5的緩沖溶液中，制成內水相。(2)將聚乳酸基高分子載體材料溶于有機溶劑中，制成中油相。(3)將步驟⑴制成的內水相加入到中油相中，其中內水相與中油相的體積比為
5-25%，機械攪拌作用下形成W/0 (油/水)的初乳。(4)將步驟(3)制成的初乳滴加到含有一定量乳化劑的外水相分散介質中，機械攪拌作用下，乳化形成w/0/w (水/油/水)的復乳。(5)在步驟(4)的復乳中加入一定量的異丙醇溶液，在機械攪拌作用下揮發3小時，除去有機溶劑，使微球固化。然后高速離心收集，冷凍干燥24小時，即得抗菌肽微球。其中，有機溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、二惡烷中任意一種或幾種的混合物。乳化劑為聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉、丙甲基纖維素、吐溫中的任意一種或幾種混合物。這種抗菌肽組合物的制備方法，所述的可降解高分子材料中疏水材料及親水材料的比例可以是重量比95 5—40 60之間，材料分子量一般控制在2000-30萬之間。本發明中典型的可用來負載抗菌肽的具有疏水材料及親水材料組成的共聚物可以但不局限于是聚乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚天冬酸共聚物、聚乳酸-聚賴氨酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇-聚天冬酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇-聚賴氨酸共聚物、聚乙二醇-聚天冬酸共聚物、聚乙二醇-聚賴氨酸共聚物、聚乳酸-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚己內酯-聚賴氨酸共聚物、聚乳酸-聚三亞甲基碳酸酯-聚賴氨酸共聚物及聚乳酸-聚絲氨酸共聚物及聚乳酸-聚谷氨酸共聚物等，可以一種單獨或幾種混合使用，材料的重均分子量這些材料的制備在文獻中已經有報道，典型的結構示例如下
權利要求
1.一種抗菌肽組合物，其特征是用同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料對抗菌肽進行負載，使抗菌肽分子負載到材料上就得到抗菌肽組合物。
2.根據權利要求I所述的抗菌肽組合物，其特征在于所述同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料為由疏水材料及親水材料組成的共聚物材料，其中疏水材料為聚乳酸、聚乙醇酸、聚三亞甲基碳酸酯及聚己內酯中的任意一種單獨或幾種混合使用，親水材料為聚乙二醇、側鏈帶羧基的聚氨基酸、側鏈帶羥基的聚氨基酸及側鏈帶氨基的聚氨基酸中的任意一種或幾種混合使用。
3.根據權利要求I所述的抗菌肽組合物，其特征在于所述的抗菌肽主要為單功能抗菌妝和雙功能抗菌妝即 Pexiganan, Hlfl-11, Plectasin, Neuprex, Iseganan, Brevinin-I,Brevinin-2, Esculentin-1, Esculentin-2, Ranacyclin 中的任意一種或幾種的混合物。
4.根據權利要求I所述的抗菌肽組合物的制備方法，其特征在于可降解高分子材料對抗菌肽的具體負載方法是采用物理包裹的方法，把抗菌肽包裹在可降解高分子材料的中心制備成納米到微米級的微球，當材料開始降解后逐步釋放抗菌肽，微球的制備采用雙乳液W1/0/W2或0/W體系制備。
5.根據權利要求4所述的抗菌肽組合物的制備方法，其特征在于同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料中疏水材料及親水材料的比例可以是重量比95 5-40 60之間，可降解高分子材料的分子量一般控制在2000-30萬之間。
6.根據權利要求4所述的所述的抗菌肽組合物的制備方法，其特征在于可用來負載抗菌肽的具有疏水材料及親水材料組成的共聚物可以但不局限于是聚乳酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚天冬酸共聚物、聚乳酸-聚賴氨酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇-聚天冬酸共聚物、聚乳酸-聚乙二醇-聚賴氨酸共聚物、聚乙二醇-聚天冬酸共聚物、聚乙二醇-聚賴氨酸共聚物、聚乳酸-聚乙醇酸-聚乙二醇共聚物、聚乳酸-聚己內酯-聚賴氨酸共聚物、聚乳酸-聚三亞甲基碳酸酯-聚賴氨酸共聚物及聚乳酸-聚絲氨酸共聚物及聚乳酸-聚谷氨酸共聚物，可以一種單獨或幾種混合使用。
全文摘要
本發明的提供一種抗菌肽組合物及其制備方法，是用同時具有疏水及親水性能的可降解高分子材料對抗菌肽進行負載，使抗菌肽分子負載到材料上就得到抗菌肽組合物。具體負載方法是采用文獻廣泛研究的物理包裹的方法，把抗菌肽包裹在可降解高分子材料的中心制備成納米到微米級的微球，當材料開始降解后逐步釋放抗菌肽。本發明采用同時具有疏水及親水性的可降解高分子材料作為載體，其結構與抗菌肽有相似之處，與現有聚乳酸-羥基乙酸共聚物具有更好生物相容性和親水性能，更有利于穩定抗菌肽的結構。通過調節材料的親水疏水性及分子量，可以實現對抗菌肽釋放時間的調節，有利于滿足各種使用需求，擴大使用范圍。這種抗菌肽組合物可以用在生物醫學領域及食品保鮮領域作為長效食品保鮮劑。
文檔編號A61K38/10GK102657843SQ20121018139
公開日2012年9月12日 申請日期2012年6月5日 優先權日2012年6月5日
發明者于美玲, 李麗麗, 李宏利, 袁明偉, 袁明龍 申請人:云南民族大學