專利名稱：預防和治療豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體感染的疫苗組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種預防和治療豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌以及豬肺炎支原體感染的疫苗組合物，屬于獸用疫苗領域。
背景技術：
豬圓環病毒(PCV)是迄今發現的一種最小的動物病毒。現已知PCV有兩個血清型，即PCVl和PCV2。PCVl為非致病性的病毒。PCV2為致病性的病毒，它是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(PMWS)的主要病原。除PMWS外，PDNS (豬皮炎與腎病綜合征)、PNP (增生性壞死性肺炎)、PRDC (豬呼吸道疾病綜合征)、繁殖障礙、先天性顫抖、腸炎等疾病亦與PCV2感染·有重要關聯。副豬嗜血桿菌病又稱多發性纖維素性漿膜炎和關節炎，也稱格拉澤氏病。是由副豬嗜血桿菌引起。副豬嗜血桿菌只感染豬，可以影響從2周齡到4月齡的青年豬，主要在斷奶前后和保育階段發病，通常見于5 8周齡的豬，發病率一般在10% 15%，嚴重時死亡率可達50%臨床癥狀取決于炎癥部位，包括發熱、呼吸困難、關節腫脹、跛行、皮膚及黏膜發紺、站立困難甚至癱瘓、僵豬或死亡。母豬發病可流產，公豬有跛行。哺乳母豬的跛行可能導致母性的極端弱化。死亡時體表發紫，肚子大，有大量黃色腹水，腸系膜上有大量纖維素滲出，尤其肝臟整個被包住，肺的間質水腫。豬肺炎支原體是豬支原體肺炎的病原體。該疾病導致體重增加減少和飼養效率降低，是養豬業經濟損失的重要原因。該疾病導致持續幾周的持續性咳嗽、被毛失去光澤、生長遲緩和外觀不壯實。在感染動物尤其是在腹頂端和心葉觀察到特征性病變紫色到灰色實變區。雖然該疾病的死亡率低，但受感染的豬常常易于受到機會病原體的繼發感染，從而導致死亡或應激。每年的經濟損失佑計在2億 2.5億美元之間。PCV感染可引起豬的免疫抑制，從而使機體更易感染其他病原，這也是豬圓環病毒與豬副豬嗜血桿菌、肺炎支原體混合感染的重要原因，混合感染病豬的病死率也將大大提高，有的可達25% 40%。但是，由于聯合疫苗(疫苗組合物)，如二聯疫苗或三聯疫苗中，多種抗原相互間存在干擾或影響，導致目前市場上還未見有豬圓環病毒病、副豬嗜桿菌病、豬支原體肺炎三聯苗的產品，也未見有相關的文獻和專利。因此，目前對于預防豬圓環病毒、副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體共感染或繼發感染，只能使用豬圓環病毒病滅活疫苗、副豬嗜血桿菌病滅活疫苗、豬支原體肺炎疫苗分別進行三次免疫來預防和控制，導致免疫程序復雜、免疫次數增多，免疫成本增加，豬只的免疫應激次數增多，影響豬只的生長性能。
發明內容
本發明通過大量的篩選研究，意外發現將豬圓環病毒2型(PCV2)、副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體的抗原，三種抗原并不會相互干擾或影響；相反地，豬圓環病毒2型(PCV2)、副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體的抗原組合物和疫苗組合物不僅能夠產生足夠的保護性免疫應答，同時還意外發現相對于每種抗原或三種抗原的單苗免疫效果均得到了增強。特別令人意外地，在PCV2、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體抗原量減半的情況下，三種抗原或其疫苗組合物仍能維持良好的免疫效果，至少與每種抗原或抗原的單苗的免疫效果相同或類似。因此，本發明可以提供預防或治療豬圓環病毒2型(PCV2)病、副豬嗜血桿菌病、豬支原體肺炎的疫苗組合物，達到一針免疫預防三種疫病的效果，在顯著地降低成本和節省人力的情況下，可以顯著地提高對三種病毒或細菌的病原體的感染之免疫效力，對預防和治療豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌以及豬肺炎支原體混合感染或繼發感染有特別好的效果O技術方案為了實現上述目的，本發明預防或治療豬圓環病毒2型(PCV2)、副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體感染的疫苗組合物，其包含豬圓環病毒2型抗原、副豬嗜血桿菌抗原和豬肺炎支原體抗原優選地，本發明所述的疫苗組合物為包括滅活的豬圓環病毒2型基因型(PCV2)2a.2b.2c或2d基因型的一種或任意幾種的組合；和/或PCV20RF2蛋白、與滅活的副豬嗜血桿菌、滅活的豬肺炎支原體。本發明中的術語“豬圓環病毒2型抗原”是指含有至少一種PCV2抗原形式的任何組合物，所述抗原接種豬可誘導、刺激或增強抵抗PCV2感染的免疫應答。優選地，所述PCV2抗原是PCV2全病毒、優選為滅活的PCV2全病毒、含有PCV2免疫原性氨基酸序列(如0RF2蛋白)的嵌合病毒，任何其它至少含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位或其他成分。PCV2抗原還可以包含以下組合物的任一種抗原:如梅里亞公司(Merial)的Circovac. ;
輝瑞公司(Pfizer)的Suvaxynu PCV2 ;哈爾濱維科生物技術開發公司的豬圓環病毒2
型滅活疫苗(LG株)；福州大北農生物技`術有限公司的豬圓環病毒2型滅活疫苗(DBN-SX07株)和基因工程亞單位疫苗(如勃林格殷格翰公司(Boehringer-1ngelheim)的Ingelvac
CircoFLEXli)因PCV2基因組大小為1767bp或1768bp，不同毒株之間核苷酸序列同源性較高，均在90%以上，因此PCV2 SH株(GenBank登錄號為AY686763)、PCV2LG株(GenBank登錄號為HM038034)、PCV2 DBN-SX07-2 (GenBank 登錄號為 HM641752)均在本發明之內。優選地，本發明疫苗組合物中，豬圓環病毒2型抗原為滅活的PCV2全病毒抗原，優選PCV2 SH株，保藏號為CGMCC N0.23890，公開于專利文獻CN101240264A。優選地，本發明疫苗組合物中，所述的滅活的豬圓環病毒2型每劑量或每頭份含量滅活前為3X 105_° IO8 tlTCID5ci/頭份；更優選，本發明所述的滅活的豬圓環病毒2型含量為滅活前5X 105_tlTCID5tl/頭份。優選地，本發明疫苗組合物中，豬圓環病毒2型抗原為含有PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亞單位或其他成份；更優選地，豬圓環病毒2型抗原為PCV2亞單位抗原，最優選地，豬圓環病毒2型抗原為PCV2 0RF2蛋白。其中，本發明PCV2 0RF2蛋白，優選序列表SEQN01.DNA序列編碼的蛋白或序列表SEQ N02.氨基酸序列的蛋白或與其同源性在75%以上的蛋白，更優選地為同源性在80%以上的、最優選在90%以上的蛋白。即所有能達到本發明目的的蛋白序列或含有PCV2免疫原性氨基酸序列的蛋白。本發明對PCV2 0RF2蛋白沒有特別的限制，只要其具有保留對PCV2的免疫原性，任何PCV20RF2蛋白都可用作本文所述PCV2 0RF2 DNA和/或多肽的來源。優選地，本發明疫苗組合物中，所述PCV2 0RF2蛋白的含量為2 20 μ g/頭份，更優選10 μ g/頭份,最優選20 μ g/頭份。優選地，本發明疫苗組合物中，所述的副豬嗜血桿菌抗原為滅活的副豬嗜血桿菌血清4型和血清5型。更優選地，本發明疫苗組合物中，所述的副豬嗜血桿菌血清4型為保藏號為CCTCC N0.M2011172的副豬嗜血桿菌JS株；所述的副豬嗜血桿菌血清5型為保藏號為CCTCC N0.M2011173的副豬嗜血桿菌ZJ株。更優選地，本發明疫苗組合物中，所述的滅活的副豬嗜血桿菌4型含量為5 X IO8 4X IO9CFU/頭份，副豬嗜血桿菌5型含量為5 X IO8 4X IO9CFU/頭份。最優選地，本發明疫苗組合物中，所述的滅活的副豬嗜血桿菌4型含量為I X IO9CFU/頭份，副豬嗜血桿菌5型含量為I X IO9CFU/頭份。本發明中術語“副豬嗜血桿菌抗原”是指含有至少一種副豬嗜血桿菌抗原形式的任何組合物，所述抗原接種豬可誘導、刺激或增強抵抗副豬嗜血桿菌感染的免疫應答。副豬嗜血桿菌的野毒株，包括本領域技術人員熟知的臨床分離的野毒株，包含目前已鑒定的I 15個血清型或無法定血清型的副豬嗜血桿菌。優選地，所述副豬嗜血桿菌抗原是完整的副豬嗜血桿菌，更優選為滅活形式的副豬嗜血桿菌，最優選，所述副豬嗜血桿菌抗原是滅活的血清型為4型和5型的混合抗原；最優選為副豬嗜血桿菌滅活的血清4型菌株為JS株，所選用的滅活的副豬嗜血桿菌血清5型菌株為ZJ株。副豬嗜血桿菌抗原還可以包含以下組合物的任一種抗原副豬嗜如勃林格殷格翰公司的Ingelvac HP-1 ;海博萊公司(Hipra)的Hiprasuis-Glasser);武漢科前動物生物制品有限責任公司的副豬嗜血桿菌滅活疫苗(4型MD0322株+5型SHO165株)。正如本領域技術人員所知，不同的微生物野外分離株在基因序列上有微小的變異，然而，當變異不影響其蛋白質合成、結構或者主要作用功能區時，該微生物之他種野外分離株即使基因序列無法百分之百相同，其基本的生理功能并不會有所改變。但是同源性比較如果針對全部的基因來進行比對，在實際上是非常巨大的工程，不太可行，目前國際上常使用16S Ribosomal RNA (16S rRNA)來進行細菌型的分辨，因此在相似性的比較上可以用16S rRNA來進行比對而得到其同源性。所以本發明所使用的副豬嗜血桿菌抗原并不限定于本發明所使用的野外分離株，16s rRNA基因是細菌染色體上編碼rRNA相對應的DNA序列，存在于所有細菌的染色體基因組中。16S rRNA具有高度的保守性和特異性以及該基因序列足夠長(包含約50個功能域)因此，本發明包括與副豬嗜血桿菌兩株菌株(JS株、ZJ株)16SrRNA的同源性在80%上以上的菌株，更優選與JS株或ZJ株16SrRNA同源性在至少90%，至少95%，至少95% 99%的副豬嗜血桿菌菌株，即不改變副豬嗜血桿菌兩株菌株(JS株、ZJ株)16S rRNA的前提下，本領域技術人員可以通過簡單的篩選或誘變本發明的副豬嗜血桿菌，獲得與本發明副豬嗜血桿菌16S rRNA高度同源的菌株，并獲得相應地具有相同或相似免疫原性的抗原組合物。
優選地，本發明疫苗組合物中，所述的豬肺炎支原體抗原為滅活的豬肺炎支原體。更優選地，所述的豬肺炎支原體抗原為滅活的豬肺炎支原體HN0613株，已在中國典型培養物保藏中心進行保藏，保藏日期:2012年6月13日，保藏號為CCTCC N0.M2012230。
優選地,本發明疫苗組合物中，豬肺炎支原體HN0613株抗原滅活前含量為IO7 IO9CXU /頭份；更優選地，本發明疫苗組合物中，豬肺炎支原體HN0613株抗原滅活前含量IXlO8CCU/ 頭份。本發明中術語“豬肺炎支原體抗原”是指含有滅活的豬肺炎支原體抗原，所述抗原接種豬可誘導、刺激或增強抵抗豬肺炎支原體感染的免疫應答。豬肺炎支原體包括本領域技術人員熟知的臨床分離的野毒株。優選地，所述豬肺炎支原體抗原是完整的豬肺炎支原體，優選為滅活形式，更優選為豬肺炎支原體HN0603株或J株。副豬嗜血桿菌抗原還可以包含以下組合物的任一種抗原豬肺炎支原體如勃林格殷格翰公司的Ingelvac. M.hyo ；哈藥集團公司的瑞倍適Respisure和RespisureOne ;美國普泰克公司的MycoGard;美國輝瑞公司的RespiFend MH ;梅里亞動物保健公司的豬克喘；國內生產的168株活疫苗。優選地，本發明疫苗組合物中，所述的疫苗佐劑混合物為Gel 01 (法國SCIPPIC)、氫氧化鋁膠、礦物油、可代謝油、卡波姆(Carbomer )、蜂膠、ISA206(法國SCIPPIC )、ISA760VG(法國SCIPPIC)的一種或幾種的組合。優選地，本發明所述佐劑混合物可代謝油包括一種或多種角鯊烯、角鯊烷的菇烯烴以及維生素E·，所述佐劑混合物的終濃度是約2 30%v/v。更優選地,本發明所述的疫苗佐劑為卡波姆(Carbomer)(商品名Carbopol )、Gel01(法國SCIPPIC)、鋁膠、白油；最優選地，發明所述的疫苗佐劑為Gel 01(法國SCIPPIC)。優選地，本發明疫苗組合物中，相對于疫苗組合物的總重，所述的疫苗佐劑的用量為5% 60%重量,所述的抗原成份的用量為40% 95%重量，即滅活的豬圓環病毒2型、滅活的副豬嗜血桿菌、滅活的豬肺炎支原體的用量占疫苗組合物的總重為40% 95%重量。作為本發明的另外一個方面，本發明的提供一種豬肺炎支原體菌株，菌株名稱為HN0613株，保藏編號為CCTCC M2012230，保藏單位為位于中國武漢的中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏日期:2012年6月13日。由上可知，本發明選用毒種為豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌4型、副豬嗜血桿菌5型及豬肺炎支原體；本發明制備的疫苗組合物，可起到打一針該疫苗即可預防豬圓環病毒病、豬支原體肺炎和副豬嗜血桿菌病三種病的目的，和現有的打三針單疫苗才能預防這三種傳染病比較，本發明的技術方案更加經濟實用，簡化了免疫程序，降低了生產成本和防疫成本，具備商業成功的基礎。
圖1為Friis固體培養基豬肺炎支原體菌落狄氏染色圖；圖2為豬肺炎支原體PCR鑒定圖。
具體實施例方式菌株(毒株)的來源所選用的豬圓環病毒2型(Porcine Circovirus Type 2，PCV2)毒株為PCV2b基因型SH株，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行保藏，保藏日期:2008年3月4日，保藏號為CGMCCN0.23890。所選用的血清4型副豬嗜血桿菌(Haemophilus Parasuis, HPS)菌株為JS株，已在中國典型培養物保藏中心進行保藏，保藏日期:2011年5月18日，保藏號為CCTCCN0.M2011172o所選用的血清5型副豬嗜血桿菌(Haemophilus Parasuis, HPS)菌株為ZJ株，已在中國典型培養物保藏中心進行保藏，保藏日期:2011年5月18日，保藏號為CCTCCN0.M2011173o所選用的豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)菌株為J株,購自ATCC(美國典型培養物保藏中心，ATCC編號為:25934 ;豬肺炎支原體HN0613株，已在中國典型培養物保藏中心進行保藏，保藏日期:2012年6月25日，保藏號為CCTCC N0.M2012230。本發明實施例中肺病變指數評分標準:根據7個肺葉病變程度進行評定，最大得分為28分。特異性損傷的肺葉面積為0%時，記為O分，1% 25%記為I分，26% 50%記為2分，51% 75%記為3分，大于75%為4分。本發明實施例統計分析方法為:統計7個肺葉的肺病變指數，確定病變程度。用SPSS計算機軟件進行ANOVA分析，比較各組間差異，確定病變差異的有效性。本實施例中的疫苗組合物、三聯疫苗或聯苗均指預防或治療豬圓環病毒2型(PCV2)、副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體感染的疫苗組合物，即至少包含豬圓環病毒2型抗原、副豬嗜血桿菌抗原和豬肺炎支原體抗原的疫苗組合物，本發明實施例中使用的單苗為含有豬圓環病毒2型抗原、副豬嗜血桿菌抗原和豬肺炎支原體抗原中一種的疫苗，用于評價本發明的疫苗組合物、三聯疫苗或聯苗的免疫效力。本發明中所用的pH 7.2的PBS液配方為:1000ml蒸餾水中加入NaCl 9g、Na2HPO4.12H20 6g、NaH2PO4.2H20 0.4g，本發明中所用到的化學試劑均為分析純，購自國藥
集團。 為使本發明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規實驗方法進行。實施例1、豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體的疫苗組合物中三種抗原的制備1.1生產用菌(毒)種的制備豬圓環病毒2型SH的制備:將毒種PCV2SH株用MEM液體培養基(用購自美國Invitrogen公司的MEM干粉培養基按說明書配制)作1:9稀釋,然后按細胞培養液體積的5 %接種于PK15 (ATCC，保藏號為CCL-33 )單層細胞，37 °C吸附30分鐘，加入細胞維持液(MEM液體培養基中添加4%犢牛血清和2mmol/L的D-氨基葡萄糖鹽酸)，37°C培養4日，凍融2 3次，收獲病毒，病毒滴度為106_5TCID5(l/ml。副豬嗜血桿菌菌種的制備:將副豬嗜血桿菌4型JS株和副豬嗜血桿菌5型ZJ株劃線接種于含5%新生牛血清和0.005%煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD，美國BBI公司)的胰蛋白大豆瓊脂(TSA，購自美國BD公司)平板(簡稱TSA/NAD平板)，37°C培養24 48小時，各挑選5個以上典型菌落，純粹檢驗合格后，作為一級種子。一級種子挑取單個菌落，接入含5%新生牛血清和0.005%煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD，美國BBI公司)的胰蛋白大豆肉湯(TSA，購自美國BD公司)(簡稱TSB/NAD液體培養基)，37°C搖床180rpm振蕩培養12小時，同時取樣革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察細菌形態均勻，符合副豬嗜血桿菌的形態特征，無任何雜菌生長，作為二級種子
其中:含5%血清的TSA/NAD平板的制備方法:胰蛋白大豆瓊脂(Trypti c SoyAgar, TSA, BD Difico產品)40克加入945ml蒸餾水，充分搖勻后加熱至充分溶解，121°C高壓蒸汽滅菌15min，溫度降至60°C左右，加入50ml過濾除菌的牛血清，5ml過濾除菌的1%NAD,充分搖勻后倒平皿。含5%新生牛血清的TSB/NAD液體培養基:胰大豆蛋白肉湯(Tryptic Soy Broth,TSB, BD Difico產品)30克加入940ml蒸餾水，充分搖勻后加熱至充分溶解，121°C高壓蒸汽滅菌15min，加入50ml過濾除菌的牛血清，IOml過濾除菌的0.01%NAD即成。
豬肺炎支原體菌種的制備:凍干菌種啟封后，按10%接種量接種液體培養基，370C振蕩培養3 7日，待pH值由7.5降至6.8時收獲，經純粹檢，作為一級生產種子。取一級種子按5%接種量接種液體養基，37°C振蕩培養3 7日，待pH值由7.5降至6.8時收獲，經純粹檢，作為二級生產種子。豬肺炎支原體液體培養基的配方:牛心浸出液(BD公司)300ml，雙蒸水360ml，校正pH值到7.4，121°C滅菌15分鐘。再加入下列過濾除菌的成份:Hank’s平衡鹽溶液(IOX) 40ml, 0.25(ff/V)酚紅 10ml,馬血清 200ml，5%(W/V)水解乳蛋白 100ml, 25%W/V 酵母浸出液 20ml，10000IU/ml 青霉素 10ml。1.2病毒液或菌液的培養與制備豬圓環病毒2型SH株病毒液的制備:用轉瓶細胞培養法。將長滿單層的PK15細胞，倒去細胞培養液(MEM液體培養基中添加6%犢牛血清和2mmol/L的D-氨基葡萄糖鹽酸)，將毒種液體積比按0.1 0.2TCID5(I/個細胞的接種量接種于PK15細胞上，旋轉細胞瓶2周，37°C吸附30分鐘，加入細胞維持液(步驟1.1所述)，置37°C旋轉(1(Γ12轉/小時)培養。每日觀察廣2次，細胞生長良好，37°C培養4日收獲細胞和細胞液，凍融3次，置-20°C以下保存。副豬嗜血桿菌(4型JS株與5型ZJ株)菌液的制備:將鑒定合格的副豬嗜血桿菌4型JS株與副豬嗜血桿菌5型ZJ株的二級種子分別按1:100 (v/v)接種于TSB/NAD液體培養基(步驟1.1所述)，置37°C搖床200rpm培養。培養至12 16小時，收獲。豬肺炎支原體菌液的制備:將鑒定合格的豬肺炎支原體HN0603株的二級種子分別按5% (v/v)接種于液體培養基(步驟1.1所述)，37°C振蕩培養3 7日，待pH值由7.5降至6.8時收獲。1.3病毒液或菌液的處理豬圓環病毒2型SH株病毒液的處理:將步驟1.2的病毒液用中空纖維濾柱(Millipore公司孔徑10 μ m與0.45 μ m)過濾，除去細胞碎片。副豬嗜血桿菌(4型JS株與5型ZJ株)菌液的處理:將步驟1.2的兩種菌液(副豬嗜血桿菌ZJ株與JS株)分別以連續離心機(10000轉/分鐘)離心后再以PBS (pH值為
7.2 7.4)復溶至離心前的體積。1.4濃縮將豬圓環病毒2型SH、副豬嗜血桿菌4型JS株、副豬嗜血桿菌5型ZJ株、分別用密理博(Millipore公司)膜包(分子截留量為300Kda)作5倍(體積比)濃縮，用同樣的方式對豬肺炎支原體HN0603株抗原液進行10倍濃縮。1.5含量測定1.5.1豬圓環病毒SH株病毒液的含量測定
將病毒液用MEM液體培養基(步驟1.1所述)按本領域技術人員通用方法作10倍系列稀釋，取10_5、10_6、10_73個稀釋度，每個稀釋度分別接種96孔培養板PK15細胞單層4孔，每孔0.1ml,同時設立陰性對照，在37°C含5% CO2的溫箱中繼續培養24小時，換細胞維持液，繼續培養24小時；用冷丙酮固定細胞，用間接免疫熒光試驗(IFA)測定每個稀釋度含有PCV2陽性細胞(呈綠色)的孔數，根據Karber氏法計算病毒TCID5(I。1.5.2副豬嗜血桿菌ZJ株與JS株菌液的活菌數測定菌液取樣，按本領域技術人員熟知的方法作10倍系列稀釋，取10_6、10_72個稀釋度接種于前述TSA/NAD固體培養基，每個平板接種0.1ml，37 °C培養24小時后，選擇菌落數在30和300之間的平板進行菌落計數。1.5.3豬肺炎支原體的菌液活菌計數測定將含酚紅指示劑的液體培養基分裝至小試管中，設兩排，每排13支，1.8ml/支，取0.2ml待檢培養物接種至第一支小試管，混勻后依次10倍稀釋至第12支小試管，第13管為對照管，置37°C搖振培養，記錄21天為止產生顏色變化的最高管數，以判定CXU滴度，取兩排結果的平均值。1.6病毒液或菌液含量測定結果:豬圓環病毒2型SH株、副豬嗜血桿菌4型JS株及副豬嗜血桿菌5型ZJ株以及豬肺炎支原體含量見表I。表I含量測定
權利要求
1.種預防和治療豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌以及豬肺炎支原體感染的疫苗組合物，其特征在于，所述疫苗組合物包含:豬圓環病毒2型抗原、副豬嗜血桿菌抗原、豬肺炎支原體抗原。
2.據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬圓環病毒2型抗原為滅活的豬圓環病毒2型2a、2b、2c或2d基因型的一種或任意幾種的組合；和/或豬圓環病毒2型0RF2蛋白。
3.據權利要求2所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬圓環病毒2型為滅活的豬圓環病毒2型2b基因型。
4.據權利要求2所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬圓環病毒2型含量為3 X IO5.0 108.0TCID50/ 頭份。
5.據權利要求4所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬圓環病毒2型含量為5 X IO5 0TCID50/ 頭份。
6.據權利要求2所述疫苗組合物，其特征在于，所述的豬圓環病毒2型ORF2蛋白含量為2 20 μ g/頭份。
7.據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的副豬嗜血桿菌抗原為滅活的副豬嗜血桿菌血清4型和血清5型。
8.據權利要求7所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的副豬嗜血桿菌血清4型為保藏號為CCTCC N0.M2011172的副豬嗜血桿菌JS株；所述的副豬嗜血桿菌血清5型為保藏號為CCTCC N0.M2011173的副豬嗜血桿菌ZJ株。
9.據權利要求4所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的滅活的副豬嗜血桿菌4型含量為5 X IO8 4X IO9CFU/頭份，副豬嗜血桿菌5型含量為5 X IO8 4X IO9CFU/頭份。
10.據權利要求9所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的滅活的副豬嗜血桿菌4型含量為I X IO9CFU/頭份，副豬嗜血桿菌5型含量為I X IO9CFU/頭份。
11.據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬肺炎支原體抗原為滅活的豬肺炎支原體。
12.據權利要求1所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的豬肺炎支原體抗原為滅活的豬肺炎支原體HN0613株。
13.據權利要求12所述的疫苗組合物，其特征在于，滅活的豬肺炎支原體HN0613株含量為IO7 IO9CCU /頭份。
14.據權利要求6所述的疫苗組合物，其特征在于，滅活的豬肺炎支原體HN0613株含量 IXlO8CCU/ 頭份。
15.據權利要求f14任意一項所述的疫苗組合物，其特征在于，所述的疫苗組合物還包括疫苗佐劑，其中所述的疫苗佐劑為氫氧化鋁膠、礦物油、卡波姆(Carbomer)、Gel 01(法國 SCIPPIC)、蜂膠、ISA206 (法國 SCIPPIC)、ISA760VG (法國 SCIPPIC)的一種或任意幾種的組合。
16.據權利要求f15任意一項所述的疫苗組合物，其特征在于，在所述的疫苗組合物中，相對于疫苗組合物的總重量，疫苗佐劑的用量為5% 20%重量，抗原成份的用量為80% 95%重量。
17.種預防和治療豬 圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌以及豬肺炎支原體感染的疫苗組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將豬圓環病毒2型病毒液、副豬嗜血桿菌4型和5型菌液、豬肺炎支原體菌液滅活處理并濃縮后混合，然后將混合液與疫苗佐劑攪拌，即獲得疫苗組合物。
18.據權利要求17所述的疫苗組合物的制備方法，其特征在于，所述的豬圓環病毒2型病毒液滅活后濃縮至5 X 105_tlTCID5tl/頭份，所述的副豬嗜血桿菌4型菌液滅活后濃縮至I X IO9CFU/頭份，所述的副豬嗜血桿菌5型菌液滅活后濃縮至I X IO9CFU/頭份，所述的豬肺炎支原體菌液滅活后濃縮 至I X IO8CXU/頭份。
全文摘要
本發明提供了一種豬圓環病毒2型、副豬嗜血桿菌、豬肺炎支原體的疫苗組合物，包含滅活的豬圓環病毒2型抗原、滅活的副豬嗜血桿菌、滅活的豬肺炎支原體以及疫苗佐劑。本發明的疫苗組合物，可起到打一針該疫苗即可預防豬圓環病毒病、豬支原體肺炎和副豬嗜血桿菌病三種病的目的，且三種抗原混合后制備成本發明的疫苗組合物時抗原含量是普通單苗抗原含量的1/2，和現有的打三針單疫苗才能預防這三種傳染病比較，本發明的技術方案更加經濟實用，降低了生產成本，簡化了免疫程序，同時也降低了防疫成本。
文檔編號A61K39/102GK103083655SQ201210221969
公開日2013年5月8日 申請日期2012年6月29日 優先權日2011年11月2日
發明者張許科, 孫進忠, 白朝勇 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司