一種卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑，是由卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料制成的藥物組合物，同時提供了該吸入制劑的制備方法，該吸入制劑主要用于預防和治療呼吸道感染、哮喘。
【專利說明】一種卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑及其制備方法，屬于生物【技術領域】。
[0002]
【背景技術】
[0003]支氣管哮喘(bronchial asthma)簡稱“哮喘”，是當今世界上一種最常見的慢性呼吸道疾病，發生機制復雜，現代研究認為哮喘患者體內存在著細胞免疫功能缺陷，從而引發氣道變應性炎癥，這可能是哮喘患者氣道反應性增高的重要機制之一。該病可發生于任何年齡，以I一6歲發病較多，大多在3歲以內發病。
[0004]小兒反復呼吸道感染是指在單位時間內上下呼吸道感染反復發作超過規定次數而言的一種臨床綜合征，為兒科常見疾病，它不僅影響患兒的生長和發育，同時嚴重影響患兒的身心健康。由于反復呼吸道感染導致經常應用抗生素治療，而長期反復的抗生素治療會進一步削弱機體免疫力，如此往復造成惡性循環，給社會和家庭帶來諸多的負擔和痛苦。
[0005]目前應用在小兒反復呼吸道感染及哮喘的常規用藥，起效快，療效顯著。但同時存在著毒副作用明顯，容易復發等問題。卡介菌多糖核酸在治療小兒反復呼吸道感染及哮喘開辟了免疫治療的新方向，通過調節機體內的細胞免疫、體液免疫、刺激網狀內皮系統，激活單核一巨噬細胞功能，增強自然殺傷細胞功能來增強機體抗病能力；通過穩定肥大細胞， 封閉IgE功能，減少脫顆粒細胞釋放活性物質，以及具有抗乙酰膽堿所致的支氣管痙攣作用，達到抗過敏及平喘作用。在常規治療的基礎上，加用卡介菌多糖核酸，縮短療程，降低毒副作用，減輕癥狀，減少復發。
[0006]目前的市售卡介菌多糖核酸為注射劑,在臨床應用方面存在著些許不足:卡介菌多糖核酸給藥頻次高，給藥時間長，采用注射給藥需要患者到醫院治療，用藥不便。這些不足使患者不能堅持用藥，影響療效，特別是小兒患者的順應性差。
【發明內容】
[0007]本發明的目的提供一種卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑，是由卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料制成的藥物組合物。本發明的另一個目的是提供該制劑的制備方法和用途。
[0008]本發明所述的吸入制劑包括吸入粉霧劑、氣霧劑、噴霧劑，分為口腔吸入制劑和鼻腔吸入制劑。其中吸入粉霧劑、氣霧劑以口腔吸入為主，噴霧劑以鼻腔吸入為主。
[0009]一、吸入粉霧劑
吸入粉霧劑由卡介菌多糖核酸原粉、載體及附加劑制成。
[0010]吸入粉霧劑的制備方法為:卡介菌多糖核酸原粉與載體混合，得到均一粉體，粉體通過微粉化處理，其粒徑分布范圍在0.1-10微米，再加入附加劑，混勻，分裝，置于吸入裝置即得。[0011]載體包括但不限于果糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、甘氨酸、纈氨酸、亮氨酸中的一種或幾種，其中優選乳糖。卡介菌多糖核酸的原粉與載體的質量比為1:10-1000，優選1:10-100。附加劑包括但不限于硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉中的一種或幾種，其用量為載體和卡介菌多糖核酸原粉重量總和的0.01%-0.1%。所述卡介菌多糖核酸原粉及載體混合得到的均一粉體通過微粉化處理，可以采用噴霧干燥法、 流化床超音速氣流粉碎法、高速研磨法、球磨法、流能磨法等，其中優選噴霧干燥法；所述卡介菌多糖核酸原粉及載體混合得到的均一粉體經微粉化處理后，其粒徑分布范圍在0.1-10 微米，優選0.5-5微米；在制備成粉霧劑時可以單劑量或多劑量的形式包裝，包括但不限于儲庫型、膠囊型、泡罩型、蝶形，優選泡罩包裝，上述經微粉化處理后的卡介菌多糖核酸原粉、載體和附加劑混勻后的組合物，進行分裝后，配合現有公知的吸入器進行吸入。
[0012]二、氣霧劑
氣霧劑由卡介菌多糖核酸原粉、拋射劑和附加劑制成。
[0013]氣霧劑的制備方法為:
(1)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸原粉1份，拋射劑10-100份，附加劑5-20份；
(2)卡介菌多糖核酸原粉溶解或分散在附加劑中，加入拋射劑，混勻，灌入耐壓密閉容器，組裝定量閥門即得。
[0014]所述拋射劑包括但不限于氟氯烷烴、碳氫化合物、壓縮氣體、氫氟烴中的一種，所述的氟氯烷烴包括但不限于二氯二氟甲烷、三氟一氯甲烷、二氟甲烷、五氟乙烷、四氟乙烷， 所述碳氫化合物包括但不限于丙烷、正丁烷、異丁烷，所述壓縮氣體包括但不限于二氧化碳、氮氣，所述氫氟烴包括但不限于四氟乙烷(HFA-134a)、七氟丙烷(HFA-227)，上述拋射劑中優選氫氟烴，氫氟烴中優選四氟乙烷(HFA-134a)。所述附加劑包括但不限于甘油、丙二醇、乙醇、注射用水、油酸中的一種或多種，優選油酸。
[0015]卡介菌多糖核酸原粉溶解或分散在附加劑中，加入拋射劑，超聲或振搖混勻，灌入耐壓密閉容器，組裝定量閥門即得。
[0016]三、噴霧劑
噴霧劑由卡介菌多糖核酸原粉、溶劑及附加劑制成。
[0017]噴霧劑的制備方法為:
(1)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸原粉1份，溶劑50-500份，附加劑0.01-0.1份；
(2)卡介菌多糖核酸原粉溶解 在溶劑中，加入附加劑，灌裝即得。
[0018]所述溶劑包括但不限于生理鹽水，附加劑為防腐劑，所述防腐劑包括但不限于羥苯酯類、山梨酸類的一種或多種，羥苯酯類包括但不限于羥苯甲酯、羥苯乙酯、羥苯丙酯，山梨酸類包括但不限于山梨酸鉀、山梨酸鈉，其中優選山梨酸鉀。所述的附加劑還可以含有PH 調節劑。
[0019]本發明所述卡介菌多糖核酸吸入制劑，用于預防和治療呼吸道反復感染、哮喘，特別是小兒呼吸道反復感染、哮喘。
[0020]本發明的有益效果:本發明所述的以卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑具有較好的療效，服藥的順應性強。
【具體實施方式】[0021]本發明所需的卡介菌多糖核酸原粉(精制的卡介菌多糖核酸提取物)可通過按照 2000版《中國生物制品規程》P235-239記載的制備，也可以通過實施例1的方法獲得，但本領域技術人員可以理解卡介菌多糖核酸的制備包括但并不限于這兩種方法:
實施例1
I)卡介菌的培養和收獲
1.菌體培養:將液體低溫保藏的菌種(中國卡介苗制備用卡介菌株D2PB302，中國藥品生物制品檢定所)室溫下溶解，接種于馬鈴薯蘇通培養基，37°C連續培養14-20天；或在 37°C連續培養15天后轉種于改良的液體蘇通培養基，37°C連續培養14-20天。
[0022]2.菌體收集:待菌體生長至對數期時，對培養瓶逐瓶檢查后，收集菌膜，加入適量去離子蒸餾水洗滌，壓干后稱重。
[0023]2)卡介菌多糖核酸混合物的制備
1.菌體破碎和熱酚處理:將收集的菌體按10:1的比例加入純化水，以組織搗碎勻漿機(12000rpm/min)破碎菌體，3 min X 3次，將菌體搗碎，然后再加入破碎菌懸液0.5-2.0倍體積量的熱苯酚(30~100°C)，在低速攪拌中保溫30分鐘~I小時。
[0024]2.卡介菌多糖核酸混合物的提取:將熱酚好的混合液自然沉淀I~10天，吸取上清液，管式離心機高速離心后，上清經0.45Mm無菌濾器過濾，即為卡介菌多糖核酸混合物。
[0025]3)精制卡介菌多糖核酸提取物的制備
可通過以下兩種方法來制備卡介 菌多糖核酸提取物:
1.透析法精制卡介菌多糖核酸提取物
將卡介菌多糖核酸混合物人工裝入透析袋(截流分子量>5000道爾頓)中在100倍體積的純化水中透析7~10天，每天更換透析池中純化水，每天從透析袋中抽樣檢測苯酚殘留量。將透析好的卡介菌多糖核酸混合物中加入適量乙醇使含醇量60~85%，自然沉淀I~ 10天后，沉淀物用無水乙醇充分攪拌均勻、離心洗滌3次。然后用乙醚洗滌離心3次后，放至干燥器干燥，干燥2~5天即為精制卡介菌多糖核酸提取物。
[0026]2.凝膠柱層析法精制卡介菌多糖核酸提取物
采用美國密里博(MILLIP0RE)公司制造的K- PRIME 40 II凝膠層析過濾系統和GH-25 凝膠介質進行卡介菌多糖核酸、苯酚及卡介菌蛋白的分離。具體的制備過程如下:
(I)打開主機及監控電腦，將系統預熱20至30分鐘，并檢查管道，柱體是否暢通完好， 是否存在氣泡。
[0027](2)平衡:用0.9%生理鹽水以1000mL/分鐘經柱正向流動，直至柱前柱后電導、pH 一致時結束平衡過程。
[0028](3)上樣:將卡介菌多糖核酸混合物經上樣系統進行上樣，上樣速度為600mL/分鐘。
[0029](4)洗脫:上樣結束后，用0.9%生理鹽水以SOOmL/分鐘速度進行洗脫，采用紫外分光儀(波長采用260 nm或280nm)檢測流出液，收集目的峰，將收集的目的峰通過0.45Mm 無菌濾器過濾，即為精制卡介菌多糖核酸提取液。
[0030](5)清洗:洗脫后用注射用水對系統進行清洗直至柱前、柱后電導接近于零時為止。
[0031]將所收集的精制卡介菌多糖核酸提取液進行醇沉，在精制卡介菌多糖核酸提取液中加入藥用乙醇進行醇沉，含醇量為70-75%。自然沉淀4天后，收集沉淀物。沉淀物通過無水乙醇充分攪拌均勻、離心洗滌3次，然后用乙醚洗滌離心3次后，放至干燥器干燥，干燥物即為精制卡介菌多糖核酸提取物。
[0032]實施例2 吸入粉霧劑處方如下:
【權利要求】
1.一種卡介菌多糖核酸為活性成分的吸入制劑，其特征在于以卡介菌多糖核酸與藥學上可接受的輔料制成的藥物組合物。
2.根據權利要求1所述的吸入制劑，其特征在于包括吸入粉霧劑、氣霧劑、噴霧劑。
3.根據權利要求1或2所述的吸入制劑，其特征在于包括口腔吸入制劑、鼻腔吸入制劑。
4.根據權利要求2所述的吸入粉霧劑，其特征在于其制備方法為:卡介菌多糖核酸原粉與藥學上可接受的輔料，得到均一粉體，粉體通過微粉化處理，其粒徑分布范圍在0.1-10 微米，粉體分裝，置于吸入裝置即得。
5.根據權利要求4所述的吸入粉霧劑，其特征在于，所述的粒徑分布范圍為0.5-5微米。
6.根據權利要求4所述的吸入粉霧劑，其特征在于所述的輔料包括載體和附加劑，載體為果糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、甘氨酸、纈氨酸、 亮氨酸中的一種或幾種，附加劑為硬脂酸鎂、微粉硅膠、滑石粉中的一種或幾種；卡介菌多糖核酸的原粉與載體的質量比為1:10-1000，附加劑用量為載體與卡介菌多糖核酸原粉重量總和的0.01%-0.1%。
7.根據權利要求6所述的吸入粉霧劑，其特征在于卡介菌多糖核酸原粉與載體的質量比為 1:10-100。
8.根據權利要求2所述的氣霧劑，其特征在于其制備方法為:(1)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸原粉1份，拋射劑10-100份，附加劑5-20份；(2)卡介菌多糖核酸原粉溶解或分散在附加劑中，加入拋射劑，混勻，灌入耐壓密閉容器，組裝定量閥門即得。
9.根據權利要求8所述·的氣霧劑，其特征在于，所述的拋射劑為氟氯烷烴、碳氫化合物、壓縮氣體、氫氟氯烷烴、氫氟烴中的一種，所述的附加劑為甘油、丙二醇、乙醇、注射用水、油酸中的一種或多種。
10.根據權利要求2所述的噴霧劑，其特征在于其制備方法為:(I)原輔材料準備:卡介菌多糖核酸原粉1份，溶劑50-500份，附加劑0.01-0.1份；(2)卡介菌多糖核酸原粉溶解在溶劑中，加入附加劑，灌裝即得。
11.根據權利要求10所述的噴霧劑，其特征在于，所述的溶劑為生理鹽水，所述的附加劑為防腐劑。
12.根據權利要求10所述的噴霧劑，其特征在于，所述的附加劑為羥苯酯類、山梨酸類中的一種或多種。
13.根據權利要求11所述的噴霧劑，其特征在于，所述的附加劑還可以含有pH調節劑。
14.權利要求1所述的吸入制劑，其特征在于用于預防和治療呼吸道感染、哮喘。
【文檔編號】A61P31/00GK103565780SQ201210260981
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月26日 優先權日:2012年7月26日
【發明者】劉芳潔, 顏冬蘭, 谷陟欣 申請人:九芝堂股份有限公司, 湖南斯奇生物制藥有限公司