專利名稱：低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于免疫調節領域，主要涉及一種藥物聯合使用作為制備抗癌藥物中的應用，具體說是利用低劑量納曲酮(LDN)聯合蛋氨酸腦腓肽(MENK)體內給藥作為治療癌癥藥物的應用。
背景技術：
腫瘤治療包括手術、放療、化療和生物治療。通過調節機體免疫細胞來治療癌癥的方法稱作腫瘤免疫治療技術，屬生物治療范疇。既是通過調整或增強機體本來就有的內在防御機制來抑制或殺傷腫瘤細胞，或通過抑制腫瘤細胞轉化來降低腫瘤的惡性度。具體機理為1，外源給予免疫刺激劑或調節劑，糾正免疫功能底下狀態。2，直接給予具有免疫效應 的細胞或具有抗癌活性的細胞因子，或采用過繼性細胞免疫治療。3，增強腫瘤細胞對機體抗腫瘤效應的敏感性。4，增強機體對腫瘤對機體所致損傷的耐受。5，抑制腫瘤細胞轉化或通過基因治療使腫瘤細胞凋亡。1975年Hughes等從豬腦抽提液中分離的、具有內源性嗎啡樣活性的蛋氨酸腦啡肽。后來研究發現是由腎上腺產生的前激素和前腦啡肽衍生來，釋放入血，由五個氨基酸構成的五肽。正常體內含量極低，每毫升血衆50-150pg。蛋氨酸腦啡肽是一種神經肽，是連接神經和免疫兩個系統重要的轉導信號分子之一。能夠和阿片受體結合而使人或動物(類似內啡肽)產生鎮定和止痛作用，并且有直接抑制腫瘤生長的功能。后繼研究發現正常的T淋巴細胞，樹突狀細胞，巨噬細胞，自然殺傷細胞(NK)含有阿片受體。大量研究證明蛋氨酸腦啡肽對免疫系統具有如下作用
細胞活性，增加CD2，CD4，CD8等受體分子的表達，特別是增加CD4分子的表達，增加T細胞玫瑰花節形成率，增加NK細胞活性，增加有絲分裂素誘導的細胞增殖，增加單核細胞(巨噬細胞)和中性粒細胞的趨化作用，誘導M2型巨噬細胞向Ml型巨噬細胞轉化，對樹突狀細胞的成熟和活性有明顯的促進作用。還可以增加Y-干擾素，白介素-2和腫瘤壞死因子等多種細胞因子的產生。特別是可以明顯地抑制調節性T細胞活性。在與白細胞介素-2比較時顯示出，用量小，副作用小，活性高，安全性高的優點。納曲酮為羥二氫嗎啡酮的衍生物，其化學結構與嗎啡相似，僅在嗎啡的n-位甲基以烯丙基取代，6位羥基變為酮基，而它的藥理作用卻與嗎啡安全相反，是阿片受體的特異性拮抗劑，它與阿片受體的親和力大于嗎啡與￠-內啡肽的親和力，能競爭性阻止并取代嗎啡樣物質與受體結合，從而阻斷嗎啡樣物質的作用。近年來有研究證明低劑量納曲酮對免疫系統細胞有很強的刺激作用，如可以增加T細胞，NK細胞，巨噬細胞活性等，但是對于納曲酮聯合蛋氨酸腦啡肽刺激免疫系統細胞和用于癌癥則沒有報道。
發明內容
發明目的
本發明提供一種低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物中的應用，其目的在于解決現有方法用量大、副作用大、療效及安全性差、沒有突破性等方面存在的問題。技術方案
本發明是通過以下技術方案來實現的
低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于所述納曲酮學名為17_(環丙甲基)_4，5-環氧-3，14-二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341. 4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 780 ;納曲酮與蛋氨酸腦啡肽二者以I :1比例聯合，以口服或注射使用，作為治療癌癥的藥物。將納曲酮配成0. 01 10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. 01 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。
將納曲酮配成0. I I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。納曲酮使用量為每次口服I 50暈克，或者注射每次I 20暈克；同時，蛋氨酸腦啡肽的使用量范圍為每次口服0. I 50暈克，注射為0. I 10暈克。免疫系統指標包括⑶4+T細胞，⑶8+T細胞，NK細胞，NET細胞，、6 T細胞和樹突狀細胞。優點及效果
本發明具有如下優點
本發明涉及一種低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物中的應用，機體免疫系統細胞，如T細胞，NK細胞，巨噬細胞等表面存在阿片受體，低劑量納曲酮和蛋氨酸腦啡肽通過與上述受體結合，能夠刺激免疫細胞的活化，增殖和改善免疫功能。低劑量納曲酮對免疫系統細胞有很強的刺激作用，應用本發明方法，使用低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡肽用于制備治療晚期癌癥藥物的研究，取得一定很好治療效果，具有用量小，副作用小，活性高，安全性高的優點。
圖I為腫瘤小鼠生存率不意 圖2為小鼠DC細胞不意 圖3為人淋巴細胞總數示意 圖4為人⑶8+⑶28+活性T細胞示意 圖5為人DC細胞示意 圖6為人NK cell不意 圖7為人NKT cell示意 圖8為人Y 5 T cell不意 圖9為人Treg cell示意 圖10為樹突狀細胞電鏡照片MENK ；
圖11為樹突狀細胞電鏡照片MENK+LDNX2000 ；
圖12為樹突狀細胞電鏡照片正常對照RPMI 1640X5000 ；
圖13為患者治療前后CT對照圖。
具體實施例方式經過系統研究了蛋氨酸腦啡肽對樹突狀細胞和CD4+T細胞作用，做了對多例免疫系統遭受放化療損傷的癌癥患者免疫系統作用觀察，同時聯合低劑量納曲酮對癌癥患者進行了系統治療研究，在此基礎上形成了新的、獨特的腫瘤免疫治療方法的藥物。低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于所述納曲酮學名為17_(環丙甲基)_4，5-環氧-3，14-二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met,為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 780 ;納曲酮與蛋氨酸腦啡肽二者以I :1比例(體積比)聯合，以口服或注射使用，作為治療癌癥的藥物。將納曲酮配成0. 01 10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. 01 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。將納曲酮配成0. I I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。 納曲酮使用量為每次口服I 50暈克，或者注射每次I 20暈克；同時，蛋氨酸腦啡肽的使用量范圍為每次口服0. I 50暈克，注射每次為0. I 10暈克。本方法適用于大多數癌癥，患者治療前后免疫系統大大改善，癥狀有明顯改善。癌癥患者免疫系統指標明顯改善，包括CD4+T細胞，CD8+T細胞，NK細胞，NET細胞，Y S T細胞和樹突狀細胞。下面結合具體實施例對本發明做進一步的說明
實施例I :
納曲酮學名為17_(環丙甲基)_4，5-環氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 ；
將納曲酮配成0. 01毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. 01毫克/ml，使用時按照二者I :1比例使用。實施例2
納曲酮學名為17_(環丙甲基)_4，5-環氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量780 ；
將納曲酮配成0. I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I毫克/ml，使用時按照二者I :1比例使用。實施例3
納曲酮學名為17_(環丙甲基)_4，5-環氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量770 ；
將納曲酮配成I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I毫克/ml，使用時按照二者I 1比例使用。實施例4
納曲酮學名為17_(環丙甲基)_4，5-環氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 ；
將納曲酮配成10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成10毫克/ml，使用時按照二者I 1比例使用。以上實施例得到的溶液，分別配置成注射液。通過對自愿患者24人進行免疫系統激活實驗，將這24人分為3組，一組為納曲酮聯合蛋氨酸腦啡肽組(MENK+LDN)，一組為蛋氨酸腦啡肽組(MENK)，一組為對照組(RPMI1640)。對實驗組采用實施例I藥物進行治療，然后檢測外周血淋巴細胞總數和分別亞群數目，結果顯著，淋巴細胞總數和亞群數量明顯上升，而調節性T細胞(Treg)得到有效抑制，參見圖3-圖12。實施例5
取C57小鼠，分成三組，分別為正常對照組(RPMI1640組)，蛋氨酸腦啡肽治療組(MENK·組)和蛋氨酸腦啡肽加納曲酮組(MENK+LDN組)。每組10只，標準化飼養，將三組小鼠每只皮下接種肝癌細胞5X IO6個。同時，給予藥物治療。蛋氨酸腦啡肽組每只小鼠給予蛋氨酸腦啡肽0.01毫克；蛋氨酸腦啡肽加納曲酮組每只小鼠給予納曲酮0.01毫克，給予蛋氨酸腦啡肽0. 01毫克；正常對照組每只小鼠給予生理鹽水0. 5毫升，上述均為腹腔給藥。小鼠飼養經過20天，計算生存率，取外周血檢測樹突狀細胞，統計分析，見圖I與圖2結果。結果表明蛋氨酸腦啡肽加納曲酮顯出明顯的腫瘤治療作用，比單純使用蛋氨酸腦啡肽效果好，說明二者聯合的用法具有優越性。實施例6
患者李某，女，61歲，患胰腺癌中期，臨床已經沒有治療選擇，外周血淋巴細胞亞群檢測表明患者⑶4+T細胞明顯下降(21)，⑶8+T細胞(包括抑制細胞)明顯上升(46)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯下降(0. 52)，NK明顯下降(2%)，整個免疫系統已經明顯失衡，生命瀕臨死亡。采用納絡酮聯合蛋氨酸腦啡肽注射液治療，I毫克/每天，連續30天，患者外周血淋巴細胞亞群檢測表明⑶4+T細胞明顯上升(31)，⑶8+T細胞(包括抑制細胞)明顯下降(22)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯上升(I. 42)，NK明顯上升(8%)。患者免疫系統恢復近正常值，繼續維持治療3個月，患者生命得以挽救。實施例I
患者謝某，女，57歲，患乳腺癌晚期，全身轉移至骨髓，臨床已經沒有治療選擇，外周血淋巴細胞亞群檢測表明患者⑶4+T細胞明顯下降(18)，⑶8+T細胞(包括抑制細胞)明顯上升(52)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯下降(0. 34)，NK明顯下降(3%)，整個免疫系統已經明顯失衡，生命瀕臨死亡。采用納絡酮聯合蛋氨酸腦啡肽注射液治療，5毫克/每天，連續30天，患者外周血淋巴細胞亞群檢測表明⑶4+T細胞明顯(38)，⑶8+T細胞(包括抑制細胞)明顯下降(35)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯上升(I. I), NK明顯上升(7%)。患者免疫系統恢復近正常值，繼續維持治療3個月，患者生命得以挽救，全面恢復。實施例8
患者趙某，58歲，患直腸癌，手術后轉移，肝臟，臨床已經沒有治療選擇，外周血淋巴細胞亞群檢測表明患者⑶4+T細胞明顯下降(18)，⑶8+T細胞(包括抑制細胞)明顯上升(50)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯下降(0. 35)，NK明顯下降(3%)，整個免疫系統已經明顯失衡，生命瀕臨死亡。采用納絡酮聯合蛋氨酸腦啡肽注射液治療，5毫克/每天，連續30天，患者外周血淋巴細胞亞群檢測表明⑶4+T細胞明顯(35)，⑶8+T細胞(包括抑制細胞)明顯下降(31)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯上升(I. I), NK明顯上升(7%)。患者免疫系統恢復近正常值，繼續維持治療3個月，患者生命得以挽救，全面恢復見附圖13及參考圖片。結論機體免疫系統細胞表面存在阿片受體，低劑量納曲酮和蛋氨酸腦啡肽通過與上述受體結合，能夠刺激免疫細胞的活化，增殖和改善免疫功能，患者治療前后免疫系統大大改善，癥狀有明顯改善；本發明填補了納絡酮聯合蛋氨酸腦啡肽作為制備治療癌癥藥物方面使用的空白。·
權利要求
1.低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于所述納曲酮學名為17-(環丙甲基)-4，5-環氧-3，14-二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341. 4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結構為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 780 ;納曲酮與蛋氨酸腦啡肽二者以I :1比例聯合，制備成口服或注射劑作為治療癌癥的藥物。
2.根據權利要求I所述的低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于將納曲酮配成O. 01 10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成O. 01 10毫克/ml，二者按照I: I比例使用。
3.根據權利要求2所述的低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于將納曲酮配成O. I I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成O. I 10毫克/ml，二者按照I: I比例使用。
4.根據權利要求1、2或3所述的低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于納曲酮使用量為每次口服I 50毫克，或者注射每次I 20毫克；同時，蛋氨酸腦啡肽的使用量范圍為每次口服O. I 50暈克，注射為O. I 10暈克。
5.根據權利要求1、2或3所述的低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，其特征在于免疫系統指標包括⑶4+T細胞，⑶8+T細胞，NK細胞，NET細胞，γ δΤ細胞和樹突狀細胞。
全文摘要
本發明涉及低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應用，利用低劑量納曲酮和蛋氨酸腦啡肽通過與機體免疫系統細胞表面的阿片受體結合，能夠刺激免疫細胞的活化，增殖和改善免疫功能的作用，使用低劑量納曲酮聯合蛋氨酸腦啡肽用于作為制備治療癌癥的藥物，形成具有突破性療效的腫瘤生物治療新方法，具有用量小，副作用小，活性高，安全性高等優點。
文檔編號A61K31/485GK102784384SQ201210302259
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月23日 優先權日2012年8月23日
發明者單風平, 尼古拉菠蘿尼科夫, 諾瑞·格瑞芬 申請人:單風平