專利名稱：一種含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物及應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物及應用，特別涉及一種能使糖尿病患者痊愈的含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物及應用。
背景技術：
糖尿病發病率仍在逐年增加。據資料顯示，糖尿病已成為全球第五大死因，被認為是僅次于心腦血管病和惡性腫瘤的非傳染性疾病。2005年全球糖尿病人群已擴容到2. 2億人，目前我國的糖尿病患者不少于4000萬，許多患者存在著糖耐量減低癥的風險。在發展中國家包括我國，成年人患病率較高，而中年人已成為這一疾病的高危人群，并且開始向低齡化發展。值得注意的是，糖尿病患病率在發展中國家增加速度特別快，尤其是在那些從窮變富的發展中國家。糖尿病不只是一個富貴病，在經濟和生活水平發生劇變的地區，現實地存在著糖尿病爆發流行的危險。我國糖尿病正處于爆發性流行。糖尿病并發癥困擾著患者和醫務界糖尿病得不到適當的控制并發腎病、視網膜病變、外周神經病變、心臟病變的幾 率很高，嚴重影響生活質量。我國每年用于糖尿病的直接醫療成本超過180億，占醫療總費用的4%。盡管患者數量如此之多，但較低的診斷率，疾病的慢性病程，對聯合治療的需要，缺少有效的長程治療糖尿病的口服藥物以及與注射治療相關聯的較差的患者依從性，均意味著目前在該領域中，仍有許多需求未得到滿足。近年來醫藥工作者開展了大量有關糖尿病藥物研發的工作，解決了糖尿病治療中的一些問題，同時也潛在地改變了這種疾病的治療模式。胰島β細胞功能的衰竭是糖尿病發病的重要原因，胰島細胞功能不能夠得到有效的恢復是糖尿病患者需要終身治療的根本原因，而現在對II型糖尿病患者普遍采用的口服降糖藥物治療，大多數的患者其病情都是逐漸進展到必須使用較大劑量的胰島素才能控制好血糖，也就是說，現有口服降糖藥物并沒有很好的治愈糖尿病，對于糖尿病患者的長期預后并沒有產生積極的影響。目前，胰島素療法是已知的、公認的最為有效的降糖療法，但是這種療法卻未得到有效使用。很多的II型糖尿病患者已經對胰島素產生了恐懼，而不是把它看作是能幫助他們控制血糖最理想的一種有效療法。并且這種恐懼被一些醫生所認為的在糖尿病早期治療時使用胰島素是一種威脅的論調給強化了。實際上胰島素是控制血糖最有效、最合乎規律的方法，而不愿使用或不愿強化胰島素治療常常是由于胰島素的給藥形式一注射給藥的方式所引起的。因此對于糖尿病患者的治療，以口服給藥的形式，這樣可以大大的提高患者用藥的依從性，十分方便的給藥，恢復糖尿病患者胰島細胞的功能，防止胰島細胞的進行性衰竭是最為重要的。在過去的40多年內，全球已開發出100多種抗高血糖藥物，其中有30%的品種目前活躍在我國市場上，這些品種主要由口服降糖藥和胰島素兩大類組成，如果藥物按作用機理分類，主要有胰島素、胰島素類似物、磺酰脲類、雙胍類、α -葡萄糖苷酶抑制劑、噻唑烷二酮衍生物、氨基酸衍生物等七大類品種。盡管市面上口服降糖藥種類繁多，但迄今為止，還沒有哪種藥物能夠使糖尿病患者痊愈。白茍總苷(total glucosides of paeonia,TGP)是我國傳統中藥白茍根中提取的有效部位，其藥理作用主要有抗炎、抗氧化與免疫調節活性。在臨床與動物實驗中TGP已用來治療類風濕關節炎、免疫性肝損害、系統性紅斑狼瘡及系膜增生型腎炎，療效確切，無明顯毒副作用。袁亮等人(《白芍總苷對糖尿病大鼠腎臟保護作用及部分機制》，中國藥理學通報2007年6期)應用鏈脲佐菌素誘導大鼠糖尿病模型，同時每日灌胃給予TGP，結果TGP對糖尿病大鼠腎臟保護作用機制部分與其抑制腎組織 中ICAM-I及TGFii I蛋白表達有關。牛蒡子(Fructus arctii)為菊科(Compositae)牛蒡屬(Arctium)植物牛蒡 Arctium lappaL.的干燥成熟果實，為歷版《中國藥典》收載。牛蒡子味辛苦、性寒，歸肺胃二經，具有疏散風熱、解毒透疹、利咽消腫等功效，主要用于治療外感風熱、咳嗽痰多、咽喉腫痛、發熱咳嗽，麻疹初期、疹出不暢，風熱疹癢，熱毒瘡腫，痄腮丹毒，咽喉腫痛等。現代藥理學研究證明，牛蒡子提取物有顯著而持久的降低大鼠血糖作用；在降血糖處方中加入牛蒡子，可明顯地加強降血糖作用。目前，現有技術還沒有將白芍總苷與牛蒡苷聯合用于糖尿病治療的文獻報道。
發明內容
鑒于現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種以白芍總苷和牛蒡苷協同性治療糖尿病，并使糖尿病患者痊愈的藥物組合物。本發明的目的是這樣實現的
一種含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物，白芍總苷和牛蒡苷的重量比為O. 05-0. 5 :1。優選地，所述含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物，活性成分由白芍總苷和牛蒡苷組成，且白芍總苷和牛蒡苷的重量比為O. 05-0. 5 :1。進一步優選地，所述含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物，白芍總苷和牛蒡苷的重量比為 O. 1-0. 3 :1。本發明所述的白芍總苷來自白芍飲片提取的總苷，采用生化提取，從白芍干燥根中得到茍藥苷(paeonifIorin)、輕基茍藥苷(hydroxy-paeonifIorin)、茍藥花苷(paeonin)、茍藥內酯苷(albifIorin)、苯甲酸茍藥苷(benzoylpaeonifIorin)等具有生理功效成分的混合物，總稱白茍總苷(total glucosides of paeonia, TGP)。所述的白芍總苷可按如下方法制備而成取干凈且干燥的白芍，粉碎，加入8-12倍重量的60%-80% (v/v)乙醇中，65-75 °C保溫提取1_3次，每次2_4h，合并提取液，過濾，濾液經減壓回收溶劑，真空濃縮成白芍粗提物；將所得白芍粗提物加入18-25倍重量的60%-80% (v/v)乙醇中溶解，用氫氧化鈉溶液調節pH=5. 5-6. 5，采用聚苯乙烯骨架的HPD-300大孔吸附樹脂對溶液進行吸附，吸附至飽和后，先用水吸取雜質至Molish反應陰性，再用8-13倍樹脂量的60%-80% (v/v)乙醇，以1-5倍樹脂量/小時的流速洗脫，回收洗脫液，濃縮，干燥，得白芍總苷。按干燥品計算，芍藥苷(C23H28O11)含量高達65%-75%。本發明所述的牛蒡苷(arctiin)是從牛蒡的干燥成熟果實牛蒡中提取分離而來的木脂素類化合物，熔點110 112°〇，旋光度-51.5° (0=2.0，乙醇)。所述的牛蒡苷按如下方法制備而成取干凈且干燥的牛蒡子，粉碎，加I. 5倍藥材重量的水浸泡8h,然后加水提取1-3次,每次加水量為藥材重量的10倍,提取時間為Ih,合并提取液，濃縮，干燥，得牛蒡苷。按干燥品計算，牛蒡苷(C27H34O11)含量達95%以上。根據動物試驗發現，本發明的藥物組合物經口服給藥可以治療糖尿病，尤其可使糖尿病患者痊愈，擺脫糖尿病患者治療時必須終身服藥的缺點。因此本發明的第二個目的在于提供一種藥物新用途，即上述含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物在制備治療降血糖的藥物中的應用。根據白芍總苷和牛蒡苷的物理化學性質，可以通過常規制劑技術制成固體口服制齊U，包括普通片、膠囊等。與現有技術相比，本發明涉及的含白芍總苷和牛蒡苷的藥物組合物具有如下優點和顯著的進步
(O白芍總苷和牛蒡苷協同性治療糖尿病，可使得糖尿病患者痊愈，擺脫現有技術對糖尿病治療必須終身服藥的缺點。我們經過實驗發現，白芍總苷和牛蒡苷聯合用藥雖在長期口服給藥后，十分顯著的降低了糖尿病大鼠的血糖，在整個給藥周期中降糖平穩，沒有反彈。相反，現在臨床上正在使用的可促進胰島素釋放的第二代磺酰脲類降糖藥物(如格列吡 嗪、格列齊特、比格列酮、格列喹酮等)雖然可在用藥后暫時降低大鼠的血糖，但是卻在長期給藥后不但不能降低血糖，反而有升高大鼠血糖的趨勢，這也恰恰吻合了現在臨床上糖尿病患者的疾病發展過程，很多的糖尿病患者在長期服用磺酰脲類降糖藥以后，血糖控制的難度卻越來越大，最后必須應用胰島素治療。(2)通過細胞藥理試驗發現，白芍總苷和牛蒡苷聯合用藥可以極顯著地促進胰島細胞的分裂增殖，增加胰島細胞的活力，防止胰島細胞功能的衰竭。這些都表明，聯合用藥、低分子聯合用藥可藥用鹽或其衍生物在糖尿病長期治療方面具有很好的前景。
具體實施例以下是本發明的具體實施例，對本發明的技術方案做進一步作描述，但是本發明的保護范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護范圍之內。本發明所述的白芍總苷按照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄V D)測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；磷酸鹽緩沖液[O. 05mol/L 磷酸氫二鉀液-O. 05mol/L 磷酸二氫鉀液(80:20)，pH 值為 7. 4]-甲醇(65:35)為流動相；檢測波長為230nm。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于1500，芍藥苷峰與相鄰峰的分離度應符合要求。測定法取本品約20mg，精密稱定，置IOml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取芍藥苷對照品適量，加50%甲醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含Img的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。本發明所述的牛蒡苷案如下方法測定含量
色譜條件=Waters 2695型高效液相色譜儀(Waters2996紫外檢測器)，色譜柱為Thermo C18 柱(4. 6mm X 250mm, 5 μ m),流動相為乙腈一水(25 :75),流速為 l.Oml/min,檢測波長為280nm。在本色譜條件下能較好的分離牛蒡苷，其他成分對測定無干擾。測定法取本品粉末約O. 5g，精密稱定，置50ml容量瓶中，加甲醇約45ml，超聲處理20min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取牛蒡苷對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含Img的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。
實施例I白芍總苷的提取純化
取干凈且干燥的白芍，粉碎，加入10倍重量的70% (v/v)乙醇中，65-75°C保溫提取3次，每次3h，合并提取液，過濾，濾液經減壓回收溶劑，真空濃縮成白芍粗提物；將所得白芍粗提物加入20倍重量的70%( v/v)乙醇中溶解，用氫氧化鈉溶液調節pH=6，采用聚苯乙烯骨架的HPD-300大孔吸附樹脂對溶液進行吸附，吸附至飽和后，先用水吸取雜質至Molish反應陰性，再用10倍樹脂量的70%(v/v)乙醇，以3倍樹脂量/小時的流速洗脫，回收洗脫液，濃縮，干燥，得淡黃棕色粉末白芍總苷。按干燥品計算，芍藥苷(C23H28O11)含量高達72. 2%。
實施例2牛蒡苷的制備
取干凈且干燥的牛蒡子，粉碎，加I. 5倍藥材重量的水浸泡8h，然后加水提取3次，每次加水量為藥材重量的10倍，提取時間為lh，合并提取液，濃縮，干燥，得無色結晶性粉末牛蒡苷。按干燥品計算，牛蒡苷(C27H34O11)含量達95%以上。
實施例3白芍總苷聯合牛蒡苷對胰島細胞活力的影響
取出生I 3 d SD大鼠，常規消毒，剖腹暴露術野，無菌取出胰腺，清除胰外網膜、脂肪組織后經4°C Hanks液漂洗2 3次。用眼科剪將胰腺剪成O. 5mm3大小組織碎塊，Hanks液漂洗3次后，加入5倍體積3g/L V型膠原酶(pH 7. 4)混勻，37°C水浴中振蕩消化6 8min。至消化液渾濁時，自然沉淀后吸取上層消化濁液，用4°C Hanks液終止消化。剩余未消化組織補加消化液繼續消化。按上述操作重復4-5次，直至胰腺組織基本消化完畢。收集各次消化濁液1000 r/min離心5-7 min，沉淀細胞接種于內含15%胎牛血清的PRMI1640培養液的T75瓶，細胞移至37°C、5% C029 5%空氣完全濕化的CO2培養箱內進行培養。細胞培養18 h時觀察細胞生長狀態。當細胞明亮、折光性強、培養液顏色變淺時，指示細胞生長良好。將96孔培養板的細胞分為賦形劑組、白芍總苷組、牛蒡苷組、聯合用藥組。根據細胞貼壁速度差異，將細胞從瓶底輕輕吹下，低速離心，沉淀細胞加入新的培養液，以2 X IO4個/ml接種于96孔培養板(每孔200 μ L)，2d后加入不含胎牛血清的培養基培養24h，然后更換培養液，每組除了含有16. 7mmol/L葡萄糖、15%胎牛血清的PRMI1640培養液，另外含有其它藥物分別如下賦形劑組不加任何藥物；白芍總苷組4mg/L白芍總苷；牛蒡苷組15mg/L牛蒡苷；聯合用藥組4mg/L白茍總苷+15mg/L牛蒡苷。每2d換液I次(培養液按上述各組成分分別配制)，每次換液時用放射免疫法檢測原培養液中胰島素分泌水平。試驗結果具體的試驗結果數值見表I。由表I可以看出，在胰島細胞整個培養過程中，聯合用藥組與賦形劑組相比，在胰島細胞培養的前2天，細胞釋放胰島素的活力沒有區別。但是隨著時間的延長，聯合用藥組與賦形劑組相比具有顯著性差異Gd < O. 05或/^ < O. 01);在胰島細胞培養的6天后，聯合用藥組與牛蒡苷組或白芍總苷組相比也具有顯著性差異Gd < O. 05或產<0.01)。這說明，賦形劑組和單藥組的胰島細胞活力和釋放胰島素的功能隨著時間的推移在下降，可能是胰島細胞出現了功能的衰竭；聯合用藥組的細胞沒有象賦形劑組或者單藥組的細胞那樣隨著培養時間的延長出現細胞活力的下降，而是在10天培養過程中一直保持著很好的細胞活力。這個結果提示我們，牛蒡苷與白芍總苷聯合用藥在臨床上長期使用以后，對于防止患者胰島細胞功能的衰竭，有效的保護患者胰島細胞的功能和活力必將有著很好的作用。這個結果同時也預示著，長期服用含有牛蒡苷組和白芍總苷的藥物，會使糖尿病患者得到很好的痊愈。表I各組受試物對胰島細胞的胰島素分泌水平的影響(μ IU/mL)
權利要求
1.一種含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物，其特征在于白芍苷和牛蒡苷的重量比為O. 05-0. 5:1。
2.根據權利要求I所述含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物，其特征在于活性成分由白芍苷和牛蒡苷組成。
3.根據權利要求2所述含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物，其特征在于白芍苷和牛蒡苷的重量比為O. 1-0. 3:1。
4.根據權利要求1-3任一項所述含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物，其特征在于白芍苷按如下方法制備而成取干凈且干燥的白芍，粉碎，加入8-12倍重量的60%-80% (v/v)乙醇中，65-75°C保溫提取1-3次，每次2-4h，合并提取液，過濾，濾液經減壓回收溶劑，真空濃縮成白芍粗提物；將所得白芍粗提物加入18-25倍重量的60%-80% (v/v)乙醇中溶解，用氫氧化鈉溶液調節pH=5. 5-6. 5，采用聚苯乙烯骨架的HPD-300大孔吸附樹脂對溶液進行吸附，吸附至飽和后，先用水吸取雜質至Molish反應陰性，再用8-13倍樹脂量的60%-80%( v/V)乙醇，以1-5倍樹脂量/小時的流速洗脫，回收洗脫液，濃縮，干燥，得白芍苷。
5.根據權利要求1-3任一項所述含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物，其特征在于牛蒡苷按如下方法制備而成取干凈且干燥的牛蒡子，粉碎，加I. 5倍藥材重量的水浸泡8h，然后加水提取1-3次，每次加水量為藥材重量的10倍，提取時間為lh，合并提取液，濃縮，干燥，得牛蒡苷。
6.權利要求I所述含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物在制備治療降血糖的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種含白芍苷和牛蒡苷的藥物組合物，其中白芍苷和牛蒡苷的重量比為0.05-0.51。本發明的藥物組合物經口服給藥可以協同性治療糖尿病，尤其可使糖尿病患者痊愈，擺脫糖尿病患者治療時必須終身服藥的缺點。
文檔編號A61K31/7048GK102824423SQ20121034470
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月18日 優先權日2012年9月18日
發明者王學政, 魯俞江, 尤斌, 林愛弟, 陳旦鳳, 陳勝勝, 楊海玲, 孫卓亞 申請人:寧波立華制藥有限公司