專利名稱：一葉秋堿在制備抑制mda-mb-157細胞增殖藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細胞增殖藥物中的應用。
背景技術：
乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤。2011年美國CA:ACancer Journal forClinicians雜志(2010年影響因子94. 262)公布的最新統計數據顯示，美國2011年預計將有230480例女性罹患乳腺癌，占女性新發惡性腫瘤的30%，排名女性惡性腫瘤發病率第一位。在我國北京、上海、天津等大城市的統計顯示乳腺癌同樣是我國女性最常見的惡性腫瘤，且發病率呈逐年上升趨勢。
—葉秋堿，別名葉秋堿、硝酸一葉秋堿。其化學名稱為(6S, IlaR, IIbS)-9，10，11，11&-四氫_8!1-6，IIb-亞甲呋喃并[2，3_c]吡啶并[1，2_a]氮雜卓-2 (6H)-酮。目前還沒有其抑制乳腺癌(MDA-MB-157)細胞增殖的文獻報道。
發明內容
發明目的本發明的目的在于提供一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細胞增殖藥物中的應用。技術方案一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細胞增殖藥物中的應用。一葉秋堿主要興奮脊髄使反射活動和肌張カ增加。此外能興奮腦干增強呼吸及心肌收縮力，升高血壓，并有抑制膽堿酯酶的作用。臨床用于治療小兒麻痹后遺癥和面神經麻痹，對神經衰弱、低血壓、植物神經功能紊亂引起的頭暈、耳鳴、耳聾等有一定療效。現發現其能抑制MDA-MB-157細胞増殖。有益效果一葉秋堿抑制MDA-MB-157細胞増殖，效果良好。
具體實施例方式一葉秋堿抑制MDA-MB-157細胞增殖的實驗研究資料I實驗材料I. I實驗用細胞株乳腺癌(MDA-MB-157)，來自本公司實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規培養。I. 2實驗藥物研究藥物一葉秋堿，寶雞國康生物科技有限公司，批號20110523藥液儲液稱取IOOmg —葉秋堿，溶于5ml無水こ醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水こ醇以備對照組之用。I. 3實驗試劑DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESCO 公司批號2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt (AMRESCO 公司批號2010242);Str 印 tomycin Su I fate (AMRESCO公司批號2010382);無水こ醇(南京化學試劑有限公司批號080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ;PBS (實驗室自配)；I. 4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集団安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ; IOcm培養皿(NEST公司)、96孔培養板(NEST公司)；細胞計數板；離心管、移液管、Tips若干。 2實驗方法I) MDA-MB-157 細胞用 DMEM+10%FBS 于 37°C、5%C02 進行常規培養(IOcm 培養皿)，當細胞生長至對數期吋，收集細胞，棄去培養液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0. 25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養基中和反應，吹打細胞后將其轉入離心管中，IOOOrpm離心5min，調整細胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細胞種入96孔培養板中，每孔加入細胞懸液180 μ 1，培養板放入細胞培養箱中(37 °C，5%C02 )常規培養。3)根據細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入一葉秋堿溶液，繼續培養24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5%MTT)，繼續培養 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I ニ甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設置本底(不加細胞，只加培養液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、ニ甲基亞砜)，每組設定6個復孔。7)結果以藥物對細胞的抑制率表示細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。3統計處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數據以mean + S. D.表不。4實驗結果MTT法實驗后統計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對MDA_MB_157細胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01 )，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I 一葉秋堿對MDA-MB-157細胞增殖抑制影響研究(X土SD)
權利要求
1. 一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細胞增殖藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一葉秋堿在制備抑制MDA-MB-157細胞增殖藥物中的應，一葉秋堿，別名葉秋堿、硝酸一葉秋堿。其化學名稱為(6S,11aR,11bS)-9,10,11,11a-四氫-8H-6,11b-亞甲呋喃并[2,3-c]吡啶并[1,2-a]氮雜卓-2(6H)-酮，現發現其能抑制MDA-MB-157細胞增殖。
文檔編號A61P35/00GK102824347SQ20121035580
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月22日 優先權日2012年9月22日
發明者不公告發明人 申請人:南京正亮醫藥科技有限公司