一種疫苗組合物及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供了一種疫苗組合物，該疫苗組合物包含免疫量的豬圓環病毒抗原、免疫量的豬細小病毒抗原以及獸醫學上可接受的一種或多種類型佐劑，該疫苗組合物可達到一劑即可預防豬圓環病毒病、豬細小病毒病兩種疾病的目的，與多打幾針現有的單疫苗或二聯疫苗才能預防這兩種疾病的情況相比，該疫苗組合物更加經濟實用，并具有一定的社會效益。
【專利說明】一種疫苗組合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種疫苗組合物，具體地說，涉及一種治療豬多系統衰弱綜合征的疫苗組合物。
【背景技術】
[0002]1974年，德國學者Tischer等從連續傳代的豬腎細胞系PK15細胞中檢出一種細胞污染物，是一種不能引起細胞病變的病毒樣粒子。1982年，該學者進一步研究證實:該病毒的基因組由單股環狀的DNA組成，因而將其命名為豬圓環病毒(Porcine Circovirus,PCV)ο PCV屬于圓環病毒科圓環病毒屬，是迄今發現的一種最小的動物病毒,有兩種血清型:PCV-1和PCV-2，研究表明PCV-1不具有致病性，而PCV-2具有致病性，主要引起豬多系統衰弱綜合征(Pig Multisystemic Wasting Syndrome, PMWS),還會引起豬皮炎腎病綜合征(Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome, FONS)、豬呼吸道疾病綜合征(Porcine Respiratory Disease Complex, PRDC)、增生性壞死性肺炎(Proliferative andNecrotizing Pneumonia, PNP)、先天性震顫(Congenital Tremors, CT)等疾病，總稱為豬圓環病毒病(Procine Circovirus Disease，PCVD)。在臨床上，PCV-2主要侵害豬的肺泡巨噬細胞和淋巴細胞，主要感染5-12周齡的仔豬，病豬的臨床癥狀為:漸進性消瘦或生長遲緩、營養不良、咳嗽、呼吸困難、黃疸、腹瀉、皮膚蒼白、淋巴結腫大、腎臟灰白水腫等，可成為僵豬，嚴重者可導致死亡。
[0003]1966年，Mary和Mahnel進行豬瘟病毒組織培養時發現了一種潛伏于細胞內并可以引起感染的病毒；1967年，Cartwright等分離出豬細小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)，并對其進行血清學鑒定。PPV屬于細小病毒科細小病毒屬的自主型細小病毒，所引起的豬細小病毒病又稱為豬繁殖障礙病，以懷孕母豬發生流產、死產、產木乃伊胎為主要特征，造成傳染性不孕；母豬懷孕前期感染該病毒，便可通過胎盤使胎兒受到侵襲，以引起PMWS ;PPV還可引起仔豬的皮炎和腹瀉，但其他類型的豬感染后無明顯臨床癥狀。PPV在豬群中檢出率甚高，在豬群中的血清抗體陽性率達50%-80%，是困擾養豬業發展的主要病毒性繁殖障礙性疾病之一。
[0004]PCV_2、PPV不僅可分別在不同程度上導致PMWS癥狀發生，還常常引發多種疾病混合感染和繼發感染，造成豬體免疫抑制，導致機體抵抗力下降，從而給養豬業造成巨大的經濟損失。目前，尚沒有較好的藥物可以治療PCV-2、PPV等病毒性疾病的感染，疫苗免疫是預防和/或治療豬多系統衰弱綜合征的有效手段和措施。
[0005]生產中，有湖北中博生化有限公司生產的豬細小病毒油乳劑滅活疫苗(CP-99株)用于預防豬細小病毒病感染，其推薦的免疫程序為:后備種母豬及公豬在6-7月齡或配種前3-4周注射2次，間隔期為21天，每次深部肌肉注射2mL。即需進行多次注射，容易造成機體應激反應。其免疫之后所誘導產生的抗體效價相對較低，持續時間相對比較短。
[0006]專利ZL99809131.6公開了一種豬環狀病毒和細小病毒疫苗，該豬圓環病毒和細小病毒疫苗主要是指含有礦物油佐劑的豬圓環病毒、細小病毒二聯滅活疫苗，并具體公開了:病毒抗原的滅活、制備基于礦物油的乳劑形式的疫苗、以及制備基于可代謝油的乳劑形式的疫苗。其中，基于礦物油的乳劑形式的疫苗及基于可代謝油的乳劑形式的疫苗一個疫苗劑量均含有約IO7 5TCID5tlt5 —個疫苗劑量的體積對于通過肌內途徑給藥為2mL。該疫苗可與PamwaxR疫苗聯合用于抵抗多系統萎縮綜合癥的疫苗接種計劃。
[0007]然而，由于該疫苗免疫保護期較短，需要多次免疫才能達到理想的效果，但多次免疫容易造成成本升高、免疫機體應激反應增強。現有技術未公開過一種只免疫一次便可降低成本、減輕免疫應激反應的豬圓環病毒、細小病毒二聯疫苗。
【發明內容】
[0008]為解決現有技術的不足，本發明提供了對抗PCV-2、PPV病毒的疫苗組合物，該疫苗通過單劑給予便可引發保護性免疫，預防或治療PCV、PPV所引發的疾病。
[0009]本發明的主要目的在于提供一種疫苗組合物，所述疫苗組合物包含:
[0010]免疫量的豬圓環病毒抗原；
[0011]免疫量的豬細小病毒抗原；以及
[0012]獸醫學上可接受的一種或多種類型佐劑。
[0013]本發明中所述“豬圓環病毒抗原”、“PCV抗原”是指當所述抗原對免疫動物，特別地，所述免疫動物為豬，給藥時，可誘導、刺激或增強免疫動物抵抗PCV-2感染的免疫應答。
[0014]本發明中所述 “豬細小病毒抗原”、“PPV抗原”是指當所述抗原對免疫動物，特別地，所述免疫動物為豬，給藥時，可誘導、刺激或增強免疫動物抵抗PPV感染的免疫應答。
[0015]優選地，所述佐劑包括丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠、礦物油佐劑中的一種或幾種。
[0016]更優選地，所述丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物為至少含有丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠成分的混合物；所述丙烯酸聚合物佐劑為至少含有丙烯酸聚合物的佐劑。
[0017]更優選地，所述丙烯酸聚合物佐劑為丙烯酸聚合物、可代謝油的混合物。
[0018]進一步優選地，所述的丙烯酸聚合物為均聚物或共聚物；優選地，所述丙烯酸聚合物為 Carbopol。
[0019]最優地，所述的獸醫學上可接受的一種和/或多種不同類型佐劑的混合物為疫苗組合物的5%-30%V/V，優選為15%-25%V/V ;所述丙烯酸聚合物Carbopol優選在疫苗組合物中的終含量為0.2%W/V。
[0020]優選地，所述豬圓環病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬圓環病毒2型抗原，所述豬細小病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬細小病毒抗原。
[0021]更優選地，所述豬圓環病毒抗原為PCV-2滅活全病毒抗原，所述豬細小病毒抗原為PPV滅活全病毒抗原。
[0022]可用于本發明的PCV-2抗原還可以包含以下組合物中的任一種抗原，如:梅里亞動物保健公司研發的pcv-2全病毒滅活疫苗(Circovace* ),勃林格殷格翰動物保健公司的pcv-2亞單位疫苗(CircoFlexg),先靈葆雅動物保健公司的pcv-2亞單位疫苗(Porcilis? PCV),英特威國際有限公司的pcv-2亞單位疫苗(Circumvent?)，富道動物保健公司研制的PCV-1-PCV-2嵌合病毒滅活疫苗，哈爾濱維科生物技術有限公司的豬圓環病毒2型滅活疫苗(DBN-SX07株)。[0023]可用于本發明的PPV抗原還可以包含以下組合物中的任一種抗原，如:輝瑞公司生產的PPV滅活疫苗，武漢中博生物股份有限公司的PPV滅活疫苗CP-99株，中牧實業股份有限公司的PPV滅活疫苗WH-1株，上海科立特農科(集團)有限公司的豬細小病毒油乳劑滅
活疫苗。
[0024]優選地，所述豬圓環病毒抗原為滅活SH株全病毒抗原，所述豬細小病毒抗原為滅活HN-2011株全病毒抗原；優選地，所述豬圓環病毒抗原為5X 106.0TCID5tl/頭份，所述豬細小病毒抗原為5X 106_tlTCID5tl/頭份。
[0025]豬圓環病毒PCV-2型SH株，已在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心進行保藏(簡稱為CGMCC)，保藏日期為2008年3月4日，保藏號為CGMCC N0.2389。該菌株已經在專利申請CN200810024423.1中公開。
[0026]豬細小病毒HN-2011株，已在中國典型培養物保藏中心進行保藏(簡稱為CCTCC)，保藏日期為2011年6月9日，保藏號為CCTCC N0.V201118。
[0027]優選地，所述疫苗組合物進一步包括載體，所述載體優選為水性媒介，所述水性媒介包括鹽水、磷酸鹽緩沖液、基本必需培養基(MEM)、用HEPES緩沖劑配制的MEM中的一種或幾種。
[0028]優選地,所述疫苗組合物還包括其他抗原,所述其他抗原包括豬生殖與呼吸綜合征病毒抗原、豬肺炎支原體病毒抗原、大葉性肺炎放線桿菌抗原、大腸桿菌抗原、萎縮性鼻炎抗原、偽狂犬病毒抗原、豬霍亂病毒抗原、豬流感病毒抗原中的一種或多種。
[0029]本發明的另一目的在于提供一種制備所述疫苗組合物的方法，所述制備方法包括分別培養增殖所述豬圓環病毒、所述豬細小病毒，分別用甲醛滅活所述培養的豬圓環病毒、豬細小病毒，按比例混合所述豬圓環病毒抗原和所述豬細小病毒抗原，并加入一定量佐劑。
[0030]本發明的再一目的在于提供所述疫苗組合物在制備預防和/或治療豬圓環病毒病、豬細小病毒病的藥物中的應用。
[0031]本發明所述的疫苗組合物在制備用于保護動物免患PCV-2、PPV所引起的疾病的疫苗中的應用時，所用疫苗組合物的免疫量為2mL/頭份。所述疫苗組合物在給予免疫動物時，可以通過肌內注射、皮下注射、口服途徑或鼻內途徑，優選地通過肌內注射或皮下注射。
[0032]本發明所制備的疫苗組合物，可達到一劑即可預防豬圓環病毒病、豬細小病毒病兩種疾病的目的，與多打幾針現有的單疫苗或二聯疫苗才能預防這兩種疾病的情況相比，本發明所提供的技術方案更加經濟實用，并具有一定的社會效益。
【具體實施方式】
[0033]下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。
[0034]本實施例中所用的“免疫量”是指提供針對PCV_2、PPV的免疫劑量，主要取決于以下因素:被免疫動物的物種、品種、年齡、重量大小、健康狀態以及動物之前是否接受過對抗同樣病毒的疫苗。
[0035]本發明實施例中所述的“疫苗組合物”指具有預防和/或治療豬圓環病毒2型(PCV-2)、豬細小病毒效果的疫苗組合物，即至少包含免疫量的豬圓環病毒2型抗原、免疫量的豬細小病毒抗原兩種抗原的疫苗組合物。
[0036]本發明實施例中所述的“單苗”是指僅含有免疫量的豬圓環病毒2型抗原或免疫量的豬細小病毒抗原中的一種疫苗，用于評價本發明中疫苗組合物的免疫效力。
[0037]本發明實施例中，以豬圓環病毒2型PCV-2SH株和豬細小病毒PPVHN-2011株為例，對疫苗組合物中不同佐劑對疫苗免疫效力的影響進行解釋說明。
[0038]在本發明的實施方式中使用的豬圓環病毒PCV-2型SH株，該實施方式無論在何種情況下均不構成對本發明的限定。
[0039]在本發明的實施方式中使用的豬細小病毒HN-2011株，該實施方式無論在何種情況下均不構成對本發明的限定。
[0040]在本發明的實施方式中，豬圓環病毒抗原優選為5 X IO6 0TCID50/頭份，豬細小病毒抗原優選為5X IO6 tlTCID5ci/頭份，本領域技術人員知曉，滅活疫苗的抗原量不構成對本發明的進一步限定，免疫量取決于被免疫動物的物種、品種、年齡、重量大小、健康狀態以及動物之前是否接受過對抗同樣病毒的疫苗。
[0041]本發明實施例中的疫苗組合物中的佐劑為獸醫學上可接受的一種和/或多種不同類型佐劑，為丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠、礦物油佐劑中的一種和/或幾種的混合物。優選地，丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物為至少含有丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠兩種成分的混合物，丙烯酸聚合物佐劑為至少含有丙烯酸聚合物的佐劑。更優選地，丙烯酸聚合物佐劑為丙烯酸聚合物、可代謝油的混合物。 [0042]本發明實施例中獸醫學上可接受的一種和/或多種不同類型佐劑的混合物為疫苗組合物的5%-30%V/V，更優選為15%-25%V/V ;優選地，丙烯酸聚合物Carbopol在疫苗組合物中的終含量為0.2%ff/V,蜂膠佐劑在疫苗組合物中的終含量為0.1%-2%W/V。
[0043]在本發明的實施方式中丙烯酸聚合物Carbopol為The Lubrizol Corporation的Carbopol934> Carbopol940和Carbopol941,它們是丙烯酸和聚烯丙基鹿糖的交聯聚合物，化學式為(CH2CH000H) n，該實施方式無論在何種情況下均不構成對本發明的限定。
[0044]實施例1不同類型佐劑的配制
[0045]丙烯酸聚合物佐劑的配制:將丙烯酸聚合物Carbopol934佐劑(購自TheLubrizol Corporation)10g溶解于500mL生理鹽水中，并定容至1000mL,高壓蒸汽滅菌后，得到10mg/mL的丙烯酸聚合物佐劑，于4°C以下低溫貯存備用。
[0046]蜂膠佐劑的配制:將蜂膠佐劑(購自綠都生物科技有限公司)置于4°C以下低溫貯存，用前在4-8°C下粉碎，過篩，按1:4W/V加入95%乙醇，室溫浸泡24_48h，冷卻，過濾或離心取上清，即得含蜂膠量為40mg/mL的佐劑，于4°C以下低溫貯存備用。
[0047]實施例2疫苗組合物中PCV-2、PPV兩種抗原的制備
[0048]2.1病毒液的培養與制備
[0049]豬圓環病毒2型PCV-2 (SH株)病毒液的制備:用轉瓶細胞培養法培養。將長滿單層的PK15細胞(購自美國ATCC，保藏號為CCL-33)，倒去細胞培養液(美國Invitrogen公司的MEM培養基+10%胎牛血清)，將PCV-2毒株按0.1-0.2TCID50/個細胞的接種量接種于PK15細胞上，37°C吸附30min，加入細胞維持液(美國Invitrogen公司的MEM培養基+3%胎牛血清)，置36-37°C旋轉培養。每日觀察1-2次，細胞生長良好，36-37°C培養4-7日后收獲細胞培養物，凍融1-3次后置_20°C以下保存。
[0050]豬細小病毒PPV (HN-2011株)病毒液的制備:米用同步接種法培養。將病毒液與生長液(美國Invitrogen公司的MEM培養基+5%胎牛血清)按體積比1:10的比例將HA為21°種毒接種于IBRS-2細胞(購自美國ATCC)，置37°C旋轉培養，24-36h后細胞出現網狀病變、腫脹，融合等現象。當細胞病變達到80%以上時，終止培養，反復凍融三次后收取病毒液，-20°C以下保存。
[0051]2.2病毒液的處理
[0052]豬圓環病毒2型PCV-2 (SH株)病毒液的處理:將步驟2.1所制得的PCV-2病毒液用中空纖維濾柱(0.5-2 μ m，美國Mi 11 ipore公司)過濾，除去細胞碎片。
[0053]豬細小病毒PPV (HN-2011株)病毒液的處理:將步驟2.1所制得的PPV病毒液用中空纖維濾柱(0.5-2 μ m,美國Millipore公司)過濾,除去細胞碎片。
[0054]2.3病毒含量的測定
[0055]PCV-2抗原含量的測定:步驟2.1收獲的PCV-2病毒液使用MEM基礎培養液將病毒做10倍比稀釋，取10' 10' 10' 10' 10-2五個梯度，每個稀釋梯度均重復4孔，分別接種于96孔細胞培養板中單層的ΡΚ15細胞中，100 μ L/孔，同時分別設陰性和陽性細胞對照，37°C孵育1.2h，加入維持液200 μ L繼續培養48h，中間換維持液一次。棄去維持液(同步驟 2.1所述)，用PBS洗3次，每次5min,加100 μ L含5%BSA的PBS, 37°C封閉30min,棄去封閉液，加入IOOyL的1:500倍稀釋的？(^-2陽性血清，37°C孵育45min，棄去一抗，PBS洗滌3次，5min/次，加入FITC-羊抗豬-1gG 二抗，孵育45min，棄去二抗，PBS洗3次，5min/次，每孔加50 μ L的50%PBS-甘油緩沖液封底，熒光顯微鏡下鏡檢，按照Reed-Muench計算PCV-2抗原的病毒效價為108TCID5Q/mL。
[0056]PPV抗原含量的測定:PPV病毒液使用DMEM基礎培養液將病毒做10倍比稀釋，同步接種IBRS-2細胞，100 μ L/孔，設陰性和陽性細胞對照，37°C培養24h，換維持液(美國Invitrogen公司的MEM培養基+2%胎牛血清)，培養12h后，棄去維持液，PBS洗3次，每次5min，加100 μ L含5%BSA的PBS，37°C封閉30min，棄去封閉液，加入100 μ L的1:400倍稀釋的PPV陽性血清，37°C孵育45min，棄去一抗，PBS洗滌3次，5min/次，加入FITC-羊抗豬-1gG 二抗，孵育45min,棄去二抗，PBS洗3次，5min/次，每孔加50 μ L的50%PBS-甘油緩沖液封底，熒光顯微鏡下鏡檢，按照Reed-Muenh計算PPV的病毒效價為108TCID5(l/mL。
[0057]2.4病毒液的滅活
[0058]PCV-2、PPV抗原病毒液的滅活:向培養增殖的病毒液中，分別無菌加入甲醛溶液至終濃度為0.1% (V/V)，振搖5min，置37°C下滅活48h。期間每6h振搖I次，每次5min。取滅活后的病毒液，分別接種PK15細胞和IBRS-2細胞，37°C培養觀察5d，對無病變者再盲傳2代，將滅活病毒液置于冰箱中2-8°C保存。
[0059]2.5抗原滅活結果
[0060]依據《中華人民共和國獸藥典》所述的檢驗方法進行滅活檢驗:將豬圓環病毒2型SH株、豬細小病毒HN-2011株滅活抗原分別接種PK15和IBRS-2細胞，培養3_5d后觀察，無細胞病變，證明抗原滅活徹底。
[0061]實施例3不同類型佐劑的豬圓環病毒2型抗原、豬細小病毒抗原疫苗組合物的制備[0062]為了比較不同抗原含量疫苗組合物的免疫效果，選擇3種佐劑制備不同佐劑的疫苗組合物，分別為丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物、丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠佐劑，每種佐劑分別制備豬圓環病毒與豬細小病毒二聯疫苗組合物、豬圓環病毒單苗、豬細小病毒單苗，其中，一種單苗的抗原含量與豬圓環病毒、細小病毒二聯疫苗組合物中的相應抗原含量相同。同時，制備礦物油佐劑疫苗組合物，以作比對。具體情況如下:
[0063]3.1丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物疫苗
[0064]取實施例1制備的丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑，將其配制成混合物；和實施例2制備的PCV-2、PPV兩種病毒抗原，根據表1中單苗、聯苗的最終抗原含量分別制備成丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物的單苗、二聯疫苗，并確保:所制備的各佐劑二聯疫苗與單苗中的PCV-2、PPV兩種抗原含量均相同，且丙烯酸聚合物Carbopol在疫苗組合物中的終含量為0.2%W/V，蜂膠佐劑在疫苗組合物中的終含量為0.1%-2%W/V。將抗原、丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物按照表1配方混合，并用生理鹽水補充體積至2mL，攪拌均勻。
[0065]表1丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物疫苗的配方及含量(以2mL/頭份疫苗
計)
[0066]
【權利要求】
1.一種疫苗組合物，所述疫苗組合物包含: 免疫量的豬圓環病毒抗原； 免疫量的豬細小病毒抗原；以及 獸醫學上可接受的一種或多種類型佐劑。
2.根據權利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述佐劑包括丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠、礦物油佐劑中的一種或幾種。
3.根據權利要求2所述的疫苗組合物，其中，所述丙烯酸聚合物佐劑與蜂膠佐劑混合物為至少含有丙烯酸聚合物佐劑、蜂膠成分的混合物，所述的丙烯酸聚合物佐劑為至少含有丙烯酸聚合物的佐劑；優選地，所述丙烯酸聚合物佐劑為丙烯酸聚合物、可代謝油的混合物。
4.根據權利要求3所述的丙烯酸聚合物，其中，所述的丙烯酸聚合物為均聚物或共聚物；優選地，所述丙烯酸聚合物為Carbopol。
5.根據權利要求4所述的疫苗組合物，所述的獸醫學上可接受的一種和/或多種不同類型佐劑的混合物為疫苗組合物的5%-30%V/V，優選為15%-25%V/V ;優選地，所述丙烯酸聚合物Carbopol在疫苗組合物中的終含量為0.2%W/V。
6.根據權利 要求1飛任一項所述的疫苗組合物，其中，所述豬圓環病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬圓環病毒2型抗原，所述豬細小病毒抗原為滅活形式、改良的活的形式或減毒形式的豬細小病毒抗原；優選地，所述豬圓環病毒抗原為PCV-2滅活全病毒抗原，所述豬細小病毒抗原為PPV滅活全病毒抗原。
7.根據權利要求6所述的疫苗組合物，其中，所述豬圓環病毒抗原為滅活SH株全病毒抗原，所述豬細小病毒抗原為滅活HN-2011株全病毒抗原；優選地，所述豬圓環病毒抗原為5 X IO6 0TCID50/頭份，所述豬細小病毒抗原為5 X 106_tlTCID5tl/頭份。
8.根據權利要求1飛任一項所述的疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物還包括其他抗原，所述其他抗原包括豬生殖與呼吸綜合征病毒抗原、豬肺炎支原體病毒抗原、大葉性肺炎放線桿菌抗原、大腸桿菌抗原、萎縮性鼻炎抗原、偽狂犬病毒抗原、豬霍亂病毒抗原、豬流感病毒抗原中的一種或多種。
9.一種制備權利要求f 5任一項所述的疫苗組合物的方法，所述制備方法包括分別培養增殖所述豬圓環病毒、所述豬細小病毒，分別用甲醛滅活所述培養的豬圓環病毒、豬細小病毒,按比例混合所述豬圓環病毒抗原和所述豬細小病毒抗原,并加入一定量佐劑。
10.根據權利要求1飛任一項所述的疫苗組合物在制備預防和/或治療豬圓環病毒病、豬細小病毒病的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K39/12GK103893749SQ201210590315
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2012年12月29日 優先權日:2012年12月29日
【發明者】張許科, 孫進忠, 白朝勇 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司