用于治療由流感病毒引起的疾病的硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和硫酸 ...的制作方法
【專利摘要】本發明涉及預期用作預防性或治愈性治療流感病毒的藥物的選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和硫酸雜聚糖的多糖，以及涉及藥物組合物，該藥物組合物包括特別是與至少一種藥物學上可接受的載體聯合的以下物質：包括硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻的提取物；包括芹菜糖半乳糖醛酸聚糖的大葉藻或青萍的提取物；或者包括硫酸雜聚糖的總狀蕨藻的提取物。
【專利說明】用于治療由流感病毒引起的疾病的硫酸阿拉伯半乳聚糖、
芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和硫酸雜聚糖
[0001]本發明涉及流感病毒【技術領域】。更具體地說，本發明涉及某些多糖作為流感病毒預防性或治愈性治療藥物的用途。
[0002]流感是由流感病毒引起的呼吸道感染。其在世界各地均觀察到并且每年在冬季流行期都會再現。目前，流感是繼肺炎后傳染性死亡率的第二大常見原因。導致人出現病理狀況的流感病毒是甲型和乙型流感病毒。雖然乙型流感病毒以譜系形式(forme de lignage)傳播，但是甲型流感病毒根據血細胞凝集素(HA)和神經氨酸苷酶(NA)這兩種主要的表面糖蛋白的抗原性質被分成病毒亞型。在人際間傳播并導致季節性疾病流行的病毒是甲型(HlNl)和甲型(H3N2)病毒。
[0003]目前，接種疫苗是保護人群抵抗流感病毒的唯一有效方式。不過，抗病毒藥物形式的替代解決方案也是眾多研究的主題。
[0004]文件W02009/02757描述了角叉菜膠在用于預防和治療由正粘病毒、尤其是甲型和乙型流感病毒引起的呼吸道病毒性疾病的藥物組合物中的用途。
[0005]M.Hosoya 等人在出版物 Antimicrobial agents and chemotherapy, 1991, 35(12),2515-2520中研究了選自以下的多糖的作用:
[0006]-葡聚糖硫酸酯:硫酸葡萄糖聚合物
[0007]-肝素:通過連接由硫酸艾杜糖醛酸和硫酸半乳糖胺組成的二糖單元而形成的聚合物；
[0008]-戊聚糖多硫酸酯:硫酸D-木聚糖聚合物
[0009]-甘露聚糖硫酸酯:硫酸甘露聚糖聚合物。
[0010]然而，不能僅僅因為某些多糖表現出相對于某些病毒、尤其是抗流感病毒的活性，就意味著可以預期另一多糖具有相同的活性，而是恰恰相反，這得到了采用非硫酸化的阿拉伯半乳聚糖和石莼聚糖的實施例的證實。
[0011]專利申請US2010/0015248提供了一種用于治療感冒和流感的組合物，該組合物包含對乙酰氨基酚、苯海拉明、右美沙芬、阿拉伯半乳聚糖、維生素C、鋅、橄欖油提取物、白藜蘆醇和接骨木提取物。在該文件中詳細說明了阿拉伯半乳聚糖、維生素C和鋅的存在是為了刺激免疫系統。橄欖油提取物、白藜蘆醇和接骨木提取物用作抗病毒劑。對乙酰氨基酚、苯海拉明和右美沙芬則用于緩解流感癥狀。
[0012]文件W098/11778描述了用于治療各種病毒性疾病的藥物組合物，該藥物組合物包含導致待治療疾病的微生物感染的抑制劑，其是各種植物的分離物的形式。在所列舉的各種病毒性感染中引用了流感病毒，然而該發明涉及皰疹病毒的治療，所有的實施例和結果都與皰疫病毒有關。
[0013]在該上下文中，本發明基于發明人的完全出乎意料的論證，即某些特殊多糖表現出抗流感病毒的抗病毒活性。因而，本發明的主題是選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醒酸聚糖(apiogalacturonanes)和雜聚糖硫酸酯的多糖作為預防性或治愈性治療由流感病毒引起的疾病的藥物的用途。[0014]術語“治療”表示對于由流感病毒引起的疾病是預防性的或抑制性的任何治療措施，其導致期望的臨床效果或任何有益效果，包括尤其是抑制或減輕一種或多種癥狀；或者使與其相關的疾病的進展消退、減緩或停止。由流感病毒引起的疾病通常稱為流感。
[0015]具體地說，本發明涉及選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖在預期用于治療或預防流感病毒的藥物中作為抗流感病毒的抗病毒劑的用途。換言之，本發明涉及選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖在制備預期用于預防性或治愈性治療流感病毒的藥物中的用途。在該藥物中，選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖充當有效成分，即，使用其的抗流感病毒的抗病毒活性。根據一個具體實施方案，在含有選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯中的至少一種多糖的藥物或藥物組合物中，由存在的硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖或雜聚糖硫酸酯提供至少70%、優選至少90%和更優選至少95%的抗流感病毒的抗病毒活性。根據一個具體實施方案，含有選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯中的至少一種多糖的所述藥物或藥物組合物除了硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯以外不含有任何表現出顯著的抗病毒活性的化合物。另一方面，在一個和相同組合物中，可能使用選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖的組合。表述“表現出顯著的抗病毒活性的化合物”是指致使顯著抑制目標病毒的復制的化合物；例如，在用于抑制目標流感病毒(諸如在下文實施例中的第I節中具體描述的那些流感病毒)的復制的試驗中，在250 μ g/ml的濃度下抑制率為至少25%，優選為至少50%，更優選為至少80%。在本發明的上下文中，發明人已證明了屬于硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖或雜聚糖硫酸酯家族的多糖對流感病毒的復制周期具有影響，并使得可以抑制感染敏感性細胞的感染。還證明了這些糖使得可以抑制流感病毒進入到病毒樣顆粒(VLP，法文為PPV)中。已發現屬于硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖或雜聚糖硫酸酯家族的多糖的抑制活性等于或者甚至大于已在文獻中描述的角叉菜膠的這類活性。另一方面，已發現石莼聚糖家族的其他多糖是無活性的，證明了在本發明的上下文中所選多糖的特有性質。發明人還證明了，不同于硫酸阿拉伯半乳聚糖，非硫酸化的阿拉伯半乳聚糖，諸如從落葉松樹皮中提取的那些非硫酸化的阿拉伯半乳聚糖(尤其是在W02010/117296，AlternativeMedecine Reviews, 2002，vol.7，N0.2，138-149，J.Med.Food, 2005，8(4) , 446-453 和W02011/138898中研究的)不表現出任何活性，如在下面的實施例中將變得明顯的。
[0016]硫酸阿拉伯半乳聚糖是由通過β -1, 3-糖苷鍵互相連接的半乳糖單元組成的水溶性硫酸多糖。這一主鏈可以具有通過α-1，6-糖苷鍵連接的阿拉伯糖或半乳糖單元的支鏈。這些單元可以具有若干通過1，3-或1，6-糖苷鍵互相連接的阿拉伯糖和/或半乳糖單元。阿拉伯糖或半乳糖可以在仲醇基團上具有硫酸化。阿拉伯糖/半乳糖的比率優選在3/7至2/1的范圍內，例如相當于1/1、1/2或2/1。
[0017]在本發明的上下文中，優選使用大小在1000至2X106g/mol范圍內、優選在3000至1.1 X 106g/mol范圍內和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為2%至50%、優選為5%至40%的硫酸阿拉伯半乳聚糖。
[0018]芹菜糖半乳糖醛酸聚糖是可以被硫酸化的水溶性多糖，由通過α -1, 4-糖苷鍵互相連接的半乳糖醛酸單元的直鏈組成。該主鏈可以具有通過β_1，2-糖苷鍵連接的芹菜糖單元。這些單元可以具有若干通過β-1，5-糖苷鍵互相連接的芹菜糖單元。
[0019]在本發明的上下文中，優選使用大小在10000至106g/mol范圍內、優選在50000至700000g/mol范圍內和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為2%至20%、優選為4%至12%的芹菜糖半乳糖醛酸聚糖。
[0020]在本發明的上下文中，使用的硫酸雜聚糖是由α-1，3-連接的和末端連接的半乳糖單元、1，4-連接的木糖單元和1，4-連接的阿拉伯糖單元的直鏈形成的水溶性多糖。半乳糖單元可以在C6位具有硫酸化，阿拉伯糖單元可以在C3位上具有硫酸化。
[0021]在本發明的上下文中，優選使用大小在500000至5Χ 106g/mol范圍內(例如約106g/mol)和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為5%至30%、優選13%至22%的硫酸雜聚糖。
[0022]在本發明的上下文中使用的硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯可以通過化學合成來制備或者優選從諸如藻類或植物的天然來源提取。具體地說，它們可以相當于:
[0023]-包含硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻(Codiumfragile)、綠藻(Codiumvermilara)或長松藻(Codium cylindricum)的提取物；
[0024]-包含芳:菜糖半乳糖醒酸聚糖的大葉藻(Zosteramarina)或青萍(Lemna minor)的提取物；
[0025]-包含雜聚糖硫酸酯的總狀蕨藻(Caulerparacemosa)的提取物。
[0026]可以使用本領域技術人員公知的任何提取方法。特別是，可以使用如下方法:使用含水溶劑或有機溶劑提取復 合糖，任選之后通過選擇性沉淀、離子相互作用、過濾等進行純化。舉例來說，可以使用包含用水提取的步驟和用諸如乙醇的醇沉淀的步驟的提取法。
[0027]例如，為了保存硫酸阿拉伯半乳聚糖，可能使用在環境溫度下在含水介質中從刺松藻提取的方法。特別是可以使用下文實施例中詳細描述的方法或者類似的方法。
[0028]可以使用選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖、特別是以前描述的那些多糖治愈性或預防性治療任何類型的流感病毒。術語“流感病毒”指所有的流感病毒，尤其是人流感病毒、禽流感病毒、馬流感病毒、豬流感病毒和貓流感病毒。所述流感病毒可以選自甲型、乙型和丙型。特別是，流感病毒可以是甲型流感病毒，特別是，對應于 HlNl、H2N2、H3N2、H4N2、H4N6、H5N1、H5N2、H7N1、H7N7 和 H9N2 亞型的毒株。根據一個具體實施方案，流感病毒選自乙型、A-H5N1、A-H7N1和A-H3N2病毒。
[0029]本發明的主題還涉及可給藥至動物、特別是給藥至人的藥物組合物，該藥物組合物包含與特別是根據第7版歐洲藥典的至少一種藥學上可接受的賦形劑聯合的以下物質:
[0030]-包含硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻、綠藻或長松藻的提取物，
[0031]-或者包含芹菜糖半乳糖醛酸聚糖的大葉藻或青萍的提取物，
[0032]-或者包含雜聚糖硫酸酯的來自總狀蕨藻的提取物。
[0033]根據劑型以及期望的給藥方式來選擇根據本發明的藥物和藥物組合物中存在的賦形劑。在用于口服、舌下、皮下、肌肉內、靜脈內、軟骨內、局部、氣管內、鼻內、透皮、直腸或眼內給藥的本發明的藥物組合物中，可以將多糖作為與常規藥物載體的混合物、以單位給藥的形式給藥至動物及給藥至人，從而預防或治療上述疾病。適合的單位給藥形式包括諸如片劑、凝膠膠囊劑、散劑、顆粒劑和口服液或懸浮液的口服形式；舌下、頰、氣管內或鼻內給藥形式；皮下、肌肉內、軟骨內或靜脈內給藥形式以及直腸給藥形式。對于局部應用，可以以乳膏劑、軟膏劑或洗劑使用根據本發明的化合物。
[0034]藥物或組合物通常包含治療有效量的選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖。表述“治療有效量”表示改進所治療的感染的一種或多種特征參數的任何量的組合物。為了獲得期望的效果，多糖的劑量在例如0.0Olmg/kg體重/天和100mg/kg體重/天之間的范圍內。然而，在本發明的上下文中，藥物組合物還包括同種療法組合物。
[0035]當將固體組合物制備成片劑形式時，主要的活性成分與諸如明膠、淀粉、乳糖、硬脂酸鎂、滑石粉、阿拉伯膠等藥物載體混合。片劑可以用蔗糖、基于纖維素的衍生物或者用其他適合的材料包衣；或者可以對片劑進行處理以使其具有持續或延遲的活性以及使其連續地釋放預定量的有效成分。
[0036]通過將活性成分與稀釋劑混合或者通過將所得的混合物倒入軟或硬凝膠膠囊中來制備凝膠膠囊制劑。
[0037]根據本發明的含多糖的藥物組合物也可以是液體形式，例如溶液、乳劑、懸浮液或糖漿，舉例來說，特別是以適用于口服或鼻內給藥的形式。適合的液體載體可以例如是水、不同比例的諸如甘油或乙二醇及其混合物的有機溶劑的水溶液。
[0038]糖漿或酏劑形式或者用于以滴劑形式給藥的制劑可以包含活性成分以及甜味劑，優選無熱量的甜味劑；作為防腐劑的對羥基苯甲酸甲酯和尼泊金丙酯；以及調味劑和適合的著色劑。水分散型散劑或顆粒劑可以包含與分散劑或潤濕劑或者懸浮劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)以及甜味劑或增味劑混合的活性成分。
[0039]包含選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的至少一種多糖的藥物或組合物可能用于人用或獸用。尤其是在雞的治療的情況中，多糖可以是飼料添加劑的形式。
[0040]通常，相同的變體加以適當的變通應用于使用選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖的藥物、組合物和用途。
[0041]根據一個具體實施方案，根據本發明的抗流感病毒的抗病毒藥物和組合物不包含橄欖油，也不包含白藜蘆醇，也不包含接骨木的提取物，特別是當其含有前面所定義的阿拉伯半乳聚糖時。
[0042]根據本發明的另一方面，本發明還涉及用于治療人或動物、特別是雞的方法，該方法包括給藥和使用選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖用于預防性或治愈性抵抗由流感病毒引起的疾病。
[0043]根據本發明的另一方面，本發明還涉及選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖在食品組合物中的用途，其中所述多糖用于預防性或治愈性抵抗由流感病毒引起的疾病。
[0044]根據一個具體實施方案，食品組合物包括:
[0045]-包含硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻、綠藻或長松藻的提取物；[0046]-或者包含芹菜糖半乳糖醛酸聚糖的大葉藻或青萍的提取物，
[0047]-或者包含雜聚糖硫酸酯的總狀蕨藻的提取物。
[0048]根據可以與上一個實施方案相結合的一個具體實施方案，食品組合物不包含橄欖油，也不包含白藜蘆醇，也不包含接骨木的提取物。
[0049]所有的實施變體，特別是關于與前面描述的藥物和藥物組合物、糖、提取物以及用于獲得它們的提取方法以及針對的流感病毒有關的定義加以適當的變通適用于食品組合物和治療方法。術語“食品組合物”意指例如預期用于人或動物的任何類型的功能食品或食物產品，特別是以酸奶或乳飲料的形式。
[0050]下文的實施例參照附圖可以說明本發明但在本質上絕不是限制性的。
[0051]1.用于生產和理化表征測試的多糖的方法
[0052]從刺松藻提取的硫酸阿拉伯半乳聚糖
[0053]在本發明中存在的刺松藻提取物的獲得在第一個步驟中包含用有機溶劑(特別是乙醇)對磨碎的藻進行脫色。然后在環境溫度下在含水介質中對脫色殘留物提取幾小時至24h。通過使用諸如用有機溶劑(例如乙醇)進行選擇性沉淀和/或通過離子相互作用和/或通過超濾滲析的多糖純化方法來改進得到的提取物。
[0054]得到的提取物主要是已經描述的硫酸阿拉伯半乳聚糖的結構(Marina Ciancia等人，2007 -1nternational Journal of Biological Macromolecules41(2007)641-649),即通過β-1，3-糖苷鍵互相連接的半乳糖的直鏈。這一主鏈可以具有通過α-1，6_糖苷鍵連接的阿拉伯糖或半乳糖單元的支鏈。這些單元可以具有若干通過1，3-或1，6-糖苷鍵互相連接的阿拉伯糖和/或半乳糖。阿拉伯糖或半乳糖可以在仲醇基團上具有硫酸化。
[0055]在本發明的上下文中獲得的提取物的單糖組成通過在總酸水解之后使用HPAECPAD色譜技術測定單糖來確定。提取物顯示出阿拉伯糖和半乳糖(3/7至1/1)。阿拉伯半乳聚糖的糖苷鍵的特征信號通過質子核磁共振證實。使用氯化鋇方法測定硫酸酯基團使得可以評估提取物的硫酸化程度，按重量計在18%和30%之間。聚合物的尺寸排阻色譜法(Sizeexclusion Chromatography, SEC)使得可以估測在提取物中存在的硫酸阿拉伯半乳聚糖多糖的平均分子量。取決于樣品，所述分子量在約3000至約1.1XlOVmol的范圍內。
[0056]獲得刺松藻提取物的方法:
[0057]用于獲得各種測試樣品的各種方法圖解表示在圖1中。
[0058]可以對藻類進行脫色。通過用諸如乙醇的有機溶劑連續4次洗滌可以對50g粉末狀刺松藻進行脫色。每次洗滌包括將50g藻粉懸浮在一升純乙醇中并在20°C下以400rpm攪拌2h。每次洗滌之后，通過Whatman濾紙過濾分離出提取殘留物。這一操作重復三次。在這些脫色步驟之后，將提取殘留物在孵箱中在40°C下干燥過夜。
[0059]可以在含水介質中提取脫色殘留物。將對應于脫色的50g刺松藻的殘留物重新懸浮在IL去離子水中，并在室溫下以600rpm攪拌16h。16h以后,通過離心(7000rpm, 4°C,大約40分鐘)分離出可溶性提取物。這種水提物被稱為水提物A。
[0060] 通過在IOkDa膜上進行切向超濾對水提物A進行脫鹽獲得提取樣品號98。在通過6體積的去離子水(即6L)滲濾之后達到脫鹽。超濾滯留物對應于樣品號98。
[0061]通過在0.2 μ m膜上進行切向超濾精制樣品號98的另一步驟獲得提取樣品號79。在10g/1的濃度下以10體積的去離子水的滲濾進行這種超濾。截留的部分對應于提取樣品號79。
[0062]還可以通過在0.2 μ m膜上進行切向超濾對水提物A進行處理。在10g/l的濃度下以10體積的去離子水的滲濾進行這種超濾。截留的部分對應于提取樣品號141。[0063]可以直接用含水溶劑提取該藻。將50g粉末狀刺松藻放置在IL去離子水的溶液中，在環境溫度下以400rpm攪拌過夜。通過離心(8000rpm，4°C，60分鐘)分離出可溶性提取物。這種水提物被稱為水提物B。
[0064]通過用諸如乙醇的有機溶劑的沉淀來獲得提取樣品號109和238。對此，用50%v/V純乙醇使水提物B沉淀。通過離心(5000rpm，4°C，10分鐘)分離出沉淀物。
[0065]借助于通過離子相互作用的精制樣品號109或238的另一步驟獲得提取樣品號294。這種通過離子相互作用的純化步驟在陰離子交換填料(特別是由交聯的殼聚糖形成的多糖微珠)上進行。在第一步驟中，將樣品號109或238放置在通過酸化特別是用鹽酸酸化的優選PH為4-5的溶液中。然后使該樣品與離子交換填料接觸，然后用去離子水沖洗，該去離子水優選是酸化的，特別是用鹽酸酸化的，以使PH達到4-5。在第二步驟中，使用優選調節至PH約10的堿性緩沖劑、特別是碳酸氫鹽/碳酸鹽緩沖劑從填料上釋放出目標糖。優選通過過濾分離出可溶性部分。然后使這一部分脫鹽，特別是通過用諸如乙醇的有機溶劑沉淀來脫鹽。對此，將該部分進行濃縮，優選至多糖的濃度為I至10g/l，然后用50%v/v純乙醇沉淀。通過離心(5000rpm，4°C，10分鐘)分離出沉淀物然后在孵箱中干燥。得到的部分為樣品號294。
[0066]借助于在0.2μπι膜上進行的切向超濾精制樣品號109或238的另一步驟獲得提取樣品號242。在10g/l的濃度下以10體積的去離子水的滲濾進行這種超濾。截留的部分對應于提取樣品號242。
[0067]通過酸水解特別是用鹽酸酸水解提取樣品號109或238，接著在3kDa和IOkDa兩種超濾膜上進行分子量選擇來獲得提取樣品號152。借助于在10g/l下以10體積去離子水的滲濾在IOkDa膜上進行的第一切向超濾實施分子量選擇。然后通過采用第一相的10倍濃度的切向超濾，然后用10體積去離子水滲濾使滲透物穿過3kDa膜。在3kDa膜上的這種第二切向超濾的滯留物構成提取樣品號152。
[0068]通過用膨潤土處理水提物B，接著用乙醇沉淀獲得提取樣品號237和239。通過加入預先懸浮在IOOml去 離子水中的IOg膨潤土處理在IL水中提取50g刺松藻得到的水提物B。攪拌溶液，然后在環境溫度下靜置約lh。通過離心(8000rpm，4°C，15分鐘)分離出可溶相。用有機溶劑、特別是用終濃度為50%v/v的乙醇沉淀分離的可溶相。沉淀物通過離心(5000rpm，4°C，10分鐘)分離出并構成提取樣品號237和239。
[0069]借助于在0.2 μ m膜上的切向超濾來精制樣品號237或239的另一步驟來獲得提取樣品號240。在10g/l的濃度下以10體積去離子水的滲濾來進行這種超濾。截留的部分對應于提取樣品號240。
[0070]刺松藻提取物的表征:
[0071]獲得的提取物主要具有已描述的硫酸阿拉伯半乳聚糖(Marina Ciancia等人，2007 -1nternational Journal of Biological Macromolecules41 (2007)641-649)的結構，即通過β_1，3-糖苷鍵互相連接的半乳糖的直鏈。這一主鏈可以具有通過α-1，6_糖苷鍵連接的阿拉伯糖或半乳糖單元的支鏈。這些單元可以具有若干通過1，3-或1，6-糖苷鍵互相連接的阿拉伯糖和/或半乳糖單元。阿拉伯糖或半乳糖可以在仲醇基團上具有硫酸化。
[0072]可以實施用于表征復合糖的各種方法學以便證實在用于本發明的提取物中硫酸阿拉伯半乳聚糖的存在:
[0073]-在100°C下用2NTFA酸水解提取物4h后根據DNS法比色測定還原糖。
[0074]-根據洛瑞-弗林(Lowry-Folin)法比色測定蛋白。
[0075]-根據氯化鋇法測定硫酸酯的濁度。
[0076]-在100°C下用TFA酸水解提取物4h之后根據HPAEC-PAD法的單糖譜圖分析(profil des monosaccharides)。
[0077]-質子核磁共振譜。
[0078]通過SEC估測聚合物的分子量范圍。
[0079]比色測定
[0080]
[0081]
[0082](I)總糖以 ％w/w eq Gal 表示
[0083](2)蛋白以 ％w/w eq BSA 表不
[0084](3)硫酸酯以％S03—w/w表示
[0085]單糖譜圖分析
【權利要求】
1.一種選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖，其用作預防性或治愈性治療由流感病毒引起的疾病的藥物。
2.如權利要求1所述的多糖，其用作預期用于預防性或治愈性治療由流感病毒引起的疾病的藥物中作為抗流感病毒的抗病毒劑。
3.如權利要求1或2所述的多糖，其特征在于由存在的硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖或雜聚糖硫酸酯提供的抗流感病毒的抗病毒活性為至少70%，優選至少90%，更優選至少95%。
4.如權利要求1至3任一項所述的多糖，其特征在于所述藥物除了硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯以外不包含表現出顯著的抗病毒活性的化合物。
5.如權利要求1至4任一項所述的多糖，其特征在于其對應于包含硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻、綠藻或長松藻的提取物。
6.如權利要求1至5任一項所述的多糖，其特征在于其對應于大小在1000至2X IO6g/mo I范圍內、優選在3000至1.1 X106g/mol范圍內和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為2%至50%、優選5%至40%的硫酸阿拉伯半乳聚糖。
7.如權利要求1至4任一項所述的多糖，其特征在于其對應于包含芹菜糖半乳糖醛酸聚糖的大葉藻或青萍的提取物。
8.如權利要求1至4或權利要求7任一項所述的多糖，其特征在于其對應于大小在10000至106g/mol范圍內、優選在50000至700000g/mol范圍內和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為2%至20%、優 選4%至12%的芹菜糖半乳糖醛酸聚糖。
9.如權利要求1至4任一項所述的多糖，其特征在于其對應于包含雜聚糖硫酸酯的總狀蕨藻的提取物。
10.如權利要求1至4或權利要求9任一項所述的多糖，其特征在于其對應于大小在500000至5X 106g/mol范圍內、例如為約106g/mol和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為5%至30%、優選13%至22%的硫酸雜聚糖。
11.如權利要求1至10任一項所述的多糖，其特征在于所述藥物不包含橄欖油，也不包含白藜蘆醇，也不包含接骨木提取物。
12.如前述權利要求任一項所述的多糖，其特征在于流感病毒選自人流感病毒、禽流感病毒、馬流感病毒、豬流感病毒和貓流感病毒。
13.如前述權利要求任一項所述的多糖，其特征在于流感病毒對應于乙型流感病毒、A_H5N1病毒、A_H7N1病毒或A-H3N2病毒。
14.如前述權利要求任一項所述的多糖，其用作用于獸用、例如預期用于禽類群體的藥物。
15.一種藥物組合物，其包含與至少一種藥學上可接受的賦形劑聯合的以下物質: -包含硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻、綠藻或長松藻的提取物， -或者包含芹菜糖半乳糖醛酸聚糖的大葉藻或青萍的提取物， -或者包含雜聚糖硫酸酯的總狀蕨藻的提取物。
16.如權利要求15所述的藥物組合物，其特征在于其不包含橄欖油，也不包含白藜蘆醇，也不包含接骨木提取物。
17.如權利要求15或16所述的藥物組合物，其用作預防性或治愈性治療由流感病毒引起的疾病的藥物。
18.選自硫酸阿拉伯半乳聚糖、芹菜糖半乳糖醛酸聚糖和雜聚糖硫酸酯的多糖在食品組合物中的用途，在該食品組合物中所述多糖用于預防性或治愈性治療由流感病毒引起的疾病。
19.如權利要求18所述的用途，其特征在于所述食品組合物包括: -包含硫酸阿拉伯半乳聚糖的刺松藻、綠藻或長松藻的提取物， -或者包含芹菜糖半乳糖醛酸聚糖的大葉藻或青萍的提取物， -或者包含雜聚糖硫酸酯的總狀蕨藻的提取物。
20.如權利要求18和19任一項所述的用途，其特征在于所述食品組合物不包含橄欖油，也不包含白藜蘆醇，也不包含接骨木提取物。
21.如權利要求18至20任一項所述的用途，其特征在于多糖選自大小在1000至2X106g/moI范圍內、優選在3000至1.lX106g/mol范圍內和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為2%至50%、優選5%至40%的硫酸阿拉伯半乳聚糖。
22.如權利要求18至20任一項所述的用途，其特征在于多糖選自大小在10000至106g/mol范圍內、優選在50000至700000g/mol范圍內和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為2%至20%、優選4%至12%的芹菜糖半乳糖醛酸聚糖。
23.如權利要求18至20任一項所述的用途，其特征在于多糖選自大小在500000至5 X106g/moI并且例如 為約106g/mol和/或相應的硫酸酯基團的平均負載量為5%至30%、優選13%至22%的硫酸雜聚糖。
24.如權利要求18至23任一項所述的用途，其特征在于流感病毒選自人流感病毒、禽流感病毒、馬流感病毒、豬流感病毒和貓流感病毒。
25.如權利要求18至24任一項所述的用途，其特征在于流感病毒對應于乙型流感病毒、A-H5N1病毒、A-H7N1病毒或A-H3N2病毒。
【文檔編號】A61K31/715GK103476418SQ201280011695
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2012年1月3日 優先權日:2011年1月4日
【發明者】布魯諾·莉娜, 奧利弗·費拉里斯, 武湖洪海, 弗朗索瓦-洛伊克·科塞特, 尤迪特·塞奇, 阿蘭·埃羅, 于格·洛爾塔-雅各布, 朱莉婭·巴爾托利, 拉比亞·薩迪爾, 蒂埃里·利瓦什, 伯努瓦·達爾布拉德, 斯蒂芬·阿韋特, 西爾韋爾·邦內特 申請人:艾里西特爾公司, 國家科學研究中心, 健康醫藥國家研究院, 原子能與替代能源署