駱駝蓬總生物堿的制備方法
【專利摘要】本發明為一種天然物中提取的總生物堿有效部位一駱駝蓬生物堿。本發明的制備方法是：稱取駱駝蓬種子，風干，壓碎，加入乙醇。將乙醇提取液在旋轉薄膜蒸發器中制得紫褐色粗提膏。加鹽酸加熱至溶解，熱過濾后用CHCl3提取兩次；用NaOH水溶液中和母液，析出得到棕黃色固體。再用鹽酸，加熱溶解，過濾，得到粗產品。將粗產品加乙醇加熱，溶解，過濾，析出結晶，制得駱駝蓬總堿鹽酸鹽。用無離子水加熱溶解，分離，水淋洗，淋洗液冷卻后析出結晶。再用醫用乙醇加熱，溶解，過濾，析出，重結晶，得駱駝蓬生物堿。它用于治療乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、胃癌、食道癌胃癌、食道癌，也有用于肝癌細胞BEC-7402的實驗，其抑制率高達60％，為今后推廣應用奠定了基礎。
【專利說明】駱駝蓬總生物堿的制備方法
【技術領域】：
[0001] 本發明為一種天然植物胳5它蓬草（Peganum Harmal L)中提取的總生物堿的有效 部位，用于治療乳腺癌、黑色素瘤、結腸癌、胃癌、食道癌。
【背景技術】：
[0002] 駱駝蓬草有效部位生物堿A和B，分子結構已確證，該母核也是當前抗癌藥物研有 治療黑色素瘤的報導，但有效率大約在10%左右。母核的修飾和改造，為創新抗癌藥物的研 發提供了一個可持續發展的思路。
[0003] 駱駝蓬草生長在戈壁沙灘，是一種固沙作物，過度采挖會造成生態環境的嚴重破 壞，由于生物堿含量低需求量大，質量難控制，很難滿足需求。
【發明內容】
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[0004] 本發明的目的是提供一種化學合成新工藝，不僅降低藥用成本，減輕患者的經濟 負擔，質量的可控性提高，作為一個新藥的有效性，安全性、質量的可控性有了保證。
[0005] 本發明的制備方法是這樣實現的：
[0006] 稱取駱駝蓬種子，風干，壓碎，裝柱或放在三頸瓶子里，加入乙醇，淋洗至淋洗液呈 淡紅色，或用Mayer試劑檢查無生物堿沉淀即可；將乙醇提取液在旋轉薄膜蒸發器中，回收 乙醇后，制得紫褐色粗提膏；
[0007] 將粗提膏加水，加化學純濃鹽酸，加熱至溶解，熱過濾后放至室溫，用CHC13提取兩 次，再把CHC13層用少許水洗，回收生物堿鹽酸鹽；濾液和水洗液合并，用NaOH水溶液中和， 調PH值后析出沉淀，抽濾，并用水洗，得到棕黃色固體狀的總生物堿。將此總生物堿再加 蒸餾水和化學純濃鹽酸，調PH值，加熱至溶解，熱過濾，放置至室溫，得棕黃色沉淀，再經抽 濾，風干，得到駱駝蓬總生物堿的鹽酸鹽晶體；
[0008] 將所得駱駝蓬總生物堿鹽酸鹽用無離子水加熱溶解，調PH值，經樹脂柱層析分 離，再用熱的無離子水淋洗，收集黃色的淋洗液，再用氫氧化鈉調PH值，冷卻后析出黃色結 晶，用蒸餾水洗至中性，將此固體加蒸餾水用分析純的鹽酸調PH值，加熱溶解，熱過濾，放 置析出黃色棱狀結晶，抽濾，再用醫用乙醇洗三次，風干，得駱駝蓬總生物堿有效部位，該 有效部位生物堿定名為HRM3422。
[0009] 本發明駱駝蓬總生物堿用于治療胃癌、食道癌，也有用于肝癌細胞BEC-7402的實 驗，其抑制率高達60 %，為今后推廣應用奠定了基礎。
[0010] 在該項目開發過程中，我們同放射醫學專家聯系，HRM3422對體外培養細胞的抗幅 射效應進行了研究，實驗結果表明：HRM3422在有氧條件下有抗輻射作用，在乏氧條件下無 抗放作用，并增加細胞的死亡率，這種雙相作用對抗癌是有意義的。核能的廣泛利用，是今 后一個時期不可逆轉的發展趨勢，但它的安全性也是專注的焦點。
[0011] 根據我們對HRM3422研發的經驗，無論外敷治療黑色素瘤、乳腺癌、灌腸治療大腸 癌，口服治療食道癌和胃癌，都是藥物直接與瘤體接觸，殺死或抑制癌細胞的轉移擴散，減 少藥物經腸、胃、血液、吸收代謝產生的副作用，提高藥物的療效。
【專利附圖】
【附圖說明】 圖1是HRM3422對胃癌細胞生長的影響曲線圖， 圖2是HRM3422對S180細胞生長的影響曲線圖。
【具體實施方式】：
[0012] 本發明的制備方法是這樣實現的：
[0013] 稱取胳騎蓬種子1000克，風干，壓碎，裝柱或放在2500CC的三頸瓶子里，加入質量 濃度75-95 %的乙醇，淋洗至淋洗液呈淡紅色，或用Mayer試劑檢查無生物堿沉淀即可；將 乙醇提取液在旋轉薄膜蒸發器中，控制溫度在40-45°C回收乙醇后，制得紫褐色粗提膏；
[0014] 將粗提膏加水90-110cc，加化學純濃鹽酸調到PH為1. 9-2. 1，加熱至生物堿鹽 酸鹽溶解，熱過濾，濾液放至室溫，用CHC13提取兩次，每次用量50cc，此為CHC1 3層，用于 去除油狀物，并用少許水洗CHC13層，回收生物堿鹽酸鹽；濾液和水洗液合并，再用質量濃 度10% NaOH水溶液中和，調PH為12-14,析出褐色沉淀后進行抽濾,然后用水洗至PH為 7. 5-8. 5,得到棕黃色狀的總生物堿，再加入70cc蒸餾水和化學純濃鹽酸，調PH為2. 5-3. 5， 加熱至溶解，熱過濾，放置至室溫，得棕黃色沉淀，抽濾，風干，得到總生物堿的鹽酸鹽晶體。
[0015] 將所得駱駝蓬總生物堿鹽酸鹽用無離子水加熱溶解，調PH為6. 5,經樹脂柱層析 分離，再用無離子水淋洗，收集黃色的淋洗液，再用5 %的分析純氫氧化鈉調PH為12,冷 卻后析出黃色結晶，用蒸餾水洗至中性，將此固體加蒸餾水用分析純的鹽酸調PH值為3， 加熱溶解，熱過濾，放置析出黃色棱狀結晶，抽濾，再用醫用乙醇洗三次，風干，得生物堿 HRM3422。
[0016] 精制的HRM3422經紫外光譜分析，系由駱駝蓬堿（Harmal ine)和去氫駱駝堿 (Harmine)兩個生物堿組成的混合物，胳5它蓬堿（Harmaline)占19. 35%。去氫胳5它蓬堿 (Harmir^gYUO1%。
[0017] 胳騎蓬堿（Harmal ine)和去氫胳騎堿（Harmine)的結構分析測定：
[0018] 1、駱駝蓬堿
[0019] 化學名：1-甲基?3，4_二氫-7-甲氧基-β-卡波林
[0020] 英文名：l-Methyl-3,4-dihydr〇-7-Methoxy-β-Carboline
[0021] 結構式
【權利要求】
1. 駱駝蓬總生物堿的制備方法，以下述步驟實現： 稱取駱駝蓬種子，風干，壓碎，裝柱或放在三頸瓶子里，加入乙醇，淋洗至淋洗液呈淡紅 色，或用Mayer試劑檢查無生物堿沉淀即可；將乙醇提取液在旋轉薄膜蒸發器中，回收乙醇 后，制得紫褐色粗提膏； 將粗提膏加水，加化學純濃鹽酸，加熱至溶解，熱過濾后放至室溫，用CHC13提取兩次， 再把CHC13層用少許水洗，回收生物堿鹽酸鹽；濾液和水洗液合并，用NaOH水溶液中和，調 PH值后析出沉淀，抽濾，并用水洗，得到棕黃色固體狀的總生物堿將此總生物堿再加蒸餾水 和化學純濃鹽酸，調PH值，加熱至溶解，熱過濾，放置至室溫，得棕黃色沉淀，再經抽濾，風 干，得到駱駝蓬總生物堿的鹽酸鹽晶體； 將所得駱駝蓬總生物堿鹽酸鹽用無離子水加熱溶解，調PH值，經樹脂柱層析分離，再 用無離子水淋洗，收集黃色的淋洗液，再用氫氧化鈉調PH值，冷卻后析出黃色結晶，用蒸餾 水洗至中性，將此固體加蒸餾水用分析純的鹽酸調PH值，加熱溶解，熱過濾，放置析出黃色 棱狀結晶，抽濾，再用醫用乙醇洗三次，風干，得駱駝蓬生物堿。
2. 根據權利要求1所述的駱駝蓬總生物堿的制備方法，以下述步驟具體實現： 稱取駱駝蓬種子1000克，風干，壓碎，裝柱或放在2500cc的三頸瓶子里，加入質量濃度 75-95%的乙醇，淋洗至淋洗液呈淡紅色，或用Mayer試劑檢查無生物堿沉淀即可；將乙醇 提取液在旋轉薄膜蒸發器中，控制溫度在40-45°C回收乙醇后，制得紫褐色粗提膏； 將粗提膏加水90-110cc，加化學純濃鹽酸調到PH為1. 9-2. 1，加熱至生物堿鹽酸鹽溶 解，熱過濾，濾液放至室溫，用CHC13提取兩次，每次用量50cc，此為CHC13層，用于去除油 狀物，并用少許水洗〇1(：1 3層，回收生物堿鹽酸鹽；濾液和水洗液合并，再用質量濃度10% NaOH水溶液中和，調PH為12-14,析出褐色沉淀后進行抽濾，然后用水洗至PH為7. 5-8. 5， 得到棕黃色固體狀的總生物堿，再加入70cc蒸餾水和化學純濃鹽酸，調PH為2. 5-3. 5,加熱 至溶解，熱過濾，放置至室溫，得棕黃色沉淀，抽濾，風干，得到總生物堿的鹽酸鹽晶體 將所得駱駝蓬總生物堿鹽酸鹽用無離子水加熱溶解，調PH為6. 5,經樹脂柱層析分離， 再用無離子水淋洗，收集黃色的淋洗液，再用5 %的分析純氫氧化鈉調PH為12,冷卻后析出 黃色結晶，用蒸餾水洗至中性，將此固體加蒸餾水用分析純的鹽酸調PH值為3,加熱溶解， 熱過濾，放置析出黃色棱狀結晶，抽濾，再用醫用乙醇洗三次，風干，得駱駝蓬生物堿。
【文檔編號】A61K36/185GK104107199SQ201310134675
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2013年4月18日 優先權日:2013年4月18日
【發明者】管作武, 史延年 申請人:管作武