一種地骨皮活性部位及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及中藥活性部位的制備領域，公開了一種地骨皮活性部位及其制備方法和應用。所述制備方法包括如下步驟：S1.將地骨皮粉碎后，用水提取，再將提取液濃縮，加入乙醇進行醇沉，取上清液濃縮得原液；S2.將原液通過大孔吸附樹脂，收集洗脫液，蒸干，濃縮得樣品1；S3.將樣品1通過強酸型陽離子交換樹脂吸附，先用水洗樹脂柱，再用氨水洗脫，收集氨水洗脫液，濃縮得得樣品2；S4.將樣品2通過強堿性陰離子交換樹脂吸附，收集水洗脫液，濃縮干燥即得地骨皮活性部位。本發明制備得到的地骨皮活性部位生物堿活性成分含量較高，可用于預防和治療糖尿病、肥胖癥、高血脂等疾病。
【專利說明】一種地骨皮活性部位及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥活性部位的制備領域，更具體地，涉及一種地骨皮活性部位及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002]2009年10月份公布的的第四版糖尿病地圖數據顯示，中國糖尿病患者有4320萬之多，但2010年3月24日發表在《新英格蘭雜志》的最新流行病學調查結果表明，中國已經取代印度成為全球糖尿病患者最多的國家。最新的這項研究反映出近些年來糖尿病患病率在中國的快速增長。基于此，IDF預測世界糖尿病患病人群在2030年將直逼5億。國內外治療糖尿病的藥物概括起來包括口服降糖藥、胰島素、外源性GLP-1受體激動劑、GLP-1類似物等，雖然西藥降糖效果較好，但副作用大，不利于長期使用且不能有效控制并發癥。中藥在治療糖尿病上具有顯著改善臨床癥狀和體質、副作用小、并能在多個環節上防治并發癥等優點。其中中藥地骨皮就有很好的降糖效果。地骨皮為茄科植物枸杞chinenseMill.或寧夏枸杞barbarum L的干燥根皮。中國藥典記載地骨皮用于陰虛潮熱，骨蒸盜汗，肺熱咳嗽，咯血，衄血，內熱消渴。地骨皮常于單味藥或者復方中用于治療糖尿病，藥理作用機理研究教多，但大多以粗提物為研究對象和治療材料，故療效不夠穩定和非常樂觀，而如果對其提取物中主要活性物質成分進行精制，將對其療效和初步定性定量方法的確定都將有很大的益處。本發明提供的地骨皮活性部位的制備，操作非常簡單，重復性良好。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是，為了克服現有技術中對地骨皮在治療糖尿病方面的上述不足，提供一種地骨皮活性部位的制備方法。
[0004]本發明所要解決的另一技術問題是，提供一種由上述方法制備得到的地骨皮活性部位、及其質量控制方法和保健與治療應用。
[0005]本發明所要解決的上述技術問題通過以下方案予以實現:
一種地骨皮活性部位的制備方法，包括如下步驟:
51.將地骨皮粉碎后，用8~15倍的水，加熱回流提取，再將提取液濃縮至
原體積1/3~1/5，加入濃度(體積)為90%~?00%的乙醇進行醇沉，至最終乙醇濃度(體積)為70-80%，取上清液濃縮得原液；
52.將原液通過101型大孔吸附樹脂，用水洗樹脂柱，收集洗脫液，濃縮得樣品1;
53.將樣品1通過強酸型陽離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水沖洗樹脂柱，棄去水洗脫液部分，再以3飛倍樹脂體積的0.2~1Ν氨水洗脫，收集洗脫液，蒸干，得樣品2 ；
54.將樣品2通過強堿性陰離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水洗脫，收集水洗脫液，濃縮干燥即得地骨皮活性部位。
[0006]作為一種優選方案，S1中用10倍的水，于100°C條件下回流提取2次，每次120分鐘，再將提取液濃縮至原體積1/4，加入濃度為95%的乙醇進行醇沉，至最終乙醇濃度為70~75%。
[0007]作為一種優選方案，S2中所用大孔吸附樹脂的重量為地骨皮原藥材重量的f 3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的2飛倍。
[0008]作為一種最優選方案，S2中所用的大孔吸附樹脂的重量為地骨皮原藥材重量的3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的3倍。
[0009]作為一種優選方案，S3所述的強酸型陽離子交換樹脂為交聯聚苯乙烯系的強酸性樹脂；S4所述的強堿性陰離子交換樹脂為交聯聚苯乙烯系的強堿性樹脂。
[0010]作為一種最優選方案，交聯聚苯乙烯系的強酸性樹脂的型號為001X7或001X4或001 X 14.5 ;交聯聚苯乙烯系的強堿性樹脂的型號為201X7。
[0011]作為一種優選方案，S3所述的氨水的濃度為0.5N。
[0012]一種由上述制備方法制備得到的地骨皮活性部位。
[0013]作為一種優選方案，所述的地骨皮活性部位，其主要成分為生物堿。
[0014]作為一種優選方案，活性部位中主要成分的分子量范圍為125~193。
[0015]上述地骨皮活性部位在制備抑制α -葡萄糖苷酶活性的藥物中的應用。
[0016]上述地骨皮活性部位在制備用于預防和治療糖尿病、肥胖癥或高血脂的藥物中的應用。
[0017]有益效果:本發明制備得到的地骨皮活性部位生物堿活性成分含量較高，全部為天然的α-葡萄糖苷酶抑制劑，具有作用機理清晰，療效確切，成本低廉等特點，可用于預防和治療糖尿病、肥胖癥、高血脂等`疾病。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018]圖1為本發明地骨皮活性部位的高效液相色譜圖。
[0019]圖2為本發明地骨皮活性部位對糖苷霉抑制曲線圖。
[0020]圖3地骨皮活性部位的ES1-MS測試圖譜。
【具體實施方式】
[0021]以下結合具體實施例來進一步解釋本發明，但實施例對本發明不做任何形式的限定。
[0022]實施例1.地骨皮活性部位的制備方法
S1.將地骨皮粉碎后，用10倍的水，于100°C條件下加熱回流提取2次，每次120分鐘，將提取液抽濾濃縮至原體積1/4，加入95%乙醇進行醇沉，終乙醇濃度約為75%，取上清液加壓濃縮得原液。
[0023]S2.將原液通過大孔吸附樹脂，地骨皮原藥材與樹脂的比例(重量)為1:3，用3倍的樹脂床體積的去離子水洗樹脂柱，收集洗脫液，減壓濃縮得樣品I。
[0024]S3.將樣品I通過強酸型陽離子交換樹脂交換(型號為001X7的交聯聚苯乙烯系的強酸性樹脂)，用3倍樹脂體積去離子水沖洗樹脂柱，棄水洗脫液，再以3倍0.5N的氨水洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干，得樣品2。
[0025]S4.將樣品2通過強堿性陰離子交換樹脂交換(型號為201X7交聯聚苯乙烯系的強堿性樹脂)，用3倍的樹脂體積的去離子水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮冷凍干燥即得地骨皮活性部位。
[0026]實施例2.地骨皮活性部位的一種液相分析方法
FM0C-C1 (芴甲氧基羰酰氯)是一種較新的氨基衍生化試劑，主要適用于伯胺和仲胺的衍生化，反應后的衍生物具有紫外吸收。而地骨皮的抗糖尿病活性分子中具有仲胺結構，因此可以采用FM0C-C1作為衍生化試劑進行衍生化。取實施例1中的樣品3溶液50 μ 1于1.5ml的離心管中，加入0.4mol/L硼酸鉀緩沖溶液200μ 1，再加入5mmol/L FM0C-C1 (50%乙腈配置)250μ 1,搖勻，室溫放置30分鐘,再加入lmol/L甘氨酸(Gly) 25 μ 1中止反應，再加入體積分數為1%的醋酸溶液80 μ 1,加水定容至1000 μ 1,最后溶液用有機膜過濾,即得測試液。結果如高效液相圖1所示。
[0027]實施例3地骨皮活性部位對α-葡萄糖苷酶活性的抑制
地骨皮活性部位(實施例1制備得到)對α -葡萄糖苷酶活性的抑制:取ρΗ6.8磷酸鹽緩沖溶液L 85 ml，依次加入0.1 U.πι 1的α -葡萄糖苷酶50 μ L，不同濃度的地骨皮活性部位溶液(0、1、2、3、4、5、6、7 mg ?π 1) 50 μ L,0.0116 mol.L-1 pNPG 50 yL，將上述反應體系在37°C恒溫水浴保溫30 min后，立即加入0.1 mol 的Na2C03溶液8 ml終止反應，每個濃度平行做3份，取平均值。
[0028]根據上述的方法和計算公式得到地骨皮活性部位對α -葡萄糖苷酶的抑制作用圖，如圖2所示。從圖中可以明顯地看出，地骨皮活性部位對α-葡萄糖苷酶具有很強的抑制作用。
[0029]實施例4地骨皮活性部位對正常小鼠餐后血糖的影響
地骨皮活性部位(實施例1制備得到)對正常小鼠餐后血糖的影響將體重18~22 g的正常小鼠按體重隨機分為空白對照組(生理鹽水)、陽性對照組(4.0 mg / kg阿卡波糖)和2個給藥組,每組8只，2個給藥組分別給藥劑量為4.0mg/kg、8.0mg/kg。室溫條件下喂養，飼以標準飼料，自由飲水，試驗前16h禁食不禁水，分別取一定濃度的地骨皮精制部位、阿卡波糖給正常小鼠灌喂，同時灌喂淀粉(3g/kg)，分別在給藥后0分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘斷尾采血，采用血糖儀測定小鼠血糖值。并做好實驗記錄。
[0030]表1.地骨皮活性部位對正常小鼠糖耐量的影響
【權利要求】
1.一種地骨皮活性部位的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: S1.將地骨皮粉碎后，用8~15倍的水，加熱回流提取，再將提取液濃縮至 原體積1/3~1/5，加入濃度為90%~?00%的乙醇進行醇沉，至最終乙醇濃度為70~80%，取上清液濃縮得原液； S2.將原液通過大孔吸附樹脂，用水洗樹脂柱，收集洗脫液，濃縮得樣品I; S3.將樣品I通過強酸型陽離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水沖洗樹脂柱，棄去水洗脫液部分，再以3飛倍樹脂體積的0.2~1Ν氨水洗脫，收集洗脫液，蒸干，得樣品2 ； S4.將樣品2通過強堿性陰離子交換樹脂吸附，用3飛倍樹脂體積的水洗脫，收集水洗脫液，濃縮干燥即得地骨皮活性部位。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，SI中用10倍的水，于 100°C條件下回流提取2次，每次120分鐘，再將提取液濃縮至原體積1/4，加入濃度為95%的乙醇進行醇沉，至最終乙醇濃度為70-75%。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，S2中所用大孔吸附樹脂 的重量為地骨皮原藥材重量的f 3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的2飛倍。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，S2中所用的大孔吸附樹 脂的重量為地骨皮原藥材重量的3倍；用水量為大孔吸附樹脂柱體積的3倍。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，S3所述的強酸型陽離子 交換樹脂為交聯聚苯乙烯系的強酸性樹脂；S4所述的強堿性陰離子交換樹脂為交聯聚苯乙烯系的強堿性樹脂。
6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，S3所述的氨水的濃度為0.5N。
7.權利要求1飛任一項所述的制備方法制備得到的地骨皮活性部位。
8.根據權利要求7所述的地骨皮活性部位，其特征在于，其主要成分為生物堿。
9.權利要求7所述的地骨皮活性部位在制備抑制α-葡萄糖苷酶活性的藥物中的應用。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于制備用于預防和治療糖尿病、肥胖癥或高血脂的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P3/10GK103690677SQ201310299042
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年7月16日 優先權日:2013年7月16日
【發明者】周光雄, 焦呈亮 申請人:暨南大學