銀杏提取物納米脂質體在治療婦科病中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及銀杏提取物納米脂質體在制備治療婦科病的外用制劑中的用途。所述銀杏提取物可通過化學分離方法，從銀杏的葉、果、根莖等部位的提取物中得到。所述銀杏提取物納米脂質體，通過采用薄膜超聲-高壓均質法制備。含有銀杏提取物納米脂質體的治療婦科病的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，含銀杏提取物納米脂質體0.001－80%，以及藥學上常用的外用制劑基質或可接受的載體；所述制劑是任何一種藥劑學上所說的外用劑型。藥理學研究和臨床試用結果表明，本發明對多種婦科病具有顯著的治療作用，使用安全無副作用。
【專利說明】銀杏提取物納米脂質體在治療婦科病中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物醫藥【技術領域】，具體涉及銀杏提取物納米脂質體在制備治療婦科病的外用制劑中的用途。
【背景技術】
[0002]婦科病如滴蟲性陰道炎、真菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰瘙癢癥、宮頸炎、宮頸糜爛等，是臨床最常見的疾病之一，此類疾病持續時間長，易反復發作，給患者帶來痛苦，嚴重影響患者的身心健康。目前治療此類疾病多為抗微生物藥，這些藥物雖有一時效果，但停藥后易復發，不能達到修復創面的作用；而且長期應用會引起諸多副作用。為了避免此類不良現象的發生，市場需要研制開發一種來源于天然、效果顯著、無明顯不良反應的治療婦科病的外用制劑，以減輕患者痛苦。此類疾病患者眾多，因此開發治療此類疾病的外用制劑產品具有良好的臨床應用前景，對患者是十分有益和必要的。
[0003]銀杏是我國珍貴的藥用植物，銀杏的葉、果和外種皮等皆具有藥用開發價值。據《本草綱目》記載，銀杏性甘、苦、平、澀；有定喘止咳、止帶濁、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便頻數、赤白帶下、手足皸裂等。特別是近幾十年來人們發現銀杏葉中含有多種有效成分，主要有效成分為黃酮類和萜類內酯化合物，具有防治心腦血管疾病的功能。
[0004]納米脂質體是將藥物包封于類脂質雙分子層所形成的超微球狀載體制劑。近年來脂質體作為一種新型的藥物載體，在皮膚外用制劑研究與應用方面得到了迅速的發展。納米脂質體用作皮膚給藥載體的特點為:兼容性，能增強藥物的透皮作用；皮膚組織靶向性；緩釋性；脂質體包封可提高藥物溶解度和穩定性。納米脂質體外用制劑具有高效、長效、安全、皮膚靶向作用強等優點。開發皮膚外用納米脂質體制劑是改進皮膚用藥的趨勢，已成為外用藥物和化妝品研究開發 的方向。
[0005]目前尚未見銀杏提取物納米脂質體在治療婦科病中的應用的報道。因此，有關銀杏提取物納米脂質體外用制劑防治婦科病新型藥物、化妝品、消毒劑的研究開發，以及對銀杏資源的充分開發利用，將產生巨大的社會和經濟效益。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是提供銀杏提取物納米脂質體的新用途，即銀杏提取物納米脂質體在制備防治婦科病的外用制劑中的用途。它具有療效顯著、使用安全的特點。
[0007]本發明的目的是這樣實現的:
提供銀杏提取物納米脂質體在制備治療婦科病的外用制劑中的用途。
[0008]所述婦科病為滴蟲性陰道炎、真菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰瘙癢癥、宮頸炎、宮頸糜爛等。
[0009]所述銀杏提取物通過化學分離方法，從銀杏的葉、果、根莖等部位的提取物中得到，提取溶劑可為乙醇、水、乙醚、石油醚等有機溶劑；或對銀杏葉、果、根莖提取加工產物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收。[0010]所述銀杏提取物納米脂質體，通過采用薄膜超聲-高壓均質法制備。
[0011]還提供含有銀杏提取物納米脂質體的治療婦科病的藥物、消毒劑外用制劑，含有銀杏提取物納米脂質體0.001 - 80%,以及藥學上常用的外用制劑基質或外用制劑可接受的載體。
[0012]更進一步的，含有銀杏提取物納米脂質體0.001 — 30%。
[0013]更進一步的，含有銀杏提取物納米脂質體0.5 — 20%。
[0014]按上述重量比范圍取主藥銀杏提取物納米脂質體、藥學上常用的外用制劑基質或可接受的載體制備得到銀杏提取物納米脂質體外用制劑；以及包含銀杏提取物納米脂質體和任何物質組合用于治療婦科病的藥物、消毒劑外用制劑。所述制劑是任何一種藥劑學上所說的外用劑型，為液體制劑、膏霜劑、凝膠劑、膜劑、洗劑、粉劑、氣霧噴霧劑、栓劑、透皮吸收制劑。
[0015]本發明的有益效果是，藥理學試驗研究表明本發明對大鼠細菌性陰道炎、真菌性陰道炎、宮頸炎模型具有顯著的治療作用，并可抑制人乳頭瘤病毒(HPV)感染細胞的增殖，具有抗HPV病毒感染的作用；更為重要的是，銀杏提取物納米脂質體作用顯著優于銀杏提取物對照組。局部刺激性實驗研究表明本發明安全，無皮膚刺激、過敏等不良反應。臨床多種婦科病患者試用結果表明，本發明對多種婦科病具有顯著的治療作用，有效率達100%，使用安全無副作用。
【具體實施方式】
[0016]下面結合實施例，對本發明作進一步地描述。
[0017]實施例1:
將白果去皮，放入組織搗碎機中粉碎。準確稱取一定量經粉碎的白果，加入料液比為I:10 (W/V)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，離心(5000轉/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉蒸發儀濃縮上清液，條件為溫度55°C，壓強0.008-0.009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏提取物浸膏，性狀為:淺黃色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0018]磷脂無水乙醇溶液，過濾；加入上述銀杏提取物浸膏、維生素E，振搖均勻，置圓底燒瓶中，30°C水浴恒溫旋轉蒸發，減壓成膜，使膜材在瓶壁上形成均勻的類脂薄膜，加入PBS緩沖液50°C下充分振蕩水化，至壁上薄膜完全脫落，浸入50°C水浴中攪拌，于25°C水浴條件下超聲5min, 200Hz每次5s,間歇5s ,至形成半透明略顯乳光的池液。高壓均質，100 Mpa壓力下循環3次，過微孔濾膜，即得淺黃色透明膠體狀銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0019]酊劑的制備:取上述銀杏提取物納米脂質體懸液100ml，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中加入丙二醇200ml攪拌，補95%乙醇溶液至足量1000 ml,即得淡黃色銀杏提取物納米脂質體酊劑1000 ml，銀杏提取物納米脂質體含量為10%。分裝于50支小管中，每支20 ml 。
[0020]實施例2:
將白果去皮，放入組織搗碎機中粉碎。準確稱取一定量經粉碎的白果，加入料液比為1:10(W/V)的蒸餾水，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，離心(5000轉/分，15分鐘)，取上清液。濃縮上清液，并于60°C真空干燥，得銀杏提取物浸膏，性狀為:淺黃色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0021]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0022]凝膠劑的制備:將卡波普IOg灑在500ml蒸餾水表面，溶脹過夜。稱取甘油60g，丙二醇120ml，分別加入至溶脹好的卡波普中，迅速研磨均勻，得到透明的凝膠基質。取上述銀杏提取物納米脂質體懸液40ml，溶解于100ml 95%乙醇溶液中，緩慢加入至凝膠基質中，攪拌均勻。再緩慢加入三乙醇胺15ml，補蒸餾水至足量1000 g，即得淡黃色銀杏提取物納米脂質體凝膠1000 g，銀杏提取物納米脂質體含量為4%。分裝于50支小管中，每支20g°
[0023]實施例3:
將白果去皮，放入組織搗碎機中粉碎。準確稱取一定量經粉碎的白果，加入料液比為1:10 (W/V)的80%石油醚，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，離心(5000轉/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉蒸發儀濃縮上清液，條件為溫度55°C，壓強0.008-0.009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏提取物浸膏，性狀為:淺黃色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0024]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0025]軟膏劑的 制備:取上述銀杏提取物納米脂質體懸液5ml，溶解于100ml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加溫至70°C。將石蠟300g、硬脂酸300g、丙二醇100ml分別加入攪拌融化，補蒸餾水至足量1000 g，攪拌均勻至膏狀，即得淡黃色銀杏提取物納米脂質體軟膏1000g，銀杏提取物納米脂質體含量為0.5%。分裝于50支小管中，每支20 g0
[0026]實施例4:
將銀杏葉剪碎，放入粉碎機中將其粉碎。準確稱取一定量經粉碎的銀杏葉，加入料液比為1:6 (W/V)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，離心(5000轉/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉蒸發儀濃縮上清液，條件為溫度55°C，壓強0.008-0.009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏提取物浸膏，性狀為:淺黃色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0027]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0028]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液20ml，按實施例3軟膏劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體軟膏1000g，銀杏提取物納米脂質體含量為2%。分裝于50支小管中，每支20 g0
[0029]實施例5:
將銀杏葉剪碎，放入粉碎機中將其粉碎。準確稱取一定量經粉碎的銀杏葉，加入料液比為1:6 (W/V)的蒸餾水，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，離心(5000轉/分，15分鐘)，取上清液。濃縮上清液，于60°C真空干燥，得銀杏提取物浸膏，性狀為:淺黃色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0030]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。[0031]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液300ml，按實施例1酊劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體酊劑1000 ml，銀杏提取物納米脂質體含量為30%。分裝于50支小管中，每支 20 ml ο
[0032]實施例6:
將銀杏葉剪碎，放入粉碎機中將其粉碎。準確稱取一定量經粉碎的銀杏葉，加入料液比為1:6 (W/V)的石油醚，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，離心(5000轉/分，15分鐘)，取上清液。用真空旋轉蒸發儀濃縮上清液，條件為溫度55°C，壓強0.008-0.009MPa，減壓濃縮，并于60°C真空干燥，得銀杏提取物浸膏，性狀為:淺黃色浸膏，溶于醇，不溶于水。
[0033]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0034]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液200ml，按實施例2凝膠劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體凝膠1000 g，銀杏提取物納米脂質體含量為20%。分裝于50支小管中，每支20 g。
[0035]實施例7:
按實施例1銀杏提取物浸膏制備工藝制備銀杏提取物浸膏。
[0036]按實施例1銀杏提取 物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0037]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液400ml，按實施例1酊劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體酊劑1000 ml，銀杏提取物納米脂質體含量為40%。分裝于50支小管中，每支 20 ml ο
[0038]實施例8:
按實施例2銀杏提取物浸膏制備工藝制備銀杏提取物浸膏。
[0039]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0040]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液1ml，按實施例3軟膏劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體軟膏1000g，銀杏提取物納米脂質體含量為0.1%。分裝于50支小管中，每支 20 g。
[0041]實施例9:
按實施例4銀杏提取物浸膏制備工藝制備銀杏提取物浸膏。
[0042]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。
[0043]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液0.1ml，按實施例2凝膠劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體凝膠1000 g，銀杏提取物納米脂質體含量為0.01%。分裝于50支小管中，每支20 g。
[0044]實施例10:
按實施例5銀杏提取物浸膏制備工藝制備銀杏提取物浸膏。
[0045]按實施例1銀杏提取物納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體懸液。[0046]取上述銀杏提取物納米脂質體懸液IOml，按實施例2凝膠劑制備工藝制備銀杏提取物納米脂質體凝膠1000g，銀杏提取物納米脂質體含量為1%。分裝于50支小管中，每支20 g0
[0047]用以上方法制成的銀杏提取物納米脂質體外用制劑，進行相關的藥理、局部刺激性安全性評價實驗和臨床試用試驗。下面是本發明的實驗數據:
對大鼠細菌性陰道炎的治療作用:體重200-250g的雌性大鼠，從陰道注入金黃色葡萄球菌(3X 105CFU/ml)和大腸桿菌(1.6X106CFU/ml)的混合菌液，菌液注入量為
0.05ml/100g體重，隔日再接種I次。第5天及第7天分別取陰道分泌物做鏡檢、細菌培養，并分別分離出金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，再分別接種于培養基中，經培養后，做菌株鑒定。鏡檢及菌株鑒定均為陽性者為感染成功的大鼠。取感染成功的大鼠隨機分為4組，模型對照組、銀杏提取物對照組、本發明銀杏提取物納米脂質體組、氧氟沙星軟膏組，每組10只。給藥組各只大鼠陰道內分別注入相應藥物，模型對照組各只大鼠陰道內注入生理鹽水，每天I次，連續5天。停藥后第I天和第4天取大鼠陰道分泌物進行鑒定，2次鑒定病原體均為陰性定為轉陰。停藥后第5天將大鼠解剖，取陰道標本進行肉眼觀察；陰道標本按充血、水腫、出血3項指標進行評分:無充血、水腫、出血評O分；陰道粘膜尚平滑有輕度充血，評為I分；陰道粘膜尚平滑中度充血，可見點狀出血點，評為2分；陰道粘膜不平滑，重度充血，可見大量出血點，組織輕度水腫，評為3分。以模型對照組的分值定為100% (炎癥程度)，藥物組與模型對照組比較，可得出藥物組炎癥抑制率。用t檢驗對炎癥評分進行統計，用X2檢驗對轉陰率進行統計。結果表明(見表1)，本發明銀杏提取物納米脂質體凝膠對大鼠細菌性陰道炎具有顯著的治療作用，且作用顯著優于氧氟沙星和銀杏提取物外用制劑對照組。
[0048]表1.對大鼠細菌性陰道炎的治療作用
【權利要求】
1.銀杏提取物納米脂質體在制備防治婦科病的外用制劑中的用途。
2.如權利要求1所述的用途，所述婦科病為滴蟲性陰道炎、真菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰瘙癢癥、宮頸炎、宮頸糜爛。
3.如權利要求1所述的銀杏提取物納米脂質體，所述銀杏提取物通過化學分離方法，從銀杏的葉、果、根莖部位的提取物中得到，提取溶劑為乙醇、水、乙醚、石油醚有機溶劑；或對銀杏葉、果、根莖提取加工產物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；所述銀杏提取物納米脂質體，通過采用薄膜超聲-高壓均質法制備。
4.如權利要求1所述的外用制劑，為含有銀杏提取物納米脂質體的治療婦科病的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑；以及包含銀杏提取物納米脂質體和任何物質組合用于治療婦科病的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑；其特征是，所述制劑是任何一種藥劑學上所說的外用劑型，為液體制劑、膏霜劑、凝膠劑、粉劑、膜劑、洗劑、氣霧噴霧劑、透皮吸收制劑、皮下注射劑。
5.如權利要求4所述的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，其特征是，含有銀杏提取物納米脂質體0.0Ol — 80%O
6.如權利要求4所述的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，其特征是，含有銀杏提取物納米脂質體0.001 — 30%O
7.如權利要 求4所述的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，其特征是，含有銀杏提取物納米脂質體0.5 - 20%。
【文檔編號】A61K9/127GK103751230SQ201310409369
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年9月11日 優先權日:2013年9月11日
【發明者】雷紅, 王青 申請人:王青