一種山茶籽蛋白肽及其制備方法和其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種山茶籽蛋白肽及其制備方法與應用。該山茶籽蛋白肽是按照包括下述步驟的方法制備得到的：采用芳香水果植物復合蛋白酶對山茶籽分離蛋白粉進行酶解反應，得到所述山茶籽蛋白肽。其相對分子質量主要在0～1000Da之間，均由2～9個氨基酸組成。本發明所提供的山茶籽蛋白肽小肽含量高、風味獨特、無苦味、不需脫苦，可作為醫藥原料以及食品添加劑用于制備抗氧化、清除自由基、降血壓、降血糖、降血粘，提高高密度脂蛋白的產品，如藥品、保健品、食品等。本發明制備山茶籽蛋白肽的方法變廢為寶、變垃圾為高科技產品，工藝簡單、投資少、見效快、經濟效益高，是適宜于工業化生產的方法。
【專利說明】一種山茶籽蛋白肽及其制備方法和其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物【技術領域】，具體涉及一種山茶籽蛋白肽及其制備方法和其應用。【背景技術】
[0002]山茶籽是油茶籽的別名，是油茶樹的果實。油茶樹是我國主要的木本油料樹，被譽為“東方樹”，是我國特有的木本類植物油資源。山茶籽榨制的茶油，是一種優質食用油，其不飽和脂肪酸含量在90%以上。但是榨過油的山茶籽栢綜合利用率低，經濟效益差，常被當做垃圾廢物扔掉，十分可惜，浪費資源，污染環境。目前雖有山茶籽栢綜合利用的研究報道，但都是以山茶籽栢為原料，山茶籽蛋白質含量低，得物含肽率低，分子量大，風味不宜，工藝復雜，功能不穩定，生物效價低。
【發明內容】
[0003]本發明的一個目的是提供一種山茶籽蛋白肽及其制備方法和其應用。
[0004]本發明提供的一種制備山茶籽蛋白肽的方法，包括下述步驟:采用芳香水果植物復合蛋白酶對山茶籽分離蛋白粉進行酶解反應，得到所述山茶籽蛋白肽；所述芳香水果植物復合蛋白酶是由無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶按照iu:2U:2U的比例混合而成。
[0005]所述方法中，所述山茶籽分離蛋白的制備方法包括:去掉山茶籽外殼后，山茶籽仁通過冷榨機榨出油脂物質后，得到山茶籽栢，再從山茶籽栢中分離蛋白后，即得山茶籽分離蛋白。
[0006]所述冷榨機的入榨溫度為70°C。
[0007]所述山茶籽分離蛋白中蛋白質含量90%以上。
[0008]所述從山茶籽栢中分離蛋白具體為利用浙江糧油機械公司分離蛋白設備分離制得山茶籽分離蛋白。
[0009]山茶籽分離蛋白也可按照常規提取總蛋白的方法從山茶籽栢中進行提取得到。
[0010]所述方法中，所述酶解反應pH值為6.2，反應溫度為60°C，反應時間為2.5小時。
[0011]所述方法中，所述酶解反應的反應體系中，山茶籽分離蛋白粉與水的質量體積比為1:15 ;酶解每克山茶籽分離蛋白粉所需芳香水果植物復合蛋白酶8000U。
[0012]所述質量體積比中，質量單位具體以g計，體積單位具體以ml計。
[0013]所述方法還包括下述步驟:在酶解反應結束后，對酶解液進行冷藏沉降處理，過濾，收集濾液；所述冷藏沉降的溫度為-4°C，時間為24小時。
[0014]所述方法還包括將所述濾液進行酶滅活處理的步驟；所述酶滅活的條件為:溫度100°C，時間20分鐘。
[0015]所述方法制備得到的山茶籽蛋白肽也屬于本發明保護的范圍。
[0016]所述方法制備得到的山茶籽蛋白肽在下述至少一種中的用途:
[0017]( I)制備預防和/或治療糖尿病的廣品中的應用；[0018](2)制備抗氧化和/或清除自由基的廣品中的應用；
[0019](3)制備降血壓產品中的應用；
[0020](4)提高高密度脂蛋白數量和/或降血粘產品中的應用。
[0021 ] 所述應用中，所述產品可為藥品、保健品或食品。
[0022]本發明的再一個目的是提供一種具有下述任一用途的產品，其活性成分為所述方法制備得到的山茶籽蛋白肽:
[0023]( 1)預防和/或治療糖尿病；
[0024]( 2 )抗氧化和/或清除自由基；
[0025](3)降血壓；
[0026](4)提高高密度脂蛋白數量和/或降血粘。
[0027]以山茶籽蛋白肽為活性成分制備的抗氧化、清除自由基、降血壓、降血糖、降血粘，提高高密度脂蛋白的藥物或保健品，需要的時候，在上述藥物或保健品中還可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
[0028]所述抗氧化、清除自由基、降血壓、降血糖、降血粘，提高高密度脂蛋白的藥物可以制成口服液、片劑、沖劑、膠囊(包括軟、硬膠囊)、噴劑以及包衣丸劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規方法制備。
[0029]本發明制備山茶籽蛋白肽的方法變廢為寶、變垃圾為高科技產品，工藝簡單、投資少、見效快、經濟效益高，是適宜于工業化生產的方法。
【具體實施方式】
[0030]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。
[0031]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。
[0032]實施例1、山茶籽蛋白肽的制備
[0033](一)山茶籽分離蛋白的制備
[0034]從山茶籽栢中提取總蛋白:去掉山茶籽外殼后，山茶籽仁通過冷榨機榨出油脂物質后，得到山茶籽栢，再以山茶籽栢為原料，利用浙江糧油機械公司分離蛋白設備分離制得山茶籽分離蛋白。
[0035]冷榨機的入榨溫度為70°C，所得山茶籽分離蛋白中蛋白質含量90%以上。
[0036](二)芳香水果植物復合蛋白酶的配制
[0037]將無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶按照IU:2U:2U的比例混合即得芳香水果植物復合蛋白酶。
[0038](三)山茶籽蛋白肽的制備
[0039]將上述制備的山茶籽分離蛋白粉投入酶解罐中，向酶解罐內加入水，每Ig山茶籽分離蛋白粉中加入15ml的水，按酶解每克山茶籽分離蛋白粉需要芳香水果植物復合蛋白酶8000U的量加入復合蛋白酶；攪拌混勻后用冰醋酸調節pH值至6.2，加熱至60°C，酶解
2.5小時；酶解結束后，還需對酶解液進行酶滅活處理，所述酶滅活的條件為溫度100°C，時間為20分鐘。之后在-4°C條件下冷藏沉降處理24小時，待其雜質基本沉淀，取上清液，再用板框過濾后進行冷凍干燥或噴霧干燥處理，即得山茶籽蛋白肽。[0040]實施例2、山茶籽蛋白肽的分子量分布檢測
[0041]山茶籽蛋白肽的分子量分布的測定方法采用高效凝膠過濾色譜法，測試結果表明本發明提供的山茶籽蛋白肽的相對分子質量主要集中在O-1OOODa的小分子肽與氨基酸混合物，小肽含量為65%以上。
[0042]對比例1-3、山茶籽蛋白肽的制備
[0043]按照表1所述的酶反應條件，按實施例1所述方法，進行山茶籽蛋白肽的制備。
[0044]表1
[0045]
復合蛋白酶酶活配比酶解反應pH值酶解反應溫度酶解反應時間 對比例I~2:1:1TTo&5V4小時
對比例2~1:2:15?755VI小時
對比例3~1:1:1870701-2小時
[0046]表1中，復合蛋白酶酶活配比具體指無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶與木瓜蛋白酶的酶活單位的比例。
[0047]計算按各對比例的反應條件所制備的山茶籽蛋白肽中分子質量主要集中在
0-1OOODa的小分子肽的含量，結果顯示，按照對比例1-3的反應條件所制備的山茶籽蛋白肽的小肽含量依次為37%、23%、29%。該數據表明實施例1所述的山茶籽蛋白肽的制備方法要優于對比例1-3。
[0048]實施例3、山茶籽蛋白肽的降血糖的藥效學試驗
[0049]采用實施例1制備的山茶籽蛋白肽對II型糖尿病模型大鼠進行動物試驗，通過對照試驗，考察本發明的山茶籽蛋白肽對試驗大鼠的治療作用。
[0050]具體試驗過程如下:
[0051]將大鼠用基礎飼料喂養I周后，隨機分為普通飼料組(正常對照組，10只)和高脂飼料組(100只)，持續喂養8周后，高脂飼料組大鼠尾靜脈一次性注射STZ (鏈脲佐菌素)25mg/kg,正常對照組大鼠注射等量的枸櫞酸鈉-枸櫞酸緩沖液。2d后以16mmol/L (血糖< 30mmol/L者視為II型糖尿病模型大鼠造模成功。將造模成功的70只2-DM大鼠隨機分成七組(每組10只):模型對照組(水灌胃)、實施例1制備的山茶籽蛋白肽高、中、低劑量組(高劑量組給藥劑量為100mg/kg，中劑量為50mg/kg，低劑量為25mg/kg，灌胃)、對比例
1-3所述制備的山茶籽蛋白肽高劑量組(高劑量組給藥劑量為100mg/kg)。連續灌胃8天，觀察動物的癥狀及檢測各項指標，試驗結束后測定大鼠的空腹血糖指標。
[0052]采用SPSS16.0統計軟件進行數據處理，實驗數據以均數土標準差(土s)表示，采用t檢驗，檢驗水準α =0.05。結果見表2。
[0053]表2、山茶籽蛋白肽對II型糖尿病大鼠血糖的影響(X 土SD)
【權利要求】
1.一種制備山茶籽蛋白肽的方法，包括下述步驟:采用芳香水果植物復合蛋白酶對山茶籽分離蛋白粉進行酶解反應，得到所述山茶籽蛋白肽；所述芳香水果植物復合蛋白酶是由無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶按照iu:2U:2U的比例混合而成。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于:所述酶解反應PH值為6.2，反應溫度為60°C，反應時間為2.5小時。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述酶解反應的反應體系中，山茶籽分離蛋白粉與水的質量體積比為1:15 ;酶解每克山茶籽分離蛋白粉所需芳香水果植物復合蛋白酶8000U。
4.根據權利要求1-3中任意一項所述的方法，其特征在于:所述方法還包括下述步驟:在酶解反應結束后，對酶解液進行冷藏沉降處理，過濾，收集濾液；所述冷藏沉降的溫度為_4°C，時間為24小時。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于:所述方法還包括將所述濾液進行酶滅活處理的步驟；所述酶滅活的條件為:溫度100°c，時間20分鐘。
6.權利要求1-5中任意一項所述方法制備得到的山茶籽蛋白肽。
7.權利要求6所述的山茶籽蛋白肽在下述至少一種中的用途: (1)制備預防和/或治療糖尿病的廣品中的應用； (2)制備抗氧化和/或清除自由基的產品中的應用； (3)制備降血壓廣品中的應用； (4)提高高密度脂蛋白數量和/或降血粘產品中的應用。
8.根據權利要求9所述的應 用，其特征在于:所述產品可為藥品、保健品或食品。
9.一種具有下述任一用途的產品，其活性成分為權利要求8所述的山茶籽蛋白肽: (1)預防和/或治療糖尿病； (2)抗氧化和/或清除自由基； (3)降血壓； (4)提高高密度脂蛋白數量和/或降血粘。
【文檔編號】A61P3/10GK103484517SQ201310412144
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月11日 優先權日:2013年9月11日
【發明者】鄒遠東 申請人:鄒遠東