用于治療b細胞介導的炎性疾病的方法

用于治療b細胞介導的炎性疾病的方法
【專利摘要】本發明提供了用于治療CXCL13表達相關疾病的方法，包括某些自身免疫和炎性疾病(如干燥綜合征)。所述方法包括給予需要治療的對象有效量的抑制CXCL13活性的物質。根據本文所示本發明的方面，提供了一種治療、預防對象中B細胞介導炎性病癥或減輕其惡化的方法，包括給予對象有效量的分離的特異性結合CXCL13的結合分子，所述分子阻止或抑制CXCL13的活性。
【專利說明】用于治療B細胞介導的炎性疾病的方法
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【技術領域】
[0003] 本發明一般地涉及炎性疾病的治療，尤其是B細胞介導的炎性疾病。
[0004] 發明背景
[0005] 產生有自身抗體（針對自身抗原的抗體）生成潛能的B細胞在正常生理情 況下是常見的。然而，這種天然自身抗體是低親和性IgM抗體，其表現出廣譜反應性 并且對可溶性自身抗原相比細胞表面抗原具有強優先性（參見例如Dichiero等，J. Immunol. 134(2):765-771 (1985);Cote等，Proc.Natl.Acad.Sci83:2959-2963(1986))。 自身反應的低親和性B細胞經歷細胞凋亡，并且因此不太可能危及健康生物體。
[0006] 在一些情況下，產生自身抗體的B細胞數目的增加、其被招募至特定區域或所產 生自身抗體的親和性增加會導致自身免疫疾病的發生。某些自身免疫疾病的特征是存在特 定的自身抗體，所述自身抗體被認為有助于疾病發病和疾病狀態的維持。
[0007] 干燥綜合征（SS)是一種罕見的自身免疫疾病，影響約0. 2至0. 7%的總人群。通 常，其出現在40至60歲，且估計具有9:1女性傾向。值得注意的是，該疾病以原發和繼發形 式出現。原發形式主要影響唾液腺和淚腺，而繼發形式與其他自身免疫結締組織疾病（如類 風濕性關節炎（RA)和系統性紅斑狼瘡（SLE))共同出現。患有原發性和繼發性SS(分別為 pSS和sSS)的患者同時具有疾病的口部和眼部表現。雖然SS誘導的口腔干燥（口干癥）和 眼睛干燥（干眼病）對于患者的生活質量具有顯著的消極影響，越來越多的文獻顯示了該 疾病的其他使人虛弱的方面，包括骨骼肌、肺和腎表現，皮膚病變，白細胞破壞性脈管炎，雷 諾氏現象，血液學并發癥，肝臟病變和B細胞淋巴瘤。因此，該疾病的兩種形式都造成了患病 個體顯著的發病率和死亡率。參見Voulgarelis等，ArthritisRheum(1999)42:1765-1772 ; Garcia-Carrasco等，JRheumatol(2002)29:726-730;Ramos_Casals等，Medicine (Baltimore) (2002) 81: 281-292 ；Fox,Lancet(2002) 366: 321-331；EkStrom等， Blood(2008) 111:4029-4038 ;和Delalande等，Medicine(Baltimore) (2008)83:280-291。 因此，存在對于自身免疫疾病（如干燥綜合征）和其他炎性疾病的治療療法研發的需要。


【發明內容】

[0008] 本發明提供了用于治療CXCL13表達相關疾病的方法，包括某些自身免疫和炎性 疾病。根據本文所示本發明的方面，提供了一種治療、預防對象中B細胞介導炎性病癥或減 輕其惡化的方法，包括給予對象有效量的能夠阻止或抑制CXCL13活性的物質。在一些實施 方式中，所述物質抑制CXL13與其受體（如CXCR5或CXCR3)之間的相互作用。在某些實施 方式中，所述物質是特異性結合CXCL13的分離的結合分子。在其他實施方式中，所述物質 是特異性結合CXCL13受體（如CXCR5或CXCR3)或CXCL13受體（如CXCR5或CXCR3)可溶 形式的分離的結合分子。
[0009] 在本文所示某些方面，通過給予阻止或抑制CXCL13活性的物質所治療的B細胞介 導炎性病癥是干燥綜合征。
[0010] 本發明涵蓋如下實施方式：
[0011] 1. -種治療對象中干燥綜合征的方法，所述方法包括給予需要治療的對象有效量 的抑制CXCL13活性的物質。
[0012] 2.如實施方式1所述的方法，所述物質是特異性結合CXCR5的結合分子。
[0013] 3.如實施方式1所述的方法，所述物質是特異性結合CXCR13的結合分子。
[0014] 4.如實施方式2或3所述的方法，所述結合分子包括抗體或其抗原結合片段。
[0015] 5.如實施方式4所述的方法，所述抗體是嵌合、人或人源化的。
[0016] 6.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段 包含重鏈可變（VH)結構域，所述重鏈可變結構域與SEQIDNO: 10或14中所列氨基酸序列 具有至少90%序列相同性。
[0017] 7.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段 包含重鏈可變（VH)結構域，除20個或更少的保守性氨基酸取代外，所述重鏈可變結構域具 有與SEQIDNO: 10或14中所列序列相同的氨基酸序列。
[0018] 8.如實施方式6或7所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段 包含具有SEQ IDNO: 14中所列序列的VH結構域。
[0019] 9.如實施方式4-8中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結 合片段包含輕鏈可變（VL)結構域，所述輕鏈可變結構域與SEQIDNO: 15、19或21中所列 氨基酸序列具有至少90%序列相同性。
[0020] 10.如實施方式4-8中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或其抗 原結合片段包含輕鏈可變（VL)結構域，除20個或更少的保守性氨基酸取代外，所述輕鏈可 變結構域具有與SEQIDNO: 15、19或21中所列序列相同的氨基酸序列。
[0021] 11.如實施方式9或10所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含具有SEQIDNO: 19中所列序列的VL結構域。
[0022] 12.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含重鏈可變（VH)結構域和輕鏈可變（VL)結構域，所述重鏈可變結構域和輕鏈可變結 構域具有與選自下組的VL和VL序列具有至少90%相同性的氨基酸序列：
[0023] a)分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ;
[0024] b)分別是 SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 21 ;
[0025] c)分別是 SEQIDNO: 10 和 SEQIDNO: 15。
[0026] 13.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含重鏈可變（VH)結構域和輕鏈可變（VL)結構域，所述重鏈可變結構域和輕鏈可變結 構域各自除20個或更少的保守性氨基酸取代外，具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨 基酸序列：
[0027] a)分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ;
[0028] b)分別是 SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 21 ;
[0029] c)分別是SEQIDNO: 10 和SEQIDNO: 15。
[0030] 14.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含重鏈可變（VH)結構域和輕鏈可變（VL)結構域，所述重鏈可變結構域和輕鏈可變結 構域具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨基酸序列：
[0031] a)分別是SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 19 ;
[0032] b)分別是SEQIDNO: 14 和 SEQIDNO: 21 ;
[0033] c)分別是SEQIDNO: 10 和 SEQIDNO: 15。
[0034] 15.如實施方式9所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含具有SEQIDNO: 14中所列序列的VH結構域和具有SEQIDNO: 19中所列序列的VL結構 域。
[0035] 16.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含具有至少一種以下互補決定區（⑶R)的VH結構域：
[0036] &)與5￡0 10勵：11具有至少90%序列相同性的〇?1;
[0037] 幻與5￡0 10勵：12具有至少90%序列相同性的〇)1?2;以及
[0038] (：)與5￡0 10勵：13具有至少90%序列相同性的〇)1?3。
[0039] 17.如實施方式4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含具有至少一種以下互補決定區（⑶R)的VH結構域：
[0040] a)除兩個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:11相同的氨基酸序列的 CDR1 ;
[0041] b)除四個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:12相同的氨基酸序列的 CDR2 ;
[0042] c)除四個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:13相同的氨基酸序列的 CDR3 ;
[0043] 18.如實施方式16或17所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合 片段包含VH結構域，所述VH結構域包含具有SEQIDNO: 11中所列序列的⑶R1、具有SEQ IDNO: 12中所列序列的CDR2和具有SEQIDNO: 13中所列序列的CDR3。
[0044] 19.如實施方式4、5或16-18中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗 體或抗原結合片段包含具有至少一種以下互補決定區（CDR)的VL結構域：
[0045] a)與SEQIDNO: 17或20具有至少90%序列相同性的CDR1 ;
[0046] 幻與5￡〇10勵：17具有至少90%序列相同性的0)1?2;以及
[0047] (：)與5￡0 10勵：18具有至少90%序列相同性的〇)1?3。
[0048] 20.如實施方式4、5或16-18中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗 體或抗原結合片段包含具有至少一種以下互補決定區（CDR)的VL結構域：
[0049] a)除四個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDNO: 17或20相同的氨基酸序列 的CDR1 ;
[0050] b)除兩個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:17相同的氨基酸序列的 ⑶R2 ;以及
[0051] c)除兩個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQIDN0:18相同的氨基酸序列的 CDR3〇
[0052] 21.如實施方式19或20所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合 片段包含VL結構域，所述VL結構域包含具有SEQIDN0:20中所列序列的⑶R1、具有SEQ IDNO: 17中所列序列的CDR2和具有SEQIDNO: 18中所列序列的CDR3。
[0053] 22.如實施方式4-21中任一項所述的方法，所述抗體是IgGlk抗體。
[0054] 23.如實施方式22所述的方法，所述抗體包含VH結構域中的人IgGl恒定區和VL 結構域的所述恒定區中的人k區。
[0055] 24.如實施方式4所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段選 自下組：
[0056] a)單克隆抗體5261 ;
[0057] b)單克隆抗體5378 ;
[0058] c)單克隆抗體5080 ;
[0059] d)單克隆抗體1476 ;
[0060] e)單克隆抗體3D2 ;
[0061] f)a)-e)中任一單克隆抗體的嵌合或人源化形式；
[0062] g)與選自a)-e)的參考單克隆抗體結合相同CXCL13表位的抗體或抗原結合片 段；
[0063] h)競爭性抑制選自a)-e)的參考單克隆抗體的抗體或抗原結合片段；以及
[0064] i)a)-h)中任一個的抗原結合片段。
[0065] 25.如實施方式24所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體選自所述單克隆抗 體5261、所述單克隆抗體5378、所述單克隆抗體5080、所述單克隆抗體1476和所述單克隆 抗體3D2。
[0066] 26.如實施方式25所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體是所述單克隆抗體 5378〇
[0067] 27.如實施方式4-24中任一項所述的方法，所述抗原結合片段選自Fab、F(ab'）2、 Fv和scFv〇
[0068] 28.如實施方式1所述的方法，所述物質是可溶形式的CXCR5或CXCR3。
[0069] 29.如實施方式1-28中任一項所述的方法，所述物質抑制CXCL13與CXCL13受體 的相互作用。
[0070] 30.如實施方式29所述的方法，所述CXCL13受體是CXCR5或CXCR3。
[0071] 31.如實施方式1-30中任一項所述的方法，所述方法預防所述對象中的干燥綜合 征。
[0072] 32.如實施方式1-31中任一項所述的方法，所述物質與藥學上可接受的運載體一 起給予。
[0073] 33. -種治療對象中干燥綜合征的方法，包括給予需要治療的對象有效量的特異 性結合CXCL13的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段抑制CXCL13的活性。
[0074] 34.如實施方式33所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或其抗原結合片段 包含具有SEQIDNO: 14中所列序列的重鏈可變結構域和具有SEQIDNO: 19中所列序列的 輕鏈可變結構域。
[0075] 35.如實施方式33所述的方法，所述抗體或其抗原結合片段抑制CXCL13與CXCR5 的相互作用。
[0076] 36.如實施方式1-35中任一項所述的方法，所述對象是動物。
[0077] 37.如實施方式36所述的方法，所述動物是哺乳動物。
[0078] 38.如實施方式37所述的方法，所述哺乳動物是人。
[0079] 下文發明的說明書中更詳細地公開了本發明的這些和其他方面。
[0080] 附圖簡要說明
[0081] 圖1A顯示了來自雌性NOD/ShiLtJ(NOD)小鼠的蘇木精和伊紅（H&E)染色的唾液 腺樣品，所述小鼠用同種型對照抗體（左圖）或抗CXCL13抗體（右圖）治療，從4周齡開 始每周治療3次共持續12周。在16周齡時處死后移出唾液組織用于分析。圖1B顯示了 同種型對照和抗CXCL13抗體治療的樣品的頒下組織中淋巴細胞病灶的數目。
[0082] 圖2顯示了上述同種型對照抗體或抗CXCL13抗體治療后小鼠唾液組織中CXCR5 mRNA的表達。
[0083] 圖3顯示了上述同種型對照抗體或抗CXCL13抗體治療后小鼠唾液組織中⑶19 mRNA的表達。
[0084] 圖4顯示了上述同種型對照抗體或抗CXCL13抗體治療后小鼠唾液組織中⑶4 mRNA的表達。
[0085] 發明詳述
[0086] 內穩態B細胞虜獲趨化因子l(BCA-l)也稱為CXCL13(或ANGIE、BLC、BLR1L、 ANGIE2或Scybl3)，在次級淋巴器官（如脾、淋巴結和派爾斑）中由濾泡型樹突細胞（FDC) 和巨細胞組成型表達。參見Gunn等，Nature391:799-803(1998)和Carlsen等，Blood 104(10):3021-3027(2004)。CXCL13主要通過G蛋白偶聯CXCR5受體（伯基特淋巴瘤 受體1)作用。例如在成熟的B淋巴細胞、⑶4+濾泡型輔助T細胞（Thf?細胞）、小部分 CD8+T細胞和活化的扁桃體調節性T細胞（Treg)上表達CXCR5。參見Legler等，J.Exp. Med. 187:655-660(1998);F6rster等，Blood84:830-840(1994);Fazilleau等，Immunity 30:324-335(2009);Ansel等，J.Exp.Med. 190:1123-1134(1999);Lim等，J.Clin. Invest. 114 (11): 1640-1649 (2004);和R.Fdrster，ChapterinAcademicPressCytokine Reference，2000年8月；上述各文獻都通過引用全文納入本文。CXCL13也可通過另一個 趨化因子受體CXCR3傳遞信號，其由例如中等至大血管的活化T細胞、自然殺傷（NK)細 胞、樹突細胞和內皮細胞表達（Jenh等，Cytokine15:113-121 (2001) ;Garcia_L6pez等， LaboratoryInvestigation81:409-418(2001)，上述各文獻都通過引用全文納入本文。）。
[0087] 本文所用的術語"CXCL13"和"CXCL13多肽"可互換使用。在某些實施方式中， CXCL13可包括全長CXCL13或其片段，或者CXCL13變體多肽，其中CXCL13的片段或CXCL13 變體多肽保持全長CXCL13的一些或全部功能特性。人CXCL13多肽和多核苷酸序列（分別 為SEQIDNO: 1 和 2)已有描述，參見例如Legler等，J.Exp.Med. 187 (4): 655-660 (1998)。 小鼠CXCL13多肽和多核苷酸序列（分別為SEQIDNO: 3和4)已有描述，參見例如Gunn等， Nature391(6669):799-803(1998)。另外，描述了短尾猴CXCL13 多肽序列，如SEQIDN0:5 所示。
[0088] 本文所用的術語"CXCR5"和"CXCR5多肽"可互換使用。在某些實施方式中，CXCR5 可包括全長CXCR5或其片段，或者CXCR5變體多肽，其中CXCR5的片段或CXCR5變體多肽 保持全長CXCR5的一些或全部功能特性。術語"CXCR5"和"CXCR5多肽"還包括可溶形式CXCR5。本文所用術語"可溶形式CXCR5"是不結合質膜的CXCR5形式。全長CXCR5是7次 跨膜受體。因此，可溶形式CXCR5的非限制性示例包括基本由胞外結構域組成的CXCR5片 段（例如約開始的60個氨基酸）。人CXCR5多核苷酸和多肽序列是本領域已知的且在本文 中分別作為SEQIDNO:6和7提供。鼠CXCR5多核苷酸和多肽序列是本領域已知的且在本 文中分別作為SEQIDNO:8和9提供。
[0089] 本文所用的術語"CXCR3"和"CXCR3多肽"可互換使用。在某些實施方式中，CXCR3 可包括全長CXCR3或其片段，或者CXCR3變體多肽，其中CXCR3的片段或CXCR3變體多肽 保持全長CXCR3的一些或全部功能特性。術語"CXCR3"和"CXCR3多肽"還包括可溶形式 CXCR3。本文所用術語"可溶形式CXCR3"是不結合質膜的CXCR3形式。全長CXCR3是7次 跨膜受體。因此，可溶形式CXCR3的非限制性示例包括基本由胞外結構域組成的CXCR3片 段。人CXCR3多核苷酸和多肽序列是本領域已知的且在本文中分別作為SEQIDNO: 22和 23提供，分別是人CXCR3變體1和變體3。
[0090] 如本文所示，CXCL13活性的抑制減少了干燥綜合征鼠模型中的唾液腺炎癥并導 致唾液腺中存在的B細胞數目減少。雖然不受任何理論或作用機理的限制，但認為CXCL13 涉及干燥綜合征中B細胞至唾液組織的迀移。因此，提供了通過給予需要治療的對象抑制 CXCL13活性的物質以治療炎性疾病（尤其是B細胞介導的炎性疾病，包括但不限于干燥綜 合征）的方法。
[0091] 本發明公開的方法涉及與表達CXCL13的細胞相關的炎性疾病和免疫系統缺陷或 紊亂的治療或預防。"表達CXCL13的細胞"指表達CXCL13抗原的正常和惡性細胞。本領 域熟知檢測細胞內CXCL13表達的方法，包括但不限于：PCR技術、免疫組化、流式細胞術、 Western印跡、ELISA等。
[0092] 炎性疾病的特征是炎癥和組織破壞，或其組合。"抗炎活性"指減輕或預防炎癥。 "炎性疾病"包括任何炎癥免疫介導的過程，其中免疫應答的啟動事件或靶標包括非自身抗 原，包括例如，同種抗原、異種抗原、病毒抗原、細菌抗原、未知抗原或變應原。
[0093] 在一個實施方式中，所述炎性疾病是外周或中樞神經系統的炎性疾病。
[0094] 在一些實施方式中，所述炎性疾病是B細胞介導的炎性疾病。本文所用術語"B細 胞介導的炎性疾病"是本文所述的炎性疾病，其中疾病的發病、發展或發病和發展都主要依 賴B細胞的活性。B細胞介導的炎性疾病的非限制性示例包括以產生自身抗體為特征的那 些疾病。
[0095] "B細胞"是在骨髓中成熟的淋巴細胞，且包括初始B細胞、記憶B細胞或效應B細 胞（漿細胞）。本文中的B細胞可以是正常或非惡性B細胞。
[0096] 本文中"B細胞表面標記"或"B細胞表面抗原"是在可使用與之結合的拮抗劑靶 向的B細胞表面表達的抗原。示例性B細胞表面標記包括，例如，⑶10、⑶19、⑶20、⑶21、 CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、 CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85 和CD86,和CXCR5。與哺乳動物的其他非B細 胞組織相比，特別感興趣的B細胞表面標記優選在B細胞上表達且可在前體B細胞和成熟 B細胞上表達。本文中優選的B細胞表面標記是CD19和CXCR5。出于本發明的目的，術語 "炎性疾病"包括但不限于"自身免疫疾病"。本文所用的術語"自身免疫疾病"通常理解為 包括涉及"自身"抗原的炎癥免疫介導的過程。在自身免疫疾病中，自身抗原引發宿主免疫 應答。
[0097] 在一個實施方式中，使用本發明的抗CXCL13結合分子（如抗體或抗原結合片段） 治療或預防干燥綜合征。
[0098] 本文中所用"干燥綜合征"也稱為西卡綜合征（Siccasyndrome)，是一種自身免 疫疾病或紊亂，其中免疫細胞攻擊產生淚和唾液的腺體。該疾病的標志性癥狀是口腔干燥 和眼睛干燥。此外，干燥綜合征可導致皮膚、鼻和陰道干燥，并可影響身體的其他器官，包括 腎、血管、肺、肝、胰腺和大腦。干燥綜合征可以原發性疾病（"原發性干燥綜合征"）或繼發 性疾病（"繼發性干燥綜合征"）的形式存在，所述繼發性疾病與其他自身免疫疾病相關和 /或是其他自身免疫疾病繼發的，所述其他自身免疫疾病包括類風濕性疾病（如類風濕性 關節炎、系統性紅斑、多肌炎、硬皮病和自身免疫肝炎）、淋巴瘤（如非霍奇金淋巴瘤）和內 分泌紊亂（如甲狀腺炎）。本文所用術語"干燥綜合征"使用時不論干燥綜合征處于何種階 段（包括原發和繼發干燥綜合征）和干燥綜合征表現出何種癥狀，前提是做出了診斷。用 于該綜合征的診斷包括下文所列的那些。它還包括具有中度-嚴重西卡癥狀且不具有全身 表現的患者，以及具有全身癥狀的患者。
[0099] 在某些實施方式中，給予需要治療的對象物質以治療以異位淋巴濾泡或生發中 心存在或者招募B細胞至受影響組織為特征的炎性疾病。在一些這類實施方式中，抑制 CXCL13活性的物質抑制異位淋巴濾泡或生發中心的形成。
[0100] 在一個實施方式中，治療包括將抑制CXCL13活性的物質（如抗CXCL13、抗CXCR5 或抗CXCR3結合分子）應用于或給予患者，或將所述物質應用于或給予從患者處分離的組 織或細胞系，其中所述患者有疾病、疾病癥狀或疾病傾向。在另一實施方式中，治療還意在 包括將包含抑制CXCL13活性的物質（如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3結合分子）的藥物 組合物應用于或給予患者，或將包含所述物質的藥物組合物應用于或給予從患者處分離的 組織或細胞系，其中所述患者有疾病、疾病癥狀或疾病傾向。
[0101] 按照本發明的方法，使用至少一種抑制CXCL13活性的物質（如抗CXCL13、抗 CXCR5或抗CXCR3結合分子）以促進對自身免疫病癥和/或炎性疾病的治療或預防的積極 治療響應。對于自身免疫病和/或炎性疾病，"積極治療響應"指與這些給予的物質的抗炎 活性、抗血管新生活性、抗凋亡活性等相關的疾病改善，和/或疾病相關癥狀的改善。也就 是說，可觀察到抗增殖作用、防止表達CXCL13細胞的進一步增殖、減輕炎癥反應（包括但不 限于炎性細胞因子、粘著分子、蛋白酶、免疫球蛋白（在攜帶CXCL13的細胞是B細胞的情 況下）、其組合等的分泌減少）、抗炎蛋白產量增加、自身反應性細胞數量減少、免疫耐受提 高、自身反應性細胞存活被抑制、凋亡減少、內皮細胞迀移減少、自發性單核細胞迀移增加、 異位淋巴濾泡數目的減少、受影響組織中存在的B細胞數目的減少、B細胞至受感染組織迀 移的減少、通過刺激CXCL13表達細胞介導的一種或多種癥狀減輕和/或降低。這種積極 治療響應不僅限于給藥途徑，可包括給予供體、供體組織（如器官灌注）、宿主、其任何組合 等。可利用篩選技術評估臨床響應，如磁共振成象（MRI)掃描、x-射線成像、計算機斷層成 像（CT)掃描、流式細胞術或熒光活化細胞分選儀（FACS)分析、組織學分析、大體病理學分 析和血液化學分析，包括但不限于可通過ELISA、RIA、色譜等檢測到的改變。除這些積極治 療響應外，接受抑制CXCL13活性的物質（如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3結合分子）治 療的對象可產生疾病相關癥狀改善的有益效果。
[0102] 本文所用術語"治療"或"處理"都指治療性處理和預防性或預防方法，其目的是 防止或減緩（緩解）、減少不期望的生理改變或病癥（如干燥綜合征的發展）的惡化或者預 防其復發。有益或所需的臨床結果包括但不限于可檢測或不可檢測地：緩解癥狀、減輕疾病 程度、疾病狀態穩定（即不惡化）、延遲或減緩疾病進展、改善或減輕疾病狀態和緩解（部分 或完全）。"治療"也可以指與不接受治療的期望存活相比延長生存期。需要治療的人包括 已經患有病癥或疾病的人，以及傾向于患有病癥或疾病的人或需預防病癥或疾病的人。
[0103] "對象"或"個體"或"動物"或"患者"或"哺乳動物"指需要診斷、預防或治療的任 何對象，特別是哺乳動物對象。哺乳動物對象包括人、家養動物、家畜和動物園動物、競技動 物或寵物，如犬、貓、豚鼠、兔、大鼠、小鼠、馬、奶牛等等。
[0104] 本文中所用短語（如"因給予抑制CXCL13活性的物質而受益的對象"和"需要治 療的動物"）包括因給予抑制CXCL13活性的物質（如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體） 進行治療而受益（即疾病得到緩解或預防）的對象（如哺乳動物對象）。如本文更詳細所 述，抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體可以非偶聯形式使用，或者可偶聯于例如藥物、前藥 或同位素。
[0105] 用于抑制CXCL13活性的物質包括小分子、多肽和多核苷酸。在某些實施方式中， 所述物質阻斷CXCL13與其受體的結合。在一些實施方式中，所述物質阻斷CXCL13與CXCR5 之間的相互作用。在其他實施方式中，所述物質阻斷CXCL13與CXCR3之間的相互作用。在 特定實施方式中，所述物質是特異性結合CXCL13、CXCR5或CXCR3的特異性結合分子。在一 些這類實施方式中，所述物質是抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體。在其他實施方式中， 所述物質是可溶形式CXCR5或CXCR3。
[0106] 本文所用的術語"多肽"意在包括單數形式"多肽"和復數形式"多肽"，指由酰胺 鍵（也稱肽鍵）線性連接的單體（氨基酸）所組成的分子。術語"多肽"指兩個或多個氨 基酸的任何一條鏈或多條鏈，而非具體長度的產物。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、"蛋白質"、 "氨基酸鏈"或其它任何用于指兩個或多個氨基酸的一條或多條鏈的術語均包含于"多肽" 的定義內，術語"多肽"可與任意這些術語替代或互換使用。術語"多肽"還指多肽表達后修 飾的產物，所述修飾包括但不限于糖基化、乙酰基化、磷酸化、酰胺化、通過已知保護/阻斷 基團衍生化、蛋白酶切割或非天然產生氨基酸修飾。多肽可能由天然生物來源衍生或由重 組技術產生，但不必定由指定核酸序列翻譯而來。可以任何方式產生多肽，包括化學合成。
[0107] 本文公開的方法中所用多肽的大小可以是約3個或更多個、5個或更多個、10個或 更多個、20個或更多個、25個或更多個、50個或更多個、75個或更多個、100個或更多個、200 個或更多個、500個或更多個、1，000個或更多個或者2, 000個或更多個氨基酸。多肽可具 有確定的三維結構，但它們不必定具有這種結構。具有確定三維結構的多肽稱為折疊多肽， 不具有確定三維結構、但可采用大量不同構象的多肽稱為非折疊多肽。本文所用術語"糖蛋 白"指偶聯于至少一個糖部分的蛋白質，所述糖部分通過某些氨基酸殘基，如絲氨酸殘基或 天冬酰胺殘基的含氧或含氮側鏈連接于蛋白質。
[0108] "分離的"多肽或其片段、變體或衍生物指不在其天然環境中的多肽。不要求特定 的純化水平。例如，可從其自然或天然環境中移出分離多肽。就本發明目的而言，在宿主細 胞中表達的重組產生多肽和蛋白質被認為是分離的，通過任何合適技術分離、分級、或者部 分或基本上純化的天然或重組多肽也如此。
[0109] 本文公開的方法中所用多肽還包括多肽的片段、衍生物、類似物、變體及其任意組 合。提到抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體或抗體多肽時，術語"片段"、"變體"、"衍生物" 和"類似物"包括保持相應抗體或抗體多肽的至少一部分抗原結合特性的任何多肽。除本文 他處討論的具體抗體片段外，本發明多肽的片段還包括蛋白酶水解片段以及缺失片段。抗 CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體的變體包括上述片段，以及具有因氨基酸取代、缺失或插 入而改變氨基酸序列的多肽。變體可以是天然產生或非天然產生的。可使用本領域已知的 誘變技術生成非天然產生變體。變體多肽可包含保守或非保守性氨基酸取代、缺失或添加。 多肽變體在本文中也稱作"多肽類似物"。本文所用抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體或 抗體多肽的"衍生物"指具有官能性側鏈基團反應化學所衍生的一個或多個殘基的對象多 肽。"衍生物"還包括那些含有一個或多個20種標準氨基酸的天然產生氨基酸衍生物的肽。 例如，4-羥基脯氨酸可取代脯氨酸；5-羥基賴氨酸可取代賴氨酸；3-甲基組氨酸可取代組 氨酸；高絲氨酸可取代絲氨酸；且鳥氨酸可取代賴氨酸。抗CXCL13、抗CXCR5和抗CXCR3抗 體和抗體多肽的衍生物可包括經過改變以表現出參考抗體或抗體多肽上未發現的其他特 性的多肽。
[0110] 對于多肽而言，"線性序列"或"序列"是多肽中從氨基到羧基末端方向上氨基酸的 順序，在序列中彼此相鄰的殘基是多肽一級結構中的毗連殘基。
[0111] 術語"多核苷酸"包括單個核酸和多個核酸，指分離的核酸分子或構建物，例如信 使RNA(mRNA)或質粒DNA(pDNA)。多核苷酸可包含常規磷酸二酯鍵或非常規鍵（如酰胺鍵， 如肽核酸（PNA)中的酰胺鍵）。術語"核酸"指多核苷酸中存在的任何一種或多種核酸區段， 如DNA或RNA片段。"分離的"核酸或多核苷酸指從其天然環境中移出的核酸分子，DNA或 RNA。例如，就本發明目的而言，包含在載體中的編碼抗CXCL13、抗CXCR5和抗CXCR3結合分 子（如抗體或其抗原結合片段）的重組多核苷酸被認為是分離的。經分離多核苷酸的其它 例子包括保持于異源宿主細胞中的重組多核苷酸或溶液中的純化（部分或基本上純化的） 多核苷酸。經分離的RNA分子包括本發明中多核苷酸的體內或體外RNA轉錄物。本發明中 分離的多核苷酸或核酸還包括合成產生的此類分子。此外，多核苷酸或核酸可以是或可包 括調控元件，如啟動子、核糖體結合位點或轉錄終止子。
[0112] 本文所用的術語"編碼區"是由翻譯成氨基酸的密碼子組成的核酸部分。雖然"終 止密碼子"（TAG、TGA或TAA)不翻譯成氨基酸，但它可被認為是編碼區的一部分，而任何側 接序列如啟動子、核糖體結合位點、轉錄終止子、內含子等均不是編碼區的一部分。本文公 開的方法中所用兩個或多個編碼區可安置在同一多核苷酸構建物中，例如在同一載體上， 或者在分開的多核苷酸構建物中，例如在分開（不同）的載體上。而且，任何載體可包含單 個編碼區，或者可包含兩個或多個編碼區，例如，單一載體可單獨編碼免疫球蛋白重鏈可變 區和免疫球蛋白輕鏈可變區。此外，本文公開的方法中所用的載體、多核苷酸或核酸可編碼 與抗CXCL13、抗CXCR5和抗CXCR3抗體或其片段、變體或衍生物的編碼核酸融合或不融合的 異源編碼區。異源編碼區包括但不限于專用的元件或基序，如分泌信號肽或異源功能結構 域。
[0113] 在某些實施方式中，本文公開的方法中所用的多核苷酸和核酸是DNA。對DNA而 言，包含多肽編碼核酸的多核苷酸通常包含啟動子和/或其它轉錄或翻譯控制元件，這些 元件與一個或多個編碼區可操作連接。可操作地連接指，當基因產物如多肽的編碼區與一 個或多個調控序列以此方式連接時，該基因產物的表達將受到該調控序列的影響或控制。 如果啟動子功能的誘導使編碼所需基因產物的mRNA轉錄，且如果兩個DNA片段間連接的屬 性不干擾表達調控序列指導基因產物表達或不干擾轉錄DNA模板的能力，則兩個DNA片段 (如多肽編碼區及其相連的啟動子）"可操作連接"。因此，如果啟動子能夠影響核酸的轉 錄，則啟動子區域與多肽編碼核酸可操作連接。啟動子可以是僅在預定細胞中指導DNA實 質轉錄的細胞特異性啟動子。啟動子以外的其它轉錄控制元件如增強子、操縱子、阻遏物和 轉錄終止信號，能與多核苷酸可操作連接以指導細胞特異性轉錄。本文公開了合適的啟動 子和其它轉錄控制區。
[0114] 許多轉錄控制區是本領域技術人員已知的。它們包括但不限于在脊椎動物細胞 中發揮作用的轉錄控制區，例如但不限于，來自巨細胞病毒（立即早期啟動子，與內含子-A 聯用）、猿病毒40(早期啟動子）和逆轉錄病毒（如勞氏肉瘤病毒）的啟動子和增強子區 段。其它轉錄控制區包括衍生自脊椎動物基因，例如肌動蛋白、熱激蛋白、牛生長激素和兔 珠蛋白的那些，以及能夠在真核細胞中控制基因表達的其它序列。其它合適的轉錄控制 區包括組織特異性啟動子和增強子，以及淋巴因子誘導型啟動子（如干擾素或白介素誘導 的啟動子）。
[0115] 類似地，本領域普通技術人員了解各種翻譯控制元件。它們包括但不限于：核糖體 結合位點、翻譯起始和終止密碼子以及衍生自小核糖核酸病毒的元件（特別是內部核糖體 進入位點或IRES，也稱為CITE序列）。
[0116] 在其它實施方式中，本文公開的方法中所用多核苷酸是RNA，例如，采用信使 RNA(mRNA)形式。
[0117] 本文公開的方法中所用的多核苷酸和核酸編碼區可與編碼分泌或信號肽的其它 編碼區聯合，所述分泌或信號肽指導本發明多核苷酸編碼的多肽分泌。根據信號假說，哺乳 動物細胞分泌的蛋白質具有信號肽或分泌前導序列，一旦生長的蛋白質鏈向粗面內質網外 的輸出過程啟動，所述序列從成熟蛋白質上切除。本領域普通技術人員了解，脊椎動物細 胞分泌的多肽通常具有融合于所述多肽N末端的信號肽，它們從完整或"全長"多肽上切割 產生分泌或"成熟"形式的多肽。在某些實施方式中，使用天然信號肽，例如免疫球蛋白重 鏈或輕鏈信號肽，或者使用仍然能夠指導與其可操作連接的多肽分泌的該序列的功能衍生 物。或者，可采用異源哺乳動物信號肽或其功能衍生物。例如，野生型前導序列可以用人組 織纖溶酶原激活物（TPA)或小鼠葡糖醛酸糖苷酶的前導序列代替。
[0118] 本文所用的術語"表達"指基因生成生化物質如多肽的過程。該過程包括在細胞 內基因功能存在的任何表現，包括但不限于，基因敲除以及瞬時表達和穩定表達。它包括但 不限于，基因轉錄成信使RNA(mRNA)和這類mRNA翻譯成多肽。若最終期望產物是生化物 質，則表達包括產生該生化物質和任何前體。基因表達產生"基因產物"。本文所用的基因 產物可以是核酸，如基因轉錄產生的信使RNA，或由轉錄物翻譯得到的多肽。本文所述的基 因產物還包括具有轉錄后修飾的核酸，例如聚腺苷酸化，或具有翻譯后修飾的多肽，如甲基 化、糖基化、加入脂質、連接其它蛋白質亞基、經蛋白酶水解切割等。
[0119] "結合分子"或"抗原結合分子"以其最寬泛的含義使用，指特異性結合抗原決定簇 的分子。在一個實施方式中，所述結合分子特異性結合CXCL13(也稱為BCA-1)。在另一個 實施方式中，所述結合分子特異性結合CXCR5。在另一個實施方式中，所述結合分子特異性 結合CXCR3。而在另一實施方式中，本文公開的方法中所用的結合分子是抗體或其抗原結合 片段，如抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗體。在另一個實施方式中，結合分子包括抗體分 子的至少一個重鏈或輕鏈CDR。在另一個實施方式中，結合分子包括來自一種或多種抗體分 子的至少兩個CDR。在另一個實施方式中，結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少三 個CDR。在另一個實施方式中，結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少四個CDR。在 另一個實施方式中，結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少五個CDR。在另一個實施 方式中，結合分子包括來自一種或多種抗體分子的至少六個CDR。在某些實施方式中，一個 或多個CDR來自MAb5261、MAb5378、MAb5080、MAb1476 或 3D2。
[0120] 在一些實施方式中，本發明公開的方法涉及某些抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3抗 體，或其抗原結合片段、變體或衍生物。除非特別提到完整大小的抗體如天然產生的抗體， 術語"抗CXCL13抗體"、"抗CXCR5抗體"和"抗CXCR3抗體"包括完整大小的抗體以及這種 抗體的抗原結合片段、變體、類似物或衍生物，例如天然產生的抗體或免疫球蛋白分子，或 以類似于抗體分子的方式結合抗原的經工程改造的抗體分子或片段。
[0121] 本文所用的"人"或"完全人"抗體包括具有人免疫球蛋白氨基酸序列的抗體，包 括分離自人免疫球蛋白文庫或不表達內源性免疫球蛋白的一種或多種人免疫球蛋白轉基 因動物的抗體，如下文所述，例如，Kucherlapati等的美國專利號5,939,598。"人"或"完 全人"抗體也包括至少含重鏈可變區或至少重鏈和輕鏈可變區的抗體，其中所述可變區具 有人免疫球蛋白可變區的氨基酸序列。
[0122] "人"或"完全人"抗體還包括上文所述包含已知的抗CXCL13、抗CXCR5或抗CXCR3 抗體分子（如VH區和/或VL區）的變體（包括衍生物）或基本由其組成或由其組成的 "人"或"完全人"抗體，所述抗體或其片段免疫特異性結合于CXCL13、CXCR5或CXCR3多肽 或其片段或變體。可利用本領域技術人員已知的標準技術在編碼人抗CXCL13、抗CXCR5或 抗CXCR3抗體的核苷酸序列中引入突變，包括但不限于，引起氨基酸取代的定點誘變和PCR 介導的誘變。優選地，相對于參考VH區、￥此01?1、￥1^01?2、￥1^01?3、￥1區、￥10)1?1、￥10)1?2或 VIXDR3,該變體（包括衍生物）編碼少于50個氨基酸取代、少于40個氨基酸取代、少于30 個氨基酸取代、少于25個氨基酸取代、少于20個氨基酸取代、少于15個氨基酸取代、少于 10個氨基酸取代、少于5個氨基酸取代、少于4個氨基酸取代、少于3個氨基酸取代或少于 2個氨基酸取代。
[0123] 在某些實施方式中，氨基酸取代是保守性氨基酸取代，如下所詳述。或者，也可 沿所有或一部分編碼序列隨機引入突變，例如通過飽和誘變引入，可篩選所得突變體的生 物學活性以鑒定保持活性（例如，結合CXCL13、CXCR5或CXCR3多肽，例如人、鼠或人和鼠 CXCL13、CXCR5或CXCR3的能力）的突變體。"人"或"完全人"抗體的這類變體（或其衍生 物）也可稱為"優化"或"就抗原結合優化"的人或完全人抗體，包括對抗原親和性提高的 抗體。
[0124] 術語"抗體"和"免疫球蛋白"在本文中可互換使用。抗體或免疫球蛋白至少包括 重鏈可變區，通常至少包括重鏈和輕鏈的可變區。較好地理解了脊椎動物系統中的基本免 疫球蛋白結構。參見例如，Harlow等（1988)Antibodies:ALaboratoryManual(《抗體：實 驗室手冊》）（第2版；冷泉港實驗室出版社（ColdSpringHarborLaboratoryPress))。
[0125] 正如下文中更詳細討論，術語"免疫球蛋白"包括可通過生化性質區分的各種類 型多肽。本領域技術人員應理解，重鏈分為Y、U、a、S或e，其中還有一些小類（如 Y卜Y4)。該鏈的特性決定抗體"類別"分別為IgG、IgM、IgA、IgG或IgE。免疫球蛋白小 類（同種型）如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl等已被良好表征，且已知產生功能特化。根 據本文公開內容，本領域技術人員不難區分這些類別和同種型的修飾形式，因此，它們涵蓋 在本發明范圍內。所有免疫球蛋白類別明顯屬于本發明范圍，以下討論通常針對免疫球蛋 白分子的IgG類。在IgG中，標準的免疫球蛋白分子包括分子量約為23, 000道爾頓的兩條 相同輕鏈多肽和分子量為53, 000-70, 000的兩條相同重鏈多肽。這四條鏈通常在"Y"構型 中由二硫鍵連接起來，其中輕鏈從Y的口部開始托起重鏈，并延續通過可變區。
[0126] 輕鏈分類為k或A。各重鏈類可與k或A輕鏈結合。通常，通過雜交瘤、B細 胞或遺傳工程改造的宿主細胞產生免疫球蛋白時，輕鏈和重鏈互相共價結合，兩條重鏈的 "尾部"通過共價二硫鍵或非共價連接互相結合。在重鏈中，氨基酸序列從Y構型的分叉末 端的N末端走向每條鏈底部的C末端。
[0127] 輕鏈和重鏈都可以分成結構和功能同源的區域。從功能角度使用術語"恒定"和 "可變"。在這方面，應理解輕鏈（VL或VK)和重鏈（VH)部分的可變區決定抗原識別和特異 性。相反，輕鏈（CL)和重鏈（CH1、CH2或CH3)的恒定區產生重要的生物學特性，例如分泌、 跨胎盤移動、Fc受體結合、補體結合等。通常，恒定區結構域的編號越大，離抗體的抗原結 合位點或氨基末端越遠。N-末端部分是可變區，C-末端部分是恒定區；CH3和CL結構域實 際上分別包括重鏈和輕鏈的羧基末端。
[0128] 如本文所述，可變區允許抗體選擇性識別并特異性結合抗原上的表位。也就是 說，抗體的VL和VH結構域、或這些可變區內的互補決定區（⑶R)亞組組合形成確定三維 抗原結合位點的可變區。這種四聯抗體結構形成在Y的每條臂末端存在的抗原結合位 點。更具體地，所述抗原結合位點由各VH和VL鏈上的三個CDR確定。在一些情況下，例 如在衍生自羊駝種類或根據羊駝免疫球蛋白工程改造的某些免疫球蛋白分子中，完整的 免疫球蛋白分子可僅由重鏈構成而不含輕鏈。參見例如Hamers-Casterman等，Nature 363:446-448(1993)。
[0129] 在天然產生的抗體中，每個抗原結合結構域上出現的六個"互補決定區"或"CDR" 是短的非毗連氨基酸序列，隨著抗體在水性環境中確定其三維構型時，它們特別定位以形 成抗原結合結構域。抗原結合結構域中的其余氨基酸稱為"構架"區，顯示較小的分子間 差異。構架區主要采用片層構象，⑶R形成連接片層結構和某些情況下形成部分 片層結構的環。因此，構架區用于通過鏈間非共價相互作用形成為CDR提供正確方向位 置的支架。定位的CDR形成的抗原結合結構域確定了與免疫反應性抗原上的表位互補的表 面。這種互補表面促進抗體與其關聯表位的非共價結合。對于任何給定的重鏈或輕鏈可變 區，本領域普通技術人員能容易地鑒定分別包含CDR和構架區的氨基酸，因為它們已被精 確定義（見下文）。
[0130] 除非明確表述為相反的含義，否則在本領域內所使用和/或接受的某一術語有兩 種或多種定義的情況下，本文所用的術語定義應包括所有這些含義。具體示例是使用術語 "互補決定區"（"CDR"）描述在重鏈和輕鏈多肽的可變區內發現的非毗連抗原結合位點。 這一特定區域的描述可參見Kabat等（1983)美國健康和公共服務部（U.S.D印t.ofHealth andHumanServices)/'SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(具有免疫 學重要性的蛋白質序列）"以及Chothia和Lesk，J.Mol.Biol. 196:901-917 (1987)(上述文 獻通過引用全文納入本文），互相比較時所述定義包括重疊的氨基酸殘基或氨基酸殘基亞 組。盡管如此，應用任一定義指抗體或其變體的CDR均應落入本文所定義和使用的術語范 圍。合適氨基酸殘基包括上文引用的各參考文獻中定義的CDR，所述氨基酸殘基列于下表1 以作比較。包括特定CDR的準確殘基編號根據CDR的序列和大小而變化。在抗體的可變區 氨基酸序列給定的情況下，本領域技術人員可常規確定哪些殘基包含具體CDR。
[0131] 表 1.CDR 定義 1
[0132]

【權利要求】
1. 一種治療對象中干燥綜合征的方法，所述方法包括給予需要治療的對象有效量的抑 制CXCL13活性的物質。
2. 如權利要求1中所述的方法，所述物質是特異性結合CXCR5的結合分子。
3. 如權利要求1中所述的方法，所述物質是特異性結合CXCL13的結合分子。
4. 如權利要求2或3所述的方法，所述結合分子包括抗體或其抗原結合片段。
5. 如權利要求4所述的方法，所述抗體是嵌合、人或人源化的。
6. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包含 重鏈可變（VH)結構域，所述重鏈可變結構域與SEQ ID NO: 10或14中所列氨基酸序列具有 至少90%序列相同性。
7. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包含 重鏈可變（VH)結構域，除20個或更少的保守性氨基酸取代外，所述重鏈可變結構域具有與 SEQ ID NO: 10或14中所列序列相同的氨基酸序列。
8. 如權利要求6或7所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包含 具有SEQ ID NO: 14中所列序列的VH結構域。
9. 如權利要求4-8中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片 段包含輕鏈可變（VL)結構域，所述輕鏈可變結構域與SEQ ID NO: 15、19或21中所列氨基 酸序列具有至少90%序列相同性。
10. 如權利要求4-8中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或其抗原結 合片段包含輕鏈可變（VL)結構域，除20個或更少的保守性氨基酸取代外，所述輕鏈可變結 構域具有與SEQ ID NO: 15、19或21中所列序列相同的氨基酸序列。
11. 如權利要求9或10所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含具有SEQ ID NO: 19中所列序列的VL結構域。
12. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含重鏈可變（VH)結構域和輕鏈可變（VL)結構域，所述重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域 具有與選自下組的VL和VL序列具有至少90%相同性的氨基酸序列： a) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ; b) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO:21 ; c) 分別是 SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 15。
13. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含重鏈可變（VH)結構域和輕鏈可變（VL)結構域，所述重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域 各自除20個或更少的保守性氨基酸取代外，具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨基酸 序列： a) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ; b) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO:21 ; c) 分別是 SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 15。
14. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含重鏈可變（VH)結構域和輕鏈可變（VL)結構域，所述重鏈可變結構域和輕鏈可變結構域 具有與選自下組的VH和VL序列相同的氨基酸序列： a)分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO: 19 ; b) 分別是 SEQ ID NO: 14 和 SEQ ID NO:21 ; c) 分別是 SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 15。
15. 如權利要求9所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包含具 有SEQ ID NO: 14中所列序列的VH結構域和具有SEQ ID NO: 19中所列序列的VL結構域。
16. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含具有至少一種以下互補決定區（⑶R)的VH結構域： a) 與SEQ ID NO: 11具有至少90%序列相同性的CDRl ; b) 與SEQ ID NO: 12具有至少90%序列相同性的CDR2 ;以及 c) 與SEQ ID NO: 13具有至少90%序列相同性的⑶R3。
17. 如權利要求4或5所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段包 含具有至少一種以下互補決定區（⑶R)的VH結構域： a) 除兩個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 11相同的氨基酸序列的CDRl; b) 除四個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 12相同的氨基酸序列的CDR2; c) 除四個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 13相同的氨基酸序列的CDR3。
18. 如權利要求16或17所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段 包含VH結構域，所述VH結構域包含具有SEQ ID NO: 11中所列序列的⑶R1、具有SEQ ID NO: 12中所列序列的CDR2和具有SEQ ID NO: 13中所列序列的CDR3。
19. 如權利要求4、5或16-18中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或 抗原結合片段包含具有至少一種以下互補決定區（CDR)的VL結構域： a) 與SEQ ID NO: 17或20具有至少90%序列相同性的CDRl ; b) 與SEQ ID NO: 17具有至少90%序列相同性的CDR2 ;以及 c) 與SEQ ID NO: 18具有至少90%序列相同性的⑶R3。
20. 如權利要求4、5或16-18中任一項所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或 抗原結合片段包含具有至少一種以下互補決定區（CDR)的VL結構域： a) 除四個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID N0:17或20相同的氨基酸序列的 CDRl ; b) 除兩個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 17相同的氨基酸序列的CDR2 ;以 及 c) 除兩個或更少的氨基酸取代外，具有與SEQ ID NO: 18相同的氨基酸序列的⑶R3。
21. 如權利要求19或20所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段 包含VL結構域，所述VL結構域包含具有SEQ ID N0:20中所列序列的⑶R1、具有SEQ ID NO: 17中所列序列的CDR2和具有SEQ ID NO: 18中所列序列的CDR3。
22. 如權利要求4-21中任一項所述的方法，所述抗體是IgGl κ抗體。
23. 如權利要求22所述的方法，所述抗體包含VH結構域中的人IgGl恒定區和VL結構 域的所述恒定區中的人κ區。
24. 如權利要求4所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或抗原結合片段選自下 組： a) 單克隆抗體5261 ; b) 單克隆抗體5378 ; C)單克隆抗體5080 ; d) 單克隆抗體1476 ; e) 單克隆抗體3D2 ; f) a)_e)中任一項的單克隆抗體的嵌合或人源化形式； g) 與選自a)_e)的參考單克隆抗體結合相同CXCL13表位的抗體或抗原結合片段； h) 競爭性抑制選自a)-e)的參考單克隆抗體的抗體或抗原結合片段；以及 i) a)-h)中任一個的抗原結合片段。
25. 如權利要求24所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體選自單克隆抗體5261、 單克隆抗體5378、單克隆抗體5080、單克隆抗體1476和單克隆抗體3D2。
26. 如權利要求25所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體是單克隆抗體5378。
27. 如權利要求4-24中任一項所述的方法，所述抗原結合片段選自Fab、F (ab'）2、Fv和 scFv〇
28. 如權利要求1所述的方法，所述物質是可溶形式的CXCR5或CXCR3。
29. 如權利要求1-28中任一項所述的方法，所述物質抑制CXCL13與CXCL13受體的相 互作用。
30. 如權利要求29所述的方法，所述CXCL13受體是CXCR5或CXCR3。
31. 如權利要求1-30中任一項所述的方法，所述方法在所述對象中預防干燥綜合征。
32. 如權利要求1-31中任一項所述的方法，所述物質與藥學上可接受的運載體一起給 予。
33. -種治療對象中干燥綜合征的方法，包括給予需要治療的對象有效量的特異性結 合CXCL13的抗體或其抗原結合片段，所述抗體或其抗原結合片段抑制CXCL13的活性。
34. 如權利要求33所述的方法，特異性結合CXCL13的所述抗體或其抗原結合片段包含 具有SEQ ID NO: 14中所列序列的重鏈可變結構域和具有SEQ ID NO: 19中所列序列的輕鏈 可變結構域。
35. 如權利要求33所述的方法，所述抗體或其抗原結合片段抑制CXCL13與CXCR5的相 互作用。
36. 如權利要求1-35中任一項所述的方法，所述對象是動物。
37. 如權利要求36所述的方法，所述動物是哺乳動物。
38. 如權利要求37所述的方法，所述哺乳動物是人。
【文檔編號】A61P37/00GK104520323SQ201380022683
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年3月1日 優先權日:2012年3月2日
【發明者】E·S·史密斯, M·左德勒 申請人:瓦西尼斯公司