一種杏香兔耳風提取物及其提取方法、應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬于中藥提取【技術領域】，具體涉及一種杏香兔耳風提取物及其提取方法、應用。杏香兔耳風提取物為杏香兔耳風的乙酸乙酯提取物或/和甲醇提取物，采用以下方法制得：將杏香兔耳風全草粉碎，加入乙酸乙酯加熱回流提取2-3次，過濾分別合并兩次濾渣、濾液，濾液濃縮干燥得乙酸乙酯提取物；將濾渣用甲醇加熱回流提取2-3次，過濾合并兩次濾液，濾液濃縮干燥得甲醇提取物。本發明的杏香兔耳風提取物有抗氧化活性和保肝活性。
【專利說明】一種杏香兔耳風提取物及其提取方法、應用
[0001]【技術領域】
本發明屬于中藥提取【技術領域】，具體涉及一種杏香兔耳風提取物及其提取方法、應用。
[0002]【背景技術】
肝臟是體內新陳代謝的中心站，是人體最大、最重要的解毒器官，能通過糖原合成、分解、異生來維持血糖濃度，肝臟制造的膽汁酸能促進脂類的消化與吸收，合成大部分血漿蛋白；肝臟還能儲存脂溶性維生素A、D、E、K及維生素B12，能吞噬或胞飲血液中的細菌、衰老破壞的紅細胞、病毒、抗原及變性蛋白體等，使血液凈化，能解除氨的毒性和具有造血功能。而肝臟一旦受損傷常常會導致各種嚴重的肝臟疾病。
[0003]急性肝損傷是肝損傷常見的疾病之一，肝損傷是由于肝臟受到多種因素(如病毒、藥物、試劑、缺氧和免疫因素等)的入侵，從而引起的肝臟受損，導致炎癥、肝纖維化、肝硬化。另外，日常生活中，各種有害因子和物質(如病毒、藥物、乙醇、四氯化碳、缺氧和免疫因素等)都會通過胃腸道、血液循環進入肝臟代謝，可能損傷肝臟，造成細胞壞死和凋亡、炎癥、纖維化、膽汁郁積、肝硬化等病理變化，最終導致各種肝臟疾病。因此，預防和治療肝損傷是目前面臨的重大問題。
[0004]更多研究表明，中藥在抗氧化和保肝方面具有明顯的優勢。目前，市場上有多種保肝護肝的中藥制劑及保健品，但其大多數不是組方復雜就是采用經濟價值較高的中草藥如靈芝、松花粉等提取物為原料，存在著療效不顯著或藥物費用高的不足。 [0005]目前，腹腔注射CCl4誘導體內肝損傷是研究急性肝損傷最常用的典型模型。通過檢測在急性或者活動性肝病中血清中最敏感的檢測指標GOT和GPT活力及抗氧化酶SOD活力、脂質過氧化產物MDA的含量考察該藥物對肝臟的保護作用。
[0006]杏香兔耳風(Ainsliaea fragrans Champ.) 為雙子葉被子植物菊科(Asteraceae)兔兒風屬杏香兔耳風種Cl fragrans)的干燥全草。具有清熱補虛、涼血止血、利濕解毒等功效，主治虛勞骨蒸、肺癆咳血、濕熱黃疸、水腫、癰疽腫毒、跌打損傷、毒蛇咬傷等，產于臺灣、福建、浙江、安徽、江蘇、江西、湖北、四川、湖南、廣東、廣西等省區。而且杏香兔耳風分布比較廣泛，具有取材方便、價格低廉的優勢。
[0007]
【發明內容】
本發明的目的在于提供一種杏香兔耳風提取物及其提取方法、應用。
[0008]本發明采用以下技術方案:
一種杏香兔耳風提取物，為杏香兔耳風的乙酸乙酯提取物或/和甲醇提取物，采用以下方法制得:將杏香兔耳風全草粉碎，加入乙酸乙酯加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，用甲醇加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得甲醇提取物。
[0009]每I g杏香兔耳風使用乙酸乙酯或甲醇分別為8-10 mL。
[0010]回流提取時每次1-2 h。
[0011]一種杏香兔耳風提取物的提取方法，將杏香兔耳風全草粉碎，加入乙酸乙酯加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，用甲醇加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得甲醇提取物。
[0012]每I g杏香兔耳風使用乙酸乙酯或甲醇分別為8-10 mL。
[0013]回流提取時每次1-2 h。
[0014]杏香兔耳風提取物在制備預防、治療肝損傷保健品或藥物上的應用。
[0015]杏香兔耳風提取物在制備保肝保健品或藥物上的應用。
[0016]杏香兔耳風提取物在抗氧化方面的應用。
[0017]杏香兔耳風提取物可按照常規方法制成膠囊劑、顆粒劑或片劑等劑型。
[0018]為證實上述杏香兔耳風的抗氧化作用，本發明采用微量抗氧化方法，分析了杏香兔耳風乙酸乙酯提取物和甲醇提取物清除DPPH、ABTS自由基和還原Fe3+的能力。實驗結果表明，杏香兔耳風乙酸乙酯提取物和甲醇提取物均有一定清除DPPH和ABTS自由基及還原Fe3+的能力。
[0019]為證實上述杏香兔耳風的保肝作用，本發明采用了四氯化碳誘導的急性肝損傷小鼠模型，考察其保肝活性。實驗結果表明，杏香兔耳風甲醇提取物和乙酸乙酯提取物均能降低急性肝損傷小鼠血清中GPT、GOT水平和肝臟勻漿液中MDA含量，同時能顯著升高肝臟勻漿液中SOD活力，表明杏香兔耳風具有一定保肝作用。
[0020]【專利附圖】
【附圖說明】
圖1為乙酸乙酯提取物和甲醇提取物質量濃度對ABTS自由基的影響。
【具體實施方式】
[0021]實施例1
將500 g干燥杏香兔耳風全草粉碎，分別用4000mL乙酸乙酯加熱回流提取2次，依次為2 h、l h，過濾合并兩次濾液，濃縮干燥得16.3 g膏狀的杏香兔耳風乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，分別用4000 mL甲醇加熱回流提取2次，依次為2 h、l h，過濾合并兩次濾液，濃縮干燥得97.65 g膏狀杏香兔耳風甲醇提取物。
[0022]實施例2
將200 g干燥杏香兔耳風全草粉碎，分別用1800 mL乙酸乙酯加熱回流提取3次，每次均為I h，過濾合并三次濾液，濃縮干燥得6 g膏狀的杏香兔耳風乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，分別用1800 mL甲醇加熱回流提取3次，每次均為I h，過濾合并兩次濾液，濃縮干燥得36.1 g膏狀的杏香兔耳風甲醇提取物。
[0023]實施例3
將250 g干燥杏香兔耳風全草粉碎，分別用2500 mlL乙酸乙酯加熱回流提取2次，依次為2 h、2 h，過濾合并兩次濾液，濃縮干燥得9.5 g膏狀的杏香兔耳風乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，分別用2500 mL甲醇加熱回流提取2次，依次為2 h、2 h，過濾合并兩次濾液，濃縮干燥得48.25 g膏狀的杏香兔耳風甲醇提取物。
[0024]效果實驗一 杏香兔耳風提取物的體外抗氧化活性篩選試驗 試驗方法
樣品:杏香兔耳風乙酸乙酯提取物(實施例一)、杏香兔耳風甲醇提取物(實施例一)分別溶于甲醇中，配置成初始濃度均為2 mg/mL的甲醇溶液。[0025]陽性對照:BHT、BHA, PG分別溶于甲醇中，陽性對照初始濃度為I mg/mL的BHT甲醇溶液、初始濃度為0.6 mg/mL的BHA甲醇溶液、初始濃度為0.4 mg/mL的PG甲醇溶液。
[0026]對于DPPH和ABTS方法，若自由基清除率大于50%，則需要進一步稀釋樣品，使自由基清除率在50%以下，根據濃度-抑制率作圖，求出IC5tl值，對于FRAP方法，若測定的吸光度A不在標準曲線范圍內，則需要進一步稀釋樣品，再測定。
[0027](I) DPPH 法
設樣品組為?ο μ L樣品+175 μ L DPPH甲醇溶液(200 Mmol/L)，樣品作3個平行，求平均值；另設空白對照組(10 PL甲醇+175 PLDPPH甲醇溶液(200 Mmol/L));以10 μ LBHT甲醇溶液+175 μ L DPPH甲醇溶液(200 Mmol/L)、10 μ L BHA甲醇溶液+175 μ L DPPH甲醇溶液(200 Mmol/L) UO μ L PG甲醇溶液+175 μ L DPPH甲醇溶液(200 Mmol/L)為陽性對照；均避光反應20 min后,用酶標儀在515 nm處測定吸光度值。按公式(1_1)計算清除率:
7同 1? 庫^ [ (Acontrol ^sample
)/A_trol] XlOO(公式 1-1)
式中A_trol為DPPH本 身在測定波長的吸光度值，Asample為樣品對DPPH作用后的吸光度值(除去樣品自身吸收)。
[0028](2) ABTS 法
ABTS工作液的配制:將7 mmol/LTBTS水溶液與2.45 mmol/LK2S208水溶液混合后，常溫下放置12 h以上使用，使用時用甲醇溶液稀釋，并使吸光度在734 nm處為0.80±0.02。設樣品組為10 PL樣品+200 μL ABTS工作液，樣品作三個平行，求平均值；另設空白對照組(10 PL樣品+200 μL甲醇)；以10 μ LBHT甲醇溶液+200 μL ABTS工作液、10 μ L BHA甲醇溶液+200 μL ABTS工作液、10 μ L PG甲醇溶液+200 μL ABTS工作液為陽性對照；避光反應20 min后，用酶標儀在405 nm處測定吸光度值。按公式(1_2)計算自由基清除率。
[0029]清除率=[(Acontrol-Asample)/Acontrol] X 100(公式 1-2)
式中A_trol為ABTS自由基本身在測定波長的吸光度值，Asample為樣品對ABTS自由基作用后的吸光度值(除去樣品自身吸收)。
[0030](3) FRAP 方法
依照文獻(FRAP法微量模型的建立)的方法配制TPTZ工作液，將0.3 mo I/L醋酸鈉緩沖液(PH 3.6) UO mmol/L TPTZ 溶液、20 mmol/L FeCl3.6H20 溶液按體積比為 10:1:1 混合即得。樣品測定組為10 PL樣品+200 μL TPTZ工作液，每份樣品平行操作3次，取平均值。空白對照組為10 PL樣品+200 μL甲醇，以10 μ LBHT甲醇溶液+200 μL TPTZ工作液、10 μ L BHA甲醇溶液+200 μL TPTZ工作液、10 μ L PG甲醇溶液+200 μL TPTZ工作液為陽性對照，將各組溶液混勻，37°C反應40 min后用酶標儀測定595 nm處吸光度，根據Trolox標準曲線y=0.ΟΟΟδχ-Ο.0050 (r=0.9975),計算樣品的Trolox當量(即每克樣品還原Fe3+能力相當于Trolox還原Fe3+能力的微摩爾數)表示。若所測定樣品吸光度值超過線性范圍，則需要進一步稀釋樣品。
[0031]實驗結果
表1杏香兔耳風不同提取物的抗氧化活性
【權利要求】
1.一種杏香兔耳風提取物，其特征在于，為杏香兔耳風的乙酸乙酯提取物或/和甲醇提取物，采用以下方法制得:將杏香兔耳風全草粉碎，加入乙酸乙酯加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，用甲醇加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得甲醇提取物。
2.如權利要求1所述的杏香兔耳風提取物，其特征在于，每次回流提取時每Ig杏香兔耳風使用乙酸乙酯或甲醇為8-10 mL。
3.如權利要求1所述的杏香兔耳風提取物，其特征在于，回流提取時每次l_2h。
4.一種權利要求1所述杏香兔耳風提取物的提取方法，其特征在于:將杏香兔耳風全草粉碎，加入乙酸乙酯加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得乙酸乙酯提取物；將濾渣揮發干溶劑，用甲醇加熱回流提取2-3次，過濾合并濾液，濾液濃縮干燥得甲醇提取物。
5.如權利要求4所述的杏香兔耳風提取物的提取方法，其特征在于，每次回流提取時每I g杏香兔耳風使用乙酸乙酯或甲醇為8-10 mL。
6.如權利要求4所述的杏香兔耳風提取物的提取方法，其特征在于，回流提取時每次1-2 ho
7.權利要求1所述杏香兔耳風提取物在制備預防、治療肝損傷保健品或藥物上的應用。
8.權利要求1所述杏香兔耳風提取物在制備保肝保健品或藥物上的應用。
9.權利要求1所述杏香兔耳風提取物在抗氧化方面的應用。
【文檔編號】A61K36/28GK103933094SQ201410078115
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年3月5日 優先權日:2014年3月5日
【發明者】康文藝, 崔雪靖, 崔麗麗, 曹鵬然 申請人:河南大學