茜草科類型環肽用作為腫瘤轉移抑制劑和其制備方法與應用的制作方法
【專利摘要】本發明提供用茜草科類型環肽化合物RA‐V(1)及其配糖體RA‐XII(2)作為腫瘤轉移抑制劑，以其為活性成分的藥物組合物，此類化合物的制備方法及其在制備抗腫瘤轉移藥物中的應用。本發明的方法能快捷分離得到環肽，樣品損失少，成本較低，操作方便，可控性和重現性好，溶劑可以反復回收利用，適用于工業生產。
【專利說明】茜草科類型環肽用作為腫瘤轉移抑制劑和其制備方法與應
用
【技術領域】
[0001]本發明屬于藥物【技術領域】，具體地，涉及一類茜草科類型環肽用作為腫瘤轉移抑制劑，以其為有效成分的藥物組合物，其制備方法及其在制備抗腫瘤轉移藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]腫瘤是機體在各種致瘤因素下，局部組織的細胞在基因水平上失去了對其生長的正常調控，導致細胞異常增生而形成的新生物。一般將腫瘤分為良性和惡性兩大類。惡性腫瘤包括癌和肉瘤，是嚴重威脅人類生命健康的主要疾病之一。據世界衛生組織公布的統計數據，我國惡性腫瘤的發病率為299.12/10萬，城市高于農村；死亡率為184.67/10萬，農村高于城市；但無論城市還是農村，惡性腫瘤都是人類死亡的主要原因之一。因此，抗癌藥物的研究已成為本世紀新藥研發的重要方向。
[0003]腫瘤轉移是惡性腫瘤的最本質的生物學行為，表現為腫瘤細胞從原發部位遷徙至新的場所并克隆性增生的過程，是一個高選擇的系列事件動態變化的階梯式生物過程，主要包括以下幾個步驟:①原發瘤擴張性生長；②腫瘤細胞黏附，降解腫瘤細胞周圍基底膜；③穿透血管進入循環系統，隨血液到達靶部位并黏附外滲進入組織實質腫瘤細胞在繼發位點存活和生長，形成轉移灶。大多數癌癥患者死于轉移性癌而并非原發性癌。據統計，惡性腫瘤患者初次診斷時轉移率達60%，臨床上80-90%腫瘤患者因腫瘤發生轉移而死，腫瘤轉移已成為引起癌癥患者死亡的首要因素。目前，雖有一些抗腫瘤轉移藥物在臨床上應用，如阿瓦斯汀、恩度等，但毒副作用大、易產生耐藥等問題而導致治療效率降低；因此，開發抗腫瘤轉移藥物具有極為重要的現實意義。
[0004]現有技術中未見有茜草科類型環肽作為腫瘤轉移抑制劑的報道。
[0005]茜草科類型環肽的分離純化較為困難，具有一定的特點，主要是因為茜草屬的植物富含蒽醌類色素且極性分布范圍廣，很難得到純度較高的環肽類成分。在現有技術中，從茜草屬植物中分離環肽類成分已公開發表若干種方法，這些方法普遍存在樣品損失量大，溶劑成本高、可控性和重復性差等缺點，如Lee，J.E等報道，用甲醇提取茜草科茜草的根后，得甲醇浸膏，加水混懸后用氯仿萃取，氯仿部分依次用硅膠、氧化鋁、氨丙基鍵和硅膠色譜柱層析得到環肽富集部分，重結晶富集環肽，再結合各種手段對結晶或母液進行分離純化，得到一系列環肽，包括大量和微量環肽[Lee, J.E.et al.Structures of cytotoxicbicyclic hexapeptides，RA - XIX，-XX，- XXI，and - XXII，from Rubia cordifolia LTetrahedron.，2008, 64，4117 -4125]，其缺點在于樣品損失量大，過程過于復雜，分離成本高且重結晶技術可控性和重現性不好。
【發明內容】
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[0006]針對現有技術存在的上述不足之處，本發明的目的在于提供一類茜草科類型環肽化合物；提供制備該類化合物的方法，該方法能快捷分離得到環肽，樣品損失少，成本較低，操作方便，可控性和重現性好，溶劑可以反復回收利用，也適用于工業生產；本發明的目的還在于提供以茜草科類型環肽化合物為有效成分的藥物組合物；該類化合物及其組合物在制備抗腫瘤轉移藥物中的應用。
[0007]為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下技術方案:
[0008]以下述結構式所示的茜草科類型環肽RA - V(1)和RA - XII (2)或其藥理學上容許
的鹽為有效成分的腫瘤轉移抑制劑，
[0009]
【權利要求】
1.以下述結構式所示的茜草科類型環肽RA-V(I)和RA-XII(2)或其藥理學上容許的鹽為有效成分的腫瘤轉移抑制劑，
2.用權利要求1中的茜草科植物中的茜草科類型環肽RA-V(I)和RA-XII(2)作為腫瘤轉移抑制劑。
3.抗腫瘤轉移的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1所述的茜草科類型環肽或其藥理學上容許的鹽和藥學上可接受的載體。
4.權利要求1所述的茜草科類型環肽或其藥理學上容許的鹽在制備腫瘤轉移抑制劑中的應用。
5.權利要求1所述的茜草科類型環肽或其藥理學上容許的鹽在制備抗腫瘤轉移藥物中的應用。
6.制備權利要求1所述的茜草科類型環肽化合物的方法，取茜草屬植物的根莖，經干燥、粉碎后，通過甲醇回流充分提取，得甲醇浸膏；結合環肽的TLC檢測方法，利用硅膠、Sephadex LH - 20和HPLC等各種分離材料和技術進行分離純化，即得到茜草科類型環肽。
7.制備權利要求1所述的茜草科類型環肽化合物RA- V(I)和RA - XII (2)的方法，取茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)的根莖，經干燥、粉碎后，利用甲醇熱回流提取3次，每次時間為3-4小時，提取液經減壓濃縮得甲醇浸膏；甲醇浸膏經硅膠柱層析，用氯仿/甲醇(100:0，9:1，8:2，7:3，1:1，0:100)梯度洗脫，通過環肽TLC檢測方法合并各餾分得總環肽部位；以下的每一步驟都須結合環肽TLC檢測方法來進行分離純化；總環肽部位經硅膠柱層析，用70:1-8:2的氯仿/甲醇梯度洗脫，根據環肽點的不同合并為三個組分Fr.1-Fr.3 ;對Fr.1組分經硅膠柱層析，用7:3-0:1石油醚/丙酮為洗脫劑分離得到三個亞組分Fr.1 -1 - Fr.1 - 3 ;其中Fr.1-3亞組分經Sephadex LH - 20凝膠柱層析，1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑，所富集的含有環肽的部分再經硅膠柱層析，用1:1的石油醚/丙酮洗脫分離得到化合物RA-V (I) ;Fr.3組分經硅膠柱層析，10:1-8:2乙酸乙酯/甲醇進行梯度洗脫，合并得到四個亞組分Fr.4 -1 - Fr.4 - 4 ；Fr.4 - 3亞組分以1:1的氯仿/甲醇為洗脫劑直接經Sephadex LH - 20進行環肽富集；再經硅膠柱層析，95:5_0:1氯仿/甲醇梯度洗脫，合并得到三個亞組分Fr.4 - 3 -1 - Fr.4 - 3 - 3 ;利用HPLC對Fr.4 - 3 - 3亞組分進行分離，即可得到化合物RA-XII ⑵。
【文檔編號】A61K38/12GK103880929SQ201410133237
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年4月3日 優先權日:2014年4月3日
【發明者】譚寧華, 劉碧珊, 汪哲, 趙思蒙, 余嘉莉, 梁愷穎, 陳小強, 馮國培, 梁秉中 申請人:中國科學院昆明植物研究所, 香港中文大學中醫中藥研究所