去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯作為治療肺纖維化的藥物用途。化合物去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯從中藥材墨旱蓮首次中獲得并通過NMR等波譜數據確定結構，體內、外藥理實驗結果證明去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯可顯著抑制TGF-β1誘導的人胚肺成纖維細胞的增殖及其HYP含量，在口服灌胃5-30mg/kg劑量范圍內可改善博萊霉素誘導的小鼠肺纖維化模型中肺組織的炎癥及纖維化程度，影響肺組織中反映肺損傷程度的MDA含量，減少反映肺組織膠原沉積的HYP含量，降低可致肺纖維化的細胞因子TGF-β1含量等從而發揮改善肺纖維化程度的藥理作用。去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯具有作為治療或改善肺纖維化疾病的藥物新用途。
【專利說明】去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及化合物去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯作為治療肺纖維化的藥物新用途。【背景技術】
[0002]肺纖維化是一種以纖維化及肺實質重塑為特征的漸進性疾病，肺成纖維細胞過度增殖、轉分化為肌成纖維母細胞，分泌大量膠原和基質沉積是其重要特征，目前尚無有效的治療方法。博來霉素誘導肺纖維化動物模型最為常用。氣管給藥博來霉素在很短時間內引起組織炎癥及纖維化，博來霉素引起促炎癥細胞因子如IL-1，TNF-α上調，之后又增加促纖維化標記物如TGF-β 1、纖連粘蛋白、a -SMA的表達，14天達最高值。博來霉素動物模型在造模后9天開始出現纖維化癥狀，21天出現典型的纖維化癥狀[1]。
[0003]去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯為香豆草醚類物質，本發明人于2010年首次從墨旱蓮Eclipta prostrata L.中獲得。目前，未見任何關于此類物質治療肺纖維化疾病的研究報道，及在制備肺纖維疾病治療藥物中的應用[3]。有關去甲蟛蜞菊內酯的的活性主要涉及治療關節炎(專利號:200310124512.0)、治療和預防支氣管哮喘、慢性支氣管炎及肺氣腫(專利號:200510023677.8)。然而，肺纖維化和肺氣腫不是一個病，肺纖維化是一種以肺實質重塑，肺成纖維細胞過度增殖、轉分化，分泌大量膠原和基質沉積是其重要特征的慢性漸進性疾病[3]。支氣管哮喘(簡稱哮喘)、慢性支氣管炎是多種炎性細胞及細胞組分參與的氣道慢性炎性疾病；肺氣腫的發病機制尚未完全清楚，一般認為與支氣管阻塞以及蛋白酶-抗蛋白酶失衡有關。吸煙、感染和大氣污染等引起細支氣管炎癥，管腔狹窄或阻塞，吸氣時細支氣管管腔擴張，空 氣進入肺泡；呼氣時管腔縮小，空氣滯留，肺泡內壓不斷增高，導致肺泡過度膨脹甚至破裂。支氣管哮喘、慢性支氣管炎及肺氣腫的治療常選用舒張支氣管藥物如氨茶堿、β 2受體興奮劑，如有過敏或感染因素，可選用皮質激素以及抗生素如青霉素、頭孢菌素等；目前臨床上推薦使用吸入型糖皮質激素與β 2腎上腺素受體激動劑的復合制劑如舒利迭。一般治療支氣管炎、哮喘、肺氣腫的藥物，對治療肺纖維化無效或效果差，原因在于舒張支氣管的類藥物并不能最終減緩或終止肺組織中的膠原過多沉積，而膠原沉積是肺纖維化的主要特征和病因。
[0004]目前，尚未有文獻報道去甲蟛蜞菊內酯等類似物具有治療肺纖維化疾病的藥理功效及其在治療肺纖維疾病藥物中的應用。
[0005]【參考文獻】
[0006]1.Moeller A, Ask K, Warburton D, Gauldie J, Kolb M.The bleomyc inanimalmodel:a useful tool to investigate treatment options for idiopathiepulmonary fibrosis.1nt J.Biochem Cell Biol.，2008，40(3):362-82.[0007]2Zhang C F，Sun ZH, Zhang D，Zhang M.Sulphur compounds from the aerialparts of Eclipta prostrata, Biochemical Systematics and Ecology.2010,38:1253-1256[0008]3施維，張勁農Th I /Th2炎癥極化與肺氣腫和肺纖維化國際呼吸雜志.2007，27(7):551-553.[0009]本項發明預解決的問題
[0010]本項發明的目的在于發現去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯可用于治療肺纖維化疾病的醫藥新用途。
【發明內容】
[0011]本發明是關于作為醫藥品使用的去甲蟛蜞菊內酯7-硫酸酯改善肺纖維化的新醫藥用途。詳細地說，就是本發明專利是指去甲蟛蜞菊內酯7-硫酸酯具有改善肺纖維化進程的功效，體內藥理實驗結果證明去甲蟛蜞菊內酯7-硫酸酯可降低肺纖維化模型的肺組織中MDA、HYP、TGF- β I含量，在1_50 μ M范圍內抑制TGF- β I誘導的人胚肺成纖維細胞的增殖及其HYP的含量，呈現劑量依賴性，具有治療肺纖維化疾病的新醫藥用途。
[0012]有益效果[0013]1、尚未見研究報道去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯可用于肺纖維化的治療。發明人通過體內、外實驗證明去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯對于博萊霉素誘導的小鼠肺纖維化治療有很好干預作用，可用于制備治療肺纖維疾病的藥物。
[0014]具體來說:本項發明是經過體內、外藥理實驗結果證明去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯可改善博萊霉素誘導小鼠炎癥及肺纖維化程度，通過HE、Masson染色觀察肺組織病理切片、測定肺臟指數和肺組織中代表膠原含量的ΗΥΡ，代表過氧化水平的MDA，致纖維因子TGF-β I等各種指標的變化情況，體外細胞實驗考察去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯對抑制TGF- β I誘導的人胚肺成纖維細胞的增殖及其HYP含量，綜合評價去甲蟛蜞菊內酯7-硫酸酯改善模型小鼠肺纖維的藥理作用機制。2、本發明涉及實驗材料來自多種原植物，成本低；也可采用有機合成方法獲得，本物質藥理活性明確，具有廣泛的實用價值。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0015]圖1藥物對博萊霉素誘導小鼠肺纖維化模型中各組肺組織炎癥的影響(HE染色X 200)。B:對照組；Μ:模型組；Ρ:陽性藥；SH:高劑量；SM:中劑量；SL:低劑量
[0016]圖2藥物對博萊霉素誘導小鼠肺纖維化模型中各組肺組織纖維化程度的影響(Masson染色X200)。B:對照組；M:模型組；P:陽性藥；SH:高劑量；SM:中劑量；SL:低劑
量
【具體實施方式】
[0017]一、去甲蟛蜞菊內酯7-硫酸酯的制備和結構確證
[0018]墨旱蓮(Herba Ecliptae)為菊科植物鱧腸Eclipta prostrate L.的干燥地上部分，購于安徽亳州。乙醇、石油醚等試劑均為分析純。墨旱蓮干燥地上部分，以10倍于生藥體積的80%乙醇回流提取3次，每次2h，過濾，合并提取液，減壓去除乙醇，得總浸膏903g，依次石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等量萃取，正丁醇萃取物減壓濃縮后采用硅膠(150~200目)柱色譜，以氯仿-甲醇-水(5: 3: 0.1)洗脫，Sephadex LH-20色譜柱純化，經氯仿-甲醇(1:1)洗脫得化合物去甲膨蜞菊內酯-7-硫酸酯(Demethylwedelolctone-7-硫酸酯)。
[0019]波譜數據及其結構如下:棕色粉末(甲醇)；365nm下觀察顯示藍色熒光，碘顯紅色，噴霧1 % AlCl3乙醇液，紫外365nm下顯藍色熒光。ES1-MS m/z:379[Μ-Η]-，299[μ-η-80]-。1Hnmr(Dmso-C^soomHz):?ο.9i(ih,s,5-oh),6.89(ih,d, j = 2.2Hz，h-6)，
6.73 (IH, d, J = 2.2Hz, H_8)，7.24 (IH, s’ H-10)，9.36 (IH, s’ 11-OH)，9.34 (IH, s’ 12-OH)，
7.16(1H, s, H-13)和 13C 匪 R (DMS0_d6，125MHz): 158.6 (C_l)，102.2 (C_2)，154.1 (C_3)，97.9 (C-4)，154.1 (C_5)，102.7 (C_6)，156.5 (C_7)，98.8 (C_8)，157.7 (C_9)，104.5 (C-1l)，145.5 (C-l I)，144.3 (C-12)，98.8 (C-13), 113.7 (C-13)，148.9 (C-14)。
[0020]
【權利要求】
1.去甲蟛蜞菊內酯7-硫酸酯在制備抗肺纖維化藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯在治療肺纖維化疾病藥物中的應用，其特征在于去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯由如下方法獲得:墨旱蓮藥材干燥粉碎后、用80%乙醇回流提取得總提取物，減壓濃縮依次石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，正丁醇萃取物減壓濃縮干燥，通過硅膠柱色譜以氯仿-甲醇-水(5: 3: 0.1)洗脫，S^hadex LH-20色譜柱(氯仿-甲醇(1: 1))洗脫制備去甲蟛蜞菊內酯-7-硫酸酯。
【文檔編號】A61P11/00GK103919769SQ201410165166
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年4月24日 優先權日:2014年1月28日
【發明者】張朝鳳, 許翔鴻, 張勉 申請人:中國藥科大學