一種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球及其制備方法和應用，本發明以殼聚糖為載體，三聚磷酸鈉為交聯劑，通過離子交聯法，包封厚樸酚或和厚樸酚藥物，然后經過濾、透析除去溶液中未包埋的藥物和小分子物質，最后冷凍干燥即得含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球。所制備的載藥納米微球的平均粒徑為40～150nm，載藥量為74.4～283.14μg/mg，包封率為20.27～82.11％，多分散系數為0.3～0.4，Zeta電位為20～50mV。所制得的載藥納米微球粒徑均一、分散性好，有較高的抗氧化活性和抗癌活性，有效地提高了厚樸酚、和厚樸酚的水溶性、穩定性和生物利用度，在新型天然抗氧化劑和抗腫瘤制劑方面有很好的應用前景。
【專利說明】一種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥【技術領域】，涉及一種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球及其制備方 法和應用。
【背景技術】
[0002] 我國是中藥資源生物多樣性最豐富的國家。但是，我國中藥制劑劑型老化、單一， 極大的限制了中藥臨床療效的提高。充分利用現代科學技術，使中藥具有更好的現代劑型 可能是現代中藥發展的重要方向之一。納米藥物具有一些特別的性質，像靶向性、緩釋行、 可控性、低毒性等，納米中藥也具有這些相似的性質。將納米技術引入中藥的研究，開發具 有自主知識廣權的中藥新劑型，對中藥的研究是很有意義的。相關研究表明，引入納米技 術，將中藥制備成納米中藥，能有效改善藥物的穩定性、水溶性、使藥物具有緩釋效果、提高 藥物靶向性，從而提高中藥生物利用度；同時，還可豐富傳統中藥劑型和給藥途徑，解決中 藥劑型單一的問題。雖然納米技術在中醫藥領域起步較晚，但已展現出巨大的潛力及廣闊 的前景。
[0003] 厚樸（Magnolia officinalis.)是我國傳統中藥，在我國已有2000多年的藥用歷 史，而厚樸酚（magnolol)與和厚樸酚（honokiol)是木蘭科植物厚樸中的兩個主要活性成 分，屬于難溶性藥物。研究發現，厚樸酚、和厚樸酚具有良好抗炎、抗菌、抗腫瘤、肌肉松弛、 降膽固醇和抗衰老等廣泛的藥理活性，且毒副作用小，是很具有開發前途的中藥經濟作物。 但由于厚樸酚與和厚樸酚均為酚類結構，由于溶解性差在生物體內利用率很低，主要滯留 于胃腸內，95%由糞便排出，進入循環后以肝代謝和腎排泄為主。且酚類物質穩定性較差， 在潮濕、陽光、高溫等條件下極易發生氧化、聚合、縮合等反應，使其分子結構中有生物活性 的酚羥基變成醌，導致其應用受到局限。因此，采用現代科學技術將厚樸酚或和厚樸酚包裹 起來，制備成納米微球，改善其水溶性和穩定性以提高其生物利用度，成為亟需解決的一大 難題。
[0004] 殼聚糖是一種具有反應性官能團，較高的吸附能力和可生物降解性的高分子電解 質。此外，它有良好的生物相容性，在體內能被降解，降解產物能完全地被人體吸收,對生命 體無毒且有抗細菌、抗真菌和抗腫瘤的能力。這些特點使它在藥物的控制與釋放、改善藥物 的溶解性和吸收性等方面發揮重要作用。殼聚糖作為藥物緩釋載體還具有維持血藥濃度平 衡、降低藥物不良反應、提高藥物療效等優勢。因此殼聚糖是制備納米微球理想的載體。
[0005] 將難溶性藥物通過殼聚糖載體進行包裹可制得載藥的納米微球，這種微球已被證 實可提高藥物分子的溶解性和生物活性。殼聚糖載藥微球的制備方法通常有噴霧干燥法、 溶劑蒸發法、乳化-化學交聯法和離子交聯法等。乳化交聯法，溶劑蒸發法和噴霧干燥法都 會用到乳化劑，如果清洗不徹底，會影響藥物活性甚至對生物體產生副作用，且這些方法的 制備工藝比較復雜，而離子交聯法工藝簡便易行，而且不會用到有毒的有機溶劑。
[0006] 目前關于難溶性藥物的殼聚糖載藥微球的報道還不多，例如，CN102389398 A公開 了一種殼聚糖載辣椒素微球的制備方法。以殼聚糖溶液和辣椒素溶液為主要原料，通過離 子交聯法聯合噴霧干燥法制備得到，交聯劑為三聚磷酸鈉，得到的微球粒徑分布在0. 8? 4. 5 μ moCN 102641245 A公開了一種裝載紫杉醇等難溶性藥物的殼聚糖-殼聚糖衍生物納 米球制備方法，先將難溶性藥物溶于有機溶劑，然后與殼聚糖溶液、乳化劑在一定壓力的條 件下先制備成初乳再制備成0/W/0型復乳液，多次過微孔濾膜再加入戊二醛或甲醛等交聯 齊U，最后固化得到產物。CN 102349871 B公開了一種制備難溶性藥物10-羥基喜樹堿載藥 納米微球的方法，先在較高壓力下通過反復壓過微孔膜制備含藥乳滴，再通過兩步較長時 間交聯固化得到粒徑在300nm?2 μ m之間的載藥納米微球。這些殼聚糖載藥微球的制備 方法步驟復雜，反應條件較苛刻，有些方法使用了有毒溶劑，并且所得到的載藥微球粒徑均 偏大，分布較廣。
【發明內容】
[0007] 本發明所要解決的技術問題是針對現有技術中存在的上述不足，提供一種粒徑較 小、分散良好的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球及其制備方法和應用。
[0008] 本發明為解決上述提出的問題所采用的技術方案為：
[0009] -種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球，該納米微球為殼聚糖與三聚磷酸鈉交聯 形成的三維網狀結構，厚樸酚或和厚樸酚以分子形式固定其中，厚樸酚或和厚樸酚的包封 率為20. 27?82. 11 %，納米微球的平均粒徑為40?150nm，納米微球粒徑的多分散系數 (PDI)為 0· 3 ?0· 4,載藥量為 74. 4 ?283. 14 μ g/mg，Zeta 電位為 20 ?50mV。
[0010] 本發明還提供了上述含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，步驟如下：
[0011] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖溶于含有濃度為〇. 〇1?〇. 〇5mg/mL的泊洛沙姆 188和體積濃度為1. 0?1. 5%醋酸的溶劑中，所述的溶劑為水或水與乙醇的混合物，其中 乙醇體積含量不超過50%，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為1. 0?3. Omg/mL的溶液，然 后用堿液調節pH值為3. 5?4. 5,即得殼聚糖溶液；
[0012] (2)厚樸酚或和厚樸酚溶液的配制：將厚樸酚或和厚樸酚溶于無水乙醇中，配制 厚樸酚或和厚樸酚濃度為1. 〇?10. 〇mg/mL的乙醇溶液，然后過濾得到厚樸酚或和厚樸酚 溶液；
[0013] (3)含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備：將步驟（2)所得厚樸酚或和厚樸酚 溶液逐滴加入步驟（1)所得殼聚糖溶液中，并逐滴加入1. 〇?2. Omg/mL的三聚磷酸鈉水 溶液，其中厚樸酚或和厚樸酚溶液、殼聚糖溶液及三聚磷酸鈉水溶液的體積比為1:5:2,在 30?40°C持續攪拌反應10?60min，所得微乳液靜置陳化10?15h，再后處理即得含厚樸 酚或和厚樸酚的納米微球。
[0014] 按上述方案，步驟（1)所述殼聚糖脫乙酰度為82?97%，分子量為10?50萬。
[0015] 按上述方案，步驟（1)所述堿液為濃度lmol/L的NaOH溶液。
[0016] 按上述方案，步驟（1)和步驟（2)所述過濾為采用孔徑為0.45 μ m的微孔濾膜過 濾。
[0017] 按上述方案，步驟（3)所述攪拌速率為800?1600r/min，優選攪拌速率為1200r/ min〇
[0018] 優選的是，步驟（3)所述三聚磷酸鈉水溶液濃度為1. 2mg/mL。
[0019] 按上述方案，步驟（3)所述后處理包括過濾、透析、真空冷凍干燥。
[0020] 本發明還提供了上述含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的應用，具體為在制備抗氧 化劑方面的應用，及在制備人肝癌細胞抑制劑方面的應用。
[0021] 本發明的有益效果在于：1、本發明以殼聚糖為載體，三聚磷酸鈉為交聯劑，泊洛沙 姆188為穩定劑，采用離子交聯法制備含厚樸酚或和厚樸酚的載藥納米微球，改善其水溶 性差，吸收較差的問題，以提高其生物利用度。2、將厚樸酚與和厚樸酚制備成納米微球，改 善了藥物的水溶性，增強了藥物的穩定性，提高了藥物的生物利用度，為開發治療和預防由 體內氧化反應引起的心腦血管、糖尿病、癌癥等疾病的新制劑提供了新途徑，并對開發中藥 新劑型和實現中藥現代化具有積極促進作用。3、本發明所提供的制備方法操作簡單，條件 溫和，重復性好，制得的納米微球粒徑均一、分散穩定，且納米微球中的藥物以分子形式存 在其中，解決了現有制備技術中存在的有毒物質殘留和載藥微球粒徑偏大、粒度分布廣、生 物活性低的問題，可實現難溶藥物溶解度的增加和生物利用度的提高，并有效提高了難溶 藥物的包封率，可實現藥物的控釋緩釋，有望在大規模中藥納米微球的制備上得到應用。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022] 圖1為本發明實施例1所制備的含厚樸酚的納米微球的原子力顯微鏡（AFM)圖；
[0023] 圖2為實施例2所制備的含厚樸酚的納米微球的AFM圖；
[0024] 圖3為實施例4所制備的含和厚樸酚的納米微球的AFM圖；
[0025] 圖4為實施例5所制備的含和厚樸酚的納米微球的AFM圖；
[0026] 圖5是實施例2和5所制備的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球清除自由基活性 圖；
[0027] 圖6是實施例2和5所制備的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球對人肝癌細胞 0fepG2)存活率關系圖；
[0028] 圖7是施例5所制備的含和厚樸酚的納米微球的釋放曲線圖。
【具體實施方式】
[0029] 為使本領域技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合附圖對本發明作進 一步詳細描述。
[0030] 實施例1
[0031] 本實施例含厚樸酚的納米微球的制備方法如下：
[0032] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖（脫乙酰度82%，分子量50萬）溶于含有 0.01mg/mL泊洛沙姆188和1.0% (V/V)醋酸的溶劑中，溶劑為含50% (V/V)乙醇的水溶 液，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為1. 5mg/mL的溶液，然后用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾 膜過濾，所得濾液經濃度為lmol/L的NaOH溶液調節pH值為4. 5,得到殼聚糖溶液；
[0033] (2)厚樸酚溶液的配制：將厚樸酚溶于無水乙醇中配成濃度為1. Omg/mL的厚樸酚 乙醇溶液，采用孔徑為〇. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得到厚樸酚溶液；
[0034] (3)含厚樸酚的納米微球的制備：將lmL步驟⑵所得厚樸酚溶液緩慢加入5mL步 驟（1)所得殼聚糖溶液中，充分攪拌（攪拌速率為800r/min)，并逐滴加入2mL 1. 0mg/mL的 三聚磷酸鈉水溶液，在40°C持續攪拌反應30min，所得微乳液靜置10h，采用中速定量濾紙 抽濾，再將濾液放入8000?14000截留分子量的透析袋中并在室溫下于超純水中透析3h ; 將透析后的微乳液倒入培養皿中，在_20°C預凍12h，然后在-50°C真空冷凍干燥24h，即得 含厚樸酚的納米微球。
[0035] 本實施例所制備的納米微球平均粒徑約為40nm，載藥量為74. 4 μ g/mg，包封率為 78. 12%。
[0036] 附圖1為采用美國Veeco公司MultiMode?型原子力顯微鏡所觀察到的本實施例 所得含厚樸酚的納米微球的原子力顯微鏡（AFM)圖。由AFM圖可以看出，制備得到的納米 微球球形規則，粒徑均一，分散良好，微球平均粒徑約為40nm。
[0037] 實施例2
[0038] 本實施例含厚樸酚的納米微球的制備方法如下：
[0039] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖（脫乙酰度97%，分子量10萬）溶于含有 0.03mg/mL泊洛沙姆188和1.0% (V/V)醋酸的溶劑中，溶劑為含20% (V/V)乙醇的水溶 液，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為1. 〇mg/mL的溶液，然后用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾 膜過濾，所得濾液經濃度為lmol/L的NaOH溶液調節pH值為4. 0,得到殼聚糖溶液；
[0040] (2)厚樸酚溶液的配制：將厚樸酚溶于無水乙醇中配成濃度為5. 0mg/mL的厚樸酚 乙醇溶液，采用孔徑為〇. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得到厚樸酚溶液；
[0041] (3)含厚樸酚的納米微球的制備：將lmL步驟（2)所得厚樸酚溶液緩慢加入5mL步 驟⑴所得殼聚糖溶液中，充分攪拌（攪拌速率為1200r/min)，并逐滴加入2mL 1. 2mg/mL 的三聚磷酸鈉水溶液，在30°C持續攪拌反應60min，所得微乳液采用與實施例1相同的方法 后處理得含厚樸酚的納米微球。
[0042] 本實施例所制備的納米微球平均粒徑約為120nm，載藥量為81. 73 μ g/mg，包封率 為 20. 27%。
[0043] 附圖2是本實施例所制備的含厚樸酚的納米微球的AFM圖。由AFM圖可以看出， 制備得到的載藥微球球形規則，粒徑均一，分散良好，微球平均粒徑約為120nm。
[0044] 實施例3
[0045] 本實施例含厚樸酚的納米微球的制備方法如下：
[0046] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖（脫乙酰度90%，分子量30萬）溶于含有 0.02mg/mL泊洛沙姆188和1.5% (V/V)醋酸的溶劑中，溶劑為含30% (V/V)乙醇的水溶 液，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為2. 0mg/mL的溶液，然后用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾 膜過濾，所得濾液經濃度為lmol/L的NaOH溶液調節pH值為4. 0,得到殼聚糖溶液；
[0047] (2)厚樸酚溶液的配制：將厚樸酚溶于無水乙醇中配成濃度為7. 0mg/mL的厚樸酚 乙醇溶液，采用孔徑為〇. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得到厚樸酚溶液；
[0048] (3)含厚樸酚的納米微球的制備：將lmL步驟（2)所得厚樸酚溶液緩慢加入5mL步 驟（1)所得殼聚糖溶液中，充分攪拌（攪拌速率為l〇〇〇r/min)，并逐滴加入2mL 1. 5mg/mL 的三聚磷酸鈉水溶液，在35°C持續攪拌反應30min，所得微乳液采用與實施例1相同的方法 后處理得含厚樸酚的納米微球。
[0049] 本實施例所制備的納米微球平均粒徑約為140nm，載藥量為115. 42 μ g/mg，包封 率為 32. 98%。
[0050] 實施例4
[0051] 本實施例含和厚樸酚的納米微球的制備方法如下：
[0052] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖（脫乙酰度82%，分子量50萬）溶于含有 0. 05mg/mL泊洛沙姆188和1. 5% (V/V)醋酸的水中，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為 3. Omg/mL的溶液，然后用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，所得濾液經濃度為lmol/L的 NaOH溶液調節pH值為3. 5,得到殼聚糖溶液；
[0053] (2)和厚樸酚溶液的配制：將和厚樸酚溶于無水乙醇中配成濃度為10. Omg/mL的 和厚樸酚乙醇溶液，采用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得到厚樸酚溶液；
[0054] (3)含和厚樸酚的納米微球的制備：將lmL步驟⑵所得和厚樸酚溶液緩慢加入 5mL步驟（1)所得殼聚糖溶液中，充分攪拌（攪拌速率為1600r/min)，并逐滴加入2mL 2mg/ mL的三聚磷酸鈉水溶液，在35°C持續攪拌反應lOmin，所得微乳液采用與實施例1相同的方 法后處理得含和厚樸酚的納米微球。
[0055] 本實施例所制備的納米微球平均粒徑約為150nm，載藥量為283. 14 μ g/mg，包封 率為 82. 11%。
[0056] 附圖3是本實施例所制備的含和厚樸酚的納米微球的AFM圖。由AFM圖可以看出， 納米微球球形較規則，粒徑均一，分散良好，微球的平均粒徑約為150nm。
[0057] 實施例5
[0058] 本實施例含和厚樸酚的納米微球的制備方法如下：
[0059] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖（脫乙酰度97%，分子量10萬）溶于含有 0. 03.g/mL泊洛沙姆188和1.0% (V/V)醋酸的溶劑中，溶劑為含20% (V/V)乙醇的水溶 液，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為1. 〇mg/mL的溶液，然后用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾 膜過濾，所得濾液經濃度為lmol/L的NaOH溶液調節pH值為4. 0,得到殼聚糖溶液；
[0060] (2)和厚樸酚溶液的配制：將和厚樸酚溶于無水乙醇中配成濃度為5. Omg/mL的和 厚樸酚乙醇溶液，采用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得到厚樸酚溶液；
[0061] (3)含和厚樸酚的納米微球的制備：將lmL步驟（2)所得和厚樸酚溶液緩慢加 入5mL步驟（1)所得殼聚糖溶液中，充分攪拌（攪拌速率為1200r/min)，并逐滴加入2mL 1. 2mg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，在30°C持續攪拌反應60min，所得微乳液采用與實施例1相 同的方法后處理得含和厚樸酚的納米微球。
[0062] 本實施例所制備的納米微球平均粒徑約為130nm，載藥量為240. 64 μ g/mg，包封 率為 59. 68%。
[0063] 附圖4是本實施例所制備的含和厚樸酚的納米微球的AFM圖。由AFM圖可以看出， 納米微球球形較規則，粒徑均一，分散良好，微球的平均粒徑約為130nm。
[0064] 實施例6
[0065] 本實施例含和厚樸酚的納米微球的制備方法如下：
[0066] (1)殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖（脫乙酰度90%，分子量30萬）溶于含有 0. 04mg/mL泊洛沙姆188和1. 2% (V/V)醋酸的水中，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為 2. Omg/mL的溶液，然后用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，所得濾液經濃度為lmol/L的 NaOH溶液調節pH值為4. 0,得到殼聚糖溶液；
[0067] (2)和厚樸酚溶液的配制：將和厚樸酚溶于無水乙醇中配成濃度為8. Omg/mL的和 厚樸酚乙醇溶液，采用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，得到厚樸酚溶液；
[0068] (3)含和厚樸酚的納米微球的制備：將lmL步驟（2)所得和厚樸酚溶液緩慢加入 5mL步驟（1)所得殼聚糖溶液中，充分攪拌（攪拌速率為1000r/min)，并逐滴加入2mL 2mg/ mL的三聚磷酸鈉水溶液，在35°C持續攪拌反應60min，所得微乳液采用與實施例1相同的方 法后處理得含和厚樸酚的納米微球。
[0069] 本實施例所制備的納米微球平均粒徑約為80nm，載藥量為252. 87 μ g/mg，包封率 為 69. 54%。
[0070] 實施例7
[0071] 含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球抗氧化活性測試：
[0072] 將二苯代苦味酰基自由基（DPPH)用無水乙醇配置成lmmol/L的工作液，實施例1、 實施例2和實施例3制備的載藥納米微球都用無水乙醇配成濃度為0,0. 5, l，2,4,8mg/mL 待用。實驗時按順序依次加入3. 5mL無水乙醇，400 μ L DPPH ·溶液和100 μ L不同濃度樣 品溶液混合均勻，37°C于暗處振蕩反應lh ;3000r/min離心5min，去上清液，使用紫外可見 分光光度計測其在517nm處的吸光值，以無水乙醇調零。實施例1作為對照組，結果表示為 樣品對DPPH ·自由基的清除率（％ ) = (A。一 Α^/ΧΧ 100% (A。為未加樣品的吸光值，Ai 為加入樣品的吸光值）。實驗均重復三次，取平均值。
[0073] 附圖5是實施例2、5所制備的納米微球清除自由基活性圖。結果表明，含厚樸酚 或和厚樸酚的納米微球均有較好的清除自由基的能力，且起清除作用的是游離的羥基。載 藥量越高，清除自由基活性越強。
[0074] 實施例8
[0075] 含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球對人肝癌細胞（HepG2)的細胞毒性測試：
[0076] 將實施例2、5制備的納米微球用二甲亞砜（DMS0)超聲分散，然后用DMEM高糖型 培養液稀釋為lmg/mL溶液，現配現用；厚樸酚用DMS0溶解后用高糖型DMEM稀釋至80 μ g/ mL ;和厚樸酚用DMS0溶解后用高糖型DMEM稀釋至240 μ g/mL ;所有溶液中DMS0的含量均 為2. 5 %。收集對數期HepG2細胞，以1 X 105個/mL接種至96孔板中，每孔接種100 μ L ;細 胞培養至對數生長期，4、8、16、32、641117孔加入載藥納米微球溶液與（和）厚樸酚溶液，每 個濃度5孔，每孔最終體積為200 μ L，連續培養48h后，每孔避光加入20 μ L MTT (5mg/mL) 溶液，37°C培養4h ;棄去孔內培養液，每孔加入100μ L DMS0,37°C恒溫低速振蕩30min，使 用酶標儀在490nm處檢測吸光值。結果表示為細胞存活率（％) = (Ai/A^XlOO% (A。為 對照孔的吸光值A為加藥孔的吸光值）。對比載藥納米微球和裸藥對Η印G2細胞生長的 抑制作用。所用濃度為微球的濃度，裸藥與微球中所含藥物濃度一致。
[0077] 附圖6是實施例2、5所制備納米微球及（和）厚樸酚對人肝癌細胞（HepG2)存活 率的影響圖。由圖可知，所制備載藥納米微球能有效抑制Η印G2細胞的生長，且實施例2、4 的載藥納米微球對Η印G2細胞的細胞毒性均優于裸藥。
[0078] 實施例9
[0079] 含和厚樸酚的納米微球的釋放曲線：
[0080] 稱取5mg含和厚樸酚的納米微球于透析袋中，透析袋內加入10mL釋放介質，放入 含有100mL釋放介質的燒杯中，于37°C、150r/min震蕩，每隔一段時間取出2mL釋放介質， 補充2mL釋放介質。取出的釋放介質測其在294nm的紫外吸收值，對比標準曲線，計算釋放 量，作釋放曲線。釋放介質為pH = 1. 2的HC1和pH = 7. 4的磷酸緩沖鹽（PBS)溶液。
[0081] 附圖7是實施例5所制備的含和厚樸酚的納米微球于pH = 1. 2的HC1和pH = 7. 4的磷酸緩沖鹽（PBS)溶液中的釋放曲線。由圖可知，所制備的載藥納米微球在酸性環境 下48小時后釋放達到80%，在中性環境下48小時后釋放達到95%，具有緩釋效果。
[0082] 實施例10
[0083] 含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的動態光散射（DLS)和Zeta電位測試，采用英國 Malvern儀器公司的Zetasizer Nano儀器，用來說明微球在溶液中的尺寸、多分散性和穩 定性。
[0084] 表1是實施例1、2、4、5所制備的載藥納米微球DLS和Zeta電位表征。
[0085] 表 1
【權利要求】
1. 一種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球，其特征在于：該納米微球為殼聚糖與三聚磷 酸鈉交聯形成的三維網狀結構，厚樸酚或和厚樸酚以分子形式固定其中，厚樸酚或和厚樸 酚的包封率為20. 27?82. 11 %，納米微球的平均粒徑為40?150nm，納米微球粒徑的多分 散系數為〇· 3?0· 4,載藥量為74. 4?283. 14 μ g/mg，Zeta電位為20?50mV。
2. -種含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，其特征在于步驟如下： (1) 殼聚糖溶液的配制：將殼聚糖溶于含有濃度為〇. 01?〇. 〇5mg/mL的泊洛沙姆188 和體積濃度為1. 〇?1. 5%醋酸的溶劑中，所述的溶劑為水或水與乙醇的混合物，其中乙醇 體積含量不超過50%，攪拌溶解、過濾，配成殼聚糖濃度為1. 0?3. Omg/mL的溶液，然后用 堿液調節pH值為3. 5?4. 5,即得殼聚糖溶液； (2) 厚樸酚或和厚樸酚溶液的配制：將厚樸酚或和厚樸酚溶于無水乙醇中，配制厚樸 酚或和厚樸酚濃度為1. 〇?10. Omg/mL的乙醇溶液，然后過濾得到厚樸酚或和厚樸酚溶 液； (3) 含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備：將步驟（2)所得厚樸酚或和厚樸酚溶 液逐滴加入步驟（1)所得殼聚糖溶液中，充分攪拌，并逐滴加入1. 〇?2. Omg/mL的三聚 磷酸鈉水溶液，其中厚樸酚或和厚樸酚溶液、殼聚糖溶液及三聚磷酸鈉水溶液的體積比為 1:5:2,在30?40°C持續攪拌反應10?60min，所得微乳液靜置陳化10?15h，再后處理即 得含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球。
3. 根據權利要求2所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，其特征在于步 驟⑴所述殼聚糖脫乙酰度為82?97%，分子量為10?50萬。
4. 根據權利要求2所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，其特征在于步 驟（1)所述堿液為濃度lmol/L的NaOH溶液。
5. 根據權利要求2所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，其特征在于步 驟（1)和步驟（2)所述過濾為采用孔徑為0. 45 μ m的微孔濾膜過濾。
6. 根據權利要求2所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，其特征在于步 驟（3)所述攪拌速率為800?1600r/min。
7. 根據權利要求2所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球的制備方法，其特征在于步 驟（3)所述后處理包括過濾、透析、真空冷凍干燥。
8. -種權利要求1所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球在制備抗氧化劑方面的應 用。
9. 一種權利要求1所述的含厚樸酚或和厚樸酚的納米微球在制備人肝癌細胞抑制劑 方面的應用。
【文檔編號】A61K31/05GK104095817SQ201410350015
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月22日 優先權日:2014年7月22日
【發明者】陳嶸, 王雅萍, 楊浩, 呂中 申請人:武漢工程大學