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草藥組合物phy906及其在化學治療中的應用的制作方法

文檔序號:1317110閱讀:2152來源:國知局
草藥組合物phy906及其在化學治療中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及草藥組合物PHY906及其在化學治療中的應用。具體而言,本發明提供草藥制劑與化學治療制劑組合用于制備治療哺乳動物中的癌癥的藥物的用途以及藥物組合。
【專利說明】草藥組合物PHY906及其在化學治療中的應用
[0001]本申請是2005年11月9日提交的發明名稱為“草藥組合物PHY906及其在化學治療中的應用”的中國專利申請200580046187.8的分案申請。
[0002]相關申請
[0003]本申請要求2005年4月7日提交的美國申請11/100,433和2004年11月9日提交的美國臨時申請60/625,943的利益,這些申請被全文引入本文作為參考。
[0004]本申請涉及2002年12月30日提交的美國申請10/220,876,其為2001年3月8日提交的國際申請PCT/US01/07353的國家階段,PCT/US01/07353是2000年3月9日提交的現已放棄的美國申請09/522,055的部分繼續申請,所有這些申請均被全文引入本文作為參考。
發明領域
[0005]本發明涉及用于提高藥物治療指數的草藥組合物和草藥提取物,所述藥物包括那些用于治療疾病,尤其是治療病毒感染和癌瘤的藥物。本發明的方法能用于改善正經歷化學治療的個體的生活質量。具體地,本發明涉及通過用草藥組合物PHY906來提高化學治療藥物的治療指數以治療疾病。更具體地,本發明涉及通過用草藥組合物PHY906提高癌癥化學治療藥物的治療指數以治療癌癥。
[0006]發明背景
[0007]本文中的所有公開和專利申請均被弓丨入作為參考,就如同特別和分別指出的將各公開或專利申請引入作為參考的程度相同。
[0008]草藥
[0009]亞洲和歐洲人已經使用草藥達幾百年。在美國(US),草藥在食物增補劑工業以及全身治療的藥物中已變得有商業價值。大約三分之一的美國人口已經至少嘗試過一次一些形式的替代藥物(Eisenberg 等人,N.Engl.J.Med., 328:246-252 (1993))。植物藥也已成為鑒定治療疾病的新型活性劑的焦點。來自植物提取物的活性化合物受到制藥工業的持續關注。例如:已經發現獲自短葉紫杉樹樹皮的抗腫瘤藥物紫杉醇可用于治療乳腺癌(Gomez-Espuch 等人,Bone Marrow Transplant, 25 (3):231-235 (2000))。
[0010]在全世界存在許多草藥分支,例如印度醫藥(Ayurveda medicine)、尤納里醫藥(Unani medicine)、Sida醫藥和中藥(TCM)。盡管現代西藥典型地由給藥能夠介入特定生化途徑的單一化學實體組成,但每種TCM處方均包含來自幾種草藥的數百種化學實體,它們被設計為以協調的方式與體內的多種靶相互作用。雖然實踐經驗明顯促成了草藥組合物和這些古老的草藥處方,但是它們也不同程度地受到一套理論的支持,這些理論在解剖學、藥理學、病理學、診斷治療等方面均不同于現代西醫的理論。在不同的草藥領域中,TCM已經在數百年間發展出了一套更完整的理論,該理論已經由當地醫師進行了充分記錄和實踐,治療大中國和包括韓國與日本在內的東亞的龐大人口(>13億人)。
[0011]中藥
[0012]西藥通常使用天然或合成的純化的化合物,大部分定向于單一的生理學靶。然而,TCM中所用的組合物通常由多種草藥和化合物組成,它們基于獨特的和整體的概念定向于體內多種靶。TCM主要以不同組合和制劑使用經加工的粗天然產物來處理不同的結構,從而導致更少的副作用。TCM的巨大潛力還未被世界上大多數人認識到。
[0013]植物提取物的混合物而非單一化合物正在世界范圍內廣泛用于治療疾病,并在西方國家獲得的逐步提高認可(Okada, F., Lancet 348:5-6(1996) ;Xiao PG, Xing ST 和 WangLff, Journal of Ethnopharmacol 38:167-175 (1993))。中藥的應用基于草藥制劑中許多化學成分的相互作用,這些成分同時并協同地作用于多種分子靶和細胞機制。這些成分具有不同的功能;一些成分或許是產生功效的原因,而其他成分可以降低毒性或增加生物利用度。中草藥制劑可能是已知最好的植物藥,源自歷經千年的人類中的觀察經驗。在許多情況中,指定中藥制劑主張的適應癥是多種而非單一的。這并不令人意外,因為在一種制劑中許多植化成分可以對多個靶發揮作用。可能的是,一種中藥制劑可以緩解一種以上與應用癌癥化學治療藥物相關的副作用。
[0014]在典型的TCM處方中,草藥被指定作為君藥和包括臣藥、佐藥和使藥在內的輔藥(the secondary herb)。君藥在治療疾病病因或主要癥狀方面產生主導作用。臣藥幫助增強君藥的作用并在治療附隨的癥狀方面起主導作用。存在三種類型的佐藥:1)那些提高君藥和臣藥的治療作用或治療第三位的癥狀的佐藥;2)那些減少或消除君藥和臣藥的毒性和其他副作用的佐藥;和3)那些對不特異性地受君藥影響的互補性靶組織起作用的佐藥。使藥將其他草藥的作用引導至受侵襲的部位和/或協調并介導處方或制劑中其他草藥的作用。與由單一植物的一個或多個部位組成的大多數草藥或增補劑相反,TCM的預期作用是指向多個組織。
[0015]例如:著名的TCM處方“麻黃湯”用于治療哮喘,它由麻黃、桂枝、苦杏仁和甘草組成。作為君藥的麻黃散寒、誘發發汗并促使肺氣流動以緩解哮喘的主要癥狀。作為臣藥的桂枝提高麻黃的誘發發汗作用并溫筋以確保陽氣流動,用于減輕頭痛和全身痛。作為佐藥的苦杏仁促進肺氣的反向流動并增強麻黃緩解哮喘的作用。作為使藥的甘草緩和麻黃與桂皮的作用以確保正氣(vital Qi)的體內平衡。盡管四種草藥中的每一種均明確顯示出其相應的活性,但當組合起來時,它們彼此互補和補充。在實踐中,可以將君藥與一種或多種輔藥一起開據處方,這取決于患者描述的癥狀(Prescript1ns ofTradit1nal Chinesemedicine, Chapter One, pplO-16, E.Zhang,首席編輯,PublishingHouse, Shanghai University of Tradit1nal Chinese medicine, 1998)。
[0016]氣指身體內的總能量。草藥用于實現氣的最佳平衡;認為這種平衡本身在患者的總體健康與活力中顯不(K.C.Huang, The Pharmacology of Chinses Herbs,第二版,Page2,1999,CRC Press)。
[0017]指導用草藥和其他方式如針灸治療疾病的TCM的主要理論是:1)陰陽學說;2)五行學說;3)臟腑學說;4)氣、血和津液學說;以及5)經絡學說。
[0018]在TCM中,得出恰當診斷的首位重要方面是確定疾病屬陰還是屬陽,中國人認為這兩種力量控制著宇宙的運轉。陰代表自然的陰性面,包括暗、靜、深、寒和濕;而陽代表陽性成分,包括光、活力、高、熱和干(K.C.Huang, The Pharmacology of Chinese Herbs,第二版,P2,1999,CRC Press)。通常將陰解釋為負面力量,而陽代表正面力量。這兩種力量互補,缺一不可。因此,TCM試圖實現陰與陽之間的平衡。
[0019]在基于陰陽哲學對患者的診斷中,那些患有發熱、口干、便秘或具有疾脈脈象(rapid pulse condit1n)的患者具有陽性特征。具有惡寒、不口干且腹灣并表現出遲脈脈象的個體具有陰性特征。還可根據陰陽學說將草藥的性、味和功能分類。例加:寒性與涼性的草藥屬陰,而溫性與熱性的草藥屬陽。具有酸、苦和咸味的草藥屬陰,而具有辛、甜和淡(bland)味的草藥屬陽。具有收斂和沉降(subsiding)功能的草藥屬陰,而具有發散、上行和上浮(floating)功能的草藥屬陽。在TCM中,治療機理基于陰和陽的盛或虛。根據草藥的陰陽特性及其使陰陽失衡復原的功能開據處方。在這樣做的過程中獲得治療益處。
[0020]根據五行學說,由五種基本物質(即:木、火、土、金和水)組成物質世界。在TCM中,已將該理論用于解釋人體生理學和病理學并用于指導臨床診斷和治療。中醫大夫(herbal physician)已應用五行相生、相克、相乘和相侮的法則作出了許多有效且特效的治療方案,例如培土生金(增強脾的功能以益于肺)、滋水涵木(滋養腎精以益于肝)、扶土克木(補充脾的功能以治療肝機能亢進)和強水控火(補充腎精以治療心臟機能亢進)。特別地,為了指導開據TCM處方,五行的每一種賦予了一些草藥特性。
[0021]在TCM中,將人體的內臟器官分成三組:五臟(心、肝、脾、肺和腎);六腑(膽囊、胃、大腸、小腸、膀胱和三焦);特別器官(腦、骨髓、骨、血管、膽囊和子宮)。在TCM中,臟或腑不僅是解剖學單位,而且是涉及不同器官間相互作用的生理學和病理學的概念。例如:心臟也涉及一些精神功能并影響血液、毛發、舌和皮膚的功能。陰陽五行影響這些內部器官、臟、腑和特別器官間的相互作用。理論的相互影響的復雜性被用于解釋開據草藥處方的疾病病理學,如下所述。
[0022]在TCM中,草藥處方從診斷開始,所述診斷由四個主要項目組成:問診、望診、聽診和聞診、脈診和捫診。在問診階段,收集大量信息,包括主要癥狀的特征。例如:如果主要癥狀的特征在于上腹部中有可以通過溫暖和壓迫來減輕的鈍痛,則這提示脾陽不足。腰膝酸軟、畏寒肢冷顯示腎陽虛。在望診階段,觀察活力、皮膚顏色、以及一般表象和舌的情況。例如:面無血色在體內對應秋肺,其氣燥。在缺乏陽氣和氣血循環受阻或經絡寒導致它們收縮時,可能發生這種情況。
[0023]在TCM中,正是由氣、血和津液帶來了五臟六腑、經絡、組織和其他用于執行它們的生理功能的器官所需的能量;而氣、血和津液的形成與代謝又依賴于這些器官。TCM的處方考慮草藥對氣和血的作用來用于治療。
[0024]TCM認為經絡及其分支部分遍布全身。認為草藥正是通過它們發揮對病理學靶的影響并實現疾病改善。例如:麻黃對肺經和膀胱經起作用以誘發發汗,從而緩解哮喘和促進利尿。如上所述,針灸的臨床應用也受經絡學說的指導。
[0025]總之,盡管可以將TCM中各草藥的性質和特性歸于五行之一和陰或陽,但是它們通過經絡起作用并通過氣、血和津液介導,以在靶如臟腑上獲得治療作用。致病因素可以通過非常相同的經絡系統偽裝誘騙,以損害臟腑功能并由此導致疾病。
[0026]草藥組合物在美國的專利情況
[0027]已經授權關于草藥組合物的美國專利,用于治療折磨哺乳動物,包括人類的多種疾病和其他涉及健康的問題。例如:已經發現包括牡丹(Paeonia suffuticosa)的草藥組合物用于治療病毒感染,包括皰疹病毒和脊髓灰質炎病毒的感染(美國專利5,411,733)。
[0028]可用包含植物生物堿漢防己甲素的藥物組合物治療眼部炎癥(美國專利5,627,195)。美國專利5,683,697公開了具有抗炎、抗發熱、祛痰或止咳作用的藥物組合物,其中所述組合物包括來自楝屬(Melia)、Angepica、石斛屬(Dendrobium)、鳳仙花屬(Impatiens)、柑桔屬(Citrus)、桑寄生屬(Loranthus)、青葙屬(Celosia)、白前屬(Cynanchum)和瑚珊菜屬(Glehnia)的植物部位。已經發現,包括山姜屬(Alphinia)、菝葜屬(Smilax)、青牛膽屬(Tinospora)、蔡藜屬(Tribulus)、睡爺屬(Withania)和姜屬(Zingiber)的根、根莖和/或植物(vegetat1n)的提取物的草藥制劑可減輕或緩解與風濕性關節炎、骨關節炎和反應性關節炎相關的癥狀,可以減少致炎細胞因子的產生(美國專利5,683,698)。已經證實包含滑石、蠶糞便和十二種不同草藥成分的組合物可有效減輕哺乳動物的炎癥、疼痛和發熱(美國專利5,908,628)。
[0029]還授權了用于治療癌癥及癌癥相關的健康問題的草藥組合物的專利。例如:美國專利5,437,866公開了包含草藥混合物的組合物,所述草藥包括半枝蓮(Scutellaria barbata)種及其提取物,所述組合物用于改善人類中的惡性病的影響。美國專利 5, 665, 393 公開了包括洋甘草(Glycyrrhiza glabra L.)和黃岑(Scutellariabaicalensis Georgi)、碎米極(Rabdosia rubescens)和銀齒掠(Serenoa repens)的多種草藥組合物用于治療前列腺癌。此外,抗腫瘤草藥組合物包括黃芪屬的根(Astragaliradix)、茍藥屬的根(Paeonia radix)、樟屬的樹皮(Cinnamomi cortex)、Rhemannia 的根和甘草屬的根(Glycyrrhizae radix),用于提高絲裂霉素D和多柔比星的抗腫瘤活性(美國專利4,613,591和美國專利4,618,495)。
[0030]癌癥和癌癥化學治療的不良作用
[0031]在美國,癌癥仍是死亡的第二大原因。人們對用于治療胃腸癌,包括結腸直腸癌、肝癌和胰腺癌的方法感興趣,不是因為它們的更高的發病率,而是因為它們的高死亡率,尤其是胰腺癌和肝癌患者(Bergsland等人Current Opin1n in Oncology, 12:357-361 (2000) ;Fernandez_ 等人 Curr Opin Gastroenterol, 18:563-567 (2002) ; Jemal等人 Cancer J Clin, 52:23-47 (2002) ;Skolnick 等人,The Journal of the AMericanMedical Associat1n, 276:1457-1458 (1996))。從 1992-1999 年,研究顯示結腸直腸癌的五年相對存活率為62.3%,而肝癌為6.9%,胰腺癌為4.4 %。肝癌的中位生存期為3.5周至6個月,而胰腺癌為4至6個月(Jemal等人Cancer J Clin, 52:23-47 (2002))。由于僅有非常差的化學治療方案,胰腺癌在美國的所有癌癥中死亡率最高,自診斷后5年的存活率小于5% (Jemal等人Cancer J Clin, 52:23-47 (2002))。盡管目前在臨床試驗中使用幾種方案治療肝細胞癌,但沒有可利用的經FDA批準的化學治療藥物。胰腺癌和肝細胞癌兩者的低存活率是因為診斷困難、腫瘤生長非常旺盛、手術切除腫瘤的可能性低以及腫瘤具有高比率的化學治療耐受性。
[0032]吉西他濱是唯一的臨床批準用于胰腺癌的化學治療藥物;但是,患者對吉西他濱的響應率僅為6-11%,總體存活時間通常為4-6個月。吉西他濱是核苷類似物,具有兩種作用機理,包括抑制核苷酸還原酶,該酶能將核苷酸二磷酸轉化為脫氧核苷酸三磷酸,后者是DNA合成所需的并在DNA合成中作為欺騙性底物與脫氧胞苷三磷酸競爭(Jemal等人,CA Cancer J Clin, 52:23-47, 2002 ;Abbruzzese 等人,Cancer Supplement, 95:941-945, 2002 ;Hertel 等人,Cancer Res., 50:4417-4422, 1990 ;Pettersson 等人,Pancreas, 23:273-279, 2001 ;Philip 等人,Cancer Supplement, 95:908-911, 2002 ;Schultz 等人,Oncology Research, 5:223-228, 1993 ;Von Hoff 等人,Current Opin1nin Oncology, 14:621-627, 2002)。由于吉西他濱單一治療的低響應率和存活率,臨床已測試了幾種吉西他濱組合藥物方案,用于改善治療功效。這些試驗包括吉西他濱與其他通用和FDA批準的抗癌藥,包括CPT-11、卡培他濱和奧沙利鉬(Bruns等人,ClinicalCancer Research,6:1936-1948,2000 ;Jacobs 等人,Cancer Supplement,95:923-927, 2002 ;Mcginn 等人,Cancer Supplement, 95:933-940, 2002 ;Oettle 等人,CancerSupplement, 95:912-922, 2002)。不幸的是,沒有發現滿意的組合藥物方案,仍然迫切需要用于胰腺癌的有效方案。
[0033]目前通過手術操作和化學治療來治療肝細胞癌。對于一些患者,手術切除和術后治療可改善外觀。不幸的是,絕大多數肝細胞癌患者會患有不能切除的癌癥。盡管目前正在臨床試驗中使用幾種方案治療肝細胞癌,但沒有可用的經FDA批準的化學治療藥物。在歷史上,全身化學治療具有很少價值或沒有價值,盡管已經證實5-氟尿嘧啶(5-FU)和多柔比星(ADM)的響應率為從 10 至 20% (Suart 等人,Am.J.Clin.0ncol.,19:136-139, 1996)。
卡培他濱(Xeloda?)被合理地設計成作為口服前藥從胃腸道有效吸收,并優先在瘤組織中轉化為5-FU。目前,卡培他濱被批準作為用于結腸直腸癌和乳腺癌的一線治療,具有減少的毒性(Berg 等人,Semin.0ncol.,25:53-59, 1998 ;Schwetz 等人,JAMA, 286:2085,2001)。卡培他濱是潛在的令人興奮的新的治療藥物。盡管在肝癌中與5-FU或ADM享有相似的臨床響應(13% ),但卡培他濱具有明顯的優點,例如是具有相對低毒性的口服給藥藥物,這將改善肝細胞癌患者的生活質量(Aguayo等人,Seminars In Oncology, 28:503-513,2001 ;Leung等人,Seminars In Oncology, 28:514-520, 2001 ;Lozano et al, OralCapecitabine(Xeloda)for the Treatment of Hepatobiliary Cancers(HepatocellularCarcinoma, Cholang1carcinoma, and Gallbladder Cancer).19.2000.Proceedings ofASC0)。
[0034]在美國,已報道結腸直腸癌是第三常見的癌癥死亡原因(ACS Cancer Facts andFigures.American Cancer Society, 2004)。最近,FDA 批準使用奧沙利鉬/5-FU/LV 的三聯組合作為晚期結腸直腸癌患者的一線治療。奧沙利鉬是合成的二氨基環己烷鉬化合物,其類似于順鉬,能引起鉬-DNA加合物的形成并破壞DNA的完整性(Eric Raymond等人,Molecular Cancer Therapeutics, 1:227-235, 2002)。其他類型的化學治療藥物如5-FU、CPT-1l是結腸直腸癌治療中常用的化學治療藥物。不幸的是,在用化學療法治療的患者中,已確定嚴重腹瀉是限制劑量的毒性之一。
[0035]在過去幾十年中,醫學腫瘤學對改變藥物實踐具有巨大影響,因為已經確定了用于各種前述致命惡性病的藥物根治療法。然而,與抗腫瘤藥物相比,常用的少數幾類藥物具有更窄的治療指數,且引起不良副作用的可能性更大(Calabresi和Chabner, 1996)。
[0036]像僅具有中等選擇性的許多其他有效藥物一樣,抗癌藥可以產生嚴重的毒性。與癌癥化學治療的相關的常見不良作用包括但不限于:胃腸道并發癥(例如腹瀉、惡心、嘔吐、厭食和粘膜炎)、疼痛、食欲缺乏、骨髓/血液并發癥(例如白細胞減少、中性白細胞減少、貧血、出血、血小板減少)、疲勞和睡眠障礙。
[0037]本發明的發明人對已用于治療與癌癥化學治療相關的癥狀的中藥制劑進行了文獻檢索。據報道,包含七種草藥的植物制劑TJ-14有效預防癌癥患者中由CPT-1l引起的腹 ?寫(Kase, Y, Hayakawa T 和 Aburada Μ.等人,Jpn.J.Pharmacol.75, 407-413 (1997);Marita Μ., Nagai E 和 Hagiwara H.等人,Xenob1tica.23,5-10 (1993))。推測腹?寫是因SN-38的蓄積而發生,SN-38是由腸微生物產生的CPT-1l的活性代謝物。本發明人認為,葡糖醛酸糖苷酶抑制劑貝加靈是TJ-14中的活性成分,其緩解由CPT-1l引起的腹 'M (Kase, Y, Hayakawa T 和 Aburada M.等人,Jpn.J.Pharmacol.75, 407-413 (1997);Marita Μ., Nagai E 和 Hagiwara H.等人,Xenob1tica.23,5-10(1993) ;TakasunaK, Takehiro H, Hirohashi Μ,等人,Cancer Chemother Pharmacol.42:280-286 (1998);Takasuna K, Takehiro H, Hirohashi M, Kato M,等人,Cancer Res.56:3752-3757 (1996))。因此,評價了包含黃岑(Scuellaria baicalensis Georgi)根的幾種中草藥制劑,其富含在貝加靈中。在實驗室檢驗的幾種制劑中,本發明人選擇了 PHY906。在1500多年前就已確定,這種特定制劑可用于治療腹瀉、腹部痙攣、發熱、頭痛、嘔吐、惡心、劇渴和下賁門擴張(subcardial distent1) (Shang Han Lun of the Han Dynasty ;Hong-Yen Hsu 和Chau-Shin Hsu, Commonly used Chinese Herb Formulas with Illustrat1ns, OrientalHealing Art Institute, California, (1980))。PHY906 由一定比例的四種草藥黃岑(Scutellariae baicalensis Georgi) (scute)、茍藥(Paeonia lactiflora pall)(白茍根)、甘草(Glycyrrhizae uralensis Fisch)(甘草)和大率(Fructus ziziphi)(海率)的果實組成,其混合比例分別為1.5:1.0: 1.0: 1.0 (干重)。應注意各草藥具有不同的藥理學特征(profile),其包括抗癌和抗病毒活性、血液學和免疫學刺激、止痛活性、血管舒張、保肝、抗氧化及改善食欲,如表I所示。
[0038]表1.PHY906制劑中各草藥的推定生物活性
[0039]
抗癌免疫調節抗菌消炎神經系統其他黃苳 ++++抗病毒、抗菌、止瀉、利
U淋巴細胞與巨尿、血管舒張、4脂、抗噬細胞活性凝、抗氧化、止吐、保肝
雙功能芍藥IIIII血管舒張、保肝、利尿、
巨噬細胞活性止痛抗凝、I腸運動
雙功能調節劑人市+++保肝、肌耐力、
抗IgE作用?睡眠改善食欲甘草+ + ++ + 抗利尿
卞巨噬細胞活性止痛 4腸運動
卞干擾素f IL-1I脂(LDL、TC)
個淋巴細胞抗氧化
個干擾素和tlL-2抗病毒
Tnk活性抗凝
I IgE抗補體
t:增加~1:下降 η:下降或增加+:有效 -:無效
[0040]到目前為止,僅將PHY906作為單一藥物而非與合成藥物組合開據處方。然而,可以理解,文獻記載的PHY906應用之一實際上可用于緩解因化學治療誘發的副作用。盡管已經驗明了 PHY906的四種草藥中每一種的一些主要化學成分,并且已經檢驗了它們的藥理學活性(Chinese Botany Shanghai Science and Technology Publishing Company(1999);Huang, H-C, Wang, H-R 和 Hsieh, L-M.,Eur J of Pharmacol 251:91-93(1994) ;Lin, C-C 和Shieh, Am J Chinese Med 1:31-36(1996) ;Tang, ff.和 Eisenbrand, G.,Chinese Drugs ofPlant Origin:Chemistry, Pharmacology and Use in Tradit1nal and Modern Medicinepp.919-929.Springer-Verlag Press, New York, (1992)),但不可能通過所驗明的成分完全預計PHY906的生物學特性。
[0041]發明概述
[0042]本發明人已經意外地發現,草藥組合物PHY906能被用于各種方法,來提高一種或多種化學治療化合物的治療指數和調節造血活性。當化學治療藥物與PHY906 —起給藥時,本文公開的方法通過提高所述化學治療藥物的功效并降低所述藥物的毒性,能夠用于改善化學治療的患者的生活質量。
[0043]本發明提供了草藥組合物PHY906,其與藥學可接受的載體組合并任選地包含一種或多種化學治療化合物或抗病毒劑。選擇用于制備特定PHY906制劑的四種植物種各自選自下列四種不同屬(group)的草藥之一:黃岑屬(Scutellaria)、甘草(Licorice)、白茍藥(Peony Alba)和棗屬果實(Ziziphi Fruit)。選擇草藥以獲得PHY906的一種或多種所需屬性,其中這樣的屬性包括但不限于:提高一種或多種化學治療化合物的治療指數、增強一種或多種化學治療化合物的抗腫瘤活性或增強一種或多種抗病毒劑的抗病毒活性、調節造血活性、調節血液學和免疫學活性及改善正經歷化學治療或抗病毒治療的哺乳動物的生活質量。
[0044]本發明包括的化學治療化合物或化學治療藥物包括但不限于用于治療癌癥、寄生蟲感染和微生物感染的化學治療化合物或化學治療藥物。
[0045]本發明包括的抗病毒化合物或抗病毒劑包括用于治療病毒感染、疾病或病癥的化合物或抗病毒劑。
[0046]本發明的組合物和方法用于治療任何哺乳動物。更具體地,本發明的方法用于治療人類。
[0047]本發明還提供了組合物,其包含藥學可接受的載體;來自下列各草藥屬的植物種的材料或化學品:黃岑屬(Scutellaria)、甘草屬(Glycyrrhiza)、率屬(Ziziphus)和茍藥屬(Paeonia);以及一種或多種化學治療化合物。優選地,所述組合物包含:藥學可接受的載體;草藥制劑,其包含黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬;以及化學治療制劑,其包含一種或多種化學治療藥物或抗病毒劑。更優選地,所述草藥制劑包含來自黃芩屬、甘草屬、棗屬和茍藥屬的材料或化學品。最優選地,本發明提供了包括黃岑(Scutellaria baicalensis)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)、率(Ziziphus jujuba)和茍藥(Paeonia lactiflora)的這樣的組合物。
[0048]本發明的草藥組合物特別用于癌癥化學治療,例如但不限于使用伊立替康(CPT-11,Camptosar? )、5-氟尿嘧啶(FU 或 5-FU)、亞葉酸(LV)、VP-16、β -L- 二氧戊環胞苷(L-OddC)、卡培他濱、吉西他濱、奧沙利鉬、多柔比星、沙立度胺及其組合進行治療,所述組合例如但不限于FU/LV、CPT-11/FU/LV、奧沙利鉬/FU/LV以及吉西他濱/奧沙利鉬。本發明提供了包括PHY906和一種或多種化學治療藥物的組合物,所述化學治療藥物例如但不限于CPT-11、5-FU、VP-16、L_OddC、卡培他濱、吉西他濱、奧沙利鉬及其組合,所述組合例如但不限于FU/LV、CPT-11/FU/LV和奧沙利鉬/FU/LV。本發明還提供了組合物,其包含PHY906和化學治療藥物的一種或多種類似物和衍生物,所述化學治療藥物例如CPT-11、5-FU、VP-16、L-OddC、LV、卡培他濱、吉西他濱、多柔比星、沙立度胺和奧沙利鉬。
[0049]本發明的草藥組合物特別用于抗病毒治療。優選地,將所述草藥組合物與用于治療AIDS的抗病毒劑一起給藥。更優選地,將所述草藥組合物與選自AZT、D4T和DD1、3TC、ddC和FTG的抗病毒劑一起給藥。
[0050]本發明提供了提高用于治療癌癥的癌癥治療化合物的治療指數的方法。本發明還提供了提高用于抗病毒疾病治療的抗病毒劑的治療指數的方法。更具體地,本發明提供了如下方法,該方法包括聯合給藥一種或多種抗癌或抗病毒劑和治療有效量的組合物,所述組合物包含藥學可接受的載體和來自下列各草藥屬的植物種的材料或化學品或包含下列各草藥屬的植物種的草藥制劑:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。本發明的方法提供了來自這樣的草藥的材料或化學品的用途,或包含這樣的草藥的草藥制劑的用途,其中所述材料或化學品或草藥制劑為出自水溶液的粒狀提取物,所述水溶液包括但不限于水和醇。這樣的組合物可為可攝取的形式,例如但不限于:散劑、膠囊、液體和片劑。或者,本發明的方法使用栓劑形式的這樣的組合物。
[0051]本發明還提供了治療需要這樣的治療的哺乳動物中的疾病的方法,其包括給藥治療有效量的組合物,所述組合物包含:藥學可接受的載體;來自下列各草藥屬的植物種的材料或化學品或包含下列各草藥屬的植物種的草藥制劑:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬;和一種或多種化學治療化合物。
[0052]本發明還提供了治療需要這樣的治療的哺乳動物中的疾病的方法,其包括給藥治療有效量的一種或多種化學治療化合物或抗病毒劑和組合物,所述組合物包含:藥學可接受的載體;來自下列各草藥屬的植物種的材料或化學品或包含下列各草藥屬的植物種的草藥制劑:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。本發明包括這樣的方法,其中在給藥一種或多種化學治療化合物之前給藥所述組合物。本發明還包括這樣的方法,其中在給藥一種或多種化學治療化合物之后給藥所述組合物。
[0053]本發明通過向需要這樣的治療的哺乳動物給藥治療有效量的組合物,提供了調節造血活性來治療疾病的方法,所述組合物基本上由藥學可接受的載體和來自下列各草藥屬的植物種的材料或化學品或包含下列各草藥屬的植物種的草藥制劑組成:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。本發明提供了這樣的方法,其中來自草藥的所述材料或化學品以出自水溶液的粒狀提取物形式,所述水溶液包括但不限于水和醇。具體地,本發明提供了這樣的方法,其中所述組合物為可攝取的形式,例如但不限于:散劑、膠囊、液體和片劑。或者,本發明提供了這樣的方法,其中所述組合物是栓劑的形式。
[0054]本發明還提供了改善正經歷化學治療或抗病毒治療的哺乳動物的生活質量的方法,其包括給藥治療有效量的一種或多種化學治療化合物和組合物,所述組合物包含:
[0055]i)藥學可接受的載體;和
[0056]ii)材料或化學品,其來自下列各草藥屬的植物種:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。
[0057]本發明關注聯合給藥包含一種或多種化學治療藥物的化學治療制劑和一種組合物,所述組合物包含藥學可接受的載體和包含下列各草藥屬的植物種的草藥制劑:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。
[0058]本發明還關注聯合給藥包含一種或多種抗病毒劑的抗病毒制劑和一種組合物,所述組合物包含藥學可接受的載體和包含下列各草藥屬的植物種的草藥制劑:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。
[0059]本發明使用所公開的草藥組合物來提高化學治療藥物的抗腫瘤活性、提高抗病毒劑的抗病毒活性、降低化學治療藥物或抗病毒劑的毒性、調節哺乳動物的血液學和免疫學活性并改善正經歷化學治療或抗病毒治療的哺乳動物的生活質量。
[0060]在一方面,本發明公開了包括化學治療方案的治療方法,所述方案包括一種或多種化學治療化合物和一種組合物,所述組合物包含藥學可接受的載體和包含黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬的草藥制劑。在另一方面,本發明公開了包括抗病毒方案的治療方法,所述方案包括一種或多種抗病毒劑和一種組合物,所述組合物包含藥學可接受的載體和包含黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬的草藥制劑。
[0061]此外,本發明提供了一種治療方案,所述方案包括一種或多種化學治療化合物或抗病毒化合物和一種組合物,所述組合物包含藥學可接受的載體及包含黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬的草藥制劑。
[0062]另外,本發明公開了化學治療方案和組合物,其包括三種化學治療化合物,優選CPT-11/FU/LV或奧沙利鉬/CPT-11/FU/LV和包含黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬的草藥制劑或來自下列各草藥屬的植物種的材料或化學品:黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬。本發明關注包含一種或多種抗病毒劑的抗病毒治療。
[0063]附圖簡述
[0064]圖1.不同劑量的CPT-1l對非荷瘤BDF-1小鼠的作用。僅在第O天腹膜內(1.p.)給藥CPT-1U各組中N = 5)。
[0065]圖2.PHY906對CPT-11治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠體重的作用。僅在第O天腹膜內給藥CPT-11 (400mg/kg)。從第O天開始以指示的劑量每天口服兩次PHY906,持續8天(各組中N = 5)。
[0066]圖3.PHY906對CPT-11治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠腫瘤生長的作用。僅在第O天腹膜內給予CPT-11 (400mg/kg)。從第O天開始每天口服兩次PHY906 (500mg/kg),持續8天。使用斯氏配對t-檢驗(Student’ s paired t_test)計算p值。(各組中N =5)
[0067]圖4.PHY906對CPT-11治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠血液學變化的作用(各組中N = 5)。僅在第O天腹膜內給予CPT-11 (400mg/kg)。從第O天開始每天口服兩次PHY906 (500mg/kg),持續 4 天(各組中 N = 5)。
[0068]圖5.PHY906對FU/LV治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠體重的作用。如材料和方法中所述,僅在第O天的I小時期限內腹膜內依次給藥LV(100mg/kg)和FUdOOmg/kg)。在第O天,在LV的初始劑量后30min,以500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在4天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0069]圖6.PHY906對FU/LV治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠腫瘤生長的作用。如材料和方法中所述,僅在第O天的I小時期限內腹膜內依次給藥LV(100mg/kg)和FUdOOmg/kg)。在第O天,在LV的初始劑量后30min,以500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在4天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0070]圖7.PHY906對FU/LV治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠血液學變化的作用。如材料和方法中所述,僅在第O天的I小時期限內腹膜內依次給藥LV(100mg/kg)和FU(100mg/kg)。在第O天,在LV的初始劑量后30min,以500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在4天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0071]圖8.PHY906對CPT-11/FU/LV治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠腫瘤生長的作用。如材料和方法中所述,僅在第O天的I小時期限內腹膜內依次給藥LV(100mg/kg)、CPT-11 (200mg/kg)和 FU(100mg/kg)。在第 O 天,在 LV 的初始劑量后 30min,以 500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在4天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0072]圖9.PHY906對CPT-11/FU/LV治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠腫瘤生長的作用。如材料和方法中所述,僅在第O天的I小時期限內腹膜內依次給藥LV(100mg/kg)、CPT-11 (300mg/kg)和 FU(100mg/kg)。在第 O 天,在 LV 的初始劑量后 30min,以 500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在4天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0073]圖10.PHY906對CPT-11/FU/LV治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠體重變化的作用。如材料和方法中所述,僅在第O天的I小時期限內腹膜內依次給藥LV(100mg/kg)、CPT-11 (300mg/kg)和 FU(100mg/kg)。在第 O 天,在 LV 的初始劑量后 30min,以 500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在4天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0074]圖11.PHY906對CPT-1l治療的具有人類H印G2腫瘤的NCr-裸鼠腫瘤生長的作用。僅在第O天腹膜內給藥CPT-11 (200mg/kg)。在第O天,在給予CPT-11之前30min,以500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在8天中每天給予兩次(各組中N = 5)。
[0075]圖12.PHY906對CPT-1l治療的具有人類H印G2腫瘤的NCr-裸鼠體重的作用。僅在第O天腹膜內給予CPT-11 (200mg/kg)。在第O天,在給予CPT-11之前30min,以500mg/kg 口服給予PHY906,并繼續在8天中每天服用兩次(各組中N = 5)。
[0076]圖13.L-OddC和PHY906對具有結腸38的BDF-1小鼠的抗腫瘤作用。給雌性BDF-1小鼠(8-10周齡,平均重量約20g)皮下注射結腸38腫瘤細胞。從第O天開始連續5天,腹膜內注射L-OddC (β -L- 二氧戍環胞苷25mg/kg,q.d.X5)。在第O天并每天口服給藥PHY906(lg/kg,b.1.d.),直到完成本實驗(q.d.是“每天”的縮寫,它指每天一次;q.d.X5指在連續5天中,五只小鼠中每一只均接受每天一次的劑量;b.1.d.是“每天兩次”的縮寫,它指一天兩次)。(各組中N = 5)。
[0077]圖14.VP-16和PHY906對具有結腸38的BDF-1小鼠的抗腫瘤作用。給雌性BDF-1小鼠(8-10周齡,平均重量約20g)皮下注射結腸38腫瘤細胞。在第O天并連續5天,每天腹膜內注射一次VP-16 (依托泊苷25mg/kg,q.d.X5)。在第O天并每天口服給藥PHY906 (lg/kg, b.1.d.),直到完成本實驗。(各組中N = 5)。
[0078]圖15.5-氟尿嘧啶(FU)和PHY906的抗腫瘤作用。給五只雌性BDF-1小鼠(8-10周齡,平均重量約20g)皮下注射結腸38腫瘤細胞。僅在第O天腹膜內注射一次劑量的FU(250mg/kg)。在第O天并每天口服給藥PHY906 (lg/kg,b.1.d.),直到完成本實驗。(各組中N = 5)。
[0079]圖16.5-氟尿嘧啶(FU)與PHY906的抗腫瘤作用。給每組的雌性BDF-1小鼠(8_10周齡,平均重量約20g)皮下注射結腸38腫瘤細胞。從第O天開始,在連續5天中每天腹膜內注射FU (30mg/kg, q.d.X5)。在第O天并每天口服給藥PHY906 (lg/kg, b.1.d.),直到完成本實驗。(各組中N= 5)。
[0080]圖17.CPT-1l和PHY906與洛哌丁胺相比對具有結腸38的BDF-1小鼠的抗腫瘤作用。給雌性BDF-1小鼠(8-10周齡,平均重量約20g)皮下注射結腸38腫瘤細胞。小鼠或者不接受治療、單獨給予PHY906、單獨給予CPT-11、給予CPT-1l和PHY906,或單獨給予洛哌丁胺。如圖3中所述給藥PHY906和CPT-11。僅在第O天口服給予一次劑量的洛哌丁胺(2mg/kg, ρ.ο.( 口服給藥),b.1.d.) ο (各組中 N = 5)。
[0081]圖18A-C.CPT-11/FU/LV在血漿中的藥物動力學。PHY906-6為PHY906的臨床批次。SN-38是CPT-1l的活性代謝物。FUR+FUMP是FU的核苷和核苷酸代謝物。
[0082]圖19A-C.CPT-11/FU/LV在肝中的藥物動力學。PHY906-6為PHY906的臨床批次。SN-38是CPT-1l的活性代謝物。FUR+FUMP是FU的核苷和核苷酸代謝物。
[0083]圖20A-B.CPT-11/FU/LV在腫瘤中的藥物動力學。PHY906-6為PHY906的臨床批次。SN-38是CPT-1l的活性代謝物。
[0084]圖21.在吉西他濱(150mg/kg, qd,Dl和8)治療的具有小鼠PAN02腫瘤的C57/81^6小鼠中,?冊906(50011^/1^,1^(1,01-4和8-11)對腫瘤生長的作用。在第I天和第8天,每天腹膜內給予一次吉西他濱(150mg/kg)。在第1-4天和8-11天,在給予吉西他濱之前30min,每天口 服兩次 PHY906 (500mg/kg)(各組中 N = 5)。
[0085]圖22.在吉西他濱(300mg/kg, qd, Dl和8)治療的具有小鼠PAN02腫瘤的C57/81^6小鼠中,?冊906(50011^/1^,1^(1,01-4和8-11)對腫瘤生長的作用。在第I天和第8天,每天腹膜內給藥一次吉西他濱(300mg/kg)。在第1-4天和8-11天,在給予吉西他濱之前30min,每天口 服兩次 PHY906 (500mg/kg)(各組中 N = 5)。
[0086]圖23.在吉西他濱(600mg/kg, qd, Dl和8)治療的具有小鼠PAN02腫瘤的C57/81^6小鼠中,?冊906(50011^/1^,1^(1,01-4和8-11)對腫瘤生長的作用。在第I天和第8天,每天腹膜內給藥一次吉西他濱^00mg/kg)。在第1-4天和8-11天,在給予吉西他濱之前30min,每天口 服兩次 PHY906 (500mg/kg)(各組中 N = 5)。
[0087]圖24.在吉西他濱(300mg/kg,qd, Dl和8)治療的具有小鼠PAN02腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906 (500mg/kg,bid,Dl-4和8-11)對腫瘤生長的作用。在第I天和第8天,每天腹膜內給藥一次吉西他濱(300mg/kg)。在第1-4天和8_11天,在給予吉西他濱之前30min,每天口服兩次PHY906 (500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0088]圖25.在吉西他濱(600mg/kg,qd, Dl和8)治療的具有小鼠PAN02腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906 (500mg/kg, bid, D1-4和8-11)對腫瘤生長的作用。在第I天和第8天,每天腹膜內給予一次吉西他濱(600mg/kg)。在第1-4天和8_11天,在吉西他濱之前30min,每天口服兩次PHY906 (500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0089]圖26.在吉西他濱(300mg/kg,qd,Dl、8、26和33)治療的人類PANC-1腫瘤異種移植物中,PHY906(500mg/kg,bid,Dl-4、8-ll、26-29和33-36)對腫瘤生長的作用。在第I天、第8天、第26天和第33天,每天腹膜內給予一次吉西他濱(300mg/kg)。在第1_4天、第8-11天、第26-29天和第33-36天,在給予吉西他濱之前30min,每天口服兩次PHY906(500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0090]圖27.在吉西他濱(300mg/kg,qd, Dl、8、26和33)治療的人類PANC-1腫瘤異種移植物中,PHY906(500mg/kg,bid,Dl-4、8-ll、26-29和33-36)對體重變化的作用。在第I天、第8天、第26天和第33天,每天腹膜內給予一次吉西他濱(300mg/kg)。在第1_4天、第8-11天、第26-29天和第33-36天,在吉西他濱之前30min,每天口服兩次PHY906(500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0091]圖28.在吉西他濱(300mg/kg,qd, Dl和8)治療的具有小鼠PAN02腫瘤的BDF-1小鼠中,906MT(lg/kg*,bid,Dl-4和8-11)對腫瘤生長的作用。在第I天和第8天,每天腹膜內給予一次吉西他濱(300mg/kg)。在第1-4天和第8-11天,在給予吉西他濱之前30min,每天口服兩次906MT (lg/kg*)(各組中N = 5)。906MT是從市場上獲得的常規制劑。因此所用的數量(lg/kg*)是近似的。
[0092]圖29.(A)吉西他濱(dFdC)及⑶其代謝物(dFdU)在血漿中的藥物動力學。口服一次劑量的吉西他濱(600mg/kg)或/和PHY906 (500mg/kg)。在給予吉西他濱前30min給予PHY906。每只小鼠在不同的時間點取血兩次,每個時間點取血三只小鼠。
[0093]圖30.PHY906對吉西他濱+奧沙利鉬治療的具有人類PANC-1腫瘤的NCr-裸鼠的抗腫瘤作用。在第I天,在一天一次腹膜內給予吉西他濱(300mg/kg)前30min,腹膜內給予奧沙利鉬(10mg/kg)。在第1-4天,在給予奧沙利鉬前30min,每天口服兩次PHY906(500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0094]圖31.PHY906對CPT-1l治療的具有人類H印G2腫瘤的NCr-裸鼠腫瘤生長的作用。僅在第O天腹膜內給予CPT-11 (200mg/kg)。在第O天,在給予CPT-11前30min,以500mg/kg 口服PHY906,并繼續在8天中每天口服兩次(各組中N = 5)。
[0095]圖32.PHY906對卡培他濱治療的具有人類H印G2腫瘤的NCr-裸鼠腫瘤生長的作用。從第O天開始到連續14天,每天口服兩次卡培他濱(360mg/kg)。間斷地在第0_3天和第7-10天,在給卡培他濱前30min,以500mg/kg每天口服兩次PHY906(各組中N = 5)。
[0096]圖33.PHY906對多柔比星治療的具有人類H印G2腫瘤的NCr-裸鼠的抗腫瘤作用。在第1、4和7天,每天腹膜內給藥一次多柔比星(7.5mg/kg)。在第1_4天和8_11天,在給予多柔比星前30min,每天口服兩次PHY906(500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0097]圖34.PHY906對沙立度胺治療的具有人類H印G2腫瘤的NCr-裸鼠的抗腫瘤作用。在第1-14天,連續每天腹膜內給藥一次沙立度胺(lg/kg)。在第1-4天,在給予沙立度胺前3小時,每天口服兩次PHY906 (500mg/kg)(各組中N = 5)。
[0098]圖35.PHY906對奧沙利鉬在具有結腸38的BDF-1小鼠中的抗腫瘤活性的作用。在第I天腹膜內給予奧沙利鉬(10mg/kg,Dl)。在第1-4天,在給予奧沙利鉬前30min,以500mg/kg每天口服兩次PHY906 (各組中N = 5)。
[0099]圖36.PHY906對奧沙利鉬/5-FU/LV在具有結腸38的BDF-1小鼠中的抗腫瘤活性的作用。在第I天、第2天、第8天和第9天,腹膜內給予5-FU和LV(分別為50mg/kg)。在第I天和第8天,腹膜內給予奧沙利鉬(5mg/kg)。在第1-4天和第8-11天,在給予5-FU/LV前30min,以500mg/kg每天口服兩次PHY906 (各組中N = 5)。
[0100]圖37.用(A)載體;(B)奧沙利鉬/5-FU/LV ;或(C)PHY906加奧沙利鉬/5-FU/LV治療的具有結腸38的BDF-1小鼠的卡-邁生存曲線。從第I天開始,腹膜內給予奧沙利鉬(10mg/kg, Dl)和 5-FU/LV (分別為 50mg/kg, D1-2)。在第 1-4 天,在給予奧沙利鉬 /5-FU/LV前30min,以500mg/kg每天口服兩次PHY906 (各組中N = 5)。
[0101]圖38.PHY906對奧沙利鉬、5-FU/LV和奧沙利鉬/5-FU/LV治療的具有結腸38的BDF-1小鼠體重的作用。在第I天腹膜內給予奧沙利鉬(5mg/kg,Dl)。在第1、2、8和9天,腹膜內給予5-FU和LV(分別為50mg/kg)。在第1_4天和第8_11天,在給予5-FU/LV或奧沙利鉬前30min,以500mg/kg每天口服兩次PHY906 (各組中N = 5)。
[0102]優選實施方案詳述
[0103]1.總述
[0104]本發明部分地基于如下發現:在體內動物模型中,PHY906降低化學治療誘發的毒性,包括體重下降和死亡,PHY906還能增強許多抗腫瘤藥如CPT-11、5-FU、VP-16、L-OddC,卡培他濱、吉西他濱、奧沙利鉬、多柔比星、沙立度胺、CPT-11/5-FU/LV、吉西他濱/奧沙利鉬和奧沙利鉬/5-FU/LV的抗腫瘤功效。PHY906是傳統中草藥制劑,由4種不同的草藥組成,它已經持續約1800年被用于治療胃腸疾病,它們中的一些是通常在正經歷化學治療的癌癥患者中觀察到的副作用。
[0105]本發明還部分地基于如下發現:在肝細胞癌和胰腺癌模型中,PHY906都顯著增強所研究的化學治療藥物的治療指數。在人肝細胞異種移植小鼠模型中,PHY906與口服的5-FU前藥卡培他濱、CPT-11、多柔比星或沙立度胺共同給藥,在小鼠胰腺癌模型中,PHY906與吉西他濱、奧沙利鉬、吉西他濱/奧沙利鉬共同給藥。在動物模型中,PHY906與卡培他濱或吉西他濱的共同給藥沒有改變卡培他濱、吉西他濱或其各自代謝物的藥物動力學曲線。
[0106]還在結腸直腸癌小鼠模型中檢查了 PHY906對奧沙利鉬、5-FU/LV和奧沙利鉬/5-FU/LV抗腫瘤活性的作用。本發明部分基于如下發現:PHY906增強奧沙利鉬和奧沙利鉬/5-FU/LV的抗腫瘤活性,如圖35和36所示。PHY906不僅能將死亡率減少至60%,而且能延遲由奧沙利鉬/5-FU/LV引起的動物死亡的發生,如圖37所示。
[0107]生化研究揭示,PHY906制劑具有廣泛的藥理學活性。PHY906可能的作用機理包括:(I)通過抑制腸CYP3A4,增強藥理學活性劑的口服攝取;(2)抑制NF- κ B活性;(3)抑制MMP活性;和(4)破壞肝臟腫瘤中血竇的完整性。
[0108]這些臨床前的體內研究為臨床環境中開發ΡΗΥ906提供了理論。啟動ΡΗΥ906的I/IIA期雙盲、安慰劑對照的、劑量遞增研究,以評價ΡΗΥ906在調節CPT-1I誘導腹瀉的潛在作用,所述腹瀉與晚期結腸直腸癌患者每周推注CPT-11/5-FU/LV相關。獲益的患者加入第二個Ι/Π期開放標記、劑量遞增臨床試驗,以評價ΡΗΥ906與卡培他濱的組合在治療肝細胞癌中的作用。
[0109]還已顯示ΡΗΥ906在小鼠模型中通過加強治療藥的抗腫瘤作用以及減少多種宿主毒性而增加幾種抗癌藥如伊立替康(CPT-1l)、5_氟尿嘧啶(5-FU)、伊立替康/5-氟尿嘧啶/亞葉酸(LV)、伊托泊苷(VP-16)和L-OddC的治療指數。為研究是否需要全部四種植物藥以獲得觀察到的全部生物學活性,研究了五種制劑:具有全部四種植物藥的完整制劑和各自缺少一種植物藥成分的四種制劑(Α =黃芩,B =芍藥,C =棗,D =甘草)。在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠模型中,當從ΡΗΥ906制劑中除去植物藥A或植物藥B時,CPT-1I抗腫瘤作用的強度受到損害。相反,沒有發現植物藥C和D有助于增強CPT-1l的抗腫瘤作用。但是,當檢查體重下降作為CPT-1l的不良毒副作用時,除了 B,所有植物藥均有助于保護體重下降。因此,所觀察到的PHY906生物學活性需要全部四種植物藥。
[0110]還在體外研究了植物藥對細胞色素P450同工酶(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4)的作用,以檢查植物藥對分離的酶靶的潛在作用。已知這些酶中的一種,即CYP3A4是CPT-1l的主要的引起代謝的酶。盡管在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠模型中的研究顯示,PHY906對CPT-1l的藥物動力學或藥效學沒有影響,但觀察發現PHY906是具有不同功效的個體的細胞色素P450同工酶的抑制劑。對單個植物藥以及三種植物藥的四種獨立制劑進行個體P450抑制的研究顯示在調節個體酶抑制作用的特定植物藥之間存在相互作用。這些研究顯示在體內和體外研究中,植物藥作用的復雜性、補償性和多因素性與來源于中藥的原理一致。PHY906正處于作為結腸直腸癌患者的CPT-11/5-FU/LV調節劑的I//IIa期臨床試驗中。
[0111]總之,本發明部分基于如下發現:
[0112]1.在不同小鼠模型中,PHY906增加各種化學治療藥物在人類胰腺癌、肝細胞癌和結腸直腸癌中的治療指數。具體地,通過增強抗腫瘤活性、減少死亡率和避免體重下降,PHY906能提高多種化學治療藥物的治療指數。
[0113]2.PHY906不改變這些化學治療藥物在小鼠模型中的藥物動力學。
[0114]3.PHY906增強所研究的癌癥化學治療藥物的藥物作用機理可能在于但不限于抑制NF- κ B、MMP或破壞肝細胞癌血竇的完整性。
[0115]4.需要PHY906制劑中的全部四種草藥(A=黃芩,B=芍藥,C=棗,D=甘草)來獲得觀察到的最大范圍的功效;
[0116].在PHY906制劑中,草藥A促成避免體重下降和增強抗腫瘤作用(p〈0.05)。
[0117]?草藥B促成增強PHY906的抗腫瘤活性(p〈0.05),但不能避免由癌癥化學治療藥物誘發的體重下降。
[0118].草藥C和D避免由癌癥化學治療藥物誘發的體重下降。
[0119]5.不同批次的PHY906在人類CYP450抑制和細胞生長抑制方面顯示出一致性;
[0120].草藥A是人類CYP450以及細胞生長的有效抑制劑。
[0121].草藥D在所檢查的細胞系中顯示出極低的細胞毒性,是極弱的人類CYP450抑制劑。
[0122]6.PHY906顯示出對人類CYP450的強大體外抑制活性。但是,動物數據顯示,PHY906不影響CPT-1l代謝,或不損害化學治療藥物的抗癌活性。
[0123]癌癥化學治療藥物經常誘發嚴重的不良副作用,這些副作用會影響患者的生活質量,并且干擾治療方案。本發明部分地基于如下發現:中草藥與標準抗癌藥的組合可用于減少癌癥化學治療藥物的不良副作用,改善正經歷化學治療的患者的生活質量。PHY906是由四種不同草藥組成的植物藥制劑,在中國,已經在數百年中將它用于治療各種胃腸疾病和其他疾病。本發明基于在動物模型中進行的實驗結果,所述實驗評價在結腸直腸癌患者中,PHY906在減少由癌癥化學治療藥物誘發的副作用方面的潛在功效。具體地,本發明部分地基于如下發現:PHY906 能減少由 CPT-11、FU、FU/LV、CPT-1l/FU/LV、L-0ddC、VP-16、沙立度胺、多柔比星、卡培他濱、吉西他濱、奧沙利鉬、吉西他濱/奧沙利鉬或奧沙利鉬/FU/LV治療所誘發的各種宿主毒性,并且能保持甚至增強化學治療藥物的抗腫瘤活性。更具體地,通過增強化學治療藥物的抗腫瘤作用并減少各種宿主毒性,PHY906可增強CPT-11、5-FU、卡培他濱、奧沙利鉬、多柔比星、沙立度胺、VP-16、L-OddC、以及CPT-11/FU/LV和奧沙利鉬/FU/LV三聯組合的治療指數。這些發現不限于一種特定的抗癌藥或一種特定的腫瘤模型。
[0124]本發明還部分地基于對如下方案的發現,所述方案可與各種抗癌藥組合使用,以降低限制劑量的毒性并增強藥物的功效。對于用于人類癌癥治療方法的物質,這個發現是極為重要的補充。
[0125]I1.定義
[0126]除非另有說明,本文所用的所有技術術語和科學術語具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解相同的含義。盡管在本發明的實施或檢測過程中可能使用與本文所述相似或等同的任何方法和材料,但仍然描述了優選的方法和材料。
[0127]本文所用的“癌癥化學治療的”或“癌癥化學治療藥物”指用于治療腫瘤疾病或癌癥的化學治療藥物。
[0128]本文所用的“化學治療的”指通過化學品或藥物治療疾病。
[0129]本文所用的術語“化學治療制劑”指包括化學治療藥物的組合物。
[0130]本文所用的術語“提取物”指按如下獲得的植物藥或動物藥的濃縮制品:使用適宜的溶媒(溶劑)從中提取出活性成分,蒸發掉全部或接近全部的溶劑,將殘余物或粉末調節至規定的標準。制備三種形式的提取物:半固體或具有糖漿狀稠度的物質、丸藥或固體,以及作為干粉(參見 http://www.gray lab.ac.uk/cg1-bin/omd ? query = extract)。
[0131]在一個實施方案中,提取物是各種固體和半固體劑型中所用粗制藥物的濃縮形式(Remington’s Pharmaceutical Sciences 第 17 版.(Gennaro, ed), Chapter84, pp.1516-1517, Mack Publishing Co, Easton, PA (1985))。例如,丸藥(即:塑性體(plastic mass))提取物具有的稠度使得它們適合于丸藥塊并將其制成丸劑(例如純甘草屬提取物USP)。此外,丸藥塊很好地適用于軟膏劑和栓劑。粉狀提取物更適合粉狀制劑如膠囊、散劑和片劑。此外,具有糖漿狀稠度的半固體或提取物能夠用于制備藥物制劑(Remington’s Pharmaceutical Sciences,1985)。
[0132]在一個相關方面,可認為提取物是按如下獲得的活性成分溶液:將植物或動物原料藥浸泡或浸潰在液體中(浸解),或者使這類原料藥通過多孔物質(滲濾),作為藥劑供使用。此外,這種類型的藥劑可以是酊劑或流浸膏劑[sic]的形式(Remington’sPharmaceutical Sciences, 1985)。
[0133]在一個實施方案中,所述提取物是酊劑形式。例如,酊劑可以包括但不限于由植物或由化學品制備的醇或水醇溶液。可以通過滲濾或浸潰制備酊劑,一般以特定活性藥物的重量(按克計)/10ml @了劑表不功效(Remington,s Pharmaceutical Sciences, 1985)。例如,甜桔皮酊劑包含50g甜桔皮/10ml酊劑。
[0134]在另一個實施方案中,所述提取物是流浸膏劑[sic]形式。例如,液體提取物包括但不限于植物藥的液體制劑,其中包括醇作為溶劑或作為防腐劑或兩者兼而有之,其中通常每ml包含I克治療成分所代表的藥物。通過作為常規方法的滲濾法能夠制備流浸膏劑(Remington’s Pharmaceutical Sciences, 1985)。
[0135]本文所用的術語“血液學活性”指與血液和造血器官相關的活性。
[0136]從技術上講,術語“草藥”指小的非木本(即帶有新鮮莖的)的一年生或多年生有種子的植物,其中所有氣生部位均在各生長季節結束時死亡。草藥具有醫療、調味(savory)或芳香性質。當更一般地使用該術語和當本文使用該術語時,“草藥”指具有食物增補、醫學、藥物、治療或延長生命的用途的任何植物或植物部位。因此,本文所用的草藥不限于草藥的植物學定義,而是用于這類目的的任何植物性藥材、植物或植物部位,包括Metaphyta界中的任何植物種或亞種的任何植物或植物部位,包括草藥、灌木、半灌木和樹。草藥組合物中所用的植物部位包括但不限于:種子、葉、莖、嫩枝、枝(branch)、芽、花、球莖、谷粒、塊莖、根莖、長匐枝、根、果實、球果、漿果、形成層和樹皮。
[0137]本文所用的“草藥組合物或制劑”指包括草藥、草藥植物、草藥植物部位和/或草藥提取物的任何組合物或制劑。因此,本文所用的草藥組合物或制劑包括包含草藥食物增補劑、草藥和藥用食物的草藥制劑。草藥組合物的例子包括但不限于下列成分:單一植物種的完整植物或植物部位;多植物種的完整植物或植物部位;來源于單一植物種的多種成分;來源于多種植物種的多種成分;草藥提取物;或這些不同成分的任何組合。本發明還關注包括來源于單一或多植物種的一種或多種化學品的草藥組合物。
[0138]關于不同草藥組合物的充分綜述,例如參見Kee Chang Huang, The Pharmacologyof Chinese Herbs, CRC Press (1993),該文獻被全文引入本文。
[0139]本文所用的術語“免疫學活性”指與免疫系統、免疫性、誘發的敏感性和變態反應相關的活性。
[0140]本文所用的術語“死亡率”指人口或特定人口數量中的死亡比例,其中將死亡率定義為死亡比例或總死亡數量與總人口之比。例如,缺血性中風癥狀發作后30天的死亡率可能為約13.3 % (例如在用組織型纖溶酶原激活物治療后,參見Albers等人,JAMA (2000) 283 (9):1145-1150)至大于約65% (例如出血性中風,參見Mahaffey等人,Am Heart J (1999) 138 (3Pt I):493-499)。
[0141]本文所用的術語“生活質量(QOL) ”指動物,尤其是哺乳動物、更具體地是人的一般健康。能夠基于任一參數、一組兩個或多個參數或基于一般總體評價或評分來評價個體的Q0L。用于評價QOL的有用指標的例子包括但不限于與下列內容相關的指標:睡眠模式;進食模式;飲用模式;靈活性;可動性;皮膚色澤;視覺;毛發保留/缺失/生長;肌肉色澤;肌肉質量;力量;體重;竇健康;存在或不存在炎癥,或其程度;不適感;完成特定任務的能力;焦慮程度;響應時間;集中能力;記憶保留;語言能力;聲覺;存在或不存在頭痛,或其程度;肌肉痙攣;神經損害;味覺;觸覺;嗅覺;機會性疾病的存在或不存在;寄生蟲的存在或不存在。
[0142]本文所用的術語“方案”指治療程序。
[0143]本文所用的術語“治療指數”指產生所需療效時藥物選擇性如何。治療指數是LD5tl與ED5tl的比例。半數有效量ED5tl是在50%人群中產生特定療效所需的藥物劑量。LD5tl是在實驗動物中測定的半數致死量。
[0144]II1.具體實施方案
[0145]A.化學治療
[0146]通常,化學治療指用化學劑治療疾病、尤其是腫瘤、寄生蟲感染和微生物疾病,這些化學劑以一定的方式作用于感染性的有機體或腫瘤。
[0147]1.癌癥化學治療
[0148]介紹:化學治療仍舊為用于治療癌癥患者的最有效方式之一。盡管十分有效,但也眾所周知化學治療藥物不良地破壞患者的生活質量。一些通常觀察到的副作用包括:骨髓抑制和免疫抑制、腹瀉、外周神經病、惡心和嘔吐、發熱、肝功能障礙和心臟毒性等(“Physicians Desk Reference”(1999)Medical Economics Company)。在許多情況下,這些不良副作用妨礙患者接受遞增劑量或追加的治療過程,由此限制了這些藥劑的功效。減輕這些副作用中的一些或全部、而不損害化學治療藥物的抗癌活性,這樣不僅可以改善癌癥患者的生活質量(QOL),而且允許使用更強力的治療方案,導致可能的改善的臨床成功。目前,大多數支持療法使用單一藥劑如止吐藥、抗粘膜炎藥和集落生長因子,它們以個別的副作用為靶,但不對應與癌癥化學治療的相關的多種副作用(Bleiberg H和Cvitkovic E., Eur J Cancer 32A (Suppl 3):S18_S23(1996) ;ffierda D.和Matamoros Μ., Toxicol&Applied Pharmacol75:25-34 (1984) ;Goldber R.M.和 ErlichmanC., Oncology 12:59—63(1988))。
[0149]用于治療癌癥的藥物包括:更常規的天然產物,如紫杉醇(TAXOL);半合成藥物,如依托泊苷;以及許多較新的不同藥劑,如白介素-2和全反式維甲酸。關于用于治療腫瘤疾病的化學治療藥物的綜合目錄,參見例如Calabresi和Chabner (1996) 1227-1229頁表X-1。
[0150]表2提供了與通常給藥的癌癥化學治療相關的主要不良作用。
[0151]表2.癌癥化學治療的主要不良作用
[0152]
主要的不良健康作用抗腫瘤藥
胰腺炎VP-16、阿糖胞苷
MlVP-16、多柔比星、紫杉醇、FU、阿糖胞苷
心臟毒性紫杉醇、多柔比星
皮膚影響多柔比星
?ΜCPT-1i
呼吸困難阿糖胞苷
潮紅(flush)他莫昔芬
發熱/寒戰VP-16、多柔比星
肝毒性VP、紫杉醇、阿糖胞苷、甲氨蝶呤
中毒性腎損害β
[0153]
¥11 [?I
骨髓發育不全幾乎所有抗癌藥
[0154]5-氟尿嘧啶:氟嘧啶類似物5-氟尿嘧啶(5-FU或FU)表現出多種臨床活性。在輔助的和重病環境中,在結腸直腸癌的治療以及在其他GI惡性病方面,它仍是最具活性的藥劑之一(Pinedo和Peters, 1988)。此外,該藥還有效抗乳腺癌和頭頸癌。
[0155]結腸直腸癌治療的近期發展已經使用生化調節來選擇性激活特定的嘧啶代謝途徑。還原的葉酸鹽,即亞葉酸(LV)是有效的生化調節劑,已經與FU組合用于臨床治療(Peters和Van Groeningen, 1991 ;Joulia,等人,1999)。在臨床試驗中,已經證實添加LV形式的外源性葉酸鹽可提高對FU的響應(Calabresi和Chabner,P1250, 1996)。LV相互作用的假設機制是胸苷酸合酶抑制。
[0156]在晚期疾病患者中,對FU的響應率由10% -12% (單獨FU治療)改善至20% -30% (FU/LV 治療)。
[0157]卡培他濱:卡培他濱(Xeloda?)是用于治療癌癥的口服藥物。在1998年,卡培他濱被FDA批準用于治療轉移性乳腺癌,這種癌癥耐受其他藥物如紫杉醇(Taxol?)、多柔比星和adriamycin?。在2001年,它被FDA批準用于治療轉移性結腸直腸癌,其常用5-FU治療。在每21天的周期中,卡培他濱一般給藥14天,然后是7天的休息期。
[0158]卡培他濱是具有抗腫瘤活性的氟嘧啶氨基甲酸鹽。卡培他濱的化學名為5’ -脫氧-5-氟-N-[(戊氧基)羰基]胞苷。卡培他濱描述于美國專利5,472,949中,該文獻被全文引入本文作為參考。
[0159]卡培他濱屬于稱為抗代謝物的化學治療藥物組。它是5’-脫氧-5-氟胞苷(5’ -DFUR)的前藥,具有獨特的激活機理。卡培他濱被位于肝的羧酸酯酶或胞苷脫氨酶轉化為5’-DFUR。5’-DFUR被腫瘤中的胸苷磷酸化酶(dThdPase)轉化為活性形式5-FU。與健康組織相比,卡培他濱可利用腫瘤組織中高濃度的dThdPase,導致腫瘤選擇性地產生5-FU。在正常細胞和腫瘤細胞中,5-FU進一步被代謝成兩種活性代謝物:5_氟-2-脫氧尿苷一磷酸(FdUMP)和5-氟尿苷三磷酸(FUTP)。FdUMP通過減少正常胸苷的制備來抑制DNA合成,而FUTP通過與尿苷三磷酸競爭來抑制RNA和蛋白質合成。卡培他濱的活性部分5-FU是細胞周期階段特異性的(S期)。
[0160]研究顯示,與靜脈內給藥(1.V.)的5-FU/LV相比,卡培他濱具有更好的響應。在一項研究中,與5-FU/LV的11%響應率相比,用卡培他濱治療的患者獲得了顯著性(P =0.0014)更好的響應率,為21%。用卡培他濱和5-FU/LV治療的疾病進展中位時間分別為128天和131天(非顯著性(NS)),中位生存時間分別為380天和407天(NS) (Hoff等人JClinOncol.19:2282-2292, 2001)。在另一項研究中,與5-FU/LV的14%響應率相比,用卡培他濱治療的患者也獲得顯著性(P = 0.027)更好的響應率,為21%。疾病進展中位時間分別為137天和131天(NS),中位生存時間分別為404天和369天(NS) (Van Cutsem等人J Clin Oncol.19 =4097-4106, 2001)。與1.v.5-FU/LV相比,卡培他濱還具有改善的安全曲線。
[0161]與單獨的5-FU/LV相比,使用卡培他濱與5-FU/LV的聯合治療來治療結腸直腸癌已經顯示出存活益處。用于治療結腸直腸癌的其他卡培他濱潛在聯合治療包括但不限于:卡培他濱/奧沙利鉬、卡培他濱/伊立替康、卡培他濱/奧沙利鉬/gefitimib、卡培他濱/奧沙利鉬/5-FU/LV和卡培他濱/放射治療。對于乳腺癌治療,聯合治療包括但不限于:卡培他濱/伊立替康、卡培他濱/多西紫杉醇(Taxotere?)、卡培他濱/紫杉醇和卡培他濱/5,-DFUR0
[0162]像其他化學治療一樣,服用卡培他濱也伴有副作用。卡培他濱最常見的副作用包括:腹瀉、惡心、嘔吐、口的疼痛性腫脹、疲勞、手或足的疼痛性皮疹和腫脹、白細胞計數低(這可能導致感染)、血小板計數低(這可能導致出血)和貧血。在接受卡培他濱的患者中,約每三個人就有一個人具有嚴重的副作用,但是當停止藥物或當降低劑量時,這些副作用通常是可逆的。
[0163]對于氟嘧啶類似物,包括5-FU和卡培他濱的治療用途的詳細描述,參見例如Chabner 等人,1996。
[0164]CPT-1l:伊立替康(CPT-1l)是半合成的喜樹堿類似物,其抑制復制細胞中的拓撲異構酶I。在用一線FU/LV治療失敗的癌癥患者中,它表現出抗腫瘤活性(Bleiberg,1999 ;Stucky-Marshall, 1999)。
[0165]盡管CPT-1l為FDA批準的作為晚期結腸直腸癌患者的二線治療,但觀察到的響應率級別僅為10% -15%。
[0166]與該藥劑相關的主要副作用包括:白細胞減少、貧血、惡心/嘔吐、食欲缺乏和腹瀉。因此,期望開發一種調節劑,其能提高CPT-1I的抗腫瘤活性的功效和/或緩解與CPT-1I治療相關的一些毒副作用,從而使癌癥患者的總體生活質量和體力狀態得到改善。
[0167]CPT-1I/FU和CPT-11/FU/LV組合:據報道,結腸直腸癌是北美地區死于癌癥的第二位主導原因。目前FDA批準用于治療結腸直腸癌的兩種藥物是伊立替康(CPT-11,Camptosar? )和5-氟尿嘧啶(FU)。FU是抗代謝藥物,它抑制合成DNA所需的胸苷酸合酶。通常將FU與還原葉酸鹽LV —起給藥,LV能增加FU對胸苷酸合酶的親合性。目前將這種治療用作轉移性結腸癌的一線治療(Murakami K, Sakukawa, R, Sano, Μ,等人,ClinCancer Res.5:2304-2310(1999) ;van der Wilt C.L, van Groeningen, C.J, Pinedo Η.M,等人,J.Cancer Res.Clin.0ncol.123:595-601 (1997))。CPT-11 是拓撲異構酶 I 的有效抑制劑,這種核酶參與DNA在復制過程中的解旋。已經證實CPT-1l作為FU失敗后的二線治療,對轉移性結腸直腸癌的抗腫瘤活性(Kase, Y, Hayakawa, T, Togashi, Y,等人,Jpn J Pharmacol, 75:399-405 (1997) ;Araki E, Ishikawa M, Iigo Μ,等 A , Jpn JCancer Res 84:697-702(1993) ;Bissery MC, Vrignaud P, Lavelle F,等人,Ant1-CancerDrugs 7:437-460 (1996) ;Saltz L.B, Cox J.V, Blanke C,等人,New.Eng.J.Med.343:905-914(2000))。最近,FDA批準將CPT-11/FU/LV的三聯組合用作晚期結腸直腸癌的一線治療。不幸的是,在使用該聯合治療治療的患者中,已經將嚴重腹瀉鑒定為限制劑量的毒性之一(Saltz L.B, Cox J.V, Blanke C,等人,New.Eng.J.Med.343:905-914(2000);Murakami K, Sakukawa, R, Sano, Μ,等人,Clin Cancer Res.5:2304-2310 (1999) ;van derWilt C.L, van Groeningen, C.J, Pinedo Η.M,等 A , J- Cancer Res.Clin.0ncol., 123:595-601(1997)。
[0168]VP_16(依托泊苷):VP-16也稱作依托泊苷,它顯示出對抗小細胞肺癌、睪丸癌、淋巴瘤和白血病(O' Dwyer, P.,等人,Etoposide (VP-16-213),Current Status of an ActiveAnt1-cancer Drug, New Engl.J.Med^312:692-700 (1985))和包括在霍奇金病、乳頭瘤病毒和彌漫性組織細胞淋巴瘤中所見的腫瘤的顯著臨床活性。
[0169]據信依托泊苷通過穩定酶-DNA復合物來阻斷DNA拓撲異構酶II的催化活性,在所述復合物中DNA裂解并與所述酶共價連接。參見Chen, G.L.,Yang, L.,RoweT.C., Halligan, B.D., Tewey, K.,和 Liu.L..1.B1l.Chem..259: 13560 (1984) ;Ross,ff., Rowe, T., Glisson, B., Yalowich, J.,和 Liu, L., Cancer Res., 44:5857 (1984);Rowe, Τ., Kuppfer, G.,和 Ross, ff., B1chem.Pharmacol., 34:2483 (1985),特別將這些文獻引入本文作為參考。
[0170]作為【背景技術】,拓撲異構酶是控制DNA拓撲學狀態的酶。II型拓撲異構酶催化DNA鏈通過DNA中短暫的雙鏈斷裂處。所得DNA連接數量的改變使得這些酶介導DNA的互變,例如超螺旋和超螺旋松弛、鏈狀排列和脫鏈狀排列、打結和不打結。參見Wang,J.C.,Annu.Rev.B1chem., 54:665(1985)和 Maxwell, A.,和 Gellert, Μ.,Adv.Protein Chem., 38:69 (1986),特別將這些文獻引入本文作為參考。
[0171]已經證實II型拓撲異構酶參與許多重要的細胞過程,包括DNA復制和轉錄,以及染色體分離。因此,這些酶是許多抗癌藥,包括依托泊苷和替尼泊苷的關鍵作用靶。導致細胞死亡的關鍵步驟可能是這些藥物能夠阻斷DNA拓撲異構酶II的催化活性,如上所述。
[0172]β-L-二氧戍環胞昔(L-OddC):β-L-二氧戍環胞昔[L_0ddC]是顯不具有抗癌活性的非天然L構象的第一種核苷類似物(Grove等人,Cancer Res (1996) 56 (18):4187-4191)。在人前列腺和肝細胞異種移植腫瘤模型中,已顯示該化合物具有有效的抗腫瘤活性(Grove 等人,Cancer Res (1995) 55:3008-3011)。此外,已顯不 L-OddC 在體外有效對抗人角質細胞的過度增殖活性(Schwartz等人,Skin Pharmacol Appl SkinPhys1l(1998)11(4-5):207-213)。
[0173]通過平衡敏感性和平衡不敏感性核苷轉運體系,該化合物快速轉移進入細胞而起作用,在所述體系中它被結合到細胞的DNA中。DNA結合導致DNA降解成大片段,而沒有產生核小體間梯化。
[0174]吉西他濱:在1996年,吉西他濱(Gemzar?)被FDA批準用于治療局部晚期或轉移性胰腺癌,作為最初治療或在用化學治療藥物氟尿嘧啶治療之后使用。它還被批準與化學治療藥物順鍆(Platinol?)組合,用于治療局部晚期或轉移性非小細胞肺癌。吉西他濱是靜脈內給藥(1.v.)的,其劑量取決于幾個因素,包括:所治療的病癥、患者的身高、所使用的具體治療方案和患者的整體健康。
[0175]吉西他濱是2’ -脫氧-2’,2’ - 二氟胞苷的通用名。也知道其化學名為1-(4-氨基-2-氧代-1H-嘧啶-1-基)-2-脫氧-2,2-二氟核糖。吉西他濱公開于美國專利4,808,614和5,464,826,這些文獻被引入本文,參考它們關于如何合成、配制和使用吉西他濱來治療敏感腫瘤的教導。吉西他濱作為一鹽酸鹽和作為異構體出售。
[0176]吉西他濱屬于稱為抗代謝物的藥物組。通常,抗代謝物通過抑制細胞產生或修復DNA的能力,從而使得細胞不能復制或修復自身,最終引起細胞死亡,來產生其抗癌作用。吉西他濱顯示細胞階段特異性,主要殺滅進行DNA合成(S期)的細胞,還能阻斷細胞通過G1/S期邊界的進程。吉西他濱被核苷激酶在細胞內代謝成活性二磷酸(dFdCDP)和三磷酸(dFdCTP)核苷。吉西他濱的細胞毒性作用來自二磷酸和三磷酸核苷的兩種作用的組合,這導致抑制DNA合成。首先,吉西他濱二磷酸抑制核糖核苷酸還原酶,該酶負責催化產生脫氧核苷三磷酸用于DNA合成的反應。二磷酸核苷對該酶的抑制引起脫氧核苷酸,包括dCTP的濃度減少。其次,吉西他濱三磷酸與dCTP競爭進入DNA。細胞內dCTP濃度的減少(通過二磷酸的作用)促進吉西他濱三磷酸進入DNA(自身增強)。在吉西他濱核苷酸進入DNA后,僅有一種額外的核苷酸進入DNA。在此加入后,即可抑制DNA的進一步合成。
[0177]像其他化學治療藥物一樣,吉西他濱可引起不良副作用。使用吉西他濱的更常見副作用包括但不限于:白細胞數計減少導致感染危險增加、血小板計數減少導致出血危險增加、惡心、嘔吐、肝功血液檢查增加和疲勞。較不常見的副作用是:腹瀉;口唇瘡;流感樣癥狀;皮膚皮疹;手、踝和面部腫脹、毛頭稀少和發癢。
[0178]奧沙利鉬:在2002年,奧沙利鉬(Eloxatin?)被FDA批準用于轉移性結腸直腸癌患者的二線治療。在2005年2月,它被批準用于晚期結腸直腸癌的一線治療。這個較近的批準推薦將奧沙利鉬與5-氟尿嘧啶和亞葉酸(5-FU/LV)組合使用。奧沙利鉬是靜脈內給藥的,其劑量取決于幾個因素,包括:所治療的病癥、患者的身高、所使用的具體方案和患者的整體健康。
[0179]奧沙利鉬是二氨基環己烷化合物,已知在與順鉬相同的加成物形成位置引起DNA損壞。它還被稱為L-0HP,是第三代鉬絡合物。奧沙利鉬的化學名為順式草酸(反式-1-1,2-環己烷二胺)鉬(II)。奧沙利鉬公開于美國專利4,169,846和相關專利:美國專利5,290,961、美國專利5,298,642、美國專利5,338,874、美國專利5,420,319和PCT/IB/00614,這些文獻被全文引入本文作為參考。
[0180]本文所用的術語“奧沙利鉬”包括順式草酸(反式-1-1,2-環己烷二胺)鉬(II)、其光學對映異構體順式草酸(反式-d-1,2-環己烷二胺)鉬(II)及其任何外消旋混合物。術語“奧沙利鉬”還包括具有高光學純度的順式草酸(反式-1-1,2-環己烷二胺)鉬
(II),即光學純度等于或高于約99.5%,例如根據美國專利5,338,874(該文獻被全文引入本文作為參考)所述的程序獲得的順式草酸(反式-1-1,2-環己烷二胺)鉬(II),其熔點為約198°C至約292°C,尤其是根據美國專利5,420,319公開的程序獲得的順式草酸(反式-1-1,2-環己烷二胺)鉬(II),其光學純度為約99.94%或更高,熔點為約198.3°C至約199.7V ,該文獻被全文引入本文作為參考。奧沙利鉬的衍生物包括但不限于卡鉬和順鉬。
[0181]奧沙利鉬屬于新一類鉬試劑。它包含與草酸鹽和二氨基環己烷(DACH)絡合的鉬原子。認為與順鉬和卡鉬相比,龐大的DACH導致更大的細胞毒性(Wiseman等人,DrugsAging 1999 ;14(6):459-75)。奧沙利鉬的確切作用機理是未知的。奧沙利鉬形成活性鉬絡合物,認為該絡合物通過形成DNA分子的鏈間交聯來抑制DNA合成。奧沙利鉬通常不與順鉬或卡鉬交叉耐受,可能是由于DACH基團和對DNA錯配修復的抵抗(Wiseman等人,DrugsAging 1999, 14 (6):459-75 ;Misset 等人,Critical Reviews in Oncology-Hematology2000,35(2):75-93)。臨床前研究顯示,奧沙利鉬與氟尿嘧啶和伊立替康的活性代謝物SN-38 是協同的(Cvitkovic 等人,Semin Oncol 1999, 26(6):647-62)。奧沙利鉬是放射敏感劑(Freyer 等人,Proc Am Soc Clin Oncol 2000,19:260a ;Carra;ro 等人,Proc Am SocClin Oncol 2000,19:291a)。它是細胞周期相非特異性的(Sanof1-Synthelab0.Eloxatin:Summary of product characteristics(Europe):France ;1ctober 1999)。
[0182]像其他化學治療藥物一樣,使用奧沙利鉬也有副作用。較常見的副作用包括:惡心、嘔吐、由于神經刺激而使手和/或足麻木和刺痛、嘴唇麻木、腹瀉、腹痛、口瘡、呼吸困難和疲勞。較少見的副作用包括行走困難、白細胞計數減少導致感染危險增加、血小板計數減少導致出血危險增加、難以吞咽或呼吸、對寒冷溫度的耐受性差和具有皮疹的變態反應、發癢、唇舌腫脹或突然咳嗽。
[0183]沙立度胺:沙立度胺是谷氨酸的衍生物,在20世紀50年代最早被開據處方作為止吐藥。不幸的是,發現沙立度胺在胎兒形成中具有致畸作用。因此,沙立度胺退出了市場。近些年,在其他藥物領域中研究了沙立度胺。發現沙立度胺能顯著減少新血管的形成并抑制血管內皮生長因子(VEGF)誘發的血管發生,血管發生是血液學惡性病的重要進程。幾項臨床試驗暗示沙立度胺可能也具有抗腫瘤性質。
[0184]沙立度胺存在兩種異構體形式,將它們稱為右手性的和左手性的。這兩種異構體自然互換,形成外消旋混合物。沙立度胺衍生的類似物包括免疫調節藥(MiD)和SelCID (選擇性細胞因子抑制藥)。IMiD的例子包括但不限于CC-4047和CC-5013。SelCID的例子包括但不限于CC-7034和CC-9088。沙立度胺的其他衍生物包括但不限于lenalidomide、a-EMl2、β-ΕΜ12和鄰苯二甲酸鄰苯二甲酸亞胺。
[0185]在近些年,已發現沙立度胺在各種疾病,包括但不限于AIDS、麻瘋病、風濕性關節炎和癌癥的治療中具有一些作用。具體地,在HIV患者中,沙立度胺有助于減少cashexia(身體和肌肉質量的進行性減少)的作用和治療aphothous潰瘍(口咽中的瘡生長)。沙立度胺還能有效地停止HIV復制。還顯示沙立度胺具有抗炎和免疫抑制性質,這使得其可能有效地治療貝切赫特病(Behcet’s disease)、肉瘤、硬皮病和克羅恩病。
[0186]此外,已經確定沙立度胺為用于治療晚期復發和難控的多發性骨髓瘤(MM)的有效的療法(Singhal等人1999N.Engl.J.Med.341:1565-1571)。已研究證實,沙立度胺和IMiD兩者不僅抑制血管發生,而且直接誘發耐受骨髓瘤細胞中的凋亡和生長抑制。它們還阻斷骨髓瘤細胞與骨髓間質細胞的結合以及對凋亡的相關保護,阻斷骨髓瘤細胞生長、存活和遷移因子如白介素-6、腫瘤壞死因子α (TNF-α)和血管內皮生長因子的分泌增加,這種分泌的增加是由骨髓瘤細胞與骨髓間質細胞的結合引發的。而且,它們在體內擴大天然殺傷細胞和T細胞的數量,改善對抗人骨髓瘤細胞的功能,增強這些細胞對抗體依賴性細胞介導的細胞毒性的敏感性。(參見例如Anderson等人2001Semin Hematol 38:6-10;Hideshima 等人 2000Blood 96:2943-2950 ;Gupta et al 2001Leukemia 15:1950-1961;Davies 等人 2001Blood 98:210-216 ;Treon 等人 2001J Immunother 24:236-271 ;Lentzsch等人2003Leukemia 17:41-44)。但是,沙立度胺的功效明顯受到不良作用的限制,不良作用包括:鎮靜、神經病、便秘和深靜脈血栓癥。
[0187]多柔比星:多柔比星(阿霉素、DOX> ADM)是由真菌streptomyces peucetius產生的蒽環類抗生素,已經被批準用于治療各種癌癥。多柔比星是DNA拓撲異構酶II的抑制劑;它通過蒽環部分的插入、金屬離子的螯合或者通過產生自由基來損害DNA。盡管沒有經FDA批準的化學治療藥物可用于治療肝細胞癌,但多柔比星現在被用作“標準的”化學治療。在包括475名可評價患者的八項試驗中報告的響應率為16% (范圍為0-35% ) (EngstromPF等人,(1993) in Cancer Medicine Holland JF, Frei E(eds)pp.1430-1441.London:Lea和 Febiger)。
[0188]生活質量(QOL):癌癥治療成功的標準評價措施包括但不限于腫瘤塊和類型以及腫瘤擴散速率和數量的變化(被評價腫瘤的局部和遠端)。化學治療的領域的技術人員還能夠確定特定的治療方法是否可提高患者的預期壽命和生活質量(即使對那些對通常治療沒有響應的患者)。例如,可以通過幾種標準來確定對胃腸疾病的有效治療,這些標準包括但不限于腸炎評分(基于臨床癥狀如腹痛、痛性痙攣、糞便中的愈創木脂和腹瀉的綜合評分)、以及相關終點如所遞送的化學治療的劑量百分比、住院天數、輸血、靜脈輸液治療、抗運動劑和飲食能力。
[0189]關于治療作用,患者的自覺癥狀并非始終符合醫生所進行試驗的結果。例如:即使在獲得不利測試結果的情況下,當尿失禁和排泄的發生減少時,患者也相信治療已經起作用,其結果是生活質量(QOL)得到改善。在化學治療的過程中,患者生命中的負面副作用如脫發、體重下降、食欲減退、疲勞、腹瀉、惡心、嘔吐等可能會持續并且導致日夜不停的緩慢折磨,這從身體上和精神上對于患者均是無法忍受的。因此,本發明方法的治療效力是指不僅部分或完全免除疼痛或者減少腫瘤生長或癌癥進程,而且減少或消除通常與治療相關的副作用,其總體結果是提高了生活質量。
[0190]可以包括基線評價作為治療方案的組成部分,由此測量各種標準并使這些標準與QOL關聯。此外,患者可以報告患者每日情況如感覺“平靜”或經受“中度”疼痛。然后在治療過程之中和之后使用這些測量,以評價患者是否感覺生活質量已經得到改善。
[0191 ] 2.寄生蟲感染的化學治療
[0192]寄生原生動物在人和動物中導致各種感染,由寄生原生動物導致的許多疾病對宿主是致命的。例如,盡管國際上作了巨大努力來根除瘧疾,但是它仍然對人體健康有明顯的威脅;錐蟲病如由克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi)導致的恰加斯病和由布氏錐蟲(T.brucei)導致的非洲睡眠病在非洲和南美中并不罕見;在無免疫應答的宿主中,由卡氏肺囊蟲(Pneumocystis carinii)、鼠弓形體(Toxoplasma gondii)、隱孢子蟲(Cryptosporidium spp.)導致的機會性感染在發達國家中正在日益變得顯著。
[0193]在一些原生動物病如恰加斯病中,沒有令人滿意的治療;在其他疾病中,可能產生原生動物的耐藥株。因此,仍需要確定新的且有效的抗原生動物藥物。然而,就大部分情況而言,通過抗一組寄生蟲的天然產物和合成化合物的生物篩選來發現抗寄生蟲藥物,這是隨機和費時的方法。
[0194]盡管在疫苗開發中有令人鼓舞的進展,但是化學治療仍然是控制大多數寄生蟲感染的單一最有效、有效率和廉價的方式(Tracy和Webster, Chemotherapy of ParasiticInfect1ns, in Goodman&Gilman,s The Pharmacological Basis of Therapeutics, NinthEdit1n, pages 955-985,1996)。目前可用的藥物在治療由吸蟲和腸寄生蟲導致的人體感染方面特別有效。但是迫切需要新型或更好的藥物來抵抗全身感染如囊尾幼蟲病、絲蟲病、利什曼病、旋毛蟲病和錐蟲病,阻止特別由瘧疾和其他原生動物寄生蟲表現出的耐藥性的形成。原生動物寄生蟲對藥物產生耐藥性遠易于蠕蟲對藥物產生耐藥性,這與其在宿主中更迅速增殖的情況一致。
[0195]抗寄生蟲藥物在患者中應安全而有效,這是必需的。抗寄生蟲藥物的治療功效是復雜的,取決于宿主、寄生蟲和環境因素。因此,通常通過試驗和誤差來決定最佳藥物和最佳劑量方案,而非來自對患地方病感染的患者進行細致的藥物動力學和藥效學研究。為了進行正確的評價,僅應在適當的流行病學研究公開了傳播模式和年齡特異性流行性與疾病感染強度之間的關系之后,再制定基于人群的化學治療方案。為了得到最佳結果,應將化學治療與其他適合于特定感染、環境和宿主人群的公眾健康措施聯用。用于群體化學治療的理想藥劑應該對感染性寄生蟲的所有發育階段具有廣泛活性。在僅口服一天的高治療劑量下,它也應是安全的:在使用條件下保持化學穩定性;作為耐藥性的誘發物是有效的;并且是廉價的。目前幾乎沒有可用的抗寄生蟲藥物滿足這些標準。
[0196]對無性生殖紅細胞瘧疾寄生蟲有效的化學治療藥物包括氯奎、奎寧、甲氟奎和鹵泛群。其他藥物如乙胺嘧啶、磺胺類、砜類和四環素類作用緩慢且療效低于上述藥劑,由此通常將它們與其他化學治療藥物聯用。藥劑如阿托伐醌、氯奎、糠酸二氯尼特、依氟鳥氨酸、依米丁和去氫依米丁、8-羥基喹啉類、美拉胂醇、甲硝唑、硝呋替莫、噴他脒、米帕林、銻酰葡糖酸鈉和舒拉明可有效地治療寄生蟲感染,包括錐蟲病、利什曼病、阿米巴病、甲第蟲病和毛滴蟲病。最終,通常用驅腸蟲藥如苯并咪唑、乙胺嗪、伊維菌素、美曲膦酯、氯硝柳胺、奧沙尼喹、哌嗪、吡喹酮和雙羥萘酸噻嘧啶治療帶有寄生蟲蠕蟲、蠕蟲病的感染。關于寄生蟲感染化學治療的綜述,參見Tracy和Webster的,文獻同上。
[0197]3.微生物疾病的化學治療
[0198]在1936年,由Colebrook和Kenny以及Buttle和合作者報道了使用磺胺在產后膿毒病和腦膜炎球菌感染中的有利臨床結果,這使醫學領域人員意識到了抗菌化學治療的新領域。在1941年,青霉素大量生產并首次用于有限的臨床試驗。目前,全部住院患者中至少30%接受使用抗生素的一個或多個療程,已經治愈了數以百萬計可能致命的感染。
[0199]抗生素是由各種微生物(細菌、真菌、放線菌)產生的物質,它們可抑制其他微生物的生長,最終可以消滅它們。然而,通常將該術語擴展至包括合成的細菌活性劑,例如磺胺類和喹諾酮類,它們并非微生物的產物。抗生素在物理、化學和藥理學特性、抗菌譜以及作用機理方面各不相同。
[0200]基于化學結構和提示作用機理的最常見抗菌劑分類如下:(I)抑制細菌細胞壁合成的藥劑;例如結構相似的青霉素類和頭抱菌素類、不相似的藥劑如環絲氨酸、萬古霉素、桿菌肽,以及咪唑類抗真菌藥如咪康唑、酮康唑和克霉唑;(2)直接對微生物細胞膜起作用的藥劑,從而影響滲透性并導致胞內化合物泄漏;它們包括洗滌劑、多粘菌素和多粘菌素E甲磺酸,以及與細胞壁固醇類結合的多烯類抗真菌藥;(3)影響30S或50S核糖體亞基功能,導致對蛋白質合成的可逆抑制的藥劑;這些制菌藥物包括氯霉素、四環素類、紅霉素和克林霉素;(4)與30S核糖體亞基結合并改變蛋白質合成(其最終導致細胞死亡)的藥劑;它們包括氨基糖苷類;(5)影響核酸代謝的藥劑,如抑制DNA-依賴性RNA聚合酶的利福霉素(例如利福平),和抑制回旋酶的喹諾酮類;(6)抗代謝物,包括甲氧芐啶和磺胺類,它們阻斷微生物必需的特定代謝步驟;(7)核酸類似物,如齊多夫定、更昔洛韋、阿糖腺苷和阿昔洛韋,它們抑制DNA合成必需的病毒酶,從而終止病毒復制。(參見Chambers和Sandej Sect1n IX Chemotherapy of Microbial Diseases:Antimicrobial Agents, inGoodman&GiIman^ s The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ninth Edit1n, page1029,1996.)
[0201]抗生素在治療感染方面是否有效取決于幾個因素。要使抗生素有效,必須在感染部位獲得足夠的抗生素濃度以抑制細菌生長。然而,藥物的濃度必須保持在對人體細胞具有毒性的濃度以下。如果抑制或殺滅微生物所需的抗生素濃度大于可以獲得安全性的濃度,則認為微生物對該抗生素具有耐藥性。細菌可能對抗菌劑產生耐藥性,這是因為該藥劑不能達到其靶、該藥劑失活或所述靶已改變。一些細菌產生保留在細胞表面上或細胞表面內的酶而使藥物失活。其他細菌具有防止藥物進入的不透性細胞膜。一些細菌缺乏由孔蛋白構成的水通道,親水藥劑使用該通道跨過細菌的外膜,而其他細菌缺乏藥物進入細菌細胞所需的轉運體系。抗生素抗性病原體的出現導致對治療抗微生物疾病的新型藥物和新型方法存在持久增加的需求。
[0202]B.杭病毒治療
[0203]1.病毒和病毒性疾病
[0204]病毒是不能由其自身再生的微生物。然而,通過感染宿主細胞,病毒利用宿主細胞的代謝機質產生更多的病毒物質。宿主細胞內的病毒感染和復制通常導致疾病,無論該宿主是動物還是植物。由病毒感染導致的人體疾病包括例如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)和肝炎。對該領域的一般性討論列于Fundamental Virology, Second Edit1n, (ed.B.N.Fields, D.M.Knipe, R.M.Chanock, M.S.Hirsh, J.L.Melnick, T.P.Monath, andB.Roizman, Raven Press, Ltd., New York, N.Y.1991) ?下面討論幾種病毒和它們導致的疾病例子。
[0205]逆轉錄病毒:逆轉錄病毒包括主要感染脊椎動物的病毒大家族。許多疾病,包括一些腫瘤的誘發與逆轉錄病毒感染有關(參見同上Fundamental Virology, pp.645-708)。逆轉錄病毒包含通過DNA中間體復制的RNA基因組。在逆轉錄病毒生命周期早期,RNA基因組通過病毒編碼的逆轉錄酶(RT)被拷貝到DNA中。該酶能夠使用RNA和DNA模板,從而由感染性RNA基因組產生第一鏈DNA (負鏈),使用第一鏈DNA作為模板產生DNA的互補第二鏈(正鏈)。為了合成這些DNA鏈,RT利用稱作脫氧核苷三磷酸(dNTP)的細胞底物。
[0206]能夠將人逆轉錄病毒分類成白血病病毒(HTLV型病毒)和免疫缺陷病毒(HIV型病毒)。HTLV感染可以導致一種形式的白血病。HIV感染導致獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)。存在兩種相關的人免疫缺陷病毒:HIV-1和HIV-2。HIV-1的毒力超過HIV-2。HTLV和HIV均感染外周血液淋巴細胞(PBL)。
[0207]其他動物逆轉錄病毒包括貓白血病毒(FeLV)和慢病毒屬。有毒力的FeLV感染一般導致貓致死性再生障礙性貧血。慢病毒屬導致各種神經和免疫疾病,例如綿羊的綿羊脫髓鞘性腦白質炎和馬的感染性貧血。
[0208]感染人、動物和植物的幾種其他病毒也依賴逆轉錄酶進行復制。它們包括逆轉錄病毒如已知存在于幾個種類中的白血病病毒,包括人體HTLV-1,以及逆轉錄酶依賴性DNA病毒,例如花椰菜花葉病毒(植物病毒)。
[0209]病毒性肝炎:肝炎是人體肝的疾病。它的表現為肝發炎,通常由病毒感染引起,有時來自毒性劑。肝炎可以發展成肝硬化、肝癌,并最終導致死亡。已知幾種病毒如甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒和己型肝炎病毒可導致不同類型的病毒性肝炎。其中,HBV和HCV最為嚴重。
[0210]乙型肝炎由DNA病毒引起。它具有50-160天的長潛伏期。它通常通過注射受感染的血液或血液衍生物或通過使用受污染的針頭、刺血針或其他器械而傳播。乙型肝炎病毒感染導致肝廣泛損傷。此外,慢性乙型肝炎感染與隨后發展成屬于主要死亡原因的肝細胞癌相關。
[0211]丙型肝炎由RNA病毒引起。潛伏期為6-8周,其中約75%為亞臨床感染,并產生慢性持久性感染。很高的百分比發展成慢性肝病,從而導致肝硬化和可能的肝細胞癌。丙型肝炎難以治療,據估計全世界有5億人感染它(約為感染HIV的15倍)。
[0212]皰疹病毒:分離自人體的皰疹病毒包括但不限于:單純皰疹I型病毒(“HSV-1”)、單純皰疹2型病毒(“HSV-2”)、人巨細胞病毒(“HCMV”)、水痘-帶狀皰疹病毒(“VZV”)、EB病毒(“EBV”)、人6型皰疹病毒(“HHV6”)、單純皰疹7型病毒(“HSV-7”)、單純皰疹8型病毒(“HSV-8”)。還從馬、牛、豬(假狂犬病病毒(“PSV”)和豬巨細胞病毒)、雞(感染中性喉氣管炎)、黑猩猩、鳥類(馬立克氏病I型和2型皰疹病毒)、火雞和魚中分離出皰疹病毒(參見“Herpesviridae:A Brief Introduct1n,,, Virology, Second Edit1n, editedby B.N.Fields, Chapter 64,1787(1990))。
[0213]單純皰疹病毒(“HSV”)感染一般是復發性病毒感染,其特征在于在炎癥輕度增加的基礎上,皮膚或粘膜上出現充滿澄清液體的單一或多簇小泡。
[0214]單純皰疹病毒是相對大尺寸的病毒。HSV-2通常產生唇單純性皰疹。通常但并不總能從生殖器損害中回收HSV-2。一般來說,HSV-2通過性交傳播。
[0215]由水痘-帶狀皰疹病毒(人3型皰疹病毒)導致的疾病包括水痘(水痘)和帶狀皰疹(帶狀皰疹)。巨細胞病毒(人5型皰疹病毒)導致嬰兒中的巨細胞包含體疾病。EB病毒(人4型皰疹病毒)是傳染性單核細胞增多的病原體,與伯基特淋巴瘤和鼻咽癌有關。可以對人造成難題的動物皰疫病毒包括B病毒(Old World猴子的皰疫病毒)和絨猴皰疫病毒(New World猴子的皰疫病毒)。
[0216]2.杭病毒劑
[0217]抗病毒劑包括治療生殖器皰疹的藥物如阿昔洛韋(ACV)到治療AIDS的藥物如齊多夫定(AZT)和雙脫氧肌苷(DDI)。下面討論幾種抗病毒劑的例子。
[0218]在許多年中,開發了抗逆轉錄病毒的藥物來治療AIDS。抗逆轉錄病毒藥物包括例如:Abacavir (ABC)、Adefovir (ADV)、Amprenavir (APV)、齊多夫定(AZT)、去輕肌苷(ddl)、扎西他濱(ddC)、Stavudine (d4T)、Efavirenz (EFV)、拉米夫定(3TC)、沙奎那韋(SQV)、Indinavir (IDV)、Ritonavir (RTV)、Delavirdine (DLV)、Nelfinavir (NFV)、奈韋拉平(NVP)。然而,用抗病毒劑物治療AIDS的嘗試沒有滿足所需的成功程度。盡管一些抗病毒劑物的功效較高,但是最初體外/體內測試的特征在于迅速產生耐受這些藥物的HIV-1變體。另外,使用抗病毒藥物存在潛在的毒性。需要有效而安全的方式來治療AIDS。
[0219]沒有局部或全身化學治療藥物被證實對治療單純皰疹病毒有效,但可能不包括在表淺皰疹性角膜炎中使用的局部用碘苷(IDU)。對該化合物在皮膚皰疹中作用的報道是不一致的。已經用于治療HSV的其他藥物包括三氟胸苷、阿糖胸苷(阿糖胸普,ara-A)、阿昔洛韋,其他病毒DNA合成抑制劑可能對皰疹性角膜炎有效。這些藥物抑制單純皰疹病毒的復制,可以抑制臨床表現。然而,單獨皰疹病毒仍然隱藏在感覺神經節中,復發的比例在藥物治療和未治療的個體中相似。此外,已經出現了一些耐藥性皰疹病毒菌株。因此,還需要開發更有效的方式來治療與單純皰疫病毒相關的疾病。
[0220]目前,乙型肝炎病毒(HBV)感染的預防方法是安全有效地接種乙型肝炎疫苗。然而,接種疫苗對那些已經感染的個體(即攜帶者和患者)無效。許多藥物已經用于治療慢性乙型肝炎,除了干擾素,無一被證明是有效的。
[0221]對于丙型肝炎,目前沒有可用的有效免疫方法,僅能通過其他預防措施如改善衛生保健和衛生條件并阻斷傳播途徑來控制丙型肝炎。目前,唯一可接受的慢性丙型肝炎治療是干擾素和/或利巴韋林,前者需要至少六(6)個月的治療,后者能夠抑制受感染細胞中的病毒復制,并改善一些人的肝功。然而,用干擾素、用或不用利巴韋林治療具有有限的長期功效,其響應率約為25%。
[0222]C.PHY906
[0223]介紹:PHY906是傳統中草藥制劑,由四味分別選自四種草藥屬之一的草藥組成。所述四種草藥屬通常稱作黃芩屬(有時稱作Scute)、甘草、芍藥和棗屬果實(表3)。因此,為了制備本發明所需的草藥組合物,從表3提供的四種植物屬的每一種中選擇一種植物種。盡管提供了所列植物種的特定組合作為優選PHY906制劑的例子,但是本發明的組合物和方法包括四種植物種的任何組合,其中植物種選自表3中四組的每一種。本發明包括這類草藥的任何這類組合,所述的草藥具有至少一種本文所述的PHY906產生的生物活性或所需作用。
[0224]表3.能夠用于制備PHY906的四個屬的特定種的例子
[0225]TCM草藥屬的常用英文名黃荅屬(ScuteHariii) 甘草(Licorice) 荀藥(Peony Alba) 専屬果實




(Ziziphi




Fruit)
草玉梅(Anemone毛相思子黃牡丹(Paeonia専 (Ziziphusrival a Hs Buch.-Ham.mollis Hancc) delavayi Franch, van jujuba Mill.)cx DC.)Iutca (Dclavay cx


Franch.) Finct Cl

Gagnep.)
蛾眉糖松果粗毛甘草3茍(Paeonia lactiflora無剌事(Thalictruni omelense (GlycyrrhizaPal 1.)(Ziziphus
W.T.Wang Cl S.H.aspera Pall.)jujuba Mill.Wang)var.1ncrmis)
扁闊葉十大功勞黃甘 草美腿巧藥{Paeonia(Mahonia bealei (For1.) [Glycyrrhizamairei Lev1.)
Carr.)eurycarpa

P.C.Li)
南天竹{Nandina洋甘 草毛葉草茍藥(Paeoniadomestica Thunb.)(Glycyrrhizciobovata Maxim, var.glabra L.)willmottiac (Stapi)


Stem)
滇黃苳{Scutellaria脹果甘草雪花構、Daphneamoena C,H, Wright) {Glycyrrhizapapyracea Wall, cx

inflata Bat.)Stcud.)
Scutellaria amoena 圓果甘草青羊參(CynanchumC.H.Wright var.(Glycyrrhizciotophyllum Schncid.)
cincrca Hand.-Mazz.scjuamulosa

Franch.)
黃苳 (Scutellaria 甘草(Glycyrrhiza 羊學 L (Codonopsisbaicalcnsis Georgi)uralensis Fisch,) Ianceolara Sicb.et


Zucc.Trauiv )
[0226] Scutellaria baicalensis 假名-)l (Ph1mis Georgi var.albiilora IC betonicoidcs OnumaDicis)
中旬黃尊{Scutellaria chungtienensis C.Y.Wu)
連翅葉黃芩 hypericifblia Lev I)
HH 江黃零{Scutellaria Hkiangcnsia Diels)
Scutellaria obtusifolia Hcmsl.var.trincrvata (Vant.) C.Y.Wu et HAV.Li
狄葉黃零{Scutellaria regeliana Nakai)
Scutellaria regeliana Nakai var.1konnikovii (Juz.) C.Y.Wu ct H.W.Li
甘肅黃岑{Scutellaria rehderiana Diels)
Scutellaria tcnax W.W.Smith var.patcntipilosa
(Hand, -Marz.) C.Y,
Wu
粘毛黃零{Scutellaria viscidula Bunge)
[0227]這種草藥制劑已經在亞洲長期用于治療各種疾病,如心臟擴張、腹部痙攣、發熱、頭痛、嘔吐、干嘔、口渴和粘樣糞便(Hani Oka和Taki No,1998)。將優選的PHY906制劑列在表4中。
[0228]表4.TCM制劑PHY906的草藥成分
[0229] 科學名百分比常用名傳統用途

用于降低毛細管通透性;減少炎癥;治療腸炎黃芩W 3 黃芩根和痢疾;增加膽汁分泌以治療黃疸;治療肌痙

攣以治療咳嗽;排出寄生蟲

用于潤肺止咳;松弛痙攣并止痛;節制草藥的
甘早22.2 甘早根

作用;瀉火和釋放毒素棗22 2 海棗具有利尿和強身作用芍藥22.2 白芍根用于抑制和緩解疼痛;安撫韌帶并純化血液
[0230]替代PHY906制劑具有黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬草藥,其相對比例分別如下:4/14:3/14:4/14:3/14。
[0231]盡管提供了 PHY906草藥的特定比例作為例子,但本發明的組合物和方法包括具有本文所述的所需生物活性的任何比例的四種草藥成分。
[0232]目前,由 Sun Ten Laboratories, Inc., in Irvine, CA (臺灣 Sun TenPharmaceutical C0.Ltd.的子公司)使用表4提供的制劑生產PHY906明膠膠囊和顆粒藥袋。自 1983 年以來,這種 PHY906 制劑由 Br1n Herbs Corporat1n(12020B CentraliaRoad, Hawaiian Garden, CA, 90716)作為食物增補劑分配和銷售。
[0233]生產:提供了對能夠用于生產PHY906的工藝的簡單綜述。首先,將適當比例的草藥粗原料成分置于夾套反應器中,在升高的恒溫下用水萃取,同時攪拌。所述配比列于由專家制劑記錄再現的生產說明。然后用120目篩從所述液體中分離固體物質。收集濾液,然后通過減壓蒸發水而濃縮。在升溫下將濃縮的液體噴霧干燥,以得到干粉,接著處理干粉,以得到成粒的粉末。然后將這種松散的物質配制成所需的劑型。
[0234]利用工藝控制確保產品的均勻性和完整性。這類工藝控制包括但不限于:檢查加工液體的體積、確定HPLC以建立化學指紋分析,鑒定所述原料的特性和對中間體和終產品的檢查和測定。為所進行的每種分析以及制備和生產控制的每一步驟建立可接受的質量水平(AQL)限度。
[0235]在生產說明記錄中,為生產過程所用的所有成分指定特定批號。在批量投料前復查質量控制記錄。
[0236]使用純標記物來鑒定和控制原料以及草藥物質的質量。表5列出了用于制備PHY-06草藥的各原料的標記物。
[0237]表5.用于PHY906草藥成分的標記物
[0238]
WMj草藥的原產地 j標記物
中國山西省貝加靈
¥1j中國內蒙古自治區j甘草甜
棗中國河北/山東省白屈菜酸
中國安徽省WMW
[0239]D.PHY906的藥物制劑
[0240]可以通過非腸道、皮下、靜脈內、肌內、腹膜內、經皮或含服途徑給藥本發明的組合物。作為替代或同時,可以通過口服途徑給藥。所給藥的劑量將取決于受體的年齡、健康和體重、同時進行的治療類型(如果有的話)、治療頻率和所需作用的性質。
[0241]可以將本發明用于全身給藥的藥物制劑配制成用于腸道、非腸道或局部給藥。實際上,可以同時使用所有這三種類型的制劑,以實現活性成分的全身給藥。
[0242]本發明還提供了包含一種或多種治療藥的組合物,該組合物可治療各種類型癌癥和/或調節造血活性,例如肺結核(T.B.)、天然殺傷細胞(NK)、單核細胞和樹突細胞的免疫調節。
[0243]盡管個體需要不同,但是確定各成分有效量的最佳范圍在現有技術范圍內。
[0244]除藥用活性劑外,本發明的組合物還可以包含合適的可藥用載體,包括賦形劑和助劑,它們有利于將所述活性化合物加工成制劑,該制劑能夠用于將藥物遞送至作用部位。
[0245]PHY906能夠以藥物制劑的形式使用,例如為固體、半固體或液體的形式,其中包含作為活性成分的PHY906,并混有適合外用、腸道或非腸道應用的有機或無機載體或賦形劑。可以將所述活性成分與例如常用的無毒可藥用載體混合成片劑、丸劑、膠囊、栓劑、溶液、乳齊U、混懸劑和適合應用的任何其他形式。本發明的制劑包括如下制劑,其包含滑石、水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯樹膠、明膠、甘露醇、淀粉糊、三硅酸鎂、玉米淀粉、角蛋白、膠體二氧化硅、馬鈴薯淀粉、尿素和適用于生產固體、半固體或液體形式制劑的其他載體,還可以使用助齊U、穩定劑、增稠劑、著色劑和香料。
[0246]為了制備固體組合物如片劑或膠囊,將PHY906與藥物載體(例如常用片劑成分,如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸氫二鈣或樹膠)和其他藥用稀釋劑(例如水)混合,以形成固體預配制組合物,它包含基本上均勻的PHY906混合物或其無毒藥學可接受的鹽。當將預配制組合物稱為基本上均勻時,是指將活性成分均勻分散在組合物中,使得可以方便地將該組合物再分成等效的單位劑型,如片劑、丸劑和膠囊。然后將這種固體預配制組合物再分成包含有效量本發明組合物的上述單位劑型類型,優選膠囊。
[0247]能夠給包含PHY906的片劑或丸劑包衣或以其他方式復合,以提供具有延長作用優點的劑型。例如,所述片劑或丸劑能夠包括內層劑量和外層劑量成分,后者作為前者的外部封蓋的形式。兩種成分能夠被腸溶層隔開,該層用于阻止在胃中崩解,使內部成分完整無缺地進入十二指腸,或用于延遲釋放。能夠將各種材料用于這類腸溶層或衣料,這類材料包括許多聚合酸以及聚合酸與如下材料如蟲膠、鯨蠟醇和乙酸纖維素的混合物。
[0248]可以包括PHY906用于口服或通過注射給藥的液體形式包括:水溶液、適當調味的糖漿、水或油混懸劑和包含食用油如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油的調味乳劑以及酏劑和類似的藥物載體。適用于水混懸劑的分散劑或助懸劑包括:合成的天然樹膠,如黃芪膠、阿拉伯膠、藻酸鹽、右旋糖酐、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
[0249]用于口服給藥的液體制劑可以采用例如溶液、糖漿或混懸劑的形式,或者它們可以作為在使用前用水或其他合適載體再溶解的干燥產品。可以通過常規方式,使用藥學可接受的添加劑制備這類液體制劑,所述添加劑為例如:助懸劑(例如山梨醇糖漿、甲基纖維素或氫化的可食用脂肪);乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠);非水載體(例如杏仁油、油酯類或乙醇);防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸);和人工或天然著色劑和/或甜味劑。
[0250]對于口腔給藥,本發明的組合物可以采用以常規方式配制成的片劑或錠劑形式。
[0251]還可以將PHY906配制成通過注射給藥的非腸道制劑,注射包括使用常規的導管插入技術或輸注。注射用制劑可以存在于單元劑型中,例如在安瓿或多劑量容器中,包含添加的防腐劑。所述組合物可以采用如下形式,例如在油或水性載體中的混懸劑、溶液或乳齊U,可以包含配制劑如助懸劑、穩定劑和/或分散劑。或者,所述活性成分可以是粉末形式,用于在使用前以合適的載體例如無菌無熱原的水再溶解。
[0252]用于非腸道給藥的合適制劑包括可水溶形式的活性化合物的溶液,例如水溶性鹽的溶液。此外,可以將活性化合物的懸浮液作為適當的油性注射混懸劑給藥。合適的親脂性溶劑或載體包括:脂肪油,例如芝麻油或合成的脂肪酸酯,例如油酸乙酯或甘油三酯。含水注射混懸劑可以包含增加所述混懸劑粘度的物質,包括例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或右旋糖酐。任選地,該混懸劑還可以包含穩定劑。還能夠使用脂質體包封藥劑,用于遞送至細胞中。
[0253]在實踐本發明的方法時,可以單獨或組合使用PHY906,或者與其他治療劑或診斷劑組合。在某些優選實施方案中,可以根據通常接受的醫學實踐,將本發明的化合物與用于癌癥化學治療的典型處方的其他化合物共同給藥。可以將本發明的化合物在體內,一般為哺乳動物如人、綿羊、馬、牛、豬、狗、貓、大鼠和小鼠體內使用,或在體外使用。
[0254]用于制備可給藥組合物的實際方法和給藥至受體所必需的調整對本領域技術人員將是已知或顯而易見的,詳細描述于例如Remington’s Pharmaceutical Science, 17thEd., Mack Publishing Company, Easton, Pa.(1985)中,該文獻被引入本文作為參考。
[0255]“治療指數”用于表示在比較治療作用和不良作用時,對藥物選擇性的定性描述。例如,如果將不良作用標為T (就毒性而言),將治療作用標為E,則治療指數可以定義為TD50/ED50,或者在一些其他任何響應水平下的近似比。
[0256]E.俥用PHY906的方法
[0257]本發明提供了聯合使用PHY906和治療劑來治療各種疾病、癥狀或病癥的方法。
[0258]具體地,本發明提供了聯合使用PHY906和化學治療藥物來治療疾病、癥狀或病癥的方法。優選地,本發明提供了治療癌癥的方法,該方法包括向患者聯合給藥一種或多種癌癥化學治療藥物和PHY906。所述化學治療藥物包括但不限于CPT-11、5-FU/LV、VP-16、L-0ddC、卡培他濱、吉西他濱、奧沙利鉬、沙立度胺、多柔比星、及其組合。更優選地,本發明提供了治療結腸直腸癌、胰腺癌、肝細胞癌的方法,該方法包括聯合給藥CPT-11/FU/LV、奧沙利鉬/FU/LV或奧沙利鉬/吉西他濱和PHY906。
[0259]本發明關注聯合使用PHY906和抗病毒劑來治療疾病、癥狀或病癥的方法。優選地,本發明提供了治療與病毒感染相關的疾病的方法,該方法包括向患者聯合給藥一種或多種抗病毒劑和PHY906。更優選地,本發明提供了治療AIDS的方法,該方法包括聯合給藥一種或多種抗逆轉錄病毒藥和PHY906。甚至更優選地,所述抗逆轉錄病毒藥選自AZT、D4T、DDC、3TC和DDI。最優選地,向患者給藥包括三種抗病毒劑和PHY906的組合。三種抗病毒劑的優選組合包括但不限于:1)D4T、3TC和蛋白酶抑制劑;2)AZT、3TC和蛋白酶抑制劑;和3) AZT, DDI和蛋白酶抑制劑。用于治療HIV的優選蛋白酶抑制劑包括但不限于奈非那韋、茚地那韋、沙奎那韋和利托那韋。
[0260]在本發明的一個方面,向細胞系如癌癥或癌細胞系和HIV細胞系給藥PHY906,以評價PHY906對不同細胞系的毒性。優選地,所述癌癥或癌細胞系包括但不限于:Jurkat、KB、H印G2、Hep Gl.6、T-細胞淋巴瘤(CEM)、結腸 26、結腸 38、HCT116、PANC 01、PANC 02、HPAC,所述HIV細胞系包括但不限于H9細胞和MT-2細胞。
[0261]在本發明的另一個方面,向動物聯合給藥PHY906與一種或多種化學治療藥物或抗病毒劑,以確定PHY906是否可以有效地提高所述活性劑的治療指數和正經歷化學治療的或抗病毒治療的動物的生活質量。優選地,所述動物是哺乳動物。更優選地,所述哺乳動物是人。
[0262]動物可能是用于特定癌癥或病毒性疾病的動物模型。此外,動物可能具有缺陷型免疫系統。這類動物模型在本領域中是公知的。已經將天然免疫缺陷的小鼠用于研究免疫系統、癌癥和感染性疾病,包括獲得性免疫缺陷綜合征或AIDS。例如,裸(NU)鼠是無胸腺的,所以不能發生T細胞分化和成熟。作為異種移植、尤其是人腫瘤宿主和抗癌藥的測試,裸鼠已經被使用了許多年。嚴重的聯合免疫缺陷綜合征(SCID)小鼠表現出TCR(T細胞受體)和免疫球蛋白基因均為有缺陷的重排,表現出嚴重的免疫缺陷。beige (BG)小鼠攜帶有功能性天然殺傷細胞缺陷,而X-連接的免疫缺陷(XID)小鼠在產生B細胞方面存在缺陷。此外,已經在各種品系中進行了雜交,以產生帶有更廣泛免疫缺陷表型的品系(例如BG/NU和 BG/NU/XID)。
[0263]可以考慮將其他實驗動物作為用于本發明的實驗室動物候選者,它們幾乎沒有或沒有自身免疫系統,或者已經用藥物或放射處理,或者是通過傳統遺傳發育或遺傳工程產生的,以具有受抑制的免疫系統、弱化的免疫系統或變性的免疫系統或者根本沒有免疫系統,例如SCID馬和其他SCID動物以及甚至潛在AIDS感染的動物,其中在動物的免疫系統被破壞或失活后,AIDS 已經被抑制((Perryman L.E., McGuire, T.C., Torbeck, R.L., andMagnuson, N.S., Clin.Tmmunol.Immunopath., 23(1): 1-9, 1982)。
[0264]用于研究經胎盤或產期抗逆轉錄病毒治療的鼠模型是公知的(Sharpe等人(1987)Science 236:1671-1674 ;Sharpe 等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.(USA)85:9792-9796 ;Sharpe等人(1989) J.Virol.63:1049-1053)。此外,已經確定應用獼猴作為哺乳動物模型,來研究由猿猴巨細胞病毒、Venezuelan和西方馬腦炎病毒、以及腮腺炎病毒導致的非逆轉錄病毒胎兒感染的過程(London等人(1986) Teratology 33:323-331 ;London等人(1977) Teratology 16:285-296 ;London 等人(1982) Teratology 25:71-79 ;London等人(1979) J.1nf.Diseases 139:324-328)。用猿猴免疫缺陷病毒(SIV)感染獼猴(Macacamulatta)近似地模擬了人中的HIV-1感染。HIV-1和SIV都是具有相似分子結構的慢病毒屬病毒(Chakrabarti等人(1987)Nature 328:543-547),均引起免疫缺陷,從而導致機會致病菌感染以及中樞神經體系損害(Letvin等人(1985)Science 230:71-73)。
[0265]已經報道將所產生的動物模型用于研究AIDS和骨髓細胞分化,其中在將人胎兒肝、胸腺和淋巴節共植入SCID小鼠以形成SCID/nu小鼠時,人淋巴細胞短暫增殖(McCune等人(1988)SCienCe 241:1632-1686)。這些小鼠中的人免疫組織對人免疫缺陷病毒(HIV)感染敏感(Namikawa等人(1988) Science 242:1684-1686),近來已經將該模型用于測試AZT在延緩AIDS病毒復制中的效力。
[0266]美國專利6,184,436公開了用作AIDS小動物模型的轉基因小鼠。該小鼠包括轉基因,轉基因包括在與人⑶4啟動子的可操作連接中編碼HIV-1的DNA序列,位于小鼠⑶4基因增強子的側翼。該小鼠發生了嚴重的AIDS疾病并導致早期死亡。
[0267]在優選實施方案中,對于用一種或多種化學治療藥物或抗病毒劑與PHY906聯合治療的動物,評價其體重下降和存活率,并與僅給藥所述一種或多種化學治療藥物或抗病毒劑的對照動物比較。還可能評價PHY906對抗腫瘤或抗病毒活性的作用,以確定PHY906的功效。
[0268]具體地,可能將PHY906評價為抗病毒治療如AIDS的調節劑。能夠使用上述用于AIDS的任何動物模型。第一步包括通過評價動物的體重下降,確定對健康動物給藥的抗病毒劑或抗病毒劑組合的最大耐受劑量。第二步包括對診斷為AIDS的動物給藥抗病毒劑或抗病毒劑與PHY906的組合。評價動物的體重,與在治療過程中不接受PHY906的對照動物進行比較。此外,通過測定紅細胞計數或血小板計數,評價PHY906與抗病毒劑或多種抗病毒劑的組合的血液學毒性。評價動物的白細胞計數,以確定PHY906與抗病毒劑或多種抗病毒劑的組合在治療AIDS動物中的效力。將各試驗的結果與不給藥PHY906的對照動物進行比較。
[0269]F.用于聯合治療的制劑
[0270]本發明提供了包括組合物的聯合治療,所述組合物包含一種或多種化合物和PHY906,用于治療癌癥,尤其是結腸直腸癌、胰腺癌和肝細胞癌。優選地,所述化合物為化學治療藥物,例如CPT-11、5-FU、LV、VP-16、L_0ddC、卡培他濱、吉西他濱、沙立度胺、多柔比星和奧沙利鉬。所述化合物也可以是抗病毒劑如AZT、DD1、3TC和D4T。聯合治療可以將所述化合物與PHY906作為組合物一起給藥,或者與PHY906的給藥分離地給藥所述化合物。可以單獨使用本發明的組合物或與另一種治療(例如手術、放射、生物學治療)組合進行治療。
[0271]能夠獨立控制每種組合物成分的給藥劑量和頻率。例如,一種成分可以每天口服給藥三次,而第二種成分可以每天靜脈內給藥一次。也可以將所述化合物和PHY906配制到一起,從而一次給藥遞送兩種成分。制劑和劑量如下所述。
[0272]藥物組合物的配制:可以通過任何合適的手段給藥組合物的每種化學治療藥物和PHY906,所述手段導致化合物的濃度、連同其他成分在到達靶區域時是特別抗腫瘤的。可以將任何適當量的化學治療藥物包括在任何合適的載體物質中,通常含量為組合物總重的l-95wt%。可以使所提供的組合物劑型適合口服、非腸道(例如靜脈內、肌內)、直腸、皮膚、鼻內、陰道、吸入、皮膚(貼片)或眼科給藥途徑。因此,組合物的形式可以為例如:片劑、膠囊、丸劑、散劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液、包括水凝膠的凝膠劑、糊劑、軟膏劑、乳膏、橡皮膏、drenches、遞藥裝置、栓劑、灌腸劑、可注射劑、植入物、噴霧或氣霧劑。可以根據常規藥學實踐配制藥物組合物(參見例如Remington:The Science and Practiceof Pharmacy, (19th ed.) ed.A.R.Gennaro, 1995, Mack Publishing Company, Easton, Pa.and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,eds.J.Swarbrick andJ.C.Boylanj 1988-1999,Marcel Dekkerj New York)。
[0273]可以將本發明的藥物組合物配制成基本上就在給藥時或在給藥后的任何預定時間或時間段釋放活性化合物。后一類組合物通常被稱為控釋制劑,其包括:(i)隨著時間段延長,在體內產生基本上恒定的藥物濃度的制劑;(ii)在預定的遲滯時間后,隨著時間段延長,在體內產生基本上恒定的藥物濃度的制劑;(iii)通過在體內保持相對恒定有效的藥物水平,同時使與活性藥物血漿水平波動(鋸齒動力學模型)相關的不良副作用最小化,從而在預定的時間段內維持藥物作用的制劑;(iv)通過例如將控釋組合物空間安置到患病組組織或器官的附近或內部,從而定位藥物作用的制劑;和(V)通過使用載體或化學衍生物將藥物遞送到特定的靶細胞類型,從而靶向藥物作用的制劑。
[0274]當化合物單獨或與PHY906組合時,給藥控釋制劑形式的化合物是特別優選的,這樣具有:(i)窄治療指數(即導致有害副作用或毒性反應的血漿濃度與導致治療作用的血漿濃度之間的差值很小;通常,將治療指數TI定義為半數致死劑量(LD5tl)與半數有效劑量(ED50)的比率);(ii)在胃腸道中具有窄吸收窗;或(iii)非常短的生物學半衰期,從而為了將血漿水平維持在治療水平,需要在一天中頻繁給藥。
[0275]為了獲得其中釋放速率超過所述化合物代謝速率的控釋制劑,可能應用許多策略中的任何一種。在一個實施例中,通過適當選擇各種制劑參數和成分,包括例如各種類型的控釋組合物和衣料,來獲得控釋。因此,將藥物與適當的賦形劑配制到藥物組合物中,在給藥至有機體后,該藥物組合物能以受控的方式釋放活性物質。例子包括單個或多單元的片劑或膠囊組合物、油溶液、懸浮液、乳劑、微囊、微球、納米粒、貼片和脂質體。
[0276]用于口服的固體劑型:用于口服的包含PHY906和一種或多種化合物的組合物制劑包括片劑,片劑中包含活性成分,并混有無毒藥學可接受的賦形劑。這些賦形劑可以是例如:惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖、山梨醇、糖、甘露醇、微晶纖維素、淀粉,包括馬鈴薯淀粉、碳酸鈣、氯化鈉、乳糖、磷酸鈣、硫酸鈣或磷酸鈉);造粒劑和崩解劑(例如纖維素衍生物,包括微晶纖維素、淀粉,包括馬鈴薯淀粉、交聯羧甲基纖維素鈉、藻酸鹽或海藻酸);粘合劑(例如蔗糖、葡萄糖、甘露醇、阿拉伯膠、海藻酸、藻酸鈉、明膠、淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、硅酸鎂鋁、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇);和潤滑劑、助流劑和抗粘劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、硅石、氫化植物油或滑石)。其他藥學可接受的賦形劑可能是著色劑、調味劑、增塑劑、保濕劑、緩沖劑等。或者,可以將所述化合物獨立于PHY906配制成供口服使用。
[0277]片劑可以是未包衣的,或者可以通過已知的技術將它們包衣,以任選地延遲在胃腸道中的崩解和吸收,從而在更長時間內提供緩釋作用。衣料可以用于以預定的模式釋放活性藥物(例如為了獲得控釋制劑),或者它可以用于不釋放活性藥物,直到通過胃以后(腸溶包衣)。衣料可以是糖衣、薄膜衣(例如,基于羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、甲基羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、丙烯酸脂共聚物、聚乙二醇和/或聚乙烯吡咯烷酮),或者腸溶衣(例如,基于甲基丙烯酸共聚物、醋酞纖維素、羥丙基甲基纖維素酞酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯、聚醋酸乙烯鄰苯二甲酸酯、蟲膠和/或乙基纖維素)。此外,可以使用延時材料如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
[0278]固體片劑組合物可以包括衣料,用于保護組合物避免有害的化學變化(例如,在釋放活性藥物前發生化學降解)。可以按照與上面Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology中所述類似的方式,將衣料應用到固體劑型上。
[0279]化合物和PHY906可以一起混合在片劑中,或者可以被分開。在一個實施例中,將第一藥物包含在片劑的內部,而第二藥物在外部,從而使大部分第二藥物在釋放第一藥物前被釋放。
[0280]用于口服使用的制劑也可以作為咀嚼片出現,或者作為硬明膠膠囊,其中將活性成分與惰性固體稀釋劑(例如馬鈴薯淀粉、乳糖、微晶纖維素、碳酸鈣、碳酸鈣或高嶺土)混合,或者作為軟明膠膠囊,其中活性成分與水或油媒介混合,例如花生油、液體石蠟或橄欖油。可以使用上面片劑和膠囊項下所述的成分,使用例如混合器、流化床裝置或噴霧干燥裝置,以常規方式制備散劑和顆粒劑。
[0281]控釋口服劑型:只包含所述化合物或與PHY906組合的口服使用控釋組合物可以例如被構造成通過控制活性藥物的溶出度和/或擴散來釋放活性藥物。
[0282]通過將化合物的片劑、膠囊、丸劑或顆粒制劑進行適當包衣,或者通過將所述化合物摻入合適的骨架中,能夠獲得溶出度或擴散控釋。控釋衣料可以包括上述一種或多種衣料物質,和/或例如蟲膠、蜂臘、glycowax、蓖麻臘、巴西棕櫚臘、硬脂醇、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕櫚硬脂酸甘油酯、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、dl-聚乳酸、醋酸-丁酸纖維素、聚氯乙烯、聚醋酸乙烯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸2-羥基酯、甲基丙烯酸酯水凝膠、1,3- 丁二醇、甲基丙烯酸乙二酯和/或聚乙二醇。在控釋骨架制劑中,骨架材料還可以包括例如水化的甲基纖維素、巴西棕櫚蠟和硬脂醇、卡波沫934、硅酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或鹵化碳氟化合物。
[0283]包含一種或多種請求保護的化合物組合的控釋組合物還可以是漂浮片或膠囊(即在口服后,片劑或膠囊在胃內容物的頂部漂浮特定的時間段)。通過將藥物與賦形劑的混合物和20-75% w/w水狀膠體如羥乙基纖維素、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素造粒,能夠制備化合物的漂浮片制劑。然后能夠將所得顆粒壓制成片劑。在與胃液接觸后,片劑圍繞其表面形成基本上不透水的凝膠屏障。該凝膠屏障參與將密度保持為小于一,從而允許片劑在胃液中保持漂浮。
[0284]用于口服給藥的液體:可以將單獨的化合物或與PHY906的組合配制成用于口服給藥的液體。適合通過添加水來制備水懸浮液的散劑、可分散散劑或顆粒劑是用于口服給藥的方便劑型。作為混懸劑的制劑所提供的活性成分與分散劑或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑摻混在一起。合適的分散劑或潤濕劑為例如:天然磷脂(例如卵磷脂或氧化乙烯與脂肪酸的縮合產物、長鏈脂肪醇或源自脂肪酸的部分酯)和己糖醇或己糖醇酐(例如聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯山梨坦單油酸酯等)。合適的助懸劑為例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、藻酸鈉等。
[0285]非腸道組合物:也可以在劑型、制劑中,通過注射、輸液或植入(靜脈內、肌內、皮下等),或通過包含常規無毒可藥物載體和輔劑的合適遞藥裝置或植入物,非腸道地給藥只包括化合物或與PHY906組合的本發明藥物組合物。這些組合物的制劑和制品對藥物制劑領域的技術人員是公知的。具體的制劑能夠在上述Remington:The Science and Practiceof Pharmacy 中找到。
[0286]用于非腸道使用的組合物可以存在于單元劑型(例如單劑量安瓿)中,或存在于包含幾個劑量的小瓶中,其中可以添加合適的防腐劑(參見下面)。組合物可以是溶液、混懸劑、乳劑、輸液裝置或用于植入的遞藥裝置的形式,或者它可以作為在使用前用水或另一種合適載體溶解的干粉。除了活性藥物,所述組合物還可以包括合適的非腸道可接受的載體和/或賦形劑。可以將所述化合物摻入微球、微囊、納米粒、脂質體等中,用于控釋。此外,所述組合物可以包含助懸劑、增溶劑、穩定劑、PH調節劑和/或分散劑。
[0287]如上所述,本發明的藥物組合物可以是適于無菌注射的形式。要制備這樣的組合物,將合適的化合物溶解或懸浮在非腸道可接受的液體載體中。在可接受的載體和溶劑中,可以使用的是水、通過添加適當量的鹽酸調整至合適PH的水、氫氧化鈉或合適的緩沖劑、1,3-丁二醇、林格氏液和等張氯化鈉溶液。水性制劑還可以包含一種或多種防腐劑(例如對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸乙酯或對羥苯甲酸正丙酯)。當所述化合物之一僅難溶或微溶于水時,可能添加溶出度增強劑或增溶劑,或者溶劑可以包含10-60% w/w丙二醇等。
[0288]控釋非腸道組合物:控釋非腸道組合物可以是水懸浮液、微球、微囊、磁性微球、油溶液、油懸浮液或乳劑的形式。或者,可以將所述化合物摻入可生物相容的載體、脂質體、納米粒、植入物或輸液裝置中。
[0289]用于制備微球和/或微囊的材料為例如可生物降解/可生物溶蝕的聚合物,例如羥乙酸乳酸聚酯、聚_(氰基丙烯酸異丁酯)、聚(2-羥乙基-L-谷氨酸)和聚(乳酸)。當配制控釋非腸道制劑時,可以使用的可生物相容載體為碳水化合物(如右旋糖酐)、蛋白質(如白蛋白)、脂蛋白或抗體。
[0290]用于植入物中的材料可能是不可生物降解的(如聚二甲基硅氧烷)或可生物降解的(如聚(己內酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)或聚(原酸酯))。
[0291]直腸組合物:可以將單獨的化合物或與PHY906組合配制用于直腸給藥。對于直腸應用,組合物的合適劑型包括栓劑(乳劑或混懸劑類型)和直腸明膠膠囊(溶液或混懸劑)。在典型的栓劑制劑中,將活性藥物與適當的可藥用栓劑基質如可可脂、酯化脂肪酸、甘油化明膠、以及各種可溶性或可分散基質如聚乙二醇和聚氧乙烯山梨坦脂肪酸酯組合。可以摻入各種添加劑、增強劑或表面活性劑。
[0292]用于吸入的組合物:可以將單獨的化合物或與PHY906組合配制成用于吸入。對于通過吸入給藥,典型的劑型包括鼻腔噴霧和氣霧劑。在典型的鼻腔制劑中,將活性成分溶解或分散在合適的載體中。以藥物制劑領域技術人員理解的方式,根據常規藥物實踐選擇藥學可接受的載體和賦形劑(以及組合物所含的其他可藥用材料,如稀釋劑、增強劑、調味劑和防腐劑)。
[0293]經皮和局部組合物:可以將單獨的化合物或與PHY906組合配制成用于經皮和局部給藥。所述藥物組合物還可以局部給藥在皮膚上供經皮吸收,其劑型或制劑包含常規的無毒可藥用載體和賦形劑,包括微球和脂質體。所述制劑包括:乳膏、軟膏劑、洗劑、擦劑、凝膠、水凝膠、溶液、混懸劑、棒、噴霧劑、糊劑、橡皮膏和其他各類透皮遞藥體系。藥學可接受的載體或賦形劑可以包括:乳化劑、抗氧化劑、緩沖劑、防腐劑、保濕劑、促滲劑、螯合劑、凝膠成型劑、軟膏劑基質、香料和皮膚保護劑。
[0294]乳化劑的例子是天然樹膠(例如阿拉伯樹脂或黃芪樹膠)和天然磷脂(例如大豆卵磷脂和山梨坦單油酸衍生物)。抗氧化劑的例子是丁羥茴醚(BHA)、抗壞血酸及其衍生物、生育酚及其衍生物、丁羥茴醚和半胱氨酸。防腐劑的例子是對羥基苯甲酸甲酯類,例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯和苯扎氯銨。保濕劑的例子是甘油、丙二醇、山梨醇和尿素。促滲劑的例子是是丙二醇、DMSO、三乙醇胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、2-吡咯烷酮及其衍生物、四氫糠醇和Azone.TM.。螯合劑的例子為EDTA鈉、檸檬酸和磷酸。凝膠成型劑的例子是Carbopol.TM.、纖維素衍生物、斑脫土、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮。軟膏劑基質的例子是:蜂蠟、石蠟、棕櫚酸十六酯、植物油、脂肪酸的山梨坦酯(Span)、聚乙二醇和脂肪酸山梨坦酯與氧化乙烯之間的縮合產物(例如聚氧乙烯山梨坦單油酸酯(Tween))。
[0295]關于局部給藥,還可以將上述用于局部給藥在皮膚上的藥物組合物使用到待治療身體部分的上面或附近。組合物可以用于直接給藥,或者用于引入身體的相關孔中(例如直腸、尿道、陰道或口腔)。可以通過特定的遞藥裝置給藥組合物,如敷料或者糊劑、襯墊、紗布、帶或其他合適的柔韌材料形式。
[0296]控釋經皮和局部組合物:可以將單獨的化合物或與PHY906組合配制成用于控釋經皮和局部給藥。有幾種方式控制藥物釋放和透皮滲透的速率,包括:膜介導的體系、粘合劑擴散控制體系、骨架分散型體系和微貯庫體系。通過使用上述方法的合適混合,可以獲得控釋的經皮和/或局部組合物。
[0297]在膜介導的體系中,活性藥物存在于貯庫內,貯庫完全包封在由不可滲透藥物的薄層如金屬塑料薄層模制的淺室中,和控速聚合物膜如微孔聚合物膜或無孔聚合物膜(例如乙烯-醋酸乙烯酯共聚物)中。僅允許活性化合物通過控速聚合物膜釋放。在藥物貯庫中,活性藥物被分散在固體聚合物骨架中,或者懸浮在粘性液體媒介如硅酮液體中。在聚合物膜的外表面,應用一薄層粘性聚合物,以使透皮體系與皮膚表面密切接觸。粘性聚合物優選為與活性藥物相容的低變應原聚合物。
[0298]在粘合劑擴散控制體系中,通過將活性藥物直接分散在粘性聚合物中,然后將包含活性藥物的粘合劑鋪展到基本上不滲透藥物的金屬塑料背襯平片上,以形成藥物貯庫薄層,來形成活性藥物的貯庫。骨架分散型體系的特征在于,通過將活性藥物基本上均勻地分散在親水或親脂聚合物骨架上,然后將含藥聚合物模制到具有基本上充分限定表面積和厚度的圓盤中,來形成活性藥物的貯庫。將粘性聚合物沿著圓周鋪展,以形成圍繞圓盤的粘合劑帶。
[0299]在微貯庫體系中,通過首先將藥物固體懸浮在水溶性聚合物的水溶液中,然后將藥物懸浮液分散在親脂聚合物中,以形成藥物貯庫的多個顯微球,來形成活性物質的貯庫。
[0300]劑量:每種化合物的劑量取決于幾個因素,包括:給藥方法、待治療的疾病、疾病的嚴重性、要治療還是要預防疾病和待治療者的年齡、體重和健康。
[0301]化合物的優選給藥量為約0.l-30mg/kg體重/天,更優選的量為約0.5_15mg/kg體重/天。如上所述,可以以片劑、膠囊、酏劑或糖漿的形式口服所述化合物,或者以栓劑的形式直腸給藥所述化合物。化合物的非腸道給藥適合以鹽水溶液的形式或將化合物摻入脂質體中進行。當化合物本身的溶解性不足以溶解時,可能應用增溶劑如乙醇。
[0302]根據上述一般性討論,下列特定的實施例僅是說明性的,并非用于限定本發明的范圍。其他類型和特定的構造對本領域技術人員將是顯而易見的。實施例
[0303]材料和方法
[0304]CPT-1l (伊立替康,CamptOSar? )購自 Pharmacia&Upjohn Co (Kalamazoo, Ml)。
5-氟尿嘧啶(5-FU或FU)、亞葉酸(亞葉酸,LV)、洛哌丁胺、大腸桿菌β-葡糖醛酸糖苷酶、亞甲藍和酌■酞葡糖苷酸購自 Sigma, C0.(St.Louis, MO)。在 Yale University CanCerCenter按照標準步驟制備MEME培養基。RPMI 1640培養基購自JRH C0.。卡那霉素、胰酶制劑和錐蟲藍購自 Gibco C0.(Grand Island, NY)。PHY906、PHY-915、PHY_14ST和 PHY-15ST 植物制劑由Sun Ten Pharmaceutical Inc.(臺北,臺灣)提供。以前稱作TJ-14ST的PHY-14ST由七種草藥組成:半夏(Pinelliae ternata Breit.)、黃岑、黃連(Coptis chinensisFranch)、甘草、大棗、人參(Panax ginseng C)和姜。以前稱作TJ-15ST的PHY-15ST由野葛(Pueraria lobata Ohwi)、黃連、黃岑和甘草組成。PHY-915由五種草藥組成:人參、姜、白術、防風和桔。
[0305]由干粉制備草藥提取物:將一克(A)包含50% (研究批次)或10% (臨床批次)淀粉賦形劑的PHY906干粉或(B)包含未知量賦形劑的PHY-915、PHY-14ST或PHY-15ST草藥制劑添加到1ml 80°CH20中,在80°C下保溫30min。通過離心(2060g,15min)從殘渣中分離上清液,立即使用。基于粗草藥水提取物的干重,計算PHY906上清液的濃度為50mg/ml (來自研究批次)或90mg/ml (來自臨床批次)。基于粉末的干重,將其他草藥制劑的濃度看作100mg/ml。使用0.45 μ m無菌Acrodisc過濾器(Gelman Sciences)滅菌上清液,用于組織培養中的生長抑制研究。
[0306]鼠:雌性BDF-1 小鼠(4-6 周齡)購自 Charles RiverLaboratories (Wilmington, MA) 0 雄性無胸腺 NCr 裸鼠(4 周齡)購自 TaconicFarms (Garmantown, NY)。將重量為16g至20g的這兩種小鼠用于本研究。
[0307]抗腫瘤研究:分別將鼠結腸38 (1-2 X 16個細胞的0.1ml PBS溶液)或人類H印G2細胞(1-2X 16個細胞的0.1ml PBS溶液)皮下移植到BDFl或NCr無胸腺裸鼠中。每天用滑動卡鉗測量腫瘤的長度和寬度。按照下列公式估算腫瘤重量(Pizzorno G, WiegandR, Lentz S,等人,Cancer Res.52:1660-1665 (1992)):
[0308]腫瘤重星(mg)=長度(mm) X覽度(Mn) /2。
[0309]在10至14天后,選擇腫瘤重量為150_200mg的小鼠(五只動物/組)用于藥物研究(Guo X, Lerner-Tung M, Chen HX,等人,B1chem Pharmacol49:1111-1116 (1995))。當月中瘤尺寸達到體重的10%時,處死小鼠。單獨或與抗癌化學治療藥物一起口服給藥PHY906。評價PHY906對所述活性劑的抗腫瘤功效的作用和對其毒性的減輕。在給藥選擇劑量的PHY906后30min,腹膜內(1.p.)給藥CPT-1l0如下給藥FU/LV聯合治療的方案:
[0310](A)單獨用FU/LV治療:首次劑量的LV(50mg/kg,1.p.),I小時后是二次劑量的LV(50mg/kg ;1.p.),然后即刻給藥 FU(100mg/kg, 1.p.);
[0311](B)用 FU/LV+PHY906 治療:首次劑量的 LV(50mg/kg, 1.p.), 30min 后給藥PHY906 (500mg/kg, 口服),30min后給藥二次劑量的LV (50mg/kg,1.p.),然后即刻給藥FU劑量(100mg/kg, 1.ρ.)。
[0312]如下給藥CPT-11/FU/LV三聯藥物組合:(A)組僅用CPT-11/FU/LV:小鼠服用首次劑量的LV(50mg/kg,1.p.),一時后給藥CPT-11,然后即刻給藥LV(50mg/kg,1.p.)和FU (lOOmg/kg, 1.p.);
[0313](B)組為 CPT-11/FU/LV+PHY906:小鼠服用首次劑量的 LV(50mg/kg,1.p.),30min后給藥PHY906 (500mg/kg,口服)。接著在第O天,在給藥PHY906后30min,用CPT-11、隨后立即用 LV(50mg/kg, 1.ρ.)和 FU (100mg/kg,1.p.)治療小鼠。
[0314]將治療的第I天定為第O天。從第O天開始每天口服給藥兩次PHY906(10am和3pm),持續4天或8天。對于對照組,給小鼠服用載體:1.p.給藥PBS或p.ο.給藥Η20( 口服給藥)。每天監測動物的死亡率、體重下降和腫瘤尺寸。
[0315]血細胞計數:在第0、3、6、9和12天,用微量毛細管從小鼠取血(20μ I)。然后用生理鹽水(0.85%氯化鈉)將血液稀釋到200 μ I。通過BAKER SYSTEM 9100? HEMATOLOGYANALYZER(B1chem ImmunoSystems Inc., Allentown, PA 18103-9562)對 WBC、RBC 和血小板進行計數。
[0316]細胞系和培養條件:人類H印G2(肝細胞癌)、HCT 116 (結腸癌)、CEM(白血病)和KB( 口腔表皮樣瘤)細胞系和鼠結腸38細胞系購自美國典型培養物保藏中心(Rockville, MD)。通常使H印G2細胞系生長在補充有10%胎牛血清(FBS)和100 μ g/ml卡那霉素的MEME培養基中。使結腸38、HCT 116,KB和CEM細胞系生長在包含10% FBS和100 μ g/ml卡那霉素的RPMI 1640培養基中。在37°C和5% CO2:95%空氣的濕潤氣氛下培育細胞。
[0317]在人或小鼠癌細胞系中的細胞毒性:使用亞甲藍吸收試驗測定細胞生長抑制。在第O天,將癌細胞(IxlO4)接種到24-孔平板中,在具有10% FBS和100 μ g/ml卡那霉素的Iml MEME培養基或RPMI 1640內。在第I天,將新鮮制備和無菌的PHY906提取物以不同濃度加入到細胞中,在37°C培育3天。然后除去培養基,用0.3ml 0.5% (w/v)亞甲藍溶液(50%乙醇溶液)將細胞層染色30min。用自來水將平板洗滌3次,干燥,用Iml 1%肌氨酰溶液(PBS溶液)將細胞層細胞溶解。在Elx800動態微量平板讀數器(B1-TekInstruments, Inc.)上,在595nm處讀取溶解產物的溶液。
[0318]實施例1:PHY906對不同細朐系的毒件評價
[0319]簡單地說,將一克各批次PHY906加入到1ml水中(lmg/ml)。就各批次的特性而言,參見表6。
[0320]表6.PHY906的批次特性
[0321]
[Altra
原產地臺灣Sun-Ten 臺灣Sun-Ten~
制備方法標準標準
[0322]在離心后收集上清液,通過0.22 μ m過濾器過濾。將四種細胞類型用于測試各批次PHY906的生物學作用:a) KB細胞(ATCC號為CCL-17) ;b) H印G2細胞(ATCC號為HB-8065) ;c)T-細胞淋巴瘤細胞系(CEM細胞);d)結腸38;和e)HCT 116(ATCC號為CCL-247)。
[0323]在第O天,將癌細胞(IxlO4個)接種到24-孔平板中,在包含10% FBS和100 μ g/ml卡那霉素的1ml MEME培養基或RPMI 1640內。24小時后,將PHY906提取物以不同濃度添加到細胞中,在37°C下培育3天。然后除去培養基,用0.3ml 0.5% (w/v)亞甲藍溶液(50% EtOH溶液)將細胞層染色30min。用自來水將平板洗滌3次,干燥,用Iml 1%肌氨酰溶液(PBS溶液)將細胞層細胞溶解。在Elx800動態微量平板讀數器(B1-TecInstruments, Inc.)上,在595nm處讀取溶解產物的溶液。
[0324]使用人T細胞淋巴瘤細胞系(CEM)進行細胞毒性研究。使CEM細胞(5xl04個)生長在包含20%展示胎牛血清的Iml RPMI 1640培養基中。在第O天添加PHY906提取物。在添加PHY906后3天,評價細胞的生長情況。使用血細胞計數器評估細胞數量。
[0325]將使用兩(2)批樣品進行的試驗結果列在表7中。基于這些數據,發現PHY906來源A和B對KB、CEM和HCT116細胞具有相對小的毒性,而對結腸38和HepG2細胞具有明顯較大的毒性作用(參見表7)。在實施例11的表10中顯示了相似的結果。
[0326]表7.傳統草藥制劑在不同細胞系中的細胞毒性
[0327]

IC5O (mg/mi)a
|'1'|我制劑h KBHcpG2 CEM結旸 38 HCTl 16
PHY906A1.35 + 0.52 0.28 + 0.17 1.45 + 0.45 0.08 L3
PHY906B1.80 + 0.99 0.17 + 0.121.28 + 0.02 0.08 L2
[0328]3基于草藥制劑的干重。
[0329]b包含50%賦形劑的不同研究批次的PHY906。
[0330]實施例2 =CPT-1l對BDF-1和棵鼠的劑量測定
[0331]監測動物體重下降,作為由抗癌化學治療藥物導致的毒性指征。使用六種不同的劑量研究CPT-1l對非荷瘤瘤BDF-小鼠體重下降的作用:100、200、300、400、600或800mg/kg體重,從而確定小鼠中的最大耐受劑量。在研究開始時,腹膜內(1.P.)給藥單一推注劑量的CPT-11,每天監測體重下降,持續12天。
[0332]在本研究開始時,對每只小鼠1.p.給藥一個劑量的CPT-11,然后每天監測動物的體重下降,持續12天。
[0333]低于200mg/kg的劑量對體重幾乎沒有影響(與不接受CPT-1l治療的對照小鼠相比)。相反,大于或等于600mg/kg的藥物劑量在給藥CPT-1l后第2天就導致動物死亡。一般來說,小鼠能夠耐受高達400mg/kg的劑量。
[0334]圖1顯示存活小鼠的體重下降曲線。用300mg/kg CPT-1l治療的小鼠平均體重明顯低于不接受CPT-1l治療的小鼠平均體重,直到治療后第5天(圖1)。從治療后第5天直到本試驗結束,這兩組小鼠的平均體重沒有顯著性差異。體重下降的持續時間和程度對給藥至動物的CPT-1l劑量是敏感的。
[0335]在注射400mg/kg CPT-1l的小鼠中,在CPT-1l治療后即刻觀察到了小鼠體重下降并持續了六天。這些動物在第12天逐步恢復了其最初體重。基于這些結果,將400mg/kg或300mg/kg CPT-1l用于BDF-1小鼠模型。然而,接種人腫瘤細胞的裸鼠對CPT-1l治療明顯比BDF-1小鼠更為敏感。在帶有人類H印G2異種移植物的裸鼠中,CPT-1l的最大耐受劑量為200mg/kg (數據未顯示)。
[0336]實施例3:PHY906對CPT-11誘發的荷瘤BDF-1小鼠體重下降的作用
[0337]在接種結腸38腫瘤細胞的小鼠中,評價PHY906作為CPT-1l治療的調節劑對毒副作用的影響。基于上述發現(實施例2),選擇單一推注劑量400mg/kg CPT-11,來研究PHY906對與CPT-1l毒性相關的體重下降的作用。為了評價PHY906是否損害CPT-1l的抗腫瘤功效,給小鼠皮下植入結腸38腫瘤細胞。在接種后10至14天,在沒有或有PHY906存在的情況下,用CPT-ll(400mg/kg,1.p.)治療小鼠,其中以不同劑量(125mg/kg、250mg/kg和500mg/kg)每天口服兩次PHY906。以指定劑量持續進行PHY906治療,連續8天。
[0338]圖2顯示,PHY906對CPT-1l治療的小鼠體重下降的作用是劑量依賴性的。接受500mg/kg/b.1.d.PHY906補充治療的CPT-1l治療動物在維持體重方面表現出顯著的改善,能更快地恢復其原始體重(p〈0.01)。表8總結了統計學結果。然而,接受250mg/kg/b.1.d.PHY906的小鼠在體重下降方面沒有表現出差異。
[0339]表8.在用CPT-1l治療的荷瘤小鼠中,PHY-906對體重下降的作用的統計學分析
[0340]
N=5I 未治 I CPT-~ CPT-CPT-CPT-
1111/PHY906 11/PHY906 11/PHY906

500 mg/kg250 mg/kg125 mg/kg
未治療 ~ P<0.01 P < 0.05P <0.01P <0.01
CPT-1I P<0.01 ^ P <0.01P> 0.1P >0.1
CPT-P<0.05P<0 01 ^P <0,01P<0.01
11/PHY906 500 mg/l<g
CPT-P<0.01 P > 0.1P <0.01^P > 0.1
11/PHY906 250 mg/kg
CPT-P<0.01 P>0.1 P <0.01P >0.1^
11/PHY906 125 mg/l<g
[0341 ] 實施例4:用CPT-11和PHY906治療的接種結腸38小鼠的腫瘤重暈
[0342]如實施例3所述治療小鼠,評價九天期限內的腫瘤重量。結果表明,用PHY906治療既不阻礙也不損害CPT-1l的抗腫瘤功效(圖3)。實際上,該數據提示這種草藥確實可以提高CPT-1l的抗腫瘤活性。
[0343]這些初步結果提示,可以將草藥組合物PHY906用作CPT-1l化學治療的調節劑,以顯著改善和緩解CPT-11的毒副作用,而不危害CPT-的抗腫瘤功效。
[0344]實施例5:在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906對CPT-11杭腫瘤活件和血液學毒性的作用
[0345]基于在上述研究中獲得的結果,500mg/kg/b.1.d.PHY906對由400mg/kg最大耐受劑量CPT-1l誘發的宿主毒性提供了最佳的保護。將該組劑量用于接下來的研究。對于用一次劑量CPT-11 (400mg/kg,1.p.)治療的具有結腸38的BDF-1,口服給予500mg/kg/b.1.d.PHY906,持續4天或8天。每組使用五只小鼠,將本實驗重復八次。圖3代表全部實驗的典型結果。在動物模型中,伴隨的PHY906治療沒有危害根據腫瘤尺寸測定的CPT-1l抗腫瘤活性。實際上,腫瘤尺寸發生了輕度的減小,這提示PHY906可以增強CPT-1l的抗腫瘤活性。
[0346]骨髓抑制是用CPT-1l治療的患者中常見的副作用(Bleiberg H and CvitkovicE., Eur J Cancer 32A(Suppl 3):S18_S23 (1996))。為了評價 PHY906 是否有益于逆轉CPT-1l誘發的骨髓毒性,在具有結腸38腫瘤的BDF-小鼠中檢驗血液學活性。如圖4所示,在全部方案中,發現PHY906對紅細胞計數或血小板計數沒有影響,也沒有顯示能保護由CPT-1l誘發的骨髓抑制。就抗腫瘤活性和血液學活性而言,在用PHY906與CPT-1l共同治療4天或8天的方案之間沒有顯著性差異(數據未顯示)。
[0347]實施例6:在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906對CPT-11死亡率的作用
[0348]將小鼠分成使用不同治療方案的四組:(A)組:用載體治療;(B)組:用單劑量的400mg/kg CPT-1l1.p.注射治療;(C)組:用單獨 PHY906 (500mg/kg/b.1.d.)治療;或(D)組:用單劑量400mg/kg CPT-1l加500mg/kg/b.1.d.PHY906治療4天或8天。各治療方案的順序描述于材料和方法中。如表9所示,在用載體或單獨PHY906治療4天或8天后,來自A組的35只荷瘤小鼠中的35只(100% )和來自C組的15只小鼠中的15只(100% )均存活下來,這表明PHY906沒有毒性或毒性極低。相反,單獨用CPT-1l治療(B組)8天后,在40只荷瘤小鼠中僅有33只(82.5%)存活下來。然而,在接受4天或8天PHY906與CPT-1l聯合治療(D組)后,存活率明顯改善至95% (20只小鼠中的19只)或100% (24只小鼠中的24只)。這提示,PHY906治療能夠保護小鼠對抗由單劑量400mg/kg CPT-1l誘發的死亡。
[0349]表9.在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906對CPT-11治療的存活率的作用
[0350]
治療小鼠總數
藥物CPT-11PHY906治療的存活的存活a %
方案劑量(mg/kg) 天數劑量(mg/kg) 天數 NN
OOOO 3535100~
400?OO 40338Z5^
^IOO5004 35 35100
OO5008 1515100
Dc400?5004 201995
400I5008 24 24100
[0351]a將所有動物觀察14天。
[0352]b在用CPT-1l治療的40只小鼠中,7只在第5天(N = I)、第6天(N = 3)、第7天(N = I)和第8天(N = 2)死亡。
[0353]。由于使用了CPT-1l與PHY906的聯合治療(4天),所以I只小鼠在第6天死亡。
[0354]實施例?:在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906對FU/LV抗腫瘤活性的作
a
[0355]FU/LV聯用表現出有效的抗腫瘤活性,被用作結腸直腸癌患者的一線治療(Goldber R.M.and Erlichman C., Oncology 12:59-63(1988) ;Saltz L.B, Cox J.V, BlankeC,等人,New.Eng.J.Med.343:905-914(2000))。因此,用FU/LV在動物中進行與上述CPT-1l治療相似的實驗。將具有結腸38腫瘤的小鼠分成四組:(A)組:用載體治療;(B)組:單獨用PHY906治療;(C)組:單獨用FU/LV治療;和(D)組:用FU/LV加PHY906治療。各治療方案的順序描述于材料和方法中。在該組實驗中,在第O天對小鼠僅給藥一次FU/LV,而每天給藥兩次PHY906,連續4天。
[0356]每天監測體重和腫瘤尺寸的改變,分別如圖5和6所示。如圖5所示,在四組中體重幾乎沒有發生變化。這一觀察結果與使用CPT-1l治療觀察到的結果相反。由于沒有進行FU/LV對體重下降的劑量響應研究,所以可能的情況是,在本實驗中給藥的FU/LV劑量沒有高到足以誘發毒性和相關的體重下降。盡管體重下降不足以證明PHY906對FU/LV的保護作用,但是圖6表明PHY906的伴隨治療沒有損害FU/LV在具有結腸38腫瘤BDF-1小鼠中的抗腫瘤活性。D組動物的腫瘤生長曲線慢于C組,這提示PHY906可以提高FU/LV在該動物模型中的抗腫瘤活性。此外,在伴隨給藥PHY906治療的小鼠中,在第4、8和12天監測FU/LV的血液學毒性。PHY906沒有逆轉由FU/LV誘發的公知副作用,即白細胞減少或血小板減少(van der Wilt C.L, van Groeningen, C.J, Pinedo H.Μ,等人,J.Cancer Res.Clin.0ncol.123:595-601(1997))(圖 7)。
[0357]實施例8:在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906對CPT-11/FU/LV抗腫瘤活性的作用
[0358]FDA近期批準CPT-1l加FU/LV的新三聯治療作為一線治療用于晚期結腸直腸癌(Goldber R.M.and Erlichman C., Oncology 12:59-63(1988) ;Saltz L.B, Cox J.V, BlankeC,等人,New.Eng.J.Med.343:905-914 (2000))。已經證實該方案可減慢腫瘤生長的進程以及死亡率。然而,在接受這種三聯治療方案的患者中,經常觀察到嚴重的遲發腹瀉。預實驗表明,在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中,PHY906能夠提高CPT-1l的治療指數。因此,使用與實施例7相似的方案,評價PHY906對緩解三聯化學治療的中限制劑量的毒性的功效。將具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠分成兩組:(A)組:僅用CPT-11/FU/LV治療;(B)組:用CPT-11/FU/LV加PHY906治療。兩組中所用的FU和LV劑量均各為100mg/kg,因為在這些劑量下,在預研究中觀察到了極低的毒性。在這種三聯方案中不進行對CPT-1l的劑量依賴性研究,而使用200mg/kg或300mg/kg CPT-11。各方案的順序描述于材料和方法中。在化學治療的后每天給藥兩次PHY906,持續4天。
[0359]結果表明,在200mg/kg和300mg/kg CPT-1l下,PHY906不損害三聯治療的抗腫瘤功效,分別如圖8和9所示。如圖8所示,由于在三聯治療中使用了 200mg/kg CPT-11,所以在第14天,PHY906輕度提高了對腫瘤的抑制(P = 0.045)。與不接受PHY906治療的組相t匕,在300mg/kg CPT-1l下,PHY906對腫瘤抑制的提高在第14天時并不顯著(p = 0.05),但在第21天時明顯(P = 0.014)。這一結果提示,可能需要更長的時間期限,來觀察PHY906對CPT-11/FU/LV腫瘤抑制作用的提高。在所研究的劑量下,在三聯治療和CPT-1l治療中,PHY906表現出對抗腫瘤活性的相似有益作用。
[0360]在三聯治療所用的劑量下,動物表現出體重下降。然而,PHY906在治療過程中沒有減慢體重下降,如圖10所示。此外,PHY906不影響體重下降的恢復。
[0361]實施例9:在有和沒有PHY906存在的情況下,CPT-11/FU/LV在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中的藥物動力學
[0362]在有和沒有PHY906存在的情況下,CPT-11/FU/LV在具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠中的藥物動力學數據如圖18-20所示。PHY906-6是PHY906的臨床批次,包含10%賦形劑(淀粉)。
[0363]在共同給藥PHY906與三聯CPT-11/FU/LV后,血漿中的CPT-11曲線下面積(AUC)增加。在共同給藥PHY906后,腫瘤或肝組織中的CPT-1l沒有顯著改變。
[0364]CPT-1l的活性代謝物即SN-38在血漿、肝或腫瘤中保持不變。
[0365]在將PHY906與CPT-11/FU/LV三聯組合共同給藥后,血漿或肝中FU及其核苷/核苷酸代謝物(FU+FUR+FUMP)的AUC發生改變。
[0366]實施例10:在具有人類HepG2腫瘤的裸鼠中,PHY906對CPT-11抗腫瘤活性和毒性的作用
[0367]來自上述實施例、特別是實施例5、7和8的結果表明,PHY906與化學治療藥物聯用可以增強化學治療藥物的抗腫瘤作用,進一步延緩腫瘤生長。基于PHY906所含草藥的已知藥理學曲線(表I),推斷這種促進作用可以通過正常小鼠中的免疫學和/或血液學體系起作用。因此,設計實驗以在缺乏免疫學和血液學體系的裸鼠中測試這種推斷。
[0368]將人類H印G2腫瘤細胞植入NCr-裸鼠中,以測試PHY906對CPT-1l抗腫瘤活性的作用。前面的實驗表明,CPT-1l在裸鼠中的最大耐受劑量為200mg/kg,將它用于本研究。在第O天給藥CPT-11 (200mg/kg, 1.p.)。從第O天開始,每天給藥兩次500mg/kg PHY906。如圖11所示,PHY906沒有危害CPT-1l對裸鼠中人類H印G2異種移植物的抗腫瘤作用。然而,不同于在BDF-1小鼠中的觀察結果,PHY906沒有表現出保護由CPT-1l導致的體重下降(圖12)或動物死亡(數據未顯示)的有益作用。PHY906可以預防正常小鼠的體重下降,但不能防止裸鼠的體重下降,這一事實提示PHY906通過血液學和免疫學體系發揮其作用,而這二者正是裸鼠缺乏的。
[0369]實施例11:不同中草藥制劑對CPT-1I在小鼠中的抗腫瘤作用、體重下降和存活率的作用
[0370]在用癌癥化學治療藥物治療的患者中,腹瀉是限制劑量的毒性之一。除PHY906夕卜,還檢驗了其他抗腹瀉藥物。它們包括中藥如PHY-14ST、PHY-15ST和PHY915、以及洛哌丁胺,目前洛哌丁胺被推薦作為抗腹瀉藥用于CPT-1l誘發的遲發腹瀉。
[0371 ] 除腫瘤生長抑制和體重下降外,我們還檢查了接受不同草藥制劑聯合單一推注給藥CPT-1l的小鼠的存活率。在所檢驗的幾種制劑中,PHY906是觀察到提高CPT-1l抗腫瘤活性的唯一制劑(表9),即使PHY906所含的某些草藥也存在于其他草藥制劑中。在死亡率研究中,PHY906沒有表現出對動物死亡率的統計學作用(P = 0.044)。觀察到所測試的其他抗腹瀉藥如PHY-14ST、PHY-15ST和洛哌丁胺在防止體重下降或提高CPT-1l抗腫瘤作用方面完全無效。令人驚訝的是,觀察到PHY-915可減少CPT-1l的抗腫瘤活性(表10)。
[0372]表10.不同草藥制劑對CPT-1l治療的具有結腸38腫瘤的BDF-1小鼠的作用
[0373]
草藥制劑(lg7kg,預防體重P值抗腫瘤P值b,e動物死亡a(死亡數/ bid, 8天)下降 M 作用總數)
?mo
PHY9060.00040.00270/24
PHY14ST無變化 0.1072無變化~0.27421710
PHY15ST無變化 0.3259無變化~0.65350/3
PHY9150.0306減少 0.08850/5
洛哌丁胺無變化 0.9706無變化 0.15953y/10
[0374]a所有動物觀察14天。
[0375]b使用斯氏配對t_檢驗計算P值。
[0376]^基于包含賦形劑的制劑干重。
[0377]<1在CPT-1l治療小鼠體重下降達到最大的當天計算。
[0378]e在最初藥物治療后第6天,基于腫瘤尺寸計算。
[0379]f 一只小鼠在第6天死亡。
[0380]8小鼠在第3天(N = I)、第4天(N = I)和第5天(N = I)死亡。
[0381]實施例12:PHY906在不同細朐系中的細朐毒件
[0382]為了評價體外細胞模型作為質量保證的措施,研究兩種不同PHY906制劑(PHY906A和PHY906B)對不同人腫瘤細胞系和小鼠結腸38腫瘤細胞系的生長抑制的作用。如表11所示,在所述細胞系的生長抑制活性方面,PHY906A和PHY906B沒有顯著性差異。要注意的是,發現HepG2細胞系對PHY906的敏感性高于其他人細胞系。
[0383]表11.PHY906在不同細胞系中的細胞毒性
[0384]IC50 (mg/ml)a
[0385]
草藥制劑
'KB HepG2 CEM HCTl 16 結腸 38
PHY906A 0.67+0.26 0.14+0 08 0,73±0.17 065 0.08+0.02
[0386]
PHY906B 0.90土 0.5 0.09+0.06 0.64±0.0 丨 0.60.07+0.02
[0387]3基于粗草藥水提取物的干重。
[0388]b PHY906的不同研究批次。
[0389]上述實驗結果提示,PHY906減輕了由CPT-11、FU/LV的治療或使用CPT-11/FU/LV三聯治療治療誘發的一些宿主毒性。植物藥PHY906不僅可以維持、而且可以增強所測試化學治療藥物的抗腫瘤活性。實際上,在具有結腸38腫瘤的小鼠和具有人類H印G2異種移植物的裸鼠中,通過增加總體抗腫瘤活性,PHY906都提高了 CPT-11、FU/LV和CPT-11/FU/LV的治療指數。在兩種不同的腫瘤模型中,使用幾種抗癌劑檢驗了這些觀察結果(圖3、6、8、9 和 11)。
[0390]實施例13:在用L-OddC治療的接種結腸38的小鼠中,PHY906對腫瘤生長的作用[0391 ] 在接種有結腸38腫瘤細胞的小鼠中,評價PHY906作為L-OddC ( β -L- 二氧戊環胞苷)治療的調節劑,對腫瘤生長的作用。給小鼠皮下注射鼠結腸38腫瘤細胞。在接種癌細胞后第七天,用L-OddC (25mg/kg)腹膜內治療小鼠,并口服給藥PHY906 (500mg/kg,b.1.d.)。然后在剩余的實驗期內,只給動物連續給藥相同劑量的PHY906。
[0392]如圖13所示,使用L-OddC的治療表明,PHY906既不阻礙也不損害L-OddC的抗腫瘤功效。實際上,數據提示該草藥藥物確實可以提高L-OddC的抗腫瘤活性。
[0393]因此,這些結果提示,可以將草藥PHY906用作L-OddC化學治療的調節劑,以顯著改善和減輕毒副作用,而不危害L-OddC的抗腫瘤功效。
[0394]實施例14:在用VP-16治療的接種結腸38的小鼠中,PHY906對腫瘤生長的作用
[0395]在接種有結腸38腫瘤細胞的小鼠中,評價PHY906作為VP-16 (依托泊普,拓撲異構酶II抑制劑)治療的調節劑,對腫瘤生長的作用。給小鼠皮下注射鼠結腸38腫瘤細胞。在接種癌細胞后第七天,用VP-16(25mg/kg)腹膜內治療小鼠,并口服給藥PHY906 (500mg/kg, b.1.d.)。然后在剩余的實驗期內,只給動物連續給藥相同劑量的PHY906。
[0396]如圖14所示,使用VP-16的治療表明,PHY906既不阻礙也不損害VP-16的抗腫瘤功效。實際上,數據提示該草藥藥物確實可以提高VP-16的抗腫瘤活性。
[0397]因此,這些結果提示,可以將草藥PHY906用作VP-16化學治療的調節劑,以顯著改善和減輕毒副作用,而不危害VP-16的抗腫瘤功效。
[0398]實施例15:在用5-氟尿嘧啶治療的接種結腸38的小鼠中,PHY906對腫瘤生長的鍾
[0399]在接種有結腸38腫瘤細胞的小鼠中,評價PHY906作為5_氟尿嘧啶(FU)治療的調節劑,對腫瘤生長的作用。給小鼠皮下注射鼠結腸38腫瘤細胞。在接種癌細胞后第七天,用5-氟尿喃唳以兩種劑量(250mg/kg,在第O天一次劑量,或在第O天至第4天每天給藥30mg/kg劑量)腹膜內治療小鼠,并口服給藥PHY906(500mg/kg,b.1.d.)。然后在剩余的實驗期內,只給動物連續給藥相同劑量的PHY906。
[0400]如圖15和16所示,使用5-氟尿嘧啶的治療表明,PHY906既不阻礙也不損害5_氟尿嘧啶的抗腫瘤功效。實際上,數據提示該草藥藥物確實可以提高5-氟尿嘧啶的抗腫瘤活性。
[0401]因此,這些結果提示,可以將草藥PHY906用作5-氟尿嘧啶化學治療的調節劑,以顯著改善和減輕毒副作用,而不危害5-氟尿嘧啶的抗腫瘤功效。
[0402]實施例16:在用CPT-1l和洛哌丁胺治療的接種結腸38的小鼠中,PHY906對腫瘤生長的作用
[0403]在接種有結腸38腫瘤細胞的小鼠中,在抗腹瀉藥物洛哌丁胺存在的情況下,評價PHY906作為CPT-1l治療的調節劑,對腫瘤生長的作用。給小鼠皮下注射鼠結腸38腫瘤細胞。在接種癌細胞后第七天,在口服給藥PHY906(500mg/kg,b.1.d.)存在的情況下,或在洛哌丁胺(2mg/kg, p.0., b.1.d.)存在的情況下,單獨用CPT-11 (400mg/kg, 1.p.)治療小鼠。
[0404]圖17比較了 PHY906與洛哌丁胺的抗腫瘤作用。如圖17所示,在PHY906存在的情況下,CPT-1l在減少腫瘤生長(確定為最初腫瘤重量的百分比)方面比洛哌丁胺更有效。
[0405]這些初步結果提示,在延遲CPT-1I誘發的腹瀉方面,草藥PHY906比標準給藥洛哌丁胺更為有效。
[0406]實施例17:在與伊立替康聯用時,測定PHY906給藥的最低有效劑暈(MED)和最佳持續時間
[0407]介紹:幾項研究表明,由七種草藥組成的KamPo藥在體內有效地預防CPT-1l誘發的動物腹瀉的發生并在體內減少CPT-1l誘發的腹瀉的嚴重性(Mori, 1998)。
[0408]還在體內動物模型中評價了 PHY906,已經證實它可減輕伊立替康誘發的毒性的嚴重性。因此,基于長期歷史經驗(1500年)證明的人體安全性、這種化合物在動物模型中有希望的臨床前活性和所述相關草藥化合物在該環境中的潛在活性,能夠開展研究,以評價PHY906對化學治療的誘發的毒性如體重下降、腹瀉、總體體力狀態和生活質量的嚴重性的作用,以及對伊立替康或其他藥物在患頑固性晚期結腸直腸癌患者中的抗腫瘤活性的作用。
[0409]這項研究包括經組織學證實的FU-頑固性晚期結腸直腸癌患者。不需要可確定或可評價的疾病。患有中樞神經系統(CNS)轉移性瘤的患者是適合的,條件是CNS疾病在完成手術、化學治療的和/或放療后已經保持穩定至少4周。
[0410]本研究的參與者年齡應> 18歲,應沒有明顯潛在的醫學疾病。所有患者應具有體力狀態ECOG 0-2,預期壽命為至少3個月,已經獲得知情同意書。(EC0G是“東方合作腫瘤機構”的縮寫。ECOG O =患者可進行正常活動;EC0G I =患者具有最低限度的癥狀;EC0G
2=患者要花費< 50%的時間在病床上;EC0G 3 =患者花費> 50%的時間在病床上;EC0G4=患者始終在病床上)。患者必須已經從任何前期手術的影響中完全恢復,在進入本研究的4周內(對亞硝基脲類或絲裂霉素C為6周),不接受野外輻療或任何化學治療的。要進入本研究,要求ANC(絕對嗜中性白細胞計數)彡1500/μ I,血小板計數彡40ml/min,總膽紅素< 2.0mg/dl。
[0411]治療前評價:在治療開始前,全部患者應具有完整的病史、身體檢查、并確定其體力狀態。實驗室研究應包括:具有微分的全血計數(CBC)、血清白蛋白、電解質、葡萄糖、血尿氮(BUN)、肌酸苷、血清鈣和鎂、肝功檢驗、凝血酶原和部分凝血活酶原時間和尿分析。
[0412]治療:將伊立替康從凍干粉再溶解到2ml無菌水中,用100mlD5W(5%葡萄糖水溶液)稀釋,在90min內以125mg/m2的劑量給藥。在各參與醫院的門診治療中,應按照每周方案將伊立替康化學治療的給藥4周,有2周休息期。
[0413]應在飲食前30min空腹服用PHY906。在化學治療的治療的當天,將服用首次劑量,隨后給藥伊立替康。
[0414]從0.60g的初始劑量開始,在各餐前每天口服三次PHY906。(每日總劑量為
1.80gm/天)。目前東方患者所使用的PHY906劑量為7.2gm/天,迄今為止還沒有觀察到不良事件。因此,建議開始本試驗的劑量為所述草藥常用劑量的1/4。在完整的4周化學治療的過程中,將PHY906和伊立替康一起給藥,有2周休息。最少有三名患者將接受該初始劑量水平的PHY906治療。一旦3位患者完成了整個6周的周期,如果3位患者中沒有I位出現限制劑量的毒性(DLT),則將對隨后組的3位患者使用下一個較高的劑量。在全部患者中,將在開始第一個化學治療的周期后24小時進行藥物動力學研究。
[0415]如果3位患者中有I位出現DLT,則將以相同的劑量水平再治療3位患者。如果接下來的3位患者中有彡I位患者出現DLT(總共6位患者中的I位或2位),則將會把劑量遞增至下一劑量水平,除非在雙盲方案中發生那些情況,此時下一個遞增將到達改良Fibonacci方案上的水平n+1 (表12)。
[0416]表12.PHY906的劑量遞增方案
[0417]
劑量水平mm總劑量(gm/天)
?^L8
22 X水平I?6
32 X水平 27.2
一旦達到7.2 gm/天劑量水平,并且在該水平“η”上沒有觀察到^2級的毒性,則進行如下改良Fibonacci遞增。
N+11.5 X 水平 η
Ν+21.33χη+1—
Ν+31.25 X 水平 η +2
所有隨后的水平:25%的遞增,直到達到最大耐受劑量。
[0418]ΡΗΥ906的劑量遞增方案:如果臨床指示和首席研究者認為必需,則可以使用較低的劑量水平,而非上述特定的劑量水平。
[0419]進入和遞增至下一劑量方案的受體比例將取決于進入各劑量水平的患者安全性曲線評價。將按照NCI臨床試驗指南(CTG)擴充的常用毒性標準來評價毒性并分級。
[0420]用于該方案的止吐藥方案將由摻入50ml生理鹽水的l_2mg格拉司瓊組成,在每個治療天的化學治療的前,經1/2小時給藥。在需要時,將該止吐藥(靜脈內或口服給藥)每8小時重復一次,以控制惡心和/或嘔吐。每周重復一次治療,連續4周,隨后休息2周。該過程將構成一個治療周期。
[0421]將用阿托品(0.5-lmg)靜脈內治療在伊立替康輸注過程中或之后不久發生的腹瀉。對于在給藥伊立替康后> 12小時發生的腹瀉,在首次出現腹瀉癥候時,將口服4mg洛哌丁胺治療患者,隨后每2小時口服2mg(在夜晚每4小時口服4mg),直到腹瀉完全消除至少12小時。如果腹瀉帶血,伴有> 101.6 °F的發熱并持續不退> 12小時,則認為該患者應去醫院作進一步檢查和治療。
[0422]伊立替康的劑量修改:在本研究中將不遞增伊立替康的劑量。將按照制造商提供的包裝插頁的推薦,針對毒性修改劑量(表13)。
[0423]表13.對每周和每3周I次方案的推薦劑量修改。不應開始新治療過程,直到粒細胞計數恢復至> 1500/mm3,血小板計數恢復至> 100,000/mm3,與治療相關的腹瀉完全消除。應使治療延緩1-2周,以允許從與治療相關的毒性中恢復。如果在延緩2周后該患者尚未恢復,則應考慮終止Camptosar。
[0424]
【權利要求】
1.草藥制劑與化學治療制劑組合用于制備治療哺乳動物中的癌癥的藥物的用途,其包括共同給藥治療有效量的 (i)基本上由黃岑屬(Scutellaria)、甘草屬(Glycyrrhiza)、率屬(Ziziphus)和茍藥屬(Paeonia)組成的草藥制劑;以及 (?)包含吉西他濱和奧沙利鉬的化學治療制劑。
2.草藥制劑與化學治療制劑組合用于制備減輕化學治療化合物在哺乳動物中的副作用的藥物的用途,其包括共同給藥治療有效量的 (i)基本上由黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬組成的草藥制劑;以及 (?)包含吉西他濱和奧沙利鉬的化學治療制劑。
3.草藥制劑與化學治療制劑組合用于制備提高化學治療化合物在哺乳動物中的抗癌活性的藥物的用途,其包括共同給藥治療有效量的 (i)基本上由黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬組成的草藥制劑;以及 (?)包含吉西他濱和奧沙利鉬的化學治療制劑。
4.權利要求1-3之任一項的用途,其中所述草藥制劑經口服途徑給藥,并且所述化學治療制劑經口服或非腸道途徑給藥。
5.權利要求4的用途,其中所述草藥制劑經口服途徑給藥,并且所述化學治療制劑經靜脈內途徑給藥。
6.權利要求1-3之任一項的用途,其中所述草藥制劑基本上由黃芩(Scutellariabaicalensis)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)、率(Ziziphus jujuba)、茍藥(PaeoniaIactiflora)和一種或多種藥學可接受的載體組成。
7.權利要求1-3之任一項的用途,其中所述草藥制劑由黃芩屬、甘草屬、棗屬、芍藥屬和一種或多種藥學可接受的載體組成。
8.權利要求1-3之任一項的用途,其中所述草藥制劑在給藥所述化學治療制劑之前給藥。
9.權利要求1-3之任一項的用途,其中所述草藥制劑在給藥所述化學治療制劑之后給藥。
10.權利要求1-3之任一項的用途,其中所述草藥制劑與所述化學治療制劑同時給藥。
11.藥物組合,其包含: i)基本上由黃芩屬、甘草屬、棗屬和芍藥屬組成的草藥制劑;以及 ?)化學治療制劑,其包含吉西他濱和奧沙利鉬。
12.權利要求11的藥物組合,其中所述草藥制劑基本上由黃芩、甘草、棗、芍藥和一種或多種藥學可接受的載體組成。
13.權利要求11的藥物組合,其中所述草藥制劑由黃芩屬、甘草屬、棗屬、芍藥屬和一種或多種藥學可接受的載體組成。
【文檔編號】A61P35/00GK104161832SQ201410401772
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2005年11月9日 優先權日:2004年11月9日
【發明者】Y-C·程, S-H·劉 申請人:耶魯大學
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