兩種緩解砒霜或其他砷劑毒性的單體化合物的制作方法

本發明屬于中藥
技術領域：
，具體涉及兩種緩解砒霜或其他砷劑毒性的單體化合物。
背景技術：
：《本草綱目》記載砒霜“性辛，大熱，有大毒”。現代研究表明三氧化二砷的吸收途徑相當廣泛，極易被呼吸系統、消化系統和皮膚吸收，既可致急性中毒，也可致慢性中毒，通過攝食發生急性砷中毒主要表現為胃腸癥狀和神經系統癥狀，入腹后1～2h(快者15～30min)即可出現癥狀，初見咽喉有燒灼感，流涎嘔吐，繼而出現陣發性或持續性腹痛，瀉下粘液血便，或米湯樣糞便，甚至血水樣便，嚴重者可引起脫水、酸中毒及休克。中樞神經系統癥狀有頭暈、頭痛、煩躁不安、驚厥、昏迷、或胸悶氣急、腹式呼吸消失等膈神經麻痹癥狀。死亡原因多為呼吸和循環衰竭。慢性砷中毒在消化系統的表現主要為胃腸功能障礙，胃鏡可見胃黏膜充血、水腫和胃黏膜糜爛；如出現中毒性肝炎，其表現為急性黃疸、肝硬化和腹水等；中樞神經系統表現為腦電圖異常、精神失常、語言不清、四肢抽搐等；呼吸系統表現為呼吸急促、胸悶、咳嗽等哮喘癥狀；循環系統出現心臟雜音、心臟肥大、心律不齊等；泌尿系統出現血尿；其它癥狀還有牙齦出血、口腔潰瘍、血小板減少及全血細胞下降等。亥茅酚苷、歐前胡素是傘形科植物防風中的兩種活性成分。防風為傘形科植物，以其根入藥，為傳統和臨床常用中藥之一，始載于《神農本草經》，列為上品，辛、甘、微溫，歸膀胱、肝、脾經；具有解表散風、勝濕止痛、祛風止痙的功效。主治風寒感冒，頭痛無汗，風寒濕痹，關節疼痛，皮膚瘙癢，四肢攣急，脊痛頸強，蕁麻疹，破傷風等。防風主要成分含有香豆素類、色原酮類、揮發油類、多糖類、有機酸類等。其中防風色原酮及其苷類成分為防風的主要活性成分。中醫藥近幾年來使用最多而且療效最好的是用防風治療砷中毒，特別是慢性砷中毒，預后良好。急性砷中毒可用防風30g，煎汁兩次，合并一次灌服；慢性砷中毒者可用防風、綠豆、紅糖各10g，水煎服，14天為一個療程，2個療程自覺癥狀改善良好。技術實現要素：發明目的：本發明的目的在于提供兩種緩解砒霜或其他砷劑毒性的單體化合物本發明提供的兩種緩解砒霜或其他砷劑毒性的單體化合物可進一步與藥學上可接受的、可廣泛使用本領域公知的各種載體組合使用，所述的載體如稀釋劑、粘合劑、吸收劑、崩解劑、分散劑、濕潤劑、助溶劑、緩沖劑、表面活化劑等。本發明的組合物可以利用本領域任何已知方法制成，以使病人用藥后能提供快速、持久或緩慢釋放的活性成分。本領域技術人員能夠理解，本發明的藥物組合物可以根據具體的施用方式被配制成各種本領域熟知的制劑形式，例如口服劑型(粉劑、片劑、膠囊、軟膠囊、口服溶液、糖漿、酏丸、散劑、囊劑、顆粒劑等)，或局部施用制劑(霜劑、乳膏、軟膏、洗劑、凝膠、香脂、膏藥、糊劑、噴霧劑、氣霧劑等)，或注射制劑(溶液、懸浮劑、乳劑)。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規方法制備。本發明提供的兩種緩解砒霜或其他砷劑毒性的單體化合物可以通過各種途徑施用至個體動物如哺乳動物(大鼠、小鼠、馴化動物或人類)，例如，給藥可以是口服、直腸給藥或經靜脈、肌肉內、皮下、皮內、鞘膜內、硬膜外或腦室內注射。可通過注射、噴射、滴鼻、滲透、吸收、物理或化學介導的方法導入機體如肌肉、皮內、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其它物質混合或包裹后導入機體。本發明進一步提供一種用于緩解砒霜或其他砷劑毒性的藥物組合物，其含有亥茅酚苷或歐前胡素作為活性成分以及一種或多種藥學上可接受的載體，所述的載體可以包括稀釋劑、粘合劑、吸收劑、崩解劑、分散劑、濕潤劑、助溶劑、緩沖劑、和表面活性劑中的一種或多種。本發明的藥物組合物可以為固體、液體或氣體形式，其中所述固體形式可以為粉末劑、片劑、顆粒劑、丸劑、硬膠囊或軟膠囊、乳膏劑、軟膏劑、硬膏劑、凝膠劑、糊劑、散劑或貼劑；所述液體形式可以為溶液劑、混懸劑、注射劑、糖漿劑、搽劑、乳劑、酊劑或酏劑；所述氣體形式可以為氣霧劑、噴霧劑。以下將結合附圖和具體實施例進一步闡明本發明，但應理解其僅是舉例說明的作用，并不以任何方式限制本發明的范圍。附圖說明附圖1.顯示本發明亥茅酚苷或歐前胡素對三氧化二砷引起的大鼠心肌細胞h9c2凋亡的保護作用fig1-1對照組,40×fig1-2ato,40×fig1-3ato+歐前胡素(1),20×fig1-4ato+歐前胡素(2),20×fig1-5ato+歐前胡素(3),20×fig1-6ato+歐前胡素(4),20×fig1-7ato+亥茅酚苷(1),20×fig1-8ato+亥茅酚苷(2),20×fig1-9ato+亥茅酚苷(3),20×fig1-10ato+亥茅酚苷(4),20×具體實施方式1,化合物的來源：(1)as2o3，白色霜狀粉末，購自國藥集團化學試劑有限公司，批號20050908。課題組嚴格按照《危險化學品安全管理條例》的相關規定進行管理，單獨存放、雙人雙發、雙人保管。as2o3微溶于水，易溶于酸堿。取as2o330mg加入30mldmem中，加入少量naoh震蕩至as2o3溶解后用hcl調整ph＝7.0。經0.22μm濾膜濾過除菌，成1000μg/ml母液，4℃保存備用。(2)歐前胡素(imperatorin，c16h14o4)，無色針狀結晶，購自中國食品藥品檢定研究院，批號110826-201214，國家藥品標準物質(供含量測定用)。(3)亥茅酚苷(sec-o-glucosylhamaudol，c21h26o10)，白色無定型粉末，購自中國食品藥品檢定研究院，批號111714-200501，國家藥品標準物質(供含量測定用)。2,細胞株的來源：大鼠胚胎心肌細胞，h9c2(2-1)，成肌細胞樣，貼壁生長。購自北京協和醫學院國家實驗細胞資源共享平臺。實施例1本發明亥茅酚苷或歐前胡素保護as2o3引起的大鼠心肌細胞h9c2細胞的活力降低實驗材料：mtt購自美國amresco公司，批號20130808420。實驗過程：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-h-tetrazoliumbromide,mtt)還原為不溶于水的藍紫色結晶甲臜沉積在細胞中，而死細胞無此功能。dmso能溶解細胞中的甲臜，用酶標儀在490nm處測定其od值，在一定細胞數范圍內，mtt結晶量與活細胞數成正比。根據od值判斷活細胞數量，od值越大，細胞活性越強。步驟：(1)取對數生長期的細胞，將細胞接種于96孔板內，5％co2，37℃孵育。(2)細胞貼壁生長，待覆蓋率約為80％-90％時，棄去原培養液，每孔加入100μl含2％胎牛血清的dmem培養液。(3)分組給藥：僅三氧化二砷實驗分組：①對照組、②as2o30.2μg/ml、③as2o30.4μg/ml、④as2o30.8μg/ml、⑤as2o31.6μg/ml、⑥as2o33.1μg/ml、⑦as2o36.3μg/ml、⑧as2o312.5μg/ml、⑨as2o325μg/ml、⑩as2o350μg/ml、as2o3100μg/ml；三氧化二砷聯合歐前胡素/亥茅酚苷實驗分組：①對照組、②as2o32μg/ml、③歐前胡素/亥茅酚苷10μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、④歐前胡素/亥茅酚苷20μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑤歐前胡素/亥茅酚苷30μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑥歐前胡素/亥茅酚苷40μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑦歐前胡素/亥茅酚苷50μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑧歐前胡素/亥茅酚苷60μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑨歐前胡素/亥茅酚苷70μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑩歐前胡素/亥茅酚苷80μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、歐前胡素/亥茅酚苷90μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、歐前胡素/亥茅酚苷100μg/ml1h+as2o32μg/ml24h。每組設8個復孔。5％co2，37℃孵育20小時，倒置顯微鏡(重慶重光，xds-1b型)下觀察。(3)每孔加入5mg/mlmtt溶液20μl，繼續培養4h。(4)終止培養，小心棄去孔內培養液，每孔加入150μldmso，振蕩使結晶充分溶解，在酶標儀(rt-6000型，深圳雷杜生命科學股份有限公司生產)od490nm處測量各孔吸光度值。本實驗重復3次。(5)用spss進行單因素方差分析，p<0.05具有統計學意義。計算細胞增殖抑制率：抑制率(％)＝(1─給藥組平均od值/對照組平均od值)×100％，用spss計算ic50值。實驗結果：1)僅三氧化二砷實驗結果：as2o3劑量依賴性減弱細胞活力。as2o3對h9c2細胞的半數抑制濃度ic50＝3.081μg/ml。實驗結果見表1。2)三氧化二砷聯合亥茅酚苷實驗結果：亥茅酚苷濃度為60、70、80μg/ml時，p＜0.05，與as2o3組有明顯差異。實驗結果見表2。3)三氧化二砷聯合歐前胡素實驗結果：歐前胡素濃度為20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/ml時，p≤0.05，與as2o3組有明顯差異，其中歐前胡素50、60、70、80μg/ml組差異具有極顯著意義(p≤0.01)。實驗結果見表3。表1.mtt法測定as2o3對h9c2細胞細胞活力的影響(n＝8)*與對照組比較p<0.05表2.mtt法測定亥茅酚苷對as2o3作用h9c2細胞的細胞活力的影響(n＝8)*與as2o3組比較p<0.05表3.mtt法測定歐前胡素對as2o3作用h9c2細胞的細胞活力的影響(n＝8)*與as2o3組比較p<0.05；**與as2o3組比較p<0.01實施例2本發明亥茅酚苷或歐前胡素保護as2o3引起的大鼠心肌細胞h9c2細胞的乳酸脫氫酶(ldh)的釋放實驗材料：ldh測定試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號20150104。實驗過程：乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase,ldh)存在于活細胞胞漿內，正常生理情況下不能透過細胞膜，當細胞凋亡或壞死導致細胞膜通透性發生改變或細胞完全裂解的時候，ldh可釋放至介質中。釋放出來的ldh可催化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸與2,4-二硝基苯肼在堿性條件下可生成紅棕色的丙酮酸二硝基苯腙，在450nm處有一高吸收峰，利用讀取的od值，經過計算可得ldh活性，考察細胞活力。步驟：(1)取對數生長期的細胞，將細胞接種于96孔板內，5％co2，37℃孵育。(2)細胞貼壁生長，待覆蓋率約為80％-90％時，棄去原培養液，每孔加入100μl含2％胎牛血清的dmem培養液。(3)分組給藥：①對照組、②as2o32μg/ml、③歐前胡素/亥茅酚苷50μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、④歐前胡素/亥茅酚苷60μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑤歐前胡素/亥茅酚苷70μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑥歐前胡素/亥茅酚苷80μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑦歐前胡素/亥茅酚苷90μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑧歐前胡素/亥茅酚苷100μg/ml1h+as2o32μg/ml24h，每組設8個復孔，倒置顯微鏡下觀察。(4)吸取細胞培養上清液，嚴格按照試劑盒說明書操作處理，在酶標儀(rt-6000型，深圳雷杜生命科學股份有限公司生產)od450nm處測定吸光度值。本實驗重復3次。(5)計算ldh活性：ldh活性(u/l)＝(測定孔od平均值─對照孔od平均值)/(標準孔od平均值─空白孔od平均值)×標準品濃度(0.2mmol/l)×1000(6)用spss進行單因素方差分析，p<0.05具有統計學意義。實驗結果：亥茅酚苷濃度為50、90μg/ml時，與as2o3組比較有統計學意義(p<0.05)，實驗結果見表4。歐前胡素濃度為50、60、80、90、100μg/ml時，與as2o3組比較有統計學意義(p<0.05)，實驗結果見表5。表4.微量酶標法測定亥茅酚苷對h9c2細胞乳酸脫氫酶(ldh)活性的影響(n＝8)*與as2o3組比較p<0.05表5.微量酶標法測定歐前胡素對h9c2細胞乳酸脫氫酶(ldh)活性的影響(n＝8)*與as2o3組比較p<0.05；**與as2o3組比較p<0.01實施例3本發明亥茅酚苷或歐前胡素保護as2o3引起的大鼠心肌細胞h9c2細胞的凋亡實驗材料：ao/eb雙染試劑盒：購自北京索萊寶科技有限公司，批號20150113。實驗過程：吖啶橙(acridineorange,ao)能透過胞膜完整的細胞，與dna結合后發出綠色熒光；溴化乙錠(ethidiumbromide,eb)僅能透過胞膜受損的細胞，與dna結合后發出橘紅色熒光。凋亡的細胞呈現為染色增強，熒光更為明亮，呈均勻一致的圓珠狀或固縮狀、團塊狀結構；非凋亡細胞呈現熒光深淺不一的結構樣特征，二者很容易判別。在熒光顯微鏡下觀察，可見四種細胞形態：活細胞，核染色質著綠色并呈正常結構；早期凋亡細胞，核染色質著綠色并呈圓珠狀或固縮狀；晚期凋亡細胞，核染色質為橘紅色并呈圓珠狀或固縮狀；非凋亡的死亡細胞，核染色質著橘紅色并呈正常結構。步驟：(1)取對數生長期的細胞，將細胞接種于6孔板專用細胞爬片上，5％co2，37℃孵育。(2)細胞貼壁生長，待覆蓋率約為80％-90％時，棄去原培養液，每孔加入100μl含2％胎牛血清的dmem培養液。(3)分組給藥：①對照組、②as2o32μg/ml、③歐前胡素100μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、④亥茅酚苷100μg/ml1h+as2o32μg/ml24h，倒置顯微鏡下觀察。(3)將ao溶液和eb溶液按1:1混合成工作液，現用現配。(4)棄去培養液，將細胞爬片用pbs洗兩遍，以清除殘余培養液和未貼壁細胞，加入新的pbs。每毫升pbs中加入20μl工作液，室溫放置2-5min。(5)取出細胞爬片，倒扣在載玻片上，于熒光顯微鏡(dmi3000b型，德國徠卡顯微系統公司生產)下觀察拍照，選擇藍光，激發波長450-490nm，發射波長515nm。本實驗重復3次。實驗結果：ao/eb染色結果顯示，as2o3顯著增加h9c2細胞凋亡，細胞形態發生改變，胞體縮小，細胞核固縮或碎裂。歐前胡素、亥茅酚苷均顯著減少細胞凋亡，細胞形態發生改變，胞體縮小、變圓，染色增強、熒光更為明亮，細胞核固縮或碎裂。實驗結果見附圖1。實施例4本發明亥茅酚苷或歐前胡素保護as2o3引起的大鼠心肌細胞h9c2細胞的caspase-3活性實驗材料：caspase-3活性檢測試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號20150406。實驗過程：caspase家族在as2o3誘導的細胞凋亡過程中發揮著重要作用，caspase-3是凋亡過程中的一個關鍵酶，在正常狀態下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在凋亡發生階段被激活，裂解相應的底物最終導致細胞凋亡。將caspase-3特異性多肽與黃色基團耦聯，當該底物被caspase-3剪切后，黃色基團游離，在405nm處有一高吸收峰，利用讀取的od值，考察caspase-3的活化程度。步驟：(1)取對數生長期的細胞，將細胞接種于96孔板內，5％co2，37℃孵育。(2)細胞貼壁生長，待覆蓋率約為80％-90％時，棄去原培養液，每孔加入100l含2％胎牛血清的dmem培養液。(3)分組給藥：①對照組、②as2o32μg/ml、③歐前胡素/亥茅酚苷50μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、④歐前胡素/亥茅酚苷60μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑤歐前胡素/亥茅酚苷70μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑥歐前胡素/亥茅酚苷80μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑦歐前胡素/亥茅酚苷90μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑧歐前胡素/亥茅酚苷100μg/ml1h+as2o32μg/ml24h，每組設8個復孔，倒置顯微鏡下觀察。(4)棄去培養液，用pbs洗兩遍以清除殘余培養液和未貼壁細胞，用胰酶消化細胞，每孔加入50μl裂解液，重懸沉淀，冰浴裂解30min。(5)4℃離心，12000rpm，15min。小心吸取上清液，嚴格按照試劑盒說明書操作處理，在酶標儀od405nm處測定吸光度值。本實驗重復3次。(6)用spss進行單因素方差分析，p<0.05具有統計學意義。實驗結果：亥茅酚苷、歐前胡素各組均p>0.05，與as2o3組無明顯差異。實驗結果見表6、表7。表6.微量酶標法測定亥茅酚苷對h9c2細胞caspase-3活性的影響(n＝8)表7.微量酶標法測定歐前胡素對h9c2細胞caspase-3活性的影響(n＝8)實施例5本發明亥茅酚苷或歐前胡素保護as2o3引起的大鼠心肌細胞h9c2細胞的活性氧蓄積實驗材料：ros測定試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號20150327。實驗過程：ros參與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程，as2o3能通過多種渠道促進細胞內ros蓄積，對細胞產生氧化損傷，進而導致細胞凋亡或死亡。dcfh-da是迄今最常用、最靈敏的細胞內ros檢測探針，靈敏度高，重復性好。dcfh-da沒有熒光，進入細胞后被酯酶水解為dcfh，在活性氧存在時dcfh被氧化為不能透過細胞膜的強綠色熒光物質dcf，熒光在激發波長502nm，發射波長530nm附近有最大吸收，強度與細胞內ros水平成正比。步驟：(1)取對數生長期的細胞，將細胞接種于96孔板內，5％co2，37℃孵育。(2)細胞貼壁生長，待覆蓋率約為80％-90％時，棄去原培養液，每孔加入100μl含2％胎牛血清的dmem維持液。(3)分組給藥：①對照組、②as2o32μg/ml、③歐前胡素/亥茅酚苷50μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、④歐前胡素/亥茅酚苷60μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑤歐前胡素/亥茅酚苷70μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑥歐前胡素/亥茅酚苷80μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑦歐前胡素/亥茅酚苷90μg/ml1h+as2o32μg/ml24h、⑧歐前胡素/亥茅酚苷100μg/ml1h+as2o32μg/ml24h，每組設8個復孔，倒置顯微鏡下觀察。(4)棄去培養液，用pbs洗兩遍以清除殘余培養液和未貼壁細胞。每孔加入10mdcfh-da100μl，5％co2，37℃孵育30-45min。(5)棄去上清液，用pbs洗兩遍以清除細胞外未負載的殘余熒光染料。用胰酶消化細胞，加入pbs終止消化，制成細胞懸液，在熒光酶標儀激發波長500nm，發射波長525nm處測定吸光度值。本實驗重復3次。(6)用spss進行單因素方差分析，p<0.05具有統計學意義。實驗結果：亥茅酚苷各組均p＞0.05，與as2o3組無明顯差異。歐前胡素50、60μg/ml組p＜0.05，與as2o3組有明顯差異。實驗結果見表8、表9。表8.化學熒光法測定亥茅酚苷對h9c2細胞活性氧(ros)含量的影響(n＝8)表9.化學熒光法測定歐前胡素對h9c2細胞活性氧(ros)含量的影響(n＝8)*與as2o3組比較p<0.05下文將列出本發明組合物的構成方法和輔料的種類，但本發明不限于它們。代表性的制備實施例敘述如下。注射劑的制備歐前胡素/亥茅酚苷1000微克偏亞硫酸氫鈉3.0毫克對羥基苯甲酸甲酯0.8毫克對羥基苯甲酸丙酯0.1毫克注射用蒸餾水適量注射劑的制備如下：溶解活性組分，控制ph值至約7.5，然后將所有組分填充至2毫升安瓿中，并用常規的注射劑制備方法滅菌。粉末劑的制備歐前胡素/亥茅酚苷200微克玉米淀粉100毫克乳糖100毫克滑石粉10毫克粉末劑制備方法如下：將上述組分混合，裝入密封包裝中。片劑的制備歐前胡素/亥茅酚苷100微克玉米淀粉100毫克乳糖100毫克硬脂酸鎂適量片劑是通過將上述組分混合和壓片制得。膠囊劑的制備歐前胡素/亥茅酚苷50微克乳糖50毫克玉米淀粉50毫克滑石粉2毫克硬脂酸鎂適量膠囊劑制備是通過將上述組分混合裝入按照常規的明膠制備方法制備的明膠膠囊中制得。參考文獻[1]潘月華，白利珊.從砷的分布、結構、特性探討其作用與危害.微量元素與健康研究,2013,30(5):71-73.[2]sumid,sasakit,miyatakah,etal.rath9c2cardiacmyocytesaresensitivetoarseniteduetoamodestactivationoftranscriptionfactornrf2.archtoxicol,2011,85(12):1509-1516.[3]孫鴻德，馬玲，胡曉晨等.癌靈ⅰ號結合中西醫辯證治療急性早幼粒細胞白血病32例.中國中西醫結合雜志,1992,12(3):170-171.[4]白建剛，李漢生.三氧化二砷抗腫瘤研究進展.中國藥事,2008,22(12):1105-1108.[5]zhangy,zhufb,lijj,etal.hyperosideenhancesthesuppressiveeffectsofarsenictrioxideonacutemyeloidleukemiacells.intjclinexpmed,2015,8(9):15290-15295.[6]xuw,weiw,yuq,etal.arsenictrioxideandbortezomibinteractsynergisticallytoinduceapoptosisinchronicmyelogenousleukemiacellsresistanttoimatinibmesylatethroughbcr/abl-dependentmechanisms.molmedrep,2014,10(3):1519-1524.[7]沈楊，陳賽娟.急性白血病基因突變與多步驟發病機制和臨床相關性.中國科學：生命科學,2013,43(1):39-45.[8]huangxj,wiernikph,kleinrs,etal.arsenictrioxideinducesapoptosisofmyeloidleukemiacellsbyactivationofcaspases.medoncol,1999,16(1):58-64.[9]wangc,zhouh,pengr,etal.electromagneticpulsereducesfreeradicalgenerationinratlivermitochondriainvitro.freeradicres,2013,47(4):276-282.[10]gobeg,craned.mitochondria,reactiveoxygenspeciesandcadmiumtoxicityinthekidney.toxicollett,2010,198(1):49-55.[11]robozgj,diass,lamg,etal.arsenictrioxideinducesdose-and-time-dependentapoptosisofendotheliumandmayexertanantileukemiceffectviainhibitionofangiogenesis.blood,2000,96(4):1525-1530.當前第1頁12