甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法與流程

本發明涉及無菌用膠原蛋白技術領域，具體涉及甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法。

背景技術：

膠原蛋白屬于生物高分子。膠原蛋白種類較多，常見類型為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。其中，I型膠原蛋白因具有低免疫源性、與宿主細胞及組織之間協調作用、止血作用和生物可降解等優勢，因此I型膠原蛋白作為生物醫學材料在臨床應用廣泛，如手術縫合線、止血纖維、止血海綿、水凝膠、敷料、人工皮膚、人工血管、角膜及藥物載體等。I型膠原蛋白是纖維形成膠原，是多細胞生物的細胞外的主要結構大分子，能活化上皮細胞，促進上皮細胞增生，也可促進膠原酶生成，使皮膚有張力和彈性，能淡化眼紋和消除眼袋及陰影，在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

I型膠原蛋白的結構呈三股螺旋結構，由三條α肽鏈組成，分子量約為300KDa。從動物肌腱中提取的I型膠原蛋白含2條α₁肽鏈和1條α₂肽鏈，在凝膠電泳圖中分子量為100kDa處有兩條譜帶，一條譜帶是由于兩條α₁肽鏈重合所得到的，另一條譜帶表示單條的α₂肽鏈。圖譜中在分子量為200kDa處也有一條譜帶，對應于膠原結構中的β鏈，β鏈是α肽鏈的二聚體。當凝膠電泳圖中不顯示譜帶時，表示I型膠原蛋白的三股螺旋結構受到破壞。

現有技術中，利用I型膠原蛋白制備手術縫合線、止血纖維、止血海綿、水凝膠、敷料、人工皮膚、人工血管、角膜或藥物載體等時，為了達到無菌要求，一般進行輻照滅菌，然而，I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構會被破壞，進而破壞了I型膠原蛋白的功效，因此嚴重限制了I型膠原蛋白的廣泛應用。

技術實現要素：

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，以利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

提供甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均勻，得到混合溶液；

步驟三，選用包裝材料將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

上述技術方案中，所述步驟一中，所述I型膠原蛋白來源于牛跟腱、豬跟腱或羊跟腱中的一種或任意兩種以上的組合物。

上述技術方案中，所述步驟一中，所述I型膠原蛋白來源于動物提取物。

上述技術方案中，所述步驟一中，所述I型膠原蛋白為經過發酵或人工重組方法而獲得的I型膠原蛋白。

上述技術方案中，所述步驟一中，所述溶劑為水、有機酸、無機酸或緩沖對中的一種或任意兩種以上的組合物；

所述有機酸為乙酸、甲酸、蘋果酸或檸檬酸；所述無機酸為鹽酸、硫酸或磷酸；所述緩沖對為醋酸-醋酸鈉緩沖對、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖對或磷酸鹽緩沖對。

上述技術方案中，所述步驟一中，所述I型膠原蛋白與所述溶劑之間的重量比為1~10:5000。

上述技術方案中，所述步驟二中，所述甘油占所述I型膠原蛋白溶液的重量比為0.5%~40%。

上述技術方案中，所述步驟三中，所述輻照滅菌為鈷60輻照滅菌或者電子束輻照滅菌。

上述技術方案中，所述步驟三中，所述包裝材料為玻璃容器、塑料容器或鋁塑袋。

上述技術方案中，所述步驟二中，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油的同時還加入防腐劑，所述防腐劑為山梨酸鉀、山梨酸或苯甲醇，所述防腐劑占所述I型膠原蛋白溶液的重量比為0.1%~5%。

本發明與現有技術相比較，有益效果在于：

（1）本發明提供的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

（2）本發明提供的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，具有方法簡單，生產成本低，并能夠適用于大規模應用的特點。

附圖說明

圖1是I型膠原蛋白溶液經過不同方法處理后的SDS-PAGE凝膠電泳圖。通過對比不經滅菌處理、用鈷60滅菌處理、和用鈷60滅菌同時加入甘油處理的樣品譜帶，觀察膠原蛋白三螺旋結構是否保持完整。

具體實施方式

為了使本發明所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

實施例1。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中，I型膠原蛋白來源于牛跟腱；

本實施例中，溶劑為水；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為5:1000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為20%；

步驟三，選用玻璃容器將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行鈷60輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例2。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中，I型膠原蛋白來源于豬跟腱；

本實施例中，溶劑為有機酸；其中，有機酸為乙酸、甲酸、蘋果酸或檸檬酸；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為1:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油和山梨酸鉀，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為0.5%；山梨酸鉀占I型膠原蛋白溶液的重量比為3%；

步驟三，選用塑料容器將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行電子束輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例3。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中，I型膠原蛋白來源于羊跟腱；

本實施例中，溶劑為無機酸，其中，無機酸為鹽酸、硫酸或磷酸；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為10:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油和山梨酸，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為40%；山梨酸占I型膠原蛋白溶液的重量比為0.1%；

步驟三，選用鋁塑袋將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行鈷60輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例4。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中，I型膠原蛋白來源于牛跟腱和豬跟腱的組合物；

本實施例中，溶劑為緩沖對；其中，緩沖對為醋酸-醋酸鈉緩沖對、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖對或磷酸鹽緩沖對；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為3:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油和苯甲醇，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為10%；苯甲醇占I型膠原蛋白溶液的重量比為5%；

步驟三，選用玻璃容器將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行電子束輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例5。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中，I型膠原蛋白來源于牛跟腱、豬跟腱和羊跟腱中的組合物；

本實施例中，溶劑為水和有機酸的組合物；其中，有機酸為乙酸、甲酸、蘋果酸或檸檬酸；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為8:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為30%；

步驟三，選用鋁塑袋將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行鈷60輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例6。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中，I型膠原蛋白來源于動物提取物；

本實施例中，溶劑為有機酸、無機酸和緩沖對的組合物；其中，有機酸為乙酸、甲酸、蘋果酸或檸檬酸；無機酸為鹽酸、硫酸或磷酸；緩沖對為醋酸-醋酸鈉緩沖對、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖對或磷酸鹽緩沖對；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為2:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為5%；

步驟三，選用玻璃容器將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行鈷60輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例7。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中， I型膠原蛋白為經過發酵方法而獲得的I型膠原蛋白；

本實施例中，溶劑為水、有機酸、無機酸和緩沖對的組合物；其中，有機酸為乙酸、甲酸、蘋果酸或檸檬酸；無機酸為鹽酸、硫酸或磷酸；緩沖對為醋酸-醋酸鈉緩沖對、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖對或磷酸鹽緩沖對；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為7:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為15%；

步驟三，選用玻璃容器將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行鈷60輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

實施例8。

甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，它包括以下步驟：

步驟一，將I型膠原蛋白用溶劑溶解后，得到I型膠原蛋白溶液；本實施例中， I型膠原蛋白為經過人工重組方法而獲得的I型膠原蛋白；

本實施例中，溶劑為緩沖對，其中，緩沖對為醋酸-醋酸鈉緩沖對；

本實施例中，I型膠原蛋白與溶劑之間的重量比為6:5000；

步驟二，往步驟一制得的I型膠原蛋白溶液中加入甘油，充分混合均勻，得到混合溶液；本實施例中，甘油占I型膠原蛋白溶液的重量比為25%；

步驟三，選用塑料容器將步驟二得到的混合溶液進行包裝，然后進行電子束輻照滅菌，即制得無菌I型膠原蛋白溶液。

本實施例的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，由于在對I型膠原蛋白進行輻照滅菌前，加入甘油，進而使得I型膠原蛋白在輻照滅菌中，其三股螺旋結構不被破壞，進而很好地保護了I型膠原蛋白的功效，因此大大提高了I型膠原蛋白的廣泛應用。利用本發明的甘油在保護I型膠原蛋白的三股螺旋結構中的應用方法，利于制備無菌I型膠原蛋白溶液。I型膠原蛋白溶液在美容與保健方面應用廣泛，適用于輕中度炎癥痤瘡、痤瘡愈后早期色素沉著、痤瘡愈合后早期表淺性疤痕的治療；對治療皮膚過敏，減輕激光、光子治療術后疤痕的形成有輔助療效；在創面愈合期有減輕色素沉著和促進創面愈合的作用。

最后應當說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對本發明保護范圍的限制，盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細地說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。