紅沒藥醇微膠囊的抗菌用途及抗菌組合物的制作方法

本發明涉及化學藥物領域，具體涉及紅沒藥醇微膠囊及其制備方法和抗菌用途。
背景技術：
：變形鏈球菌(Streptococcusmutans)為革蘭氏染色陽性的球菌，是口腔天然菌群中占比例最大的鏈球菌屬中的一種。變形鏈球菌組中，變形鏈球菌和遠緣鏈球菌(茸毛鏈球菌)與人類齲病的發生密切相關。經反復研究證實，變形鏈球菌可以造成嚙齒類動物和靈長類動物實驗性齲的動物模型，同時也有證據表明該菌與人類齲病密切相關。變形鏈球菌是牙斑的主要成分之一，它們一層一層地吸附在牙齒上，形成所謂的“生物膜”，消耗糖類，產生酸，腐蝕牙齒的釉層，造成牙洞。紅沒藥醇(CASNO.：515-69-5)是存在于春黃菊花中的一種成份，具有消炎作用，可應用在皮膚保護和皮膚護理化妝品以及口腔衛生產品中。紅沒藥醇是無色至稻草黃粘稠液體，溶于低級醇(乙醇、異丙醇)、脂肪醇、甘油酯和石醋，幾乎不溶水和甘油，因此，紅沒藥醇難以在水溶性載體中分散，這限制了其在水劑類產品中的應用。目前有一些含有紅沒藥醇的皮膚護理組合物的相關專利報道，然而在這些組合物中，紅沒藥醇均只是作為輔助成分添加的，并未得到很好的利用。另外，雖然已知利用微膠囊技術可以改善某些活性成分的分散性，但具體到某種特定的活性成分其分散效果是不可預期的，尤其是改善分散性后對于相應功能效果是否有提升以及提升程度如何也是不可預期的。本發明人在長期研究中發現了紅沒藥醇在特定條件下形成的微膠囊具有出乎意料的優異穩定性以及對于特定細菌具有出乎意料的顯著改善的抑菌效果，基于此提出本發明。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種穩定性好且對特定細菌具有顯著抑菌效果的紅沒藥醇微膠囊。本發明同時提供上述紅沒藥醇微膠囊用于抑制變形鏈球菌的用途。為解決以上技術問題，本發明采取的技術方案如下：一種紅沒藥醇微膠囊，該微膠囊的原料配方包括紅沒藥醇，礦物油和/或植物油，乳化劑，聚乙二醇系列微膠囊基質以及水，其中紅沒藥醇、乳化劑及聚乙二醇系列微膠囊基質的質量比為0.05-0.2：0.8-3.2：0.8-8；所述微膠囊通過以下步驟制得：(1)將紅沒藥醇加入到礦物油和/或植物油中，制成質量濃度為0.1-1％濃度的紅沒藥醇油溶液；(2)將微膠囊基質和乳化劑溶于水中，制成微膠囊基質和乳化劑質量濃度分別為8-15％和2-6％的水溶液；(3)將步驟(1)所得紅沒藥醇油溶液與步驟(2)所得水溶液混合并攪拌，其中控制攪拌速度為20000～28000rpm，攪拌時間為1-10分鐘。優選地，步驟(1)中，控制所述紅沒藥醇油溶液的質量濃度為0.3-0.6％。步驟(2)中，制成水溶液中微膠囊基質的質量濃度為9-11％。步驟(2)中，制成水溶液中乳化劑的質量濃度為3-5％。根據本發明的一個優選方面，步驟(3)中，采用FLUKO弗魯克F25高剪切分散乳化機(簡稱FlukoF25攪拌器)來進行攪拌。根據本發明的又一優選方面，步驟(3)中，控制攪拌速度為28000rpm，攪拌時間為3-5分鐘。根據本發明，所述礦物油包括但不限于甲基硅油和/或石蠟油，所述植物油包括但不限于葵花籽油、玉米油、橄欖油、蓖麻油、菜籽油、大豆油、花生油等。實際選用時，可采用它們中的任一種或多種的組合，沒有特別限制。根據本發明，所述乳化劑優選為司班、吐溫、長鏈烷基磺酸鈉、長鏈烷基苯磺酸鈉、卵磷脂、豆磷脂、月桂醇聚醚硫酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚中的一種或多種以任意比例組成的混合物。其中所述“長鏈烷基磺酸鈉”、“長鏈烷基苯磺酸鈉”中的長鏈烷基指碳數在12以上的烷基。根據一個具體優選方面，所述乳化劑為十二烷基磺酸鈉(SDS)。根據本發明，所述聚乙二醇系列微膠囊基質可以為選自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇800、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇3000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一種或多種以任意比例組成的混合物。根據一個具體優選方面，采用聚乙二醇1000(PEG1000)作為微膠囊基質。在根據本發明的一個優選實施方案中，所述微膠囊通過以下步驟制得：(1)將紅沒藥醇加入到葵花籽油中，制成質量濃度為0.3-0.6％的紅沒藥醇油溶液；(2將聚乙二醇1000和十二烷基磺酸鈉溶于水中，制成聚乙二醇1000和十二烷基磺酸鈉質量濃度分別為9-11％和3-5％的水溶液；(3)將步驟(1)所得紅沒藥醇油溶液與步驟(2)所得水溶液混合并攪拌，其中采用FLUKO弗魯克F25高剪切分散乳化機來進行攪拌，并控制攪拌速度為25000～28000rpm，攪拌時間為3-5分鐘。根據本發明，所述微膠囊的平均粒徑大小為10-40微米，優選為10-30微米，更優選為10-20微米。所述微膠囊的最大粒徑與最小粒徑之間的差值在30微米以內，優選在20微米以內。本發明的紅沒藥醇微膠囊相比紅沒藥醇油溶液，對于變形鏈球菌的抑菌效果顯著提高，產生了意料不到的效果。由于以上技術方案的實施，本發明與現有技術相比具有如下優點：本發明提供的紅沒藥醇微膠囊具有出乎意料的優異穩定性，能夠顯著提高紅沒藥醇在水中的分散性，且相比紅沒藥醇油溶液，對于變形鏈球菌的抑菌效果顯著提高，適用于制作水劑類口腔清潔劑，預防口腔牙菌斑、齲齒。附圖說明圖1為各實施例制備完成后立即取樣觀察的顯微鏡圖；圖2為根據各實施例制備完成后立即取樣觀察的情況繪制的粒徑分布圖；圖3為各實施例制備完成且靜止24小時后取樣觀察的顯微鏡圖；圖4為根據各實施例制備完成且靜止24小時后取樣觀察的情況繪制的粒徑分布圖；圖5為各實施例制備完成且靜止48小時后取樣觀察的顯微鏡圖；圖6為根據各實施例制備完成且靜止48小時后取樣觀察的情況繪制的粒徑分布圖；圖7為各實施例制備完成且靜止15天后取樣觀察的顯微鏡圖；圖8為各實施例制備完成且靜止28天后后取樣觀察的顯微鏡圖；圖9為根據實施例4的實驗數據繪制的柱狀圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本發明做進一步詳細的說明，但本發明并不限于以下實施例。實施例中未注明的條件為常規實驗條件。原料：PEG1000(醫藥級)，葵花籽油(食品級)，紅沒藥醇(醫藥級)，十二烷基硫酸鈉(SDS)(醫藥級)；提供儀器：FlukoF25攪拌器，8G工作頭(操作樣品量1-60ml)。對微膠囊的表征方法為：取5微升上層液滴，滴于玻璃片表面，待液滴分散開后(約30s)，于顯微鏡下放大200倍拍攝液滴照片，分析液滴尺寸，繪制粒徑分布圖。實施例1純紅沒藥醇微膠囊的制備(1)將50mg紅沒藥醇混入葵花籽油，制成總量10g的0.5％(w/w)紅沒藥醇油溶液(溶液A)；(2)將4g的PEG1000以及1.6g的SDS分別以10％(w/w)和4％(w/w)溶于去離子水中，制成總量40g的水溶液(溶液B)；(3)將10g溶液A與40g溶液B在無菌潔凈燒杯中混合后，用FlukoF25進行攪拌，設定攪拌速度為28000rpm、攪拌時間1分鐘，攪拌完成后，立即取樣觀察，相關照片和粒徑分布圖分別參見圖1A和圖2A，樣本靜止24小時后，第二次取樣觀察，相關照片和粒徑分布圖分別參見圖3A和圖4A。樣本靜止48小時后，第三次取樣觀察，相關照片和粒徑分布圖分別參見圖5A和圖6A。樣本靜止15天后，第四次取樣觀察，相關照片參見圖7A。樣本靜止28天后，第五次取樣觀察，相關照片參見圖8A。實施例2-3純紅沒藥醇微膠囊的制備實施例2-3基本同實施例1，不同的是，設定攪拌時間分別為3分鐘和5分鐘，其中，實施例2制備的微膠囊在攪拌完成后、靜止24小時后、靜止48小時后、15天以及28天后的照片分別參見圖1B、圖3B、圖5B，圖7B和圖8B，攪拌完成后、靜止24小時后、靜止48小時后的粒徑分布圖分別參見圖2B、4B、圖6B。實施例3制備的微膠囊在攪拌完成后、靜止24小時后、靜止48小時后、15天以及28天后的照片分別參見圖1C、圖3C、圖5C、圖7C和圖8C，攪拌完成后、靜止24小時后、靜止48小時后的粒徑分布圖分別參見圖2C、4C和圖6C。實施例4純紅沒藥醇微膠囊抗菌實驗(一)實驗藥物的制備：微膠囊組：實施例3所得微膠囊樣品。紅沒藥醇對照組：0.050g紅沒藥醇溶解在49.95g葵花籽油中形成的紅沒藥醇油溶液。氨芐西林對照組：0.050g氨芐西林溶解在49.95g(滅菌的生理鹽水)空白對照素：只有滅菌的生理鹽水。(二)變形鏈球菌抗菌實驗1.試劑：BHI培養基成分：胰蛋白胨、磷酸氫二鈉、氯化鈉、葡萄糖、牛心浸出液、瓊脂、蒸餾水。2.實驗步驟：①取適量培養基和菌液于搖床中過夜，稀釋適當的倍數，種平板計數。(變形鏈球菌初始濃度約為5*108Cfu/ml)；②實驗前取大腸桿菌0.01ml用滅菌的生理鹽水梯度稀釋10000倍；③分別取上述藥品溶液1ml和0.02ml的菌液，震蕩混勻后，室溫放置15分鐘或2小時(平行重復2次試驗)；④15分鐘或2小時后震蕩均勻，取上述樣品(第3步的)0.3ml加滅菌的生理鹽水稀釋至3ml。震蕩混勻后，取1ml于平板中,然后加入適量的涼至40'C-45℃培養基(每個樣品鋪2個板計數)；⑤待培養基凝固后，倒扣平板放入含有氮氣、二氧化碳、氫氣的密封袋中于37℃培養箱中，24小時后做活菌菌落計數；⑥實驗重復兩次，求其平均值。3.實驗結果(A,B為兩次獨立實驗)3.1對變形鏈球菌的第一次實驗，藥物處理時間分為15分鐘和2小時。實驗時間為2017年1月12日，結果分別參見表1和表2。表1表23.2對變形鏈球菌的第二次實驗，藥物處理時間同樣也是15分鐘和2小時。實驗時間為2017年1月14日，結果分別參見表3和表4。表3表4通過兩次獨立實驗計算出各藥物抑菌率的平均值和標準偏差進行對比，如表5和6所示。表5處理時間15分鐘兩次實驗對比抑菌率抑菌率平均值標準偏差氨芐青霉素鈉11001001000氨芐青霉素鈉21001001000紅沒藥醇油溶液1485149.52.3紅沒藥醇油溶液2615859.51.80.5％紅沒藥醇微膠囊110010010000.5％紅沒藥醇微膠囊21001001000表6處理時間2小時兩次實驗對比抑菌率抑菌率平均值標準偏差氨芐青霉素鈉11001001000氨芐青霉素鈉21001001000紅沒藥醇油溶液1615859.51.8紅沒藥醇油溶液2605959.50.40.5％紅沒藥醇微膠囊110010010000.5％紅沒藥醇微膠囊21001001000通過實驗數據的對比處理可繪制柱狀圖，如圖9所示。實驗結果證明，本發明的0.5％紅沒藥醇微膠囊相比其油溶液具有顯著提高的抗菌效果，抗菌效果可與氨芐青霉素鈉相媲美。上述實施例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發明的內容并據以實施，并不能以此限制本發明的保護范圍。凡根據本發明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。當前第1頁1 2 3