一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管及其制備方法與流程

本發明屬于生物醫用材料領域，具體涉及一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管及其制備方法。

背景技術：

近年來，世界每年約超過100萬人會遭遇周圍神經損傷，由于周圍神經損傷后病理過程復雜，神經再生速度緩慢等多種因素，損傷神經的功能恢復受到制約。目前臨床上主要通過斷端吻合和神經移植法來治療周圍神經損傷，斷端吻合法難以實現神經束的準確吻合，影響神經纖維的再生速度，縫合線的存在又會造成進一步的損傷和神經瘤的形成，而金標準—自體神經移植卻又存在來源受限，供體神經支配區永久性喪失、結締組織增生等不可克服的缺陷。

針對上述外周神經損傷修復手段存在的各種缺陷，以及長期以來，臨床對粗大、長段神經缺損和多發性神經損傷無計可施的局面，組織工程神經導管應運而生。研究采用組織工程學的方法和理論，利用外周神經再生的生物機制，結合材料學、生物學、醫學等學科知識，制備具有良好生物相容性的生物材料來構建修復周圍神經損傷的神經導管已是神經修復領域的熱點和難點。嚴瓊嬌等制備并評估了一種prgd/pdlla/β-tcp/ngf復合神經導管，該復合神經導管中rgd成分提高了復合材料對神經細胞的粘附和增殖，β-tcp和ngf促進了神經生長并改善神經再生的“微環境”，橋接大鼠坐骨神經10mm缺損的實驗表明，該復合神經導管有良好的組織相容性，能夠有效促進周圍神經再生，效果接近自體神經移植(嚴瓊姣.prgd/pdlla/β-tcp/ngf復合神經導管的制備及其在周圍神經修復中的應用[d].武漢理工大學,2008.)。

目前盡管有部分可生物降解類神經導管已投入市場，但依然存在材料細胞親和性不佳，韌性較差，難有良好的導管構型來引導神經再生修復長段缺損等問題。理想的神經導管，一方面應該兼備良好的力學性能，良好的細胞親和性，可線性調控的降解性，使損傷的周圍神經在一個適宜的“微環境”中自我修復和再生，另一方面可以防止纖維瘢痕組織的侵入，抑制神經瘤形成，又可定向引導軸突準確對接，從而達到修復長段和大范圍的周圍神經損傷的效果。

技術實現要素：

針對上述現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管及其制備方法。所述雙層多孔神經導管具有較好的力學性能和良好的細胞親和性，能促進神經生長并改善神經再生的“微環境”，通過雙層多孔和凹槽結構保證營養物質傳輸的同時，能定向引導神經再生，大幅提高周圍神經損傷的修復效果，并可用于外周神經損傷修復和取代自體神經移植等領域。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其特征在于：所述雙層多孔神經導管包括由可降解聚酯制備的外層薄膜和由rgd接枝改性的天然生物高分子并摻雜鈣磷納米粒子制備的內層電紡納米纖維膜；所述外層薄膜具有多孔結構，其孔徑大小為10μm～50μm；所述外層薄膜的內壁具有縱向凹槽結構，所述內層電紡納米纖維膜是在所述外層薄膜的內壁上通過電紡形成的。所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的模擬結構圖如圖1所示。

本發明還提供上述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)導管外層薄膜的制備：將可降解聚酯高分子完全溶解于有機溶劑中，再加入致孔劑顆粒，超聲分散倒入模具中，自然風干成型，然后置于去離子水中除去致孔劑，并真空干燥除去有機溶劑即得外層薄膜；

2)導管內層的制備：將接枝rgd的天然生物高分子溶解于溶劑中，并加入鈣磷納米粒子和促紡劑配置成質量分數為2％～5％的紡絲溶液，將步驟1)制得的外層薄膜固定在靜電紡絲裝置的接收板上，然后在一定的紡絲參數下，電紡形成導管內層，得雙層薄膜；

3)導管的成型：通過不同內徑的芯棒，將步驟2)制得的雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑溶解封口，即得所述的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

按上述方案，優選地，步驟1)中所述可降解聚酯高分子為聚己內酯(pcl)、聚乳酸(pdlla)、聚羥基乙酸(pga)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(plga)、聚己內酯-乙二醇嵌段共聚物(pcl-mpeg)、聚乳酸-乙二醇嵌段共聚物(pdlla-mpeg)、聚乙丙交酯-乙二醇嵌段共聚物(plga-mpeg、plga-peg-plga)中的一種或兩種以上的混合物。

按上述方案，優選地，步驟1)中所述有機溶劑為冰醋酸、二氯甲烷、二甲亞砜、乙酸乙酯、丙酮中的一種或兩種以上的混合溶劑。

按上述方案，優選地，步驟1)中所述模具的材質為聚四氟乙烯；所述模具呈凹槽狀，凹槽的凸面形狀為長方形、三角形或半圓柱形中任一種或幾種，凹槽深度為0.5mm，寬度為1mm～5mm。所述聚四氟乙烯凹槽模具的3d效果圖見圖2，示意圖的豎剖面圖和俯視圖分別見圖3和圖4。

按上述方案，優選地，步驟1)中所述致孔劑為氯化鈉、蔗糖、果糖中的一種或兩種以上的混合物，所述致孔劑顆粒的粒徑大小為10μm～50μm。

按上述方案，優選地，步驟2)中所述接枝rgd的天然生物高分子由下述方法制備而成：

將rgd多肽溶解于質量分數為1％的醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液中，加入縮合活化劑，在4℃下活化12h，然后往溶液體系中緩慢滴加天然生物高分子溶液，在0℃～10℃下反應6h～24h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的天然生物高分子。更優選地，所述rgd多肽為包含rgd序列的生物短肽，如grgdy(甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-酪氨酸)、c-rgdyk(環-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-賴氨酸)、grgdspc(甘氨酸-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-絲氨酸酸-脯氨酸-半胱氨酸)等。更優選地，所述縮合活化劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)/n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)。更優選地，所述edc、nhs與所述rgd多肽的摩爾比為20:20:1。更優選地，所述天然生物高分子為殼聚糖、膠原、明膠、絲素蛋白中的一種或兩種以上的混合。更優選地，所述rgd多肽與所述天然生物高分子的質量比為1：2～20。

按上述方案，優選地，步驟2)中所述溶劑為質量分數為70％～90％的醋酸水溶液或三氟乙酸。

按上述方案，優選地，步驟2)中所述鈣磷納米粒子為納米羥基磷灰石(ha)、β-磷酸三鈣(β-tcp)、磷灰石、磷酸氫鈣、磷酸二氫鈣、磷酸八鈣、焦磷酸鈣、磷酸四鈣中的一種或兩種以上混合納米粒子。

按上述方案，優選地，步驟2)中所述促紡劑為聚乙烯醇(pva)、聚氧化乙烯(peo)中的一種或兩種的混合。

按上述方案，優選地，步驟2)中所述接枝rgd的天然生物高分子和促紡劑質量比為1：0.1～2；所述鈣磷納米粒子的質量為所述接枝rgd的天然生物高分子和促紡劑質量之和的5％。

按上述方案，優選地，步驟2)中所述紡絲參數為：紡絲電壓：12kv～20kv，接收距離：10cm～15cm，推速：0.01mm/min～0.1mm/min。

按上述方案，優選地，步驟3)中所述有機溶劑與步驟1)中所述有機溶劑相同。

本發明的有益效果為：

1)本發明將溶劑流延/粒子瀝濾法與靜電紡絲技術相結合，既保證了神經導管的力學性能，又使其具有良好的細胞親和性。

2)本發明提供的雙層多孔神經導管，內層為rgd接枝改性的天然生物高分子并摻雜鈣磷納米粒子的電訪納米纖維膜，利于神經細胞的粘附、增殖、生長，具有良好的生物相容性，鈣磷納米粒子中鈣、磷離子的釋放能促進神經細胞生長并改善神經再生的“微環境”，其縱向凹槽結構能夠定向引導神經再生，達到修復外周神經長段缺損的效果。

3)本發明提供的雙層多孔神經導管，外層具有可控孔徑的多孔結構，既能有效防止纖維瘢痕組織的侵入，抑制神經瘤形成，又能保證營養物質的傳輸。

4)本發明提供的雙層多孔神經導管，可大幅提高周圍神經損傷的修復效果并有望取代自體神經移植，可用于外周神經損傷修復等領域。

附圖說明

圖1為具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的模擬結構圖。

圖2為聚四氟乙烯凹槽模具3d效果圖。

圖3為聚四氟乙烯凹槽模具示意圖的豎剖面圖。

圖4為聚四氟乙烯凹槽模具示意圖的俯視圖。

圖5為實施例1、2、3制備所得的神經導管與對照組mtt的細胞相容性評價實驗結果。

圖6為實施例2中內層電紡纖維膜的sem圖，左圖放大倍率為10kх，右圖為20kх。

圖7為實施例3中內層電紡纖維膜的sem圖，左圖放大倍率為10kх，右圖為20kх。

圖8為實施例3和實施例4中殼聚糖和接枝不同多肽rgd改性殼聚糖的紅外圖譜。

具體實施方式

為了更好地理解本發明，下面結合實施例進一步闡明本發明的內容，但本發明不僅僅局限于下面的實施例。以下實施例如無具體說明，采用的試劑均為市售化學試劑或工業產品。

以下各實施例中所用的聚四氟乙烯凹槽模具的凹槽凸面形狀均為長方形，凹槽寬度為1mm，凹槽深度為0.5mm，由深圳宜美五金塑料制品廠按照上述形狀、尺寸和圖2-4所示的3d效果圖和示意圖加工制備而成。

以下各實施例中所用的納米β-磷酸三鈣(β-tcp)由申請人所在實驗室參照“戴紅蓮,吳艷增,曲坤楠,康海飛.一種納米β-磷酸三鈣的制備方法[p].湖北：cn105883742a,2016-08-24.，”中實施例1所述的方法制備而成。

實施例1

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其制備方法包括以下步驟：

1)制備外層薄膜：將1g聚乳酸-羥基乙酸共聚物(plga)溶于15ml的二氯甲烷中，完全溶解后加入6g粒徑為10μm的氯化鈉顆粒，超聲分散完全后倒入聚四氟乙烯凹槽模具中，自然風干5天成型，然后置于去離子水中浸泡2天除去氯化鈉，并真空干燥2天除去有機溶劑即得外層薄膜。

2)制備接枝rgd的殼聚糖(cs-rgd)：將0.1g(0.176mmol)生物多肽grgdy溶解于20ml醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液(質量分數1％)中，加入縮合活化劑0.677g(3.530mmol)1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和0.406g(3.530mmol)n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)，在4℃下活化12h；量取0.2g殼聚糖溶于20ml醋酸溶液(質量分數1％)，待其完全溶解后滴加至上述反應體系中，在0℃下反應6h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的殼聚糖(cs-grgdy)。

3)稱量0.1g步驟2)中制得的cs-rggdy溶于15ml的70％的醋酸溶液中，完全溶解后加入0.2g聚乙烯醇，混合均勻再加入0.015g納米β-磷酸三鈣(β-tcp，實驗室自制)，超聲分散后即得2％(溶質質量分數)的紡絲溶液。

4)以步驟1)制得的外層薄膜為接收裝置，將上述紡絲溶液在工藝參數：紡絲電壓：12kv，接收距離：10cm，推速：0.01mm/min的條件下進行靜電紡絲，即得雙層薄膜。

5)導管的成型：最后通過芯棒，將雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑二氯甲烷溶解封口，即得所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

對本實施例制備的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管進行下述性能測試：

1、力學性能測試(按照國標gbt1040-2006中薄膜樣品拉伸測試標準)

具體步驟如下：將所述神經導管的外層薄膜樣品制成標準試樣，然后采用美特斯e44.104型萬能試驗機對標準試樣進行拉伸力學測試，測定不同復合膜的斷裂拉伸強度和斷裂伸長率。測試條件為：拉伸速度為100mm/min，試驗厚度0.5mm，標距5cm，每個不同薄膜試樣測量5次，取其平均值。

經測定，本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的外層薄膜的拉伸強度和斷裂伸長率分別為9.876mpa、293.43％，具有良好的力學強度和韌性。

2、靜態水接觸角測試

具體步驟如下：分別將所述神經導管的外層薄膜樣品和內層電紡纖維膜樣品裁剪成載玻片大小，然后使用雙面膠平整地固定在載玻片表面，再采用faceca-xp150型水接觸角測定儀，通過液滴法測試復合膜的靜態水接觸角，每個復合膜樣品在膜的不同位置測量5次，取5次的平均值作為復合膜的接觸角。

經測定，本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的外層薄膜的水接觸角為75.65°，內層電紡纖維膜的水接觸角為60.70°，顯示其具有較好的親水性。

3、細胞相容性評價

具體步驟如下：將所述神經導管浸提液與雪旺細胞(rsc96)共培養，并以dmem培養液作為對照組，將實驗組和對照組置于37℃，5％co2細胞培養箱孵育1、3、5天后通過mtt實驗檢測細胞增殖情況。實驗結果如圖5所示，該實施例組與對照組od值無明顯統計學差異，本實施例神經導管材料具有良好細胞相容性。

實施例2

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其制備方法包括以下步驟：

1)制備外層薄膜：將1g聚乳酸-羥基乙酸共聚物(plga)溶于15ml的二氯甲烷中，完全溶解后加入6g粒徑為50μm的氯化鈉顆粒，超聲分散完全后倒入聚四氟乙烯凹槽模具中，自然風干5天成型，然后置于去離子水中浸泡2天除去氯化鈉，并真空干燥2天除去有機溶劑即得外層薄膜。

2)制備接枝rgd的殼聚糖(cs-rgd)：將0.1g(0.176mmol)生物多肽grgdy溶解于20ml醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液(質量分數1％)中，加入縮合活化劑0.677g(3.530mmol)1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和0.406g(3.530mmol)n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)，在4℃下活化12h；量取0.2g殼聚糖溶于20ml醋酸溶液(質量分數1％)，待其完全溶解后滴加至上述反應體系中，在10℃下反應24h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的殼聚糖(cs-grgdy)。

3)稱量0.1g步驟2)中制得的cs-grgdy溶于10ml的80％的醋酸溶液中，完全溶解后加入0.1g聚乙烯醇，混合均勻再加入0.01g納米β-磷酸三鈣(β-tcp，實驗室自制)，超聲分散后即得2％(溶質質量分數)的紡絲溶液。

4)以步驟1)制得的外層薄膜為接收裝置，將上述紡絲溶液在工藝參數：紡絲電壓：20kv，接收距離：15cm，推速：0.05mm/min的條件下進行靜電紡絲，即得雙層薄膜。

5)導管的成型：最后通過芯棒，將雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑二氯甲烷溶解封口，即得所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

經測定，本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的外層薄膜的拉伸強度和斷裂伸長率分別為7.157mpa、278.34％，具有良好的力學強度和韌性。所述神經導管的外層薄膜水接觸角為60.4°，顯示其具有較好的親水性；其內層電紡纖維膜的水接觸角為50.42°，顯示其具有良好的親水性。

通過掃描電鏡(sem)在不同倍率下觀察本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的內層電紡纖維膜：將所述電紡纖維膜表面進行噴金處理，然后用tescan生產的vega3lm型掃描電鏡(sem)在不同倍率下觀察電紡纖維膜的表面形貌，結果如圖6所示，顯示其具有良好的纖維形貌，纖維直徑為70nm～200nm。

對本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管進行細胞相容性評價，實驗結果如圖5所示，該實施例組與對照組od值無明顯統計學差異，本實施例神經導管材料具有良好細胞相容性。

實施例3

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其制備方法包括以下步驟：

1)制備外層薄膜：將1g聚乙丙交酯-乙二醇嵌段共聚物(plga-mpeg)溶于15ml的二氯甲烷中，完全溶解后加入6g粒徑為30μm的氯化鈉顆粒，超聲分散完全后倒入聚四氟乙烯凹槽模具中，自然風干5天成型，然后置于去離子水中浸泡2天除去氯化鈉，并真空干燥2天除去有機溶劑即得外層薄膜。

2)制備接枝rgd的殼聚糖(cs-rgd)：將0.1g(0.161mmol)生物多肽c-rgdyk溶解于20ml醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液(質量分數1％)中，加入縮合活化劑0.618g(3.227mmol)1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和0.371g(3.227mmol)n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)，在4℃下活化12h；量取0.2g殼聚糖溶于20ml醋酸溶液(質量分數1％)，待其完全溶解后滴加至上述反應體系中，在0℃下反應12h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的殼聚糖(cs-c-rgdyk)。

3)稱量0.1g步驟2)中制得的cs-rgdyk溶于7.5ml的80％的醋酸溶液中，完全溶解后加入0.05g聚氧化乙烯，混合均勻再加入0.0075g納米β-磷酸三鈣(β-tcp，實驗室自制)，超聲分散后即得2％(溶質質量分數)的紡絲溶液。

4)以步驟1)制得的外層薄膜為接收裝置，將上述紡絲溶液在工藝參數：紡絲電壓：16kv，接收距離：13cm，推速：0.03mm/min的條件下進行靜電紡絲，即得雙層薄膜。

5)導管的成型：最后通過芯棒，將雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑二氯甲烷溶解封口，即得所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

對本實施例所得cs-c-rgdyk進行紅外光譜測試：取適量干燥完全的cs-c-rgdyk研磨成粉，與kbr混合均勻后壓片，用brukervertex80v型傅里葉變換紅外光譜儀進行測試，結果如圖8所示(見曲線1#)。將其譜圖與殼聚糖(cs)的紅外譜圖(見圖8中曲線3#)對比發現，在1561cm^-1處明顯出現新的吸收峰，此為cs-c-rgdyk仲酰胺ⅱ帶的特征吸收峰，表明cs-c-rgdyk成功合成。

經測定，本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的外層薄膜的拉伸強度和斷裂伸長率分別為6.405mpa、408.69％，具有良好的力學強度和韌性。所述神經導管的外層薄膜水接觸角為74.8°，顯示其具有較好的親水性；其內層電紡纖維膜水接觸角為45.46°顯示其具有優良的親水性。

本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管的內層電紡纖維膜在不同倍率下的sem圖如圖7所示，顯示其具有良好的纖維形貌，纖維直徑為50nm～270nm。

對本實施例制得的具有定向引導功能的雙層多孔神經導管進行細胞相容性評價，實驗結果如圖5所示，該實施例組與對照組od值無明顯統計學差異，本實施例神經導管材料具有良好細胞相容性。

實施例4

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其制備方法包括以下步驟：

1)制備外層薄膜：將1g聚乙丙交酯-乙二醇嵌段共聚物(plga-mpeg)溶于15ml的乙酸乙酯中，完全溶解后加入6g粒徑為30μm的氯化鈉顆粒，超聲分散完全后倒入聚四氟乙烯凹槽模具中，自然風干5天成型，然后置于去離子水中浸泡2天除去氯化鈉，并真空干燥2天除去有機溶劑即得外層薄膜。

2)制備接枝rgd的殼聚糖(cs-rgd)：將0.1g生物多肽grgdy(0.176mmol)溶解于20ml醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液(質量分數1％)中，加入縮合活化劑0.677g(3.530mmol)1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和0.406g(3.530mmol)n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)，在4℃下活化12h；量取0.2g殼聚糖溶于20ml醋酸溶液(質量分數1％)，待其完全溶解后滴加至上述反應體系中，在5℃下反應24h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的殼聚糖(cs-grgdy)。

3)稱量0.1g步驟2)中制得的cs-rggdy溶于5.5ml的90％的醋酸溶液中，完全溶解后加入0.01g聚乙烯醇，混合均勻再加入0.0055g納米β-磷酸三鈣(β-tcp，實驗室自制)，超聲分散后即得2％(溶質質量分數)的紡絲溶液。

4)以步驟1)制得的外層薄膜為接收裝置，將上述紡絲溶液在工藝參數：紡絲電壓：16kv，接收距離：13cm，推速：0.03mm/min的條件下進行靜電紡絲，即得雙層薄膜。

5)導管的成型：最后通過芯棒，將雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑乙酸乙酯溶解封口，即得所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

對本實施例所得cs-grgdy冷凍干燥后的粉末進行紅外光譜測試，結果如圖8所示。將其譜圖(見曲線2#)與cs的譜圖對比發現，在1563cm^-1處明顯出現新的吸收峰，此為cs-grgdy仲酰胺ⅱ帶的特征吸收峰，表明cs-grgdy成功合成。

實施例5

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其制備方法包括以下步驟：

1)制備外層薄膜：將1g聚乙丙交酯-乙二醇嵌段共聚物(plga-mpeg)溶于15ml的乙酸乙酯中，完全溶解后加入6g粒徑為10μm的氯化鈉顆粒，超聲分散完全后倒入聚四氟乙烯凹槽模具中，自然風干5天成型，然后置于去離子水中浸泡2天除去氯化鈉，并真空干燥2天除去有機溶劑即得外層薄膜。

2)制備接枝rgd的殼聚糖(cs-rgd)：將0.01g(0.0176mmol)生物多肽grgdy溶解于20ml醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液(質量分數1％)中，加入縮合活化劑0.0677g(0.353mmol)1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和0.0406g(0.353mmol)n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)，在4℃下活化12h；量取0.2g殼聚糖溶于20ml醋酸溶液(質量分數1％)，待其完全溶解后滴加至上述反應體系中，在5℃下反應24h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的殼聚糖(cs-grgdy)。

3)稱量0.1g步驟2)中制得的cs-rggdy溶于5ml三氟乙酸中，完全溶解后加入0.2g聚氧化乙烯，混合均勻再加入0.015g納米β-磷酸三鈣(β-tcp，實驗室自制)，超聲分散后即得4％(溶質質量分數)的紡絲溶液。

4)以步驟1)制得的外層薄膜為接收裝置，將上述紡絲溶液在工藝參數：紡絲電壓：16kv，接收距離：13cm，推速：0.1mm/min的條件下進行靜電紡絲，即得雙層薄膜。

5)導管的成型：最后通過芯棒，將雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑乙酸乙酯溶解封口，即得所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

實施例6

一種具有定向引導功能的雙層多孔神經導管，其制備方法包括以下步驟：

1)制備外層薄膜：將1g聚乙丙交酯-乙二醇嵌段共聚物(plga-mpeg)溶于15ml的二氯甲烷中，完全溶解后加入6g粒徑為20μm的果糖顆粒，超聲分散完全后倒入聚四氟乙烯凹槽模具中，自然風干5天成型，然后置于去離子水中浸泡2天除去氯化鈉，并真空干燥2天除去有機溶劑即得外層薄膜。

2)制備接枝rgd的殼聚糖(cs-rgd)：將0.1g(0.161mmol)生物多肽c-rgdyk溶解于20ml醋酸鈉-醋酸的緩沖溶液(質量分數1％)中，加入縮合活化劑0.618g(3.227mmol)1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)和0.371g(3.227mmol)n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)，在4℃下活化12h；量取1g殼聚糖溶于100ml醋酸溶液(質量分數1％)，待其完全溶解后滴加至上述反應體系中，在5℃下反應24h，最后將反應完全的溶液透析3天，冷凍干燥即得接枝rgd的殼聚糖(cs-c-rgdyk)。

3)稱量0.2g步驟2)中制得的cs-c-rgdyk溶于7.5ml的80％的醋酸溶液中，完全溶解后加入0.2g聚氧化乙烯，混合均勻再加入0.02g納米羥基磷灰石(ha)，超聲分散后即得5％(溶質質量分數)的紡絲溶液。

4)以步驟1)制得的外層薄膜為接收裝置，將上述紡絲溶液在工藝參數：紡絲電壓：15kv，接收距離：15cm，推速：0.05mm/min的條件下進行靜電紡絲，即得雙層薄膜。

5)導管的成型：最后通過芯棒，將雙層薄膜卷制成管，再用有機溶劑二氯甲烷溶解封口，即得所述具有定向引導功能的雙層多孔神經導管。

以上所述僅為本發明的優選實施方式，應當指出，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明創造構思的前提下，做出若干改進和變換，這些都屬于本發明的保護范圍。