本申請是2013年2月8日提交的、發明名稱為“用以減少眼用類固醇的并發癥的藥物組合物”的中國專利申請201380008147.9的分案申請。【
技術領域：
：】本發明是關于用以減少類固醇的副作用的包含脂質混合物(lipidcake)以及類固醇溶液的組合的藥物組合物，以及它們用于治療眼科疾病(ophthalmicdiseases)的方法。
背景技術：
：：黃斑水腫引起中心視力的喪失并且是糖尿病視網膜病變的一種臨床表現。它是由視網膜微血管病變(retinalmicrovascularchanges)所導致，而且致病機制不僅與vegf依賴有關，也與可被皮質類固醇所抑制的其它炎癥性以及血管新生性(angiogenic)細胞因子水平有關(sohnhj等人changesinaqueousconcentrationsofvariouscytokinesafterintravitrealtriamcinoloneversusbevacizumabfordiabeticmacularedema.amjophthalmol.oct2011；152(4):686-94)。針對一些對典型治療[諸如激光光凝術、眼部周圍使用與全身性使用類固醇或碳酸酐酶抑制劑]沒有反應的慢性黃斑水腫的案例而言，玻璃體內的皮質類固醇注射可以是一種治療選擇。玻璃體內的皮質類固醇注射亦被用來治療葡萄膜炎以及用來改善視網膜分支靜脈阻塞(branchretinalveinocclusion)或視網膜中央靜脈阻塞(centralretinaveinocclusion)病患的視覺敏銳度。然而，眼內最佳且有效的皮質類固醇濃度的維持需要重復性的玻璃體內注射，而重復性的玻璃體內注射會造成許多并發癥[諸如傳染性眼內炎(infectiousendophthalmitis)、視網膜剝離、外傷性白內障以及眼內壓(iop)升高]。一項研究顯示：在玻璃體內的類固醇注射后的第1個月，iop升高的發病率是57.69％，而在第3與第6個月時分別是75％與47.05％，且在22.72％的病患中發現有白內障的生成(garcíafernándezm等人intravitrealtriamcinoloneacetonideuseindiffusepersistentdiabeticmacularedema.archsocespoftalmol2011oct；86(10):314-319)。鑒于以上所概述的缺陷，需要具有較低副作用的玻璃體內類固醇注射劑。技術實現要素：本發明涉及一種包含下列各項的組合的藥物組合物：包含一種磷脂或多種磷脂的混合物且含有或不含膽固醇的脂質混合物(lipidcakemixture)，以及包含眼用類固醇、其衍生物、其藥學上可接受的鹽或其前藥的類固醇溶液；其中每50μl的該藥物組合物中磷脂的總量低于大約2.5μmol，并且相對于每50μl的藥物組合物中含有至少大約5μmol的磷脂的組合物來說，每50μl的藥物組合物中含有低于大約2.5μmol磷脂的藥物組合物降低所述眼用類固醇、所述衍生物、所述藥學上可接受的鹽或所述前藥的副作用。該藥物組合物可通過混合脂質混合物與類固醇溶液而被制備，其中該類固醇溶液包含眼用類固醇、其衍生物、其藥學上可接受的鹽或者其前藥。本發明亦涉及在需要眼科疾病治療的個體中治療眼科疾病的方法。該方法包含下列的步驟：對該個體給藥本文描述的藥物組合物，藉此減少在該個體中的癥狀。本發明對于通過眼部遞送(oculardelivery)來治療局限于眼后段的眼科疾病是特別有用的。【具體實施方式】定義如上文以及在整個公開內容中所使用的下列術語，除非另外有所指明，應被理解為具有下列意義。除非上下文另外清楚地指明，本文所使用的單數的形式“一(a)”、“一(an)”以及“所述/該(the)”包含復數的引述意思。除非另外有所指明，本文所使用的術語“大約”，當涉及一可測量的數值(諸如數量、短暫的期間等)時，被意指為包含由指定值的±10％的變化，優選為指定值的±5％的變化，更優選為指定值的±1％的變化，甚至更優選為指定值的±0.1％的變化，只要這樣的變化對于減少類固醇的副作用而言是適當的。除非另外有所指明，此處所使用的術語“大約”，當涉及一范圍時，被意指為包含在范圍的差異內由指定值的±10％的變化，優選為指定值的±5％的變化，更優選為指定值的±1％的變化，甚至更優選為指定值的±0.1％的變化，只要這樣的變化對于減少類固醇的副作用而言是適當的。本文所使用的術語“脂質體”意指由包封有水相的同中心排列的脂雙層構成的囊泡，或者小的或大的單層囊泡(unilammellarvesicles)。本文所使用的“有效量”意指一足以減少眼科疾病的癥狀以及征兆[諸如模糊(blurry)、褪色的視覺(washedoutvision)]的藥物組合物的劑量。本文所使用的術語“治療(treating)”、“被治療的(treated)”或“治療(treatment)”包括預防的(preventative)[例如預防性(prophylactic)]、緩解性(palliative)以及治愈性(curative)的用途或結果。術語“個體”包括一患有眼科疾病的脊椎動物。該個體優選為溫血動物，包括哺乳動物，優選為人類。本文所使用的術語“前藥”意指前體化合物，該前體化合物在給藥之后經由體內的一些化學或生理過程而釋放出生物活性化合物(例如，一前藥在達到生理ph或經由酶作用后被轉換為生物活性化合物)。前藥本身可能缺少或具有所欲達到的生物活性。本發明的眼用類固醇的“藥學上可接受的鹽”是一酸性類固醇與堿所形成的鹽，亦即堿加成鹽，諸如堿金屬鹽以及堿土金屬鹽(諸如鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽)，以及4銨鹽[諸如銨鹽、三甲基銨鹽、二乙基銨鹽以及三(羥甲基)甲基銨鹽]。類似地，對于堿性眼用類固醇，也可以提供酸加成鹽，諸如無機酸、有機羧酸與有機磺酸(例如鹽酸、甲磺酸、馬來酸)。在一個方面，本發明提供一包含下列各項的組合的藥物組合物：包含一種磷脂或多種磷脂的混合物且含有或不含膽固醇的脂質混合物；以及一包含配于雙蒸餾水(double-distilledwater，ddh2o)或一適合的緩沖液中的眼用類固醇、其衍生物、其藥學上可接受的鹽或其前藥的類固醇溶液；其中在所述組合物中磷脂的總量為每50μl的藥物組合物低于大約2.5μmol，并且相對于每50μl的藥物組合物中含有至少大約5μmol磷脂的組合物來說，每50μl的藥物組合物中含有低于大約2.5μmol磷脂的藥物組合物降低所述類固醇、所述衍生物、所述藥學上可接受的鹽或所述前藥的副作用。另一個方面，本發明涉及治療眼科疾病的方法，其包括對于需要此類治療的個體給藥有效量的本文所描述的藥物組合物，藉此減少在該個體中的眼科疾病的癥狀以及征兆。脂質混合物(lipidcake)在本發明中的脂質混合物意指一塊狀、薄膜狀或粉末狀的固體脂質混合物(lipidmixture)。在一個實施方案中，含有或不含膽固醇的一種磷脂或多種磷脂的混合物先制備成脂質體，之后，再進一步加工處理成為脂質混合物。在另一個實施方案中，含有或不含膽固醇的一種磷脂或多種磷脂的混合物在加工處理成為脂質混合物之前不先制備成脂質體。脂質體的粒徑是納米等級，并且包含粒子形成部分(particle-formingcomponent)以及藥劑攜帶部分(agent-carryingcomponent)。該粒子形成部分形成一封閉的脂質屏障。脂質混合物可由各種不同的脂質所制備而得，所述的脂質具有形成或被并入至單層或雙層結構中的能力。在本發明中所使用的脂質包括一種或多種的磷脂，并可含有或不含膽固醇。在本發明中所使用的磷脂的實例包括，但不限于：磷脂酰膽堿(pc)、磷脂酰甘油(pg)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰絲氨酸(ps)、磷脂酸(pa)、磷脂酰肌醇(pi)、蛋黃磷脂酰膽堿(epc)、蛋黃磷脂酰甘油(epg)、蛋黃磷脂酰乙醇胺(epe)、蛋黃磷脂酰絲氨酸(eps)、蛋黃磷脂酸(epa)、蛋黃磷脂酰肌醇(epi)、大豆磷脂酰膽堿(spc)、大豆磷脂酰甘油(spg)、大豆磷脂酰乙醇胺(spe)、大豆磷脂酰絲氨酸(sps)、大豆磷脂酸(spa)、大豆磷脂酰肌醇(spi)、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(dppc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(dopc)、二肉豆蔻酰基磷脂酰膽堿(dmpc)、二棕櫚酰基磷脂酰甘油(dppg)、二油酰基磷脂酰甘油(dopg)、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(dmpg)、十六烷基磷酸膽堿(hepc)、氫化大豆磷脂酰膽堿(hspc)、二硬脂酰基磷脂酰膽堿(dspc)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(dspg)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、棕櫚酰基硬脂酰基磷脂酰膽堿(pspc)、棕櫚酰基硬脂酰基磷脂酰甘油(pspg)、單油酰基磷脂酰乙醇胺(mope)、1-棕櫚酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(popc)、聚乙二醇二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(peg-dspe)、二棕櫚酰基磷脂酰絲氨酸(dpps)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷脂酰絲氨酸(dops)、二肉豆蔻酰基磷脂酰絲氨酸(dmps)、二硬脂酰基磷脂酰絲氨酸(dsps)、二棕櫚酰基磷脂酸(dppa)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷脂酸(dopa)、二肉豆蔻酰基磷脂酸(dmpa)、二硬脂酰基磷脂酸(dspa)、二棕櫚酰基磷脂酰肌醇(dppi)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷脂酰肌醇(dopi)、二肉豆蔻酰基磷脂酰肌醇(dmpi)、二硬脂酰基磷脂酰肌醇(dspi)，以及它們的混合物。特別優選的磷脂選自于dopc以及dopg。在一個實施方案中，脂質混合物包含29.5％至90％：3％至37.5％：10％至33％的摩爾比率的dopc、dopg以及膽固醇。在另一個實施方案中，脂質混合物包含大約15％至小于大約30％摩爾比率的膽固醇。在另一個實施方案中，脂質混合物包含大約18％至大約28％摩爾比率的膽固醇。在又另一個實施方案中，脂質混合物包含大約20％至大約25％摩爾比率的膽固醇。在一個實施方案中，粒子形成部分沒有脂肪酸或陽離子脂質(亦即在生理ph值下攜帶凈正電荷的脂質)。在另一個實施方案中，粒子形成部分包括一具有一附接于一磷脂分子的長鏈的高度水合的柔性中性聚合物的親水性聚合物。沒有被任何理論限制，該親水性聚合物被認為會穩定脂質體并且在體內導致一更長的循環時間。親水性聚合物的實例包括，但不限于：具有一為大約2,000至大約5,000道耳頓的分子量的聚乙二醇(peg)、甲氧基peg(mpeg)、神經節苷脂gm1、聚唾液酸(polysialicacid)、聚乳酸[亦被稱為多乳酸(polylactide)]、聚乙醇酸(亦被稱為聚乙醇酸交酯)、聚乳酸聚乙醇酸(apolylacticpolyglycolicacid)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚甲噁唑啉(polymethoxazoline)、聚乙基噁唑啉、聚羥乙基噁唑啉、聚羥丙基噁唑啉、聚天冬酰胺、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚乙烯基甲基醚、聚丙烯酸羥乙酯、衍生化纖維素(derivatizedcelluloses)(諸如羥甲基纖維素或羥乙基纖維素)以及合成聚合物。粒子形成部分可進一步包含抗體或肽的脂質綴合物，該脂質綴合物作為靶向部分起作用而能夠使脂質體專一性地結合至具有靶分子的靶細胞。靶分子的實例包括，但不限于：表皮生長因子受體(egfr)、血管內皮生長因子受體(vegf)、癌胚抗原(cea)以及erbb-2/neu(her2)。在本發明中所制備的脂質體可通過被用來制備囊泡的常規技術所產生。這些技術包括：醚注射法(deamer等人,acad.sci.(1978)308:250)、表面活性劑法(brunner等人,biochim.biophys.acta(1976)455:322)、凍融法(pick等人,arch.biochim.biophys.(1981)212:186)、反相蒸發法(szoka等人,biochim.biophys.acta.(1980)601:55971)、超聲波處理法(huang等人,biochemistry(1969)8:344)、乙醇注射法(kremer等人,biochemistry(1977)16:3932)、擠出法(hope等人,biochim.biophys.acta(1985)812:5565)、法式壓碎機法(frenchpressmethod)(barenholz等人,febslett.(1979)99:210)，以及在szoka,f.,jr.等人,ann.rev.biophys.bioeng.9:467(1980)中所詳述的方法。上面的所有方法是用于形成脂質體囊泡的基礎技術，并且這些方法援引加入本文。在滅菌之后，先制備成的脂質體在無菌下置于容器中，接著進行凍干而形成粉末或塊狀物。因為在本發明中，包含先制備成的脂質體的脂質混合物要被凍干，因此需要至少添加一種抗凍劑來制備脂質混合物。在一個實施方案中，脂質混合物進一步包含一種或多種緩沖劑。抗凍劑包括，但不限于：甘露糖醇、甘油、右旋糖、蔗糖和/或海藻糖。一種優選的抗凍劑是甘露糖醇。緩沖劑包括，但不限于：二水合磷酸二氫鈉以及無水磷酸氫二鈉。在脂質混合物包含不先制備成脂質體的脂質的實施方案中，脂質混合物可通過溶解于適合的有機溶劑(包括，但不限于：乙醇、甲醇、叔丁醇、乙醚以及氯仿)中而被制備，并且可通過加熱、真空蒸發、氮氣蒸發、冷凍干燥或者其它溶劑移除的常規方法而被干燥。支持本發明的脂質混合物制備的特定實施例將在下文中描述。類固醇溶液在本發明中的類固醇溶液包含眼用類固醇、其衍生物、其藥學上可接受的鹽或其前藥。在本發明中適用的眼用類固醇包括任何天然存在的類固醇激素、合成類固醇以及它們的衍生物。眼用類固醇的實例包括，但不限于：可的松、氫化可的松、乙酸氫化可的松、新戊酸替可的松(tixocortolpivalate)、膚輕松、潑尼松龍、甲潑尼龍、潑尼松、曲安奈德、曲安西龍、莫米松、安西奈德、布地奈德、地奈德、醋酸氟輕松、氟輕松、哈西奈德、倍他米松、倍他米松磷酸鈉、地塞米松、地塞米松磷酸鈉(dsp)、氟可龍、17-氫化可的松丁酸酯(hydrocortisone-17-butyrate)、17-氫化可的松戊酸酯(hydrocortisone-17-valerate)、二丙酸阿氯米松、戊酸倍他米松、二丙酸倍他米松、潑尼卡酯、17-氯倍他松丁酸酯(clobetasone-17-butyrate)、17-氯倍他索丙酸酯(clobetasol-17-propionate)、己酸氟考龍、三甲基乙酸氟可龍(fluocortolonepivalate)、醋酸氟潑尼定(fluprednideneacetate)、二氟潑尼酯、氯替潑諾、氟米龍、甲羥松、利美索龍、倍氯米松、氯潑尼醇、可的伐唑、脫氧皮質酮、二氟可龍(difluorocortolone)、氟氯縮松、氟可的松、氟米松、氟尼縮松、氟可龍(fluorocortolone)、氟氫縮松、甲潑尼松、甲潑尼龍以及帕拉米松。在一優選的實施方案中，所述眼用類固醇是水溶性類固醇。在一更優選的實施方案中，所述眼用類固醇是dsp。眼用類固醇的藥學上可接受的鹽包括從無毒性無機或有機堿形成的無毒性鹽。例如，無毒性鹽可使用無機堿[諸如堿金屬或堿土金屬(例如鉀、鈉、鋰、鈣或鎂)氫氧化物]；以及使用有機堿(諸如胺等)而被形成。眼用類固醇的藥學上可接受的鹽亦包括從無毒性無機或有機酸形成的無毒性鹽。有機以及無機酸的實例為：例如，鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、琥珀酸、檸檬酸、乳酸、馬來酸、延胡索酸、棕櫚酸、膽酸、雙羥萘酸、粘酸、d-谷氨酸、戊二酸、乙醇酸、酞酸、酒石酸、月桂酸、硬脂酸、水楊酸、山梨酸、苯甲酸等。本發明的類固醇溶液可利用ddh2o或適合的緩沖液來制備。藥物組合物本發明的藥物組合物適合用于眼部遞送類固醇并且包含下列各項的組合：包含一種磷脂或多種磷脂的混合物且含有或不含膽固醇的脂質混合物；以及包含眼用類固醇或其藥學上可接受的鹽的類固醇溶液；其中磷脂的總量為每50μl的藥物組合物大約0.1μmol至低于大約2.5μmol，并且其中所述組合物相對于每50μl的藥物組合物中含有至少大約5μmol磷脂的藥物組合物的副作用是降低的。在一個實施方案中，磷脂的總量是每50μl的藥物組合物大約0.5μmol至低于大約2.0μmol。在另一個實施方案中，磷脂的總量是每50μl的藥物組合物大約1μmol至低于大約1.5μmol。在一個實施方案中，藥物組合物進一步包含至少一種用于活性成分的藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑、媒介物(vehicle)、載體(carrier)、介質、防腐劑、抗凍劑，或者它們的組合。在一個實施方案中，本發明的藥物組合物通過下列步驟而被制備：將一種或多種的磷脂在有或無膽固醇存在下，與一種或多種緩沖液混合，以形成脂質體，將含有一種或多種抗凍劑的脂質體凍干，形成呈粉末形式的脂質混合物。該粉末狀的脂質混合物可經由類固醇溶液重組而形成水性懸浮液。在另一個實施方案中，本發明的藥物組合物通過下列步驟而被制備：將一種或多種的磷脂在有或無膽固醇存在下于溶劑中混合，接著將該溶劑移除以形成脂質混合物。該脂質混合物可經由類固醇溶液重組而形成水性懸浮液。在一個優選的實施方案中，藥物組合物包含大約0.6mg至大約0.7mg的地塞米松。在另一個優選的實施方案中，藥物組合物包含大約0.19mg至大約0.59mg的氟輕松。在又另一個優選的實施方案中，藥物組合物包含有大約4mg的曲安奈德。本發明的藥物組合物包含大約10％至大約50％與脂質締合的dsp或大約50％至大約90％的無脂質締合的dsp。無締合的dsp在玻璃體液中輕易地被清除，其半衰期大約為3.5小時，然而脂質締合的dsp在玻璃體液中不會輕易地被清除，并且取決于藥物組合物可被保留在玻璃體液中達到數個月。本發明的藥物組合物可被用來治療罹患眼科疾病的病患。在一個優選的實施方案中，眼科疾病局限于眼后段。在更優選的實施方案中，眼科疾病是下列的任一者：黃斑水腫、葡萄膜炎、視網膜分支靜脈阻塞或視網膜中央靜脈阻塞，以及年齡相關的黃斑退化(age-relatedmaculardegeneration)。治療眼科疾病的方法另一方面，本發明是治療個體中眼科疾病的方法，其包括對于需要此類治療的個體給藥有效量的本文所描述的藥物組合物，藉此減少該個體中的眼科疾病的癥狀以及征兆。藥物組合物可被組成為任何適合用于所選擇的給藥模式的形式。在一個實施方案中，藥物組合物被配制以用于眼部給藥。在另一個實施方案中，藥物組合物被配制以用于玻璃體內給藥。在另一個實施方案中，藥物組合物被配制以用于局部給藥。依據實施方案，本發明的藥物組合物的劑量可被本領域技術人員所決定。單一劑量或多重劑量形式都被考慮，各形式在某些臨床使用情況中提供優點。依據本發明，欲給藥的藥物組合物的實際量可依據被治療個體的年齡、體重與病況而變化，并且取決于醫療人員的判斷力。下面的實施例進一步例示說明本發明。這些實施例僅被意欲用以例示說明本發明，而不被解釋為是限制性的。實施例1.制備脂質混合物脂質混合物通過乙醇注射法而被制備。脂質，包括dopc、dopg[這兩者是商業上可購得的，且來自于nofcorporation(日本)以及lipoidllc(usa)]以及膽固醇[商業上可購得的，且來自于minakem(法國)]，是以67.5：7.5：25的摩爾比率而被組合并且在大約40℃下于一燒瓶中被溶解于99.9％乙醇中。桌上型超聲波清洗槽(tabletopultrasonicbath)可用來進行脂質溶解。利用蠕動泵將溶解的脂質溶液以100ml/min加至磷酸鈉溶液中，并將兩種溶液混合。脂質混合物接著通過0.2μm孔徑的聚碳酸酯膜6-10次。脂質體(或大的單層囊泡)被形成并且平均囊泡直徑是大約120-140nm(由malvernzetasizernanozs-90所測量)。脂質體混合物通過milliporepellicon2miniultrafiltrationmodulebiomax-100c(0.1m2)的切向流過濾系統(tangentialflowfiltrationsystem)透析并且濃縮，甘露糖醇被添加而得到20mg/ml的最終甘露糖醇濃度。脂質體混合物接著使用0.2μm的無菌過濾器滅菌，而經滅菌的脂質體混合物在無菌下裝填至瓶(vials)中，接著被凍干即形成脂質混合物。脂質混合物的主要組成被概述于表1中。表1.脂質混合物的組成實施例2.制備藥物組合物通過使用dsp溶液而將實施例1中經凍干的脂質混合物重組以形成多層囊泡(multilammellarvesicles)以制備藥物組合物。就50μl的含有0.6mg的dsp以及5μmol磷脂的藥物組合物而言，其是由一瓶實施例1中的凍干脂質混合物使用0.3ml的dsp溶液予以重組而得，其中dsp的濃度是13.2mg/ml。就50μl的含有0.6mg的dsp以及2.5μmol磷脂的藥物組合物而言，其是由一瓶實施例1中的凍干脂質混合物使用0.6ml的dsp溶液予以重組而得，其中dsp的濃度是13.2mg/ml。實施例3.藥物組合物在減少類固醇的眼部副作用方面的體內評估藥物組合物在減少眼用類固醇副作用的方面的效用的體內評估使用新西蘭白兔(newzealandalbinorabbit)進行。在此研究中使用25只雄性兔子(介于10-12周大)。于實驗開始時兔子的平均體重是2.3kg。兔子在此試驗期間均可以自由地獲得飲水以及食物。此研究設計分成5個研究組別，如下所述：組別1：5只兔子各接受50μl的包含先制備成的脂質體以及0.05mg的dsp的藥物組合物，其中藥物組合物的總磷脂是大約5μmol。組別2：5只兔子各接受50μl的包含先制備成的脂質體以及0.2mg的地塞米松磷酸鈉(dsp)的藥物組合物，其中藥物組合物的總磷脂是大約5μmol。組別3：5只兔子各接受50μl的包含先制備成的脂質體以及0.6mg的dsp的藥物組合物，其中藥物組合物的總磷脂是大約5μmol。組別4：此組別最初被分配有5只兔子，但1只兔子在玻璃體內注射之前在麻醉下死亡。因此，4只兔子各接受50μl的包含先制備成的脂質體以及0.6mg的dsp的藥物組合物，其中藥物組合物的總磷脂是大約2.5μmol。組別5：此組別最初被分配有5只兔子，但1只兔子在玻璃體內注射之前在麻醉下死亡。因此，4只兔子各接受50μl的包含先制備成的脂質體以及0.6mg的dsp的藥物組合物，其中藥物組合物的總磷脂是大約1.25μmol。藥物組合物通過玻璃體內注射而被給藥給兔子。被給藥給各眼的dsp的劑量與磷脂的總量、被注射的眼的數目、藥物組合物的dsp強度與磷脂濃度，以及被給藥給各眼的藥物組合物的體積被概述于表2中。表2.藥物組合物的特性*pl＝磷脂在180天的試驗期間，兔子在固定的時間間隔中被檢測，其檢測結果如下：·眼部的有害征兆，諸如中度角膜水腫、角膜混濁、角膜軟化(softenedcornea)[被定義為在角膜上使用眼壓計測量角膜彈性的缺失]以及結膜充血。兔子的眼在下列天數中被檢測：0、4、7、11、14、21、25、28、32、35、39、42、46、49、53、56、60、63、67、70、74、77、82、85、89、92、96、99、103、106、110、113、117、120、124、127、131、134、138、141、145、148、152、155、159、162、166、169、173、176以及180。·眼內壓(iop)升高。iop在藥物組合物的玻璃體內給藥之前以及在玻璃體內給藥之后的下列天數中通過reichertxl眼壓計(reichert,inc.3362waldenavenue,depew,ny14034usa)進行測量：0、4、7、11、14、18、21、25、28、32、35、39、42、46、49、53、56、60、63、67、70、74、77、82、85、89、92、96、99、103、106、110、113、117、120、124、127、131、134、138、141、145、148、152、155、159、162、166、169、173、176以及180。當iop超過15mmhg，兔子被判定為具有iop升高的情形。·玻璃體透明度(vitreousclarity)方面的改變。已知脂質體會影響玻璃體透明度(bshort.safetyevaluationofoculardrugdeliveryformulations:techniquesandpracticalconsiderations.toxicolpathol.jan2008；36(1):49-62at52)。兔子中的玻璃體透明度通過直接檢眼鏡被評估(panopticophthalmoscope118series；model11820:type71000a；welchallyninc.4341statestreetroadskaneateles,ny13153-0220)。玻璃體透明度被分為0-4的計分值(0表示視野下可以清楚地看見視網膜血管；1表示視網膜血管仍可透過藥物組合物而被輕易地看見；2表示只能模糊地看到視網膜血管而血管不能被輕易地鑒別；3表示更模糊的視野，其中僅少數視網膜血管可被鑒別；4表示藥物組合物造成的玻璃體模糊)。此外，藥物組合物在玻璃體液中的分布使用檢眼鏡來評估。眼底計分值(fundusscore)被分為0-6的計分值，0表示眼底可被看見并且沒有被藥物組合物覆蓋，1表示六分之一的眼底被藥物組合物覆蓋，2表示三分之一的眼底被藥物組合物覆蓋，3表示二分之一的眼底被藥物組合物覆蓋，4表示三分之二的眼底被藥物組合物覆蓋，5表示六分之五的眼底被藥物組合物覆蓋，6表示眼底無法被看見并且完全地被藥物組合物覆蓋。180天研究的結果被概述于表3中。這些結果顯示接受含有低于大約2.5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別4以及組別5)相對于接受含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別3)呈現更少的眼部副作用。此外，由于在玻璃體液中更快速的清除，含有低于大約2.5μmol的磷脂的藥物組合物(組別4以及組別5)相對于含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物(組別3)更好地分布于玻璃體液中。表3.在180天研究期間在組別1至組別5兔子中的眼部并發癥的總發病率*pl＝磷脂表3的更詳細的結果摘要如下所示：中度角膜水腫：結果顯示：在組別1、組別2以及組別3兔子中(這些兔子接受含有大于2.5μmol的磷脂的藥物組合物)的中度角膜水腫的發病率分別是50％、80％以及40％。在組別4兔子中沒有中度角膜水腫的發病率，而有50％的組別5兔子罹患中度角膜水腫。角膜混濁：50％的組別1兔子、80％的組別2兔子以及20％的組別3兔子罹患角膜混濁，而組別4以及組別5兔子中沒有一只兔子患有角膜混濁。總而言之，接受含有低于大約2.5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別4以及組別5)相對于接受含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別3)呈現更少的角膜混濁。角膜軟化：在組別1、組別2以及組別3兔子中的角膜軟化的發病率超過50％，而在組別4以及組別5兔子中的角膜軟化發病率低于50％。總而言之，接受含有低于大約2.5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別4以及組別5)相對于接受含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別3)呈現更少的角膜軟化。結膜充血：在組別1以及組別2中60％的兔子，以及在組別3中30％的兔子罹患結膜充血。僅有12.5％的組別4兔子患有結膜充血，以及組別5兔子中沒有一只兔子患有結膜充血。總而言之，接受含有低于大約2.5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別4以及組別5)相對于接受含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別3)呈現更少的結膜充血。iop升高：iop升高是眼用類固醇注射的熟知副作用。組別1兔子有60％iop升高、組別2兔子有80％iop升高，以及組別3兔子有40％iop升高，而iop升高在組別4兔子中未被偵測到以及在組別5兔子中則有37.5％被偵測到。總而言之，接受含有低于大約2.5μmol的總磷脂的藥物組合物的兔子(組別4以及組別5)相對于接受含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物的兔子(組別3)呈現更少的iop升高。玻璃體透明度降低：20％的組別1與組別2兔子以及10％的組別3兔子有玻璃體透明度降低情形(具有計分值3或更高)。在組別4以及組別5兔子中沒有發現玻璃體透明度降低(具有計分值3或更高)。總而言之，含有低于大約2.5μmol的總磷脂的藥物組合物(組別4以及組別5)相對于含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物(組別3)降低玻璃體透明度的可能性更小。眼底計分值：40％的組別1以及20％的組別2與組別3兔子具有高于4的眼底計分值，而組別4以及組別5兔子中沒有兔子具有高于4的眼底計分值。總而言之，含有低于大約2.5μmol的磷脂的藥物組合物(組別4以及組別5)相對于含有至少大約5μmol的磷脂的藥物組合物(組別3)更分散于兔子的玻璃體液中。當前第1頁12當前第1頁12