2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基)-2-溴-6-甲氧基苯氧基)乙酸的新用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種小分子化合物的醫藥應用，具體涉及 2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基）-2-溴-6-甲氧基苯氧基）乙酸或其可藥用鹽在制備用于治 療與MIF相關的炎癥性疾病的藥物，特別是MIF抑制劑中的用途。
【背景技術】
[0002] 巨卩策細胞移動抑制因子（Macrophagemigrationinhibitoryfactor，MIF)是一 種集細胞因子、酶活性、神經內分泌激素于一身的多功能蛋白質。作為一種細胞因子，MIF 幾乎參與所有炎癥性疾病過程，它通過活化巨噬細胞和T細胞來促進先天性和獲得性免疫 響應，是先天性免疫系統的重要調節因子，被認為是連接內分泌系統和免疫體系的介導劑。 MIF與多種免疫性和炎癥性疾病的發病機制密切相關，如MIF在單核/巨噬細胞的血管壁粘 附、跨膜移動、內皮下聚集、泡沫細胞形成及斑塊穩定中的作用，涉及到類風濕性關節炎、動 脈粥樣硬化發生和發展的多個方面。MIF還直接影響正常細胞的分裂和瘤基因誘導的惡性 轉化，或間接通過調節機體免疫反應，促進細胞增殖、迀移以及血管增生等。
[0003]由于具有廣泛的生物活性，MIF與多種免疫、炎癥以及腫瘤等疾病密切相關，已經 成為治療這些疾病的一個重要靶點。在與MIF相關的抗炎藥物研究方面，國外許多醫藥公 司和科研機構正在開發新的具有抗炎效果的MIF抑制劑，但目前還沒有成功上市的MIF抑 制劑。因此，積極尋找和設計新的MIF抑制劑，并探索其抗炎效果，具有重要的臨床意義和 廣闊的應用前景。
【發明內容】
[0004] 針對上述情況，本發明提供了一種小分子化合物一一2-(4-(苯并[d]噻 唑-2-基）-2_溴-6-甲氧基苯氧基）乙酸或其可藥用鹽在制備用于治療與MIF相關的炎 癥性疾病的藥物中的用途，其中所述2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基）-2-溴-6-甲氧基苯氧 基）乙酸的結構式如下：
[0005] 優選的，在上述技術方案中，所述可藥用鹽包括(但不限于）2-(4-(苯并[d]噻 唑-2-基）-2-溴-6-甲氧基苯氧基）乙酸與鹽酸、磷酸、硫酸等無機酸形成的酸加成鹽以 及與醋酸、馬來酸、枸櫞酸、苯磺酸、甲基苯磺酸、富馬酸、酒石酸等有機酸形成的酸加成鹽。
[0006] 優選的，在上述技術方案中，所述與MIF相關的炎癥性疾病包括(但不限于)類風濕 性關節炎、動脈粥樣硬化和敗血癥。
[0007] 優選的，在上述技術方案中，所述用于治療與MIF相關的炎癥性疾病的藥物為MIF 抑制劑。
[0008] 本發明對上述小分子化合物進行了生物學活性測定，發現其對MIF具有明顯的酶 抑制活性，對小鼠腹腔巨噬細胞RAW264. 7中的糖皮質激素具有負向調節效果，可以顯著抑 制脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS)誘導的炎性因子（TNF-a和NO)的釋放，該化合物 還可以抑制MIF引起的巨噬細胞的趨化迀移。此外，MTT法檢測證實該化合物在10、20和 40yM三個濃度下對小膠質細胞BV-2和巨噬細胞RAW264. 7的活力均沒有顯著影響。在此 基礎上，進一步研究化合物抗炎作用是否與抑制MIF對ERK1/2的活化有關，發現這個化合 物可以抑制ERK1/2的磷酸化。
[0009] 本發明中的小分子化合物2-(4-(苯并[d]噻唑-2-基）-2_溴-6-甲氧基苯氧 基）乙酸具備MIF抑制劑的功能，對與MIF相關的炎癥性疾病具有明顯的抑制作用，可以用 于制備與MIF相關的抗炎藥物。
【附圖說明】
[0010] 圖1為實施例1中化合物對MIF的酶抑制活性曲線。
[0011] 圖2為實施例2中化合物對MIF引起的巨噬細胞趨化迀移的影響效果圖。
[0012] 圖3為實施例3中化合物對培養細胞的敏感性效果圖。
[0013] 圖4為實施例4中化合物對小膠質細胞中LPS誘導炎性因子的影響效果圖。
[0014] 圖5為實施例5中化合物對MIF刺激的RAW264. 7巨噬細胞中ERK活化的影響效 果圖。
【具體實施方式】
[0015] 下面將結合附圖及具體實施例對本發明做出進一步的描述。
[0016] 實施例1 :化合物對MIF的酶抑制活性實驗。
[0017] 實驗原理：MIF具有多巴色素互變異構酶活性，可以將橙色的D、L型多巴色素甲 酯轉化為無色的11引噪衍生物，吸光度采用TecanInfiniteM1000酶標儀在475nm波長下進 行3分鐘吸光度測試。
[0018] 實驗試劑的準備：脂多糖(大腸桿菌血清型055:B5)、（L)-3, 4-二羥基苯丙酮酸甲 酯和高碘酸鈉購買自西格瑪奧德里奇(美國密蘇里州東部城市圣路易斯）；（S，R)-3-(4-羥 苯基）-4, 5-二氫-5-異惡唑乙酸甲酯（IS0-1)為MIF的典型抑制劑，購買自德國Merck公 司旗下的生化試劑品牌Calbiochem公司，在這里作為陽性對照；將化合物溶解在IOmM的 DMSO儲備溶液中，最后在緩沖液中DMSO的濃度低于0. 25%情況下，將RAW264. 7巨噬細胞 在37°C條件下添加5%熱滅活胎牛血清（Fetalbovineserum，FBS)、慶大霉素（50g/ml)和 5%032的達爾伯克改良伊格爾培養基（Dulbecco'smodifiedEagle'smedium，DMEM)中生 長和維持，重組人類MIF在大腸桿菌中表達，并且進行純化。
[0019] 實驗步驟：為了制備（L)-多巴色素甲酯，將等體積（L)-3, 4-二羥基苯甲基丙氨酸 甲酯（4mM)和高碘酸鈉（IOmM)混合，并且在室溫下培養3~5分鐘，然后將（L)-多巴色素甲 酯（30yL)添加到包含重組人類MIF(120nM)和IOmM磷酸鉀緩沖液的96孔板中，另外添加 0. 5mMEDTA并保持pH=6. 2。為了測試化合物對MIF互變異構酶活性的抑制效應，將濃度為 I、5、10、25、50和IOOyM的化合物分別添加到包含重組人類MIF(120nM)的96孔板中，在添 加（L)-多巴色素甲酯之前培養30分鐘，將孔板中的氣泡去掉，采用TecanInfiniteMlOOO 酶標儀在475nm波長下進行3分鐘吸光度測試。
[0020] 實驗結果：將濃度為1、5、10、25、50和IOOyM的2-(4-(苯并[d]噻 唑-2-基）-2-溴-6-甲氧基苯氧基）乙酸進行MIF的酶抑制活性實驗，發現該化合物有很 好的抑制活性，其半抑制濃度IC5。為7. 43yM/L(如圖1所示)。
[0021] 實施例2 :化合物對MIF引起的巨噬細胞趨化迀移的影響實驗。
[0022] 實驗原理：MIF對巨噬細胞有趨化迀移作用，抑制劑作用于MIF，可以在一定程度 上抑制MIF引起的巨噬細胞趨化迀移。
[0023] 實驗步驟：將重組人類MIF在添加或者缺失MIF互變異構酶抑制劑的情況下，分別 置于(HM-16板的下室，然后在上室將RAW264. 7巨噬細胞接種于包含20000個細胞的無血 清培養基中。然后將(HM-16孔板轉移到xCELLigenceRTCA-DP中(德國曼海姆羅氏診斷公 司），在4小時的檢測周期內每隔15分鐘采集一次數據，最后通過RTCA1. 2軟件進行數據分 析。
[0024] 實驗結果：HitMIF表示熱滅活的（Heat-inactivated)MIF，在這里作為陰性 對照