一種組合物及其在抗肝纖維化藥物中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 肝纖維化是慢性肝損傷向肝硬化發展的動態過程，表現為細胞外基質（ECM)大量 合成、分泌，而降解絕對或相對不足，使ECM在肝臟內彌漫沉積。其起始于肝細胞（HC)壞死， 隨之是炎癥反應、纖維生成介質釋放，肝星狀細胞（FSC)激活，最終以肝臟結締組織成分的 合成與降解明顯失去平衡。肝纖維化是多種慢性肝病共同的病理過程，是影響預后的重要 因素。
[0003] 過去的20年間，肝纖維化的研究取得了長足進展，證實肝纖維化與一定程度的肝 硬化都是可逆的。近年來陸續出現了一些抗肝纖維化治療方法，包括化學藥、生物制劑、中 藥與基因療法等，但是理想的臨床治療手段仍然缺乏（劉平.加強抗肝纖維化作用機制的 研究.中華肝病雜志，2005, 8(13) :561)。目前防治肝纖維的關鍵是針對與肝星狀細胞激活 相關的環節，主要是：減輕肝損傷；抑制星狀細胞激活，減少細胞外基質產生；調節細胞因 子紊亂，促進活化肝星狀細胞凋亡；抑制肝臟成纖維細胞的增殖以及星狀細胞激活大量分 泌誘導肝臟成纖維細胞的增殖。
[0004] 從天然產物中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0005] 本發明涉及的化合物I是一個2011年發表（AyumiOhsakietal.，2011. SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfromSalviaprzewalskii. TetrahedronLetters52(2011) 1375 - 1377)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾， 獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合 物并對該組合物抗肝纖維化活性進行了評價，其具有抗肝纖維化活性。
[0006] 由于肝臟星狀細胞的激活，從而引起了多種生長因子的大量分泌，這些生長因子 會誘導肝臟成纖維細胞的快速增殖，從而加速纖維化，其中最重要的生長因子之一就是 TGF。因此，篩選抗肝纖維化藥物的一個重要思路就是篩選能夠抑制肝臟成纖維細胞增殖的 藥物或者篩選能夠抑制TGF等生長因子誘導的成纖維細胞的增殖，篩選常常在成纖維細胞 上進行，NIH/3T3細胞是最常用的細胞株。
【發明內容】
[0007] 本發明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質量百分數分別為65%和35%。
[0008]
[0010] 本發明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0011] 藥效學實驗表明，本發明的組合物具有較好的抗肝纖維化作用。本發明的藥學上 可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0012] 進一步的，組合物的體外實驗表明，組合物具有很強的抗成纖維細胞增殖的活性， 因此本發明的組合物有望被用于制備新型抗肝纖維化藥物。
[0013] 進一步的，組合物的體外實驗表明，組合物具有很強的抗生長因子誘導的成纖維 細胞增殖的活性，組合物是一個極具開發潛力的化合物，它可直接用于相應疾病的治療以 及相關藥物的制備。
[0014] 以下通過實施例對本發明作進一步詳細的說明，但本發明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0015] 實施例1化合物SalviskinoneA的制備
[0016] 化合物SalviskinoneA(I)的制備方法參照AyumiOhsaki等人發表的文獻 (AyumiOhsakietal. , 2011.SalviskinoneA,aditerpenewithanewskeletonfrom Salviaprzewalskii.TetrahedronLetters52 (2011) 1375 - 1377)的方法。
[0017]
[0018] 實施例2SalviskinoneA的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0019] 將化合物I(312mg，1.OOmmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0. 08g)，1，2-二溴乙烷（3. 760g，20.OOmmol)和6mL的50 %氫氧化鈉溶液。混合物在35 攝氏度攪拌12h。12h之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相 溶液。然后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌4次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減 壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮 =100:1.5,v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末（327mg， 78% ) 〇
[0020] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.63(8，1!1)，6.37(8，1!1)，5.81(8，1!1)，4.51(8,2!1)，3· 84 (s, 1H), 3. 79 (s, 2H), 2. 15 (s, 1H), 2. 04 (s, 1H) ,1-91 (s, 1H), 1. 65 (s, 1H), 1. 39 (s, 3H), 1. 08 (s, 6H), 0. 99 (s, 6H).
[0021] 13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ188. 07 (s)，183. 70 (s)，154. 38 (s)，147. 57 (s)，140. 2 1 (s), 136. 40 (s), 134. 71 (s), 131. 25 (s), 128. 40 (s), 118. 83 (s), 72. 12 (s), 45. 49 (s), 37. 5 4 (s), 33. 58 (s), 31. 78 (s), 26. 17 (s), 25. 12 (s), 24. 66 (s), 23. 51 (s), 23. 17 (s), 22. 65 (s).
[0022] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcdforC22H28Br03:4 1 9. 12 2 2；found419. 1220.
[0023]
[0024] 實施例3SalviskinoneA的0-(四氫吡咯基）乙基衍生物（III)的合成
[0025] 將化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀 (34511^，2.5_31)，碘化鉀（8411^，0.5_31)和吡略燒（142〇11^，20_31)，混合物加熱回流 8h。反應結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和 飽和食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗 品。產物粗品用硅膠柱層析純化（流動相為：石油醚/丙酮=100:1. 0,v/V)，收集棕色集 中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物III的黃色粉末（131. 6mg，65% )。
[0026] 4匪1?(5001抱，0150-(16)5 6.57(8，1!1)，6.29(8，1!1)，5.82(8，1!1)，4.25(8,2!1)，3· 86 (s, 1H), 3. 10 (s, 2H), 2. 55 (s, 4H), 2. 16 (s, 1H), 2. 07 (s, 1H), 1. 893 (s, 1H), 1. 73 (s, 4H), 1 .70 (s, 1H), 1. 38 (s, 3H), 1. 09 (s, 6H), 1. 02 (s, 6H).
[0027] 13CMMR(125MHz，DMS0-d6)Sl88.10(s)，183.71(s)，154.37(s)，147.57(s)，140· 19 (s), 136. 41 (s), 134. 73 (s), 131. 25 (s), 128. 38 (s), 118. 82(s), 69. 23(s), 54. 54 (d,J= 16. 6Hz), 45. 51 (s), 37. 54 (s), 33. 56 (s), 26. 16 (s), 25. 19 (d,J= 10. 3Hz), 24. 73 (s), 23. 5 8(s), 23. 24(s), 22. 69 (s).
[0028]